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住院肝病患者血清丙、丁、戊、庚型肝炎病毒标志物检测结果分析
近20年来新发现的肝炎病毒有丙、丁、戊、己、庚型肝炎病毒.为了解衡阳地区住院肝病患者中丙、丁、戊、庚型肝炎病毒感染情况及其与各类肝病的关系,于1996年9月至1999年9月对来自衡阳地区各县、市的住院肝病患者血清进行了各型肝炎病毒标志物检测.
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2007~2008年大连市HBsAg阳性人群HGV重叠感染状况调查
[目的]了解庚型肝炎病毒(HGV)与乙型肝炎病毒(HBV)重叠感染状况.[方法]收集2007~2008年在大连市市级以上医院肝炎门诊和病房确诊的HBsAg阳性者228例的血清,采用酶联免疫吸附试验和逆转录聚合酶链反应进行HGV感染的血清流行病学研究.[结果]检测228例HBsAg阳性者,其中单纯HBsAg阳性者144例,HBsAg、HBeAg双阳性的急性乙肝患者(简称乙肝患者)84例.抗-HGV IgG阳性率,全部调查对象为9.65%(阳性22例),其中急性乙肝患者、单纯HBsAg阳性者分别为16.67%、5.56%(P<0.01);HGV RNA阳性率,22例抗-HGV IgG阳性者为86.36%,其中急性乙肝患者、单纯HBsAg阳性者分别为92.86%、6/8(P<0.01).[结论]HGV与HBV有较高的重叠感染率,乙肝患者重叠感染率高于单项HBsAg阳性者.
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鲁北地区部分人群TTV DNA的检测
TTV(Tvansfusion Transmitted Virus)是继甲、乙、丙、丁、戊及庚型肝炎病毒之后近才被发现的新型肝炎相关病毒,1997日本学者Nishizawa等首先报道[1],Okamoto对TTV全基因进行了测定,许多国家相继进行了TTV的研究,为了探讨TTV在鲁北地区的感染状况,我们以套式聚合酶链反应(NestedPCR)对一组肝病患者和供血者血清标本进行了检测,证实TTV在该地区存在.报告如下.
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庚型肝炎病毒(HGV)在乙型和丙型肝炎患者中的检出状况及临床意义
庚型肝炎病毒(HGV)是1995年底报道的一种RNA病毒[1-2].流行病学调查显示,HGV与乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)的混合感染较为常见,这可能与3者具有类似传播途径有关.为进一步了解HGV与HBV、HCV感染之间的关系以及HGV的临床特性,我们进行了本项调查研究.
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肝病患者各型肝炎病毒血清标志分析
病毒性肝炎在国内人群中有着较高的发病率,危害性较大.为了解肝炎与各型肝炎病毒感染的关系,我们收集近年来我院收治的部分住院肝病患者的血清,做了从甲~庚型肝炎病毒血清学标志检测,现报告如下.
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庚型肝炎病毒与丙型肝炎病毒混合感染的初步研究
庚型肝炎病毒(HGV)在健康献血员中主要以携带者形式存在,同时也存在于输血后肝炎、非甲~戊型肝炎患者中.为了解HGV在北京地区丙型肝炎患者中的感染状况,我们采用HGV非结构基因3(NS3)区逆转录-套式-聚合酶链反应(RT-nested-PCR)方法检测了80例丙型肝炎患者血清中的HGVRNA,现将结果报告如下.
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泰安市三种献血员人群庚型肝炎病毒检测分析
为了解献血员中HGV感染状况并探讨感染的危险因素.采用ELISA和RT-PCR技术,对泰安市189名无偿献血员,404名职业献血员和169名单采浆献血员进行了庚型肝炎病毒抗体检测和抗体阳性者进行病毒核酸的测定.三种献血员人群抗HGV阳性率为1.59(3/189)、0.99%(4/404)、5.33(9/169)、16例阳性者中HGVRNA阳性率分别为(0/3)、25%(1/4)、44.44%(4/9).我市献血员人群中有庚型肝炎感染者,曾经献血浆的职业献血员和单采浆献血员仍是HGV筛检的重点人群.
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庚型肝炎病毒检测技术研究近况
庚型肝炎病毒是1995年在国际上被人们发现的人类致病性肝炎病毒.1995年美国Abbott公司的Simons和Gendlabs公司的Linnen等采用分子病毒学技术分别分离出可能引起人非甲非戊型肝炎的GB病毒C(GBV-C)[1-2]和庚型肝炎病毒(HGV)[3].
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不同肝病患者中庚型肝炎病毒感染的研究
自Simons等及Linnon等报告证实存在庚型肝炎病毒(GBV-C和HGV)以来[1-2],引起了国内外广大研究人员的极大关注.采用不同的检测方法,对正常人群、已知的甲-戊肝炎病人及非甲-戊型肝炎病人等感染HGV状况进行了大量的研究.已有大量研究结果表明,在我国不同地区不同人群中均有不同程度的庚型病毒感染.流行病学等研究资料已证实HGV与丙型肝炎病毒(HCV)同属黄科病毒.HGV与乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)的传播途径与方式基本相同[1-4].为了解广州地区、从化地区不同肝病患者中HGV感染和与其它肝炎病毒混合感染状况,以及HGV单独感染和其它肝炎病毒混合感染时对人体的致病作用,对1997~1999年期间在从化市人民医院门诊及住院部就诊的部分甲-戊肝炎、非甲-戊型肝炎、肝硬化、原发性肝癌病人进行了HGV感染血清学检测,谷草转氨酶(ALT)检测.另选择部分健康卫校学生作正常对照比较,现将研究报告如下.
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HGV-RNA阳性与阴性慢性乙型肝炎患者的对比研究
目的研究慢性乙型肝炎(CHB)患者庚型肝炎病毒(HGV)感染的意义.方法应用RT-PCR法对146例CHB患者血清进行了HGV-RNA检测,并将HGV-RNA阳性与阴性患者进行临床与病理学对比.结果HGV-RNA阳性23例(15.75%).HGV-RNA阳性与阴性患者肝功能等生化指标水平、肝脏病理损害程度、HBV-DNA阳性率均无显著性差异(P<0.05).5例HGV-RNA阳性、16例HGV-RNA阴性CHB患者干扰素的近期疗效无显著差异(P>0.05).结论CHB HGV感染并不加重肝脏损害,亦不影响HBV的复制及干扰素的疗效;HGV致病性可能较弱.
关键词: 乙型肝炎 庚型肝炎病毒 逆转录-聚合酶链反应 -
单纯HGV感染急性肝炎患者的临床与病理研究
目的通过对一组急性HGV感染患者的肝组织病理和临床资料分析,探讨庚型肝炎病毒感染的致病性.方法采用免疫组织化学技术对59例不明原因急性肝炎患者的肝组织,进行乙、丙和庚型肝炎病毒抗原检测,部分病例经原位杂交证实.结果HGV NS5抗原的检出率为(57.6%,34/59),其中20例肝组织中HBsAg和/或HCV NS3Ag同时阳性(HGV合并感染组),HGV阳性信号主要位于肝细胞浆内.HGV单纯感染病例与HGV重叠感染组相比,无论在病理改变或生化指标方面均无显著性差别.结论HGV是一种嗜肝病毒,其感染可以引起急性病毒性肝炎.
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献血员庚型肝炎病毒感染情况和部分基因序列分析
目的:为探讨河南省献血员中庚型肝炎病毒(HGV)的感染情况和病毒基因的变异特征.方法:利用逆转录-巢式-聚合酶链反应(RT-Nest-PCR)检测HGVRNA;克隆入T载体并测序.结果:在300名义务献血员中发现1例庚型肝炎病毒RNA阳性;200例初检合格献血员标本中无1例阳性.河南株HGV与GenBank中HGV对应位置序列的同源性为90.9%~98.8%.结论:河南省义务献血员中有HGV携带者;河南株HGV与国内(河北株HGU75356)分离株的同源性为98.8%,其同源性高于国外分离株(90.9%~95.2%);建议对献血员增加HGV检测.
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河南省庚型肝炎病毒感染情况和基因变异的研究
目的:为了探讨河南省庚型肝炎病毒的感染情况和河南株庚型肝炎病毒基因的变异特征。方法:利用逆转录--巢式--聚合酶链反应检测庚型肝炎病毒RNA。将扩增产物克隆人T载体,进行测序和分析。结果:非甲-非戊型肝炎中庚型肝炎病毒RNA阳性率为3.33%(1/30),在丙型肝炎患者中阳性率为6%(3/50),献血员中阳性率为0.5%(1/200),对河南株庚型肝炎病毒RNA阳性扩增、克隆、测序,与GenBank中HGV对应位置序列的同源性为90%~98.8%。结论:河南省存在庚型肝炎病毒的感染者,HGV与HCV有重叠感染的现象,献血员中有HGV携带者。河南株庚型肝炎病毒部分基因序列与已报道的序列均不完全一致,与国内分离株的同源性高于国外分离株。
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7型庚型肝炎病毒非结构蛋白NS3在大肠埃希菌中的表达、纯化及其反应原性鉴定
目的:研究在大肠埃希菌( Escherichia coli, E?coli)表达系统中表达和纯化7型庚型肝炎病毒(GB virus C genotype 7, GBV?C G 7)非结构蛋白NS3的149个氨基酸(NS3?149),并对其进行反应原性鉴定。方法将NS3?149基因克隆入原核表达载体pET?28a,并转化入BL21,利用异丙基?B?D?硫代吡喃半乳糖苷( IPTG)诱导其表达。用Ni2+柱对融合蛋白NS3?149进行纯化,后经Western 印迹检测其抗原特异性和反应原性。结果①成功构建了pET?28a?NS3?149重组质粒,该重组质粒转化入BL21后,融合蛋白NS3?149表达的佳条件为在32℃条件下, A600 nm等于0?8时,用1 mmol/L 的 IPTG 诱导6 h 后,融合蛋白表达量达到高。经过SDS?PAGE分析,融合蛋白以包涵体的形式表达,其大小约27 kD,与预期大小基本一致;②用感染GBV?C 7型的人阳性血清经Western印迹鉴定,融合蛋白NS3?149具有较好的反应原性,另外,其与GBV?C容易发生共同感染的HIV或HCV阳性血清无非特异性交叉反应,说明了融合蛋白NS3?149具有较好的特异性。结论本实验在大肠埃希菌中表达并纯化并获得具有良好反应原性的GBV?C 7型融合蛋白NS3?149,为进一步对GBV?C进行抗体检测的流行病学调查研究奠定了重要的前期工作基础。
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病毒性肝炎HGV-RNA的RT-PCR检测及血清学研究
庚型肝炎病毒(HGV)是近年发现的新型肝炎病毒,能够引起非甲-非戊型肝炎;HGV广泛存在于输血后肝炎及献血员中.本文应用RT-PCR技术对我市1996年4月~5月间急性肝炎流行期间的441例患者血清进行HGV-RNA检测,并观察其肝损害情况,现报告如下.
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庚型肝炎病毒转基因小鼠的建立
利用受精卵原核显微注射的方法,产生了含有HGV结构蛋白C、E1、E2及部分非结构蛋白NS2、NS3的转基因小鼠.得到10只founder小鼠,其中有3只founder小鼠与正常小鼠交配后得到了整合有外源基因的F1代阳性小鼠.RT-PCR的结果显示,外源基因可在founder小鼠及F1代小鼠的血液有核细胞及肝细胞内转录;组织病理学检查显示,某些转基因小鼠的肝细胞出现了水样变、脂肪变性及轻微炎性反应等病理学改变,但与同一品系的正常小鼠相比,转基因小鼠血清转氨酶无明显升高.
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荧光素标记的庚型肝炎病毒基因探针的制备及应用
参考国内外已完成测序的庚型肝炎病毒(GBV-C/HGV)基因序列,选取毒株间系列较保守的基因片段,并合成与之互补的核苷酸序列(Antisense),用末端转移酶将荧光素-N6-dd ATP标记该片段,制成庚肝病毒基因探针.在严格控制温度的条件下,与固定于硝酸纤维膜(NC膜)上血清斑点杂交,洗膜后与抗-荧光素-碱性磷酸酶(AP)结合,加底物后化学发光自显影判断结果.该方法检测与套式逆转录-聚合酶链反应(Nested RT-PCR)检测结果的阳性符合率为88.2%,阴性符合率为100%;并且与其他相关病毒基因无交叉反应,具有较好的特异性与灵敏性.其检测结果比EIA法检测庚肝病毒抗体更具临床意义.
关键词: 庚型肝炎病毒 逆转录-聚合酶链反应 荧光素标记基因探针 分子杂交 -
庚型肝炎病毒包膜糖蛋白E2基因在昆虫细胞中的表达
用PCR扩增出HGV E2全基因,克隆进杆状病毒表达载体pFASTBACHTa中,构建成重组转座载体pFASTBAC-E2,转化DH10BAC大肠杆菌感受态细胞,筛选阳性菌落,抽提大分子质粒DNA,获得含HGV E2基因的重组杆状病毒穿梭载体,转染昆虫草地夜蛾Sf9细胞,出现细胞病变后,收集含有重组病毒颗粒的培养上清,重新感染草地夜蛾Sf9单层细胞及甜菜夜蛾幼虫,分别收集Sf9细胞和甜菜夜蛾幼虫体内的血淋巴细胞,进行12%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,可见表达的融合蛋白带,经亲和层析进行蛋白纯化,用ELISA方法检测各类血清标本,初步研究HGV E2糖蛋白的抗原性.
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HGV广东株和香港株NS5区部分基因的克隆及序列分析
采用HGV NS5特异的2对引物,对两个香港株和一个广东株HGV-RNA进行逆转录套式PCR扩增,PCR产物克隆入pUC19,重组质粒转化DH5α和JM109菌株.PCR和酶切法鉴定阳性克隆,双脱氧链末端终止法测定核苷酸序列并进行同源性分析.结果发现核苷酸变异呈散在分布,三株间核苷酸和氨基酸序列同源性分别为93.3%~94%及97%~99.2%,与已报道的中国株(CN)相比,则同源性分别为90%~91.2%和94%~96.3%,与美国株(PNF2161及R10291)相比,为87.1%~89.5%和95.2%~97%,而与西非株(GBV-C)相比,则达91.4%~93.8%和97%~97.9%.提示HGV NS5区核苷酸和氨基酸序列相对保守,不同HGV株存在一定的地区差异.
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性滥人群庚型肝炎病毒感染状况
目的:调查湖北地区性滥人群庚型肝炎病毒(HGV)感染状况.方法:检查309例有性滥史者的血清HGV感染标志物,用ELISA方法检测抗HGV.结果:309例性滥者HGV的感染率11.97%(37例),显著高于普通人群(1.51%,19/1257例).女性HGV的感染率(12.36%,32/259例)与男性HGV的感染率(10%,5/50例)无显著差异.性滥时间大于2年者抗HGV阳性率17.05%(30/176例)显著高于性滥时间小于2年者5.26%(7/133例).女性中有吸毒史者的HGV感染率(22.37%,17/76例)显著高于未吸毒者(8.20%,15/183例).所有HGV感染者的肝功能正常.结论:性滥人群具有较高的HGV感染率,HGV可能通过性途径传播.性滥人群HGV的感染率与性滥时间呈正相关,吸毒增加了性滥者HGV感染的风险.