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基质金属蛋白酶及其组织抑制剂与滋养细胞疾病
滋养细胞疾病包括葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌(简称"绒癌 ")、胎盘部位滋养细胞肿瘤4类,均来源于胚胎滋养细胞,是受精卵发育至囊胚期细胞分化所形成的,变成肿瘤的滋养细胞和正常妊娠的滋养细胞形态上均分化为细胞滋养细胞和合体滋养细胞,有生长活跃和侵蚀母体组织的特点,能取代血管内皮细胞而形成血管内皮层,从而使滋养细胞极易侵入母体血液中去,能产生绒毛膜促性腺激素(HCG)等糖蛋白和性激素.
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中间滋养细胞肿瘤及瘤样病变
在人胎盘中与绒毛相关的滋养细胞称为绒毛滋养细胞,而在其他部位的滋养细胞称为绒毛外滋养细胞.绒毛滋养细胞主要由细胞滋养细胞和合体滋养细胞组成,并有少量中间滋养细胞(IT).而绒毛外的滋养细胞几乎全部由IT组成,它浸润在蜕膜,子宫肌壁间和胎盘部位的螺旋动脉.根据IT所在部位的不同又将其分为绒毛 IT、种植部位细胞以及绒毛膜型IT.来自IT的肿瘤与病变是近年才被认识的,它包括胎盘部位滋养细胞肿瘤(PSTT),上皮样滋养细胞肿瘤(ETT),胎盘部位过度反应(EPS),胎盘部位结节或斑块(PSNP)[1,2].
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激活素A对早孕胎盘细胞滋养细胞凋亡的作用
激活素A是转换生长因子β家族中的一员.研究表明,激活素A在细胞增殖、凋亡以及癌变过程中都有重要的调节作用;其中激活素A对具有增殖功能的细胞可诱导其发生凋亡[1].人的细胞滋养细胞是具有增殖能力的正常细胞,细胞膜上有激活素A受体表达,在妊娠期与激活素A结合,继而影响细胞滋养细胞增殖与凋亡.本研究旨在探讨激活素A对细胞滋养细胞凋亡的调节作用,报道如下.
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金属基质蛋白酶-26在妊娠早期和中期原代细胞滋养细胞中的表达
在早孕期间,胚胎植入对成功妊娠的意义重大,胚胎植入开始于绒毛内细胞滋养细胞向子宫肌层浸润,正确的胎盘滋养细胞浸润是要求绒毛滋养细胞侵入子宫蜕膜深达螺旋动脉的过程,在时间和空间上有严格的调控[1].
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绒毛外滋养细胞浸润能力的调节
细胞滋养细胞起源于胚泡的滋养外胚层,是胎盘的主要细胞.妊娠早期,细胞滋养细胞代表着一个异源细胞群,在胚泡植入子宫壁后,其沿两条途经分化,即分化为绒毛滋养细胞(VCTs)和绒毛外滋养细胞(EVTs)[1].其中EVTs是具有浸润能力的滋养细胞. Aplin[2]将其分为浸润型和非浸润型两种亚型.
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早孕胎盘组织中PPARγ和MMP-2的表达及意义
目的 探讨PPARγ和MMP-2与早孕细胞滋养细胞浸润的关系;方法本研究通过免疫组织化学技术检测早孕早期和早孕晚期绒毛组织中PPARγ和MMP-2蛋白的表达;结果 PPARγ蛋白主要定位在早孕绒毛细胞滋养细胞核及绒毛外滋养细胞柱和细胞岛的细胞滋养细胞核内.MMP-2阳性颗粒主要存在绒毛细胞滋养细胞和合体细胞滋养细胞胞浆内,绒毛间质细胞内亦有阳性染色,且早孕早期绒毛PPARγ表达量高于早孕晚期(P<0.05),而MMP-2表达量在早孕晚期高于早期(P<0.05),与PPARγ呈负相关(r=-0.74,P<0.01):结论 PPARγ在调节滋养细胞浸润过程中起重要作用,而且其作用可能是通过调节MMP-2的表达实现的,为深入探讨PPARγ及配体在滋养细胞浸润机制中的作用提供实验基础.
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寒冷刺激对细胞滋养细胞浸润的影响
妊娠高血压综合征（简称妊高征）是严重危害母婴健康的妊娠并发症。细胞滋养细胞（cytotrophoblast,CTB）浸润能力下降是妊高征发病的重要环节之一［1］。目前，对于CTB分化浸润能力的调控机理尚不清楚。妊高征流行病学调查资料表明，寒冷是诱发妊高征的一个重要因素［2］。因此，我们试图通过非侵袭性手段——反复寒冷刺激孕鼠，观察寒冷刺激能否影响CTB的浸润能力，从而诱发孕鼠妊高征样的改变。
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人胎盘来源间充质干细胞对妊娠期高血压病细胞滋养细胞凋亡的影响：随机对照实验方案
背景：细胞滋养细胞凋亡增加、浸润能力下降是妊娠期高血压病发病的重要环节之一。人胎盘来源间充质干细胞已经在许多研究中显示出了对损伤的修复作用，而且胎盘间充质干细胞还具有一定的内分泌功能，可通过自分泌或旁分泌细胞因子的方式作用于近、远处的组织。因此，尝试移植人胎盘来源间充质干细胞修复损伤的滋养细胞功能，进而治疗妊娠期高血压病，有一定可行性。
方法/设计：随机对照细胞学实验。收集人胎盘来源间充质干细胞培养液，过滤后即为人胎盘来源间充质干细胞条件培养基。培养人绒毛膜滋养层细胞系JEG-3细胞，随机分为3组，对照组在培养液中加入体积分数15%正常孕妇血清；妊娠期高血压病模型组在培养液中加入体积分数15%子痫前期重度患者的血清；人胎盘来源间充质干细胞条件培养组在培养液中加入体积分数15%子痫前期重度患者血清培养24 h后，更换为体积分数15%子痫前期重度患者血清+人胎盘来源间充质干细胞条件培养基。采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。讨论：实验从人胎盘来源间充质干细胞对妊娠期高血压病细胞滋养细胞功能的影响入手，可能为妊娠期高血压疾病的治疗找到一条细胞移植之路。
伦理批准：研究方案取得沈阳医学院附属中心医院临床研究伦理委员会的书面批准。正常及子痫前期孕妇签署知情同意书。 -
Rho激酶抑制剂Y-27632对细胞滋养细胞侵袭能力的研究
目的 观察Rho激酶特异抑制剂Y-27632对体外培养的细胞滋养细胞侵袭能力的影响.方法 2006年3月至8月在中国医科大学附属第二医院收集妊娠6～8周行人工流产术的健康妇女绒毛组织,通过免疫组化法检测细胞滋养细胞中RhoA和ROCKⅡ蛋白的表达;利用原代细胞培养技术,采用MTT、Transwell体外浸润实验和细胞运动实验检测Rho激酶抑制剂Y-27632对细胞滋养细胞生长和浸润运动能力的影响.结果 在细胞滋养细胞有RhoA和ROCKⅡ蛋白的表达,原代培养的细胞滋养细胞经Y-27632处理后,侵袭及运动能力明显下降.结论 Rho/Rho激酶信号转导系统对细胞滋养细胞侵袭有重要作用,可能参与由胎盘植入异常引起的妊娠相关疾病.
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妊娠滋养细胞肿瘤患者保留生理功能的治疗
妊娠滋养细胞肿瘤以往均指侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌,自从对滋养细胞的分化进一步认识后,已知除细胞滋养细胞和合体滋养细胞外还有中间型滋养细胞.中间型滋养细胞中的种植部位中间型滋养细胞,部分可形成胎盘部位的滋养细胞肿瘤(PSTT);绒毛膜型中间型滋养细胞,少数可形成上皮型滋养细胞肿瘤(ETT).所以目前对妊娠滋养细胞肿瘤的认识,至少应该包括侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌、胎盘部位的滋养细胞肿瘤和上皮性滋养细胞肿瘤四种.有关对妊娠滋养细胞肿瘤保留生理功能的治疗也应包括上述四种类型的肿瘤,而保留生理功能应包括卵巢内分泌功能和生育功能,即对卵巢和子宫的保存及其能发挥功能问题.
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脂多糖调节TNF-α在细胞滋养细胞的表达及其临床意义
目的:探讨脂多糖对TNF-α在细胞滋养细胞表达的调节作用.方法:留取正常早孕绒毛,分离细胞滋养细胞,用无血清FD培养基培养,并给予不同浓度的脂多糖(0、25、50、100、200 ng/ml)作用24小时.然后,采用免疫荧光激光共聚焦技术和酶联免疫吸附实验检测TNF-α的表达情况.结果:脂多糖促进TNF-α在细胞滋养细胞的表达.荧光显微镜下见,脂多糖作用下的细胞滋养细胞内TNF-α的绿色荧光信号明显增强于未给予脂多糖的细胞滋养细胞.酶联免疫吸附实验证实脂多糖以剂量相关的模式促进TNF-α在细胞滋养细胞的表达.各浓度组TNF-α的含量分别为(179.95±35.58)、(334.75±74.09)、(390.36±79.14)、(447.72±27.81)和(482.37±39.14) pg/ml,各组间差异有统计学意义,P＜0.01.结论:脂多糖促进TNF-α在细胞滋养细胞的表达.
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子(癎)前期患者血清对人早孕细胞滋养细胞活力和浸润功能的影响
目的 探讨子(癎)前期患者血清对人早孕细胞滋养细胞活力和浸润功能的影响.方法 采用组织块贴壁法培养人早孕期(孕6-8周)细胞滋养细胞,传代后待细胞长满至70%-80%,分别加入正常孕妇血清(正常组)和子(癎)前期患者血清(子(癎)前期组)培养24 h;CCK-8法测定细胞活力;Transwell技术检测细胞滋养细胞的浸润功能;RT-PCR法检测滋养细胞MMP-2、MMP-9和PAI-1 mRNA的表达.结果 子(癎)前期组细胞滋养细胞活力和浸润能力均低于正常组(P<0.05和P<0.01).与正常组比较,子(癎)前期组细胞滋养细胞MMP-2和MMP-9 mRNA的表达明显下降,而PAI-1 mRNA的表达明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01).正常组和子(癎)前期组中,MMP-2 mRNA与PAI-1 mRNA的表达均呈负相关(r=-0.985,P<0.01;r=-0.933,P<0.05);MMP-9 mRNA与PAI-1 mRNA的表达无相关性.结论 子(癎)前期患者血清可能通过调节细胞滋养细胞中MMP-2、MMP-9和PAI-1的表达而影响细胞的浸润能力.
关键词： 子(癎)前期 细胞滋养细胞 浸润 基质金属蛋白酶 纤溶酶原激活物抑制剂-1 -
可溶性endoglin减弱人早孕细胞滋养细胞的浸润功能
本研究旨在探讨可溶性endoglin(soluble endoglin,sEng)对人早孕细胞滋养细胞活力和浸润功能的影响.采用胰蛋白酶-DNase消化法培养人早孕期(孕6～8周)细胞滋养细胞,传代后待细胞长满至70%～80%,分别加入没有添加(对照组)和添加sEng(10μg/L)的细胞培养液培养24 h;Transwell技术检测细胞滋养细胞的浸润功能;RT-PCR法检测细胞滋养细胞基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA的表达;Western blot方法分别检测细胞滋养细胞MMP-2、MMP-9蛋白的表达.结果显示,sEng组细胞滋养细胞浸润能力低于对照组.与对照组比较,sEng组细胞滋养细胞MMP-2和MMP-9 mRNA及蛋白的表达明显下降(P＜0.05).以上结果提示,sEng可能通过调节人早孕细胞滋养细胞中MMP-2、MMP-9的表达而影响细胞的浸润能力,从而参与子痫前期的发生.
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肿瘤坏死因子α诱导早孕原代培养细胞滋养细胞的凋亡
目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对早孕细胞滋养细胞凋亡的影响.方法 选取正常妊娠早孕(7～9周)绒毛,采用Percoll梯度离心法提取细胞滋养细胞进行原代培养.A组6孔培养皿分别加入10 μL PBS,10 μg/mL,100 μg/mL TNF-a,B组双孔对照.24 h后分别收集细胞使用RT-PCR方法测定Bax和Bcl-2的表达.并使用TUNEL方法测定细胞凋亡数目.结果 A组与B组相比,TNF-α可以明显增加Bax的表达(P<0.05),并呈剂量相关性.TUNEL方法测定显示:与B组相比,A组凋亡细胞数明显增加(P<0.05).结论 TNF-α可以诱导早孕细胞滋养细胞的凋亡.
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输卵管绒毛膜癌4例临床病理分析
绒毛膜癌是细胞滋养细胞、中间型滋养细胞及合体滋养细胞混合性增生的恶性肿瘤.绒毛膜癌50%继发于完全性水泡状胎块,25%发生于正常妊娠及25%发生于流产后[1].
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缺氧调控滋养细胞MMP-9/TIMP-1表达及侵袭能力的体外研究
目的:探讨缺氧对滋养细胞的生长、MMP-9/TIMP-1基因表达以及侵袭能力的影响.方法:滋养细胞在正常及二氯化钴(CoCl2)所致化学缺氧条件下的培养.MTT法检测正常及缺氧条件下滋养细胞的生长状况.细胞爬片确定MMP-9/TIMP-1在滋养细胞中的定位及缺氧前后的蛋白表达.荧光定量PCR检测滋养细胞中MMP-9和TIMP-1基因表达.Transwell侵袭模型检测滋养细胞的侵袭能力变化.结果:(1)MMP-9和TIMP-1均表达于滋养细胞的包膜和胞浆.在缺氧条件下,MMP-9和TIMP-1蛋白表达均呈上调趋势,且在缺氧48h时明显(P＜0.01);(2) 150、300μmol/L CoCl2均可显著抑制滋养细胞的增殖,其中300μmol/L抑制作用更明显,与150μmol/L比较,差异有统计学意义(P＜0.01);(3)缺氧条件下,MMP-9和TIMP-1的基因表达均增加,以48h为显著;但MMP-9/TIMP-1比值降低,以72h显著(P＜0.01);(4)缺氧后滋养细胞侵袭力显著降低(P＜0.05).结论:缺氧能抑制滋养细胞增殖、促进滋养细胞分泌MMP-9和TIMP-1,但MMP-9/TIMP-1比值降低,使滋养细胞的侵袭力减弱.
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低分子肝素对低氧诱导的早孕细胞滋养细胞凋亡的影响
目的:研究低分子肝素对低氧诱导的早孕细胞滋养细胞凋亡的影响.方法:选取正常早孕(8～10周)绒毛,使用Percoll梯度离心法提取细胞滋养细胞在1%和20%氧分压下分别进行原代培养.两种氧条件下均设对照组与研究组.研究组培养液中加入不同浓度低分子肝素(终浓度为0.1U/ml、1U/ml、10U/ml),未加低分子肝素组作为对照组,将培养孔板分别置入1%和20%氧分压培养箱中培养120h.使用TUNEL法检测细胞凋亡,RT-PCR法检测凋亡基因表达.结果:(1)与20%氧分压务件下对照组相比,在1%氧分压下对照组的细胞滋养细胞的生长明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);(2)与对照组比较,1%和20%氧分压下研究组,细胞滋养细胞的生长均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);(3)与20%氧分压条件对照组相比,在1%氧分压下,对照组的细胞滋养细胞的凋亡明显增加,有显著差异(P<0.01);(4)在1%氧分压下,与对照组相比,研究组细胞滋养细胞的凋亡明显减少,差异有统计学意义(P<0.05).结论:低氧能促进早孕细胞滋养细胞生长,并诱导细胞滋养细胞凋亡;低分子肝素抑制低氧诱导的早孕细胞滋养细胞凋亡并促进其生长.
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补肾益气方激活ERK通路影响人早孕细胞滋养细胞生长
目的:研究补肾益气方对人早孕细胞滋养细胞增殖和早期凋亡的影响及其可能的信号转导通路.方法:体外分离培养人早孕细胞滋养细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞的增殖活力,流式细胞术增殖细胞核抗原(PCNA)表达检测细胞增殖、AnnexinV FITC PI双染色法检测细胞早期凋亡,Western blot法检测细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)磷酸化.结果:与20%对照血清组比较,10%及20%补肾益气方含药血清作用48h,上调细胞滋养细胞增殖活力,促进PCNA表达、降低早期凋亡细胞百分率、诱导细胞ERK磷酸化,上述指标均呈量-效关系;ERK通路的特异性抑制剂U0126几乎完全抑制20%含药血清诱导的细胞ERK1/2活化,下调20%含药血清诱导的细胞增殖活力及PCNA蛋白表达、增加早期凋亡细胞百分率.结论:补肾益气方对人早孕细胞滋养细胞的生长具有促进作用,ERK1/2信号通路可能是补肾益气方促进细胞滋养细胞增殖、减少细胞凋亡的主要信号转导通路之一.
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氧化低密度脂蛋白及其受体对滋养细胞凋亡的影响
目的:探讨氧化低密度脂蛋白(oxLDL)及血凝集素样氧化低密度脂蛋白受体l(LOX-1)对滋养细胞凋亡的影响.方法:采用蛋白印迹法检测滋养细胞LOX-1蛋白的表达;RT-PCR技术检测LOX-1 mRNA及caspase-3 mRNA的表达;流式细胞仪检测滋养细胞凋亡指数.结果:不同浓度oxLDL(0.01,0.05,0.10mg/ml)培养下细胞滋养细胞中LOX-1蛋白、mRNA及caspase-3 mRNA表达水平均明显高于对照组(P<0.01),各组间比较差异均有统计学意义(P<0.01).拮抗剂组LOX-1蛋白、mRNA及caspase-3 mRNA表达水平均显著低于同浓度oxLDL刺激组,差异亦有统计学意义(P<0.01).结论:oxLDL可通过上调滋养细胞中LOX-1表达引起滋养细胞的过度凋亡.
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缺氧对体外培养的早孕期细胞滋养细胞中缺氧适应相关部分基因表达及细胞浸润能力的调控
目的:探讨缺氧对细胞滋养细胞表达缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及氧感受器缺氧诱导因子脯氨酸羟化酶1、2(HPH/PHD1、2)和抑制缺氧诱导因子-1(FIH-1)的调控,以及缺氧对体外培养的细胞滋养细胞浸润能力的调节.方法:用RT-PCR和Westernblot法检测在常氧、缺氧再复氧及持续缺氧等条件下,细胞滋养细胞中HIF-1α、HPFPHD1、2和F1H-1 mRNA和蛋白表达的变化;并用体外侵袭实验检测缺氧再复氧、持续低氧对细胞滋养细胞浸润能力的影响.结果:(1)持续缺氧条件下培养的细胞滋养细胞HIF-1α和HPH/PHD2 mRNA和蛋白表达显著高于常氧组(P＜0.01);HPH/PHD1和FIH-1 mRNA和蛋白表达显著低于常氧组(P＜0.01).缺氧再复氧后培养的细胞滋养细胞HIF-1α和HPH/PHD2 mRNA和蛋白表达显著高于常氧组(P＜0.05),但显著低于持续缺氧组(P＜0.05);HPH/PHDl和FIH-1 mRNA和蛋白表达均显著低于常氧组(P＜0.05),但显著高于持续缺氧组(P＜0.05).(2)持续缺氧显著抑制细胞滋养细胞的浸润能力,与常氧组比较明显降低(P＜0.01);缺氧后再复氧细胞滋养细胞的浸润能力居中,与常氧组比较明显降低(P＜0.05);与持续缺氧组比较明显升高(P＜0.05).结论:滋养细胞可感受氧分压变化,HIF-1α、HPH/PHD1、HPH/PHD2和FIH-1相互作用与滋养胞浸润能力调节有关.
