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补肾益气方调控Bcl-2和XIAP蛋白对早孕期人滋养层细胞凋亡的拮抗作用
目的:探讨补肾益气方对正常早孕期人滋养层细胞凋亡的调节作用及机制.方法:体外培养正常早孕期人细胞滋养层细胞,分别加入空白对照组、5%含药血清组、10%含药血清组、20%含药血清组,用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪检测含药血清作用24、48、72h后细胞的增殖活性,Caspase-3活性检测试剂盒检测细胞Caspase-3酶活性,Western blot检测Fas、FasL、Bcl-2和XIAP蛋白表达.结果:含药血清培养24、48、72h后,细胞在490hm波长的吸光度值增加(P<0.01);sub-G1期细胞减少(P<0.01),S期细胞增加(P<0.01),G2/M期细胞明显减少(P<0.01),Caspase-3酶活性降低;含药血清对Fas和FasL表达均有上调作用,呈剂量依赖式诱导(P<0.05);Bcl-2蛋白表达水平上升,随着浓度增加,表达量也增加,同时伴随ⅪAP水平升高(P<0.05).结论:补肾益气方通过提高凋亡抑制蛋白Bcl-2水平,从而增强XIAP表达,抑制Caspase-3活性,抑制细胞死亡.FasL表达水平的上调有利于母胎免疫耐受的维持.
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补肾益气方治疗咳嗽变异性哮喘50例
目的 观察分析用补肾益气方加减治疗咳嗽变异性哮喘50 例的临床疗效.方法 对2008 年1 月至2009 年4 月施行全程治疗且期满的50 例符合入选诊断标准的患者,随机分为观察组(口服补肾益气加减方)25 例与对照组(茶碱缓释片+沙丁胺醇气雾剂)25 例,2 组患者一般资料比较差异无统计学意义(P＞0.05),具有可比性.对比治疗前后观察组、对照组的临床疗效.结果 治疗后咳嗽、痰量、气急的三大症状观察组与对照组经检验,差异具有统计学意义(P＜0.05).观察组治疗效果明显比对照组要理想,特别是总显效率56.0%,明显高于36.0%.2 年后随访观察组复发7 例,对照组复发12 例,复发率分别为28.0% 、48.0%.观察组治疗后肺通气功能与对照组之间具有显著差异(P＜0.05).结论 对比试验发现,中药补肾益气方加减在治疗咳嗽变异性哮喘时疗效理想,并且复发率低,值得在临床上进行推广.
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补肾益气方对正常早孕期人细胞滋养层细胞生物学行为的影响
目的探讨补肾益气方对正常早孕期人细胞滋养层细胞增殖、侵袭、分化等生物学行为的影响.方法体外培养正常早孕期人细胞滋养层细胞,分别设空白对照组、5%含药血清组、10%含药血清组、20%含药血清组,用扫描电镜、噻唑蓝(MTT)法、流式细胞仪、Transwell侵袭实验检测含药血清作用24h、48h、72h后细胞的形态、增殖活性及侵袭力的变化.结果含药血清培养24h、48h、72h后,细胞滋养层细胞微绒毛变丰富,伪足增多、延长;细胞在酶联免疫分析仪490nm波长的吸光度值增加(P＜0.01);sub-G1期细胞减少(P＜0.01),S期细胞增加(P＜0.01),G2/M期细胞明显减少(P＜0.01);每视野穿过PET膜的细胞数明显增多(P＜0.01).结论补肾中药促进人细胞滋养层细胞增殖及侵袭力,并可能影响其分化能力.
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补肾益气方对血管内皮细胞p16基因表达的影响
目的 研究补肾益气方对大鼠血管内皮细胞p16基因表达的的影响.方法 24只健康雄性SD大鼠,随机分为中药组(补肾益气方灌胃)、黄芪组(黄芪水煎液灌胃)、生理盐水组(生理盐水灌胃),各8只.提取含药血清,培养人脐静脉内皮细胞株,采用β-半乳糖苷酶(β-gal)染色鉴定细胞衰老;流式细胞术分析细胞周期变化,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测p16基因的表达.结果 中药组、黄芪组G0/G1期细胞比例(63.18±1.07)、(71.73±1.32)%小于生理盐水组(79.56±2.88)%,中药组G0/G1期细胞比例小于黄芪组,差异均具有统计学意义(P<0.05).中药组、黄芪组mRNA灰度值/β-肌动蛋白(β-actin)灰度值比值(0.1231±0.0064)、(0.1835±0.0057)小于生理盐水组(0.5126±0.0110),中药组mRNA灰度值/β-actin灰度值比值小于黄芪组,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 补肾益气方具有延缓血管内皮细胞凋亡的作用,其分子机制可能通过调控p16的表达使细胞周期停滞于G1期发挥作用,具有一定参考价值.
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补肾益气方对人蜕膜基质细胞活性及分泌功能的影响
目的 观察补肾益气方对人早孕蜕膜基质细胞活性及其分泌白细胞介素10(IL-10)、干扰素γ(IFN-γ)及泌乳素(PRL)的影响.方法 收集孕6～10周行人工流产的正常妊娠妇女蜕膜组织,体外分离、培养蜕膜基质细胞,分别以10％,20％补肾益气方含药血清处理细胞24 h、36 h、48 h,同时设立相应培养时间相同浓度的血清对照组,未添加血清组为空白对照组.MTT法检测补肾益气方对蜕膜基质细胞活性的影响.ELISA法检测细胞培养上清中IL-10、IFN-],化学发光法检测PRL分泌,流式细胞术检测IL-10R表达.结果 36h起,20％中药组蜕膜基质细胞活性高于20％血清对照组(P＜0.05),48 h时10％,20％中药组细胞活性均高于相应血清对照组(P均＜0.05).24 h起,10％,20％中药组分泌IL-10高于各对照组(P均＜0.01);48 h时,20％中药组IL-10浓度高于10％中药组(P＜0.05)并且中药组IL-10R表达高于各对照组(P＜0.01),20％含药血清组IL-10R表达又高于10％含药血清组(P＜0.05).48h之内,中药组IFN-γ水平与血清对照组相近(P＞0.05).24 h起,10％,20％中药组分泌的PRL高于各对照组(P均＜0.01),并且20％中药组PRL水平高于10％中药组(P＜0.01);48 h时2中药组之间PRL水平无显著性差异(P＞0.05).结论 补肾益气方可能通过促进IL-10、PRL的分泌,上调IL-10受体表达,调控蜕膜基质细胞生长,达到保胎的目的.
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补肾益气方及其拆方对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的影响
目的观察比较补肾益气方及其拆方对氧化低密度脂蛋白(OX-LDS)损伤血管内皮细胞的保护作用,以筛选有效单味药或佳配伍方.方法用体外法,以OX-LDL损伤血管内皮细胞为动脉粥样硬化(AS)细胞病理模型,采用噻唑蓝(MTT)法,通过测定细胞丙二醛(MDA)含量及其培养液乳酸脱氢酶(LDH)活力来评估各处理因素的药效.结果补肾益气方与黄芪首鸟配伍方具有明显抗OX-LDL损伤血管内皮细胞的作用,可提高OX-LDL损伤血管内皮细胞的活力,单味药黄芪具有提高OX-LDL损伤血管内皮细胞增殖能力,补骨脂黄芪配伍方能降低OX-LDL损伤血管内皮细胞的MDA含量,其他单味药和交叉配伍方均无明显作用.结论补肾益气方抗OX-LDL对血管内皮细胞损伤作用主要是首鸟黄芪协同作用的结果.
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补肾益气方通过上调滋养细胞IDO的表达促进母胎界面NK细胞的表型转化
目的:研究补肾益气方诱导母胎界面耐受状态的机制及吲哚胺2,3-双加氧酶( IDO)对蜕膜NK细胞表型转化的影响.方法:用免疫组织化学方法测定正常绒毛组织和复发性流产患者绒毛组织内IDO的表达.体外培养人滋养细胞HTR-8/SVneo,用流式细胞术检测含药血清对HTR-8/SVneo IDO表达的影响.用含对照大鼠血清、含药大鼠血清及含药血清联合IDO阻断剂1-甲基色氨酸(1-MT)的培养液分别处理HTR-8/SVneo后与人外周NK细胞共培养,测定其对NK细胞的调节作用.结果:正常绒毛组织中IDO的表达较流产绒毛组织明显增加.含药血清可增强HTR-8/SVneo IDO的表达.外周NK细胞与含药血清处理过的HTR-8/SVneo共培养后,NK细胞表面CD16表达减低,CD56表达增加,且CD16的改变可被1-MT抑制.结论:补肾益气方可以通过上调滋养细胞IDO的表达诱导外周NK细胞向耐受型转变.
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补肾益气方对人蜕膜CD4+T细胞分泌IL-4和IFN-γ的调控作用
目的:观察补肾益气方对人早孕蜕膜CD4+T细胞分泌IL-4和IFN-γ的调节作用,探讨其调节母胎界面Th1/Th2免疫保胎机制.方法:将40只成年雌性SD大鼠随机分成两组:补肾益气方组和生理盐水组,分别灌服体积相同的中药和生理盐水,早晚各一次,3天后颈动脉取血;收集孕6～10周行人工流产术的正常孕妇的蜕膜组织,用免疫磁珠方法分离出CD4+T细胞进行培养,分4组:10%胎牛血清为正常对照组(A组),10%中药血清组(B组),20%中药血清组(C组),10%生理盐水血清组(D组),分别培养24、48、72小时,以ELISA检测法检测细胞培养上清中IL-4和IFN-γ的水平.结果:与A组相比,B组和C组的Th2型细胞因子IL-4的水平均显著升高(P＜0.05);Th1型细胞因子IFN-γ的水平显著降低(P＜0.01),但是B组和C组的结果之间无显著差异.结论:补肾益气方通过促进蜕膜CD4+T分泌IL-4,并抑制其产生IFN-γ,从而促进母胎界面形成Th2优势.
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补肾益气方对TNF-α/IFN-γ诱导的早孕期人滋养层细胞凋亡的影响
目的:探讨补肾益气方对TNF-α/IFN-γ诱导的早孕期人滋养层细胞凋亡的调节作用.方法:TNF-α/IFN-γ和含药血清共培养细胞后,采用MTT比色法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞亚二倍体峰,原位缺口末端标记法(TUNEL染色)、caspase-3活性检测试剂盒检测凋亡,Western blot 检测Bcl-2和XIAP蛋白.结果:TNF-α和IFN-γ联合给药培养后,细胞活力降低,亚二倍体细胞较未处理组明显增多,凋亡细胞数明显高于正常对照组,caspase-3酶活性明显升高,TNF-α/IFN-γ与含药血清共培养后,细胞活力升高,亚二倍体细胞数和凋亡细胞数却明显减少,caspase-3酶活性降低,Bcl-2和XIAP蛋白增加,并呈时间和剂量依赖性.结论:补肾益气方降低TNF-α和IFN-γ诱导的滋养层细胞凋亡的发生率.
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中西药结合治疗复发性流产的临床观察
目的:探讨中西药结合治疗复发性流产的临床效果.方法:40例复发性流产患者平分为两组,对照组单用黄体酮肌内注射治疗,治疗组在此基础上加用自拟补肾益气方治疗.结果:治疗组有效率为95.0%,对照组有效率为80.0%.治疗组的临床疗效明显好于对照组(P<0.05).结论:中西药结合治疗复发性流产疗效好,值得推广应用.
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补肾益气方联合有氧运动对衰老大鼠骨骼肌线粒体生物合成相关信号分子表达的影响
目的 观察补肾益气方及有氧运动对D-半乳糖所致衰老大鼠骨骼肌线粒体生物合成相关信号分子丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)、心肌细胞增强因子2C(MEF2C)及细胞色素氧化酶(COXⅣ)表达的影响.方法 将40只雄性SD大鼠随机分为5组,分别为正常组、模型组、中药组、运动+中药组、美雄酮组.除正常组外,其余各组每天颈背部皮下注射10％的D-半乳糖(100 μg/g)溶液,制作"拟衰老"大鼠模型.模型大鼠分别经补肾益气方药、有氧跑台运动、美雄酮干预10周后,采用ELISA法测定大鼠血清β-半乳糖苷酶(β-Galase)含量,采用甲基百里香酚蓝法(MTB)检测大鼠腓肠肌线粒体钙含量,采用Western blotting法检测大鼠腓肠肌线粒体生物合成信号通路分子p38MAPK、CaMKⅡ、PGC-1α、MEF2C及COXⅣ蛋白表达变化.结果 与正常组比较,模型组大鼠衰老生物学标志物β-Galase、线粒体钙含量显著增高,CaMKⅡ、MEF2C、PCG-1α蛋白表达明显下降,而P38MAPK蛋白表达显著升高(P ＜0.05,P＜0.01).与模型组比较,中药组可显著降低血清β-GALase蛋白含量、线粒体钙含量(P＜0.01);运动+中药组可显著降低线粒体钙含量,上调CaMKⅡ、PGC-1α、MEF2C及COXⅣ蛋白表达;美雄酮组显著降低线粒体钙含量,上调PCG-1α、COXⅣ蛋白表达(P ＜0.05,P＜0.01).结论 衰老大鼠骨骼肌功能减退可能与线粒体生物合成相关信号转导通路分子CaMKⅡ、p38 MAPK、PCG-1 α、MEF2C及能量代谢相关酶蛋白基因(COXⅣ)表达异常变化有关;补肾益气方联合有氧运动可一定程度改善上述指标的异常变化,延缓骨骼肌衰老.
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补肾益气方调控TGF-β1对反复自然流产患者外周血Treg/Th17细胞平衡的影响
为探讨补肾益气方通过调控TGF-β1对反复自然流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)患者外周血Treg和Th17细胞平衡的影响,选取了15例RSA患者,孕42 d起诊断为正常宫内妊娠后服中药,在服药前以及服药一个月后以流式细胞术检测Treg和Th17细胞数量,ELISA方法检测外周血TGF-β1及IL-10、IL-17水平.结果显示,中药治疗后RSA患者外周血Treg数量上升至(5.94±1.37)％,明显高于服药前(3.45±0.93)％(P＜0.05).Th17细胞数量下降至(1.12±0.32)％,低于治疗前(2.61±0.70)％.中药治疗后,Treg/Th17细胞比值上升,从1.43±0.66升高至5.64±1.84％(P＜0.05).Treg相关细胞因子IL-10水平从(17.90±4.18) pg/ml上升至(28.80±7.18)pg/ml,Th17细胞相关细胞因子IL-17则从(45.83±4.15) pg/ml下降至(31.21±5.62) pg/ml,同时发现中药治疗后血TGF-β1水平从(192.73±13.97)pg/ml上升为(334.07±61.53) pg/ml(P＜0.05),TGF-β1/IL-17比值从4.23±0.43提高至11.20±3.56,IL-10/IL-17比值从0.39±0.09上升至0.94±0.28(P＜0.05),差异有统计学意义.以上结果表明补肾益气方能够调控Treg/Th17细胞平衡,改变母体细胞因子分泌状态,保护胎儿不被排斥,其机制可能与母体TGF-β1水平上调有关.
关键词： 补肾益气方 反复自然流产 Treg/Th17细胞平衡 TGF-β1 -
补肾益气方对不明原因反复自然流产患者外周血Foxp3+Treg/Th1/Th17细胞的影响
为探讨补肾益气方对反复自然流产患者外周血Treg/Th1/Th17的影响,选取我院自然流产专科门诊30例反复自然流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)患者,诊断为正常妊娠后开始服用补肾益气方中药,采用流式细胞仪检测服药前后Treg/Th1/Th17细胞数量,ELISA方法检测外周血TNF-α、IFN-(γ)、IL-4、IL-10及IL-17水平变化.结果显示中药治疗后RSA患者外周Treg细胞数量上升(5.85±2.76),明显高于服药前(3.26±1.19),P＜0.05.Th1和Th17细胞数量下降(8.38±4.38和0.95±0.15),明显低于治疗前(23.59±8.14和1.58±0.71),P＜0.05.IL-10和IL-4水平显著上升(P＜0.05),TNF-α、IFN-(γ)和IL-17水平明显下降(P＜0.05).实验表明,补肾益气方中药能够调控Treg/Th1/Th17细胞水平,改变母体细胞因子分泌格局,保护胎儿不被排斥.
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补肾益气方对老年大鼠内源性皮质酮分泌及IL-2基因表达的影响
目的:观察补肾益气方对自然衰老大鼠皮质酮及IL-2基因表达的影响.方法:将20月龄老年大鼠随机分为对照组与补肾组,各10只.另设3月龄青年组.其中老年补肾组自分组日起以饮料方式饲喂补肾益气方药液,连续3个月,其余两组予正常饮水和饲料.于干预3月结束时,取腹主动脉血和脾脏.采用ELISA法检测大鼠血清IL-2含量;EIA法检测大鼠血清皮质酮含量;qRT-PCR法检测大鼠脾淋巴细胞中IL-2、糖皮质激素受体(GR) mRNA的表达;Western blotting法检测大鼠脾淋巴细胞GR蛋白表达.结果:与青年组相比,老年对照组大鼠血清皮质酮含量明显升高(P＜0.05),血清IL-2含量明显降低(P＜0.05),脾淋巴细胞IL-2 mRNA、GR mRNA和蛋白表达明显下降(P＜0.05);与老年对照组比较,老年补肾组血清IL-2水平明显升高(P＜0.05),GR mRNA和蛋白表达明显升高(P＜0.05).结论:补肾益气方可通过调节老年大鼠异常的皮质酮/糖皮质激素受体通路,改善IL-2基因表达的增龄性衰退.
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补肾益气方激活ERK通路影响人早孕细胞滋养细胞生长
目的:研究补肾益气方对人早孕细胞滋养细胞增殖和早期凋亡的影响及其可能的信号转导通路.方法:体外分离培养人早孕细胞滋养细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞的增殖活力,流式细胞术增殖细胞核抗原(PCNA)表达检测细胞增殖、AnnexinV FITC PI双染色法检测细胞早期凋亡,Western blot法检测细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)磷酸化.结果:与20%对照血清组比较,10%及20%补肾益气方含药血清作用48h,上调细胞滋养细胞增殖活力,促进PCNA表达、降低早期凋亡细胞百分率、诱导细胞ERK磷酸化,上述指标均呈量-效关系;ERK通路的特异性抑制剂U0126几乎完全抑制20%含药血清诱导的细胞ERK1/2活化,下调20%含药血清诱导的细胞增殖活力及PCNA蛋白表达、增加早期凋亡细胞百分率.结论:补肾益气方对人早孕细胞滋养细胞的生长具有促进作用,ERK1/2信号通路可能是补肾益气方促进细胞滋养细胞增殖、减少细胞凋亡的主要信号转导通路之一.
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中西医结合治疗老年性感音性耳聋耳鸣临床观察
目的:观察补肾益气方联合西医治疗老年性感音性耳聋耳鸣的临床疗效.方法:将104例老年性感音性耳聋耳鸣患者按随机数字表法分为观察组和对照组各52例.对照组采用声频共振耳聋治疗仪、甲钴胺胶囊、维生索B1片治疗,观察组在对照组治疗的基础上给予补肾益气方治疗.比较2组的临床疗效和不良反应情况.结果:改善耳聋的总有效率对照组为71.2％,观察组为90.4％,2组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).改善耳鸣的总有效率对照组为73.1％,观察组为94.2％,2组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).2组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:中西医结合治疗老年性感音性耳聋耳鸣可以提高临床疗效.
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补肾益气方联合西药治疗肺肾气阳虚型哮喘临床研究
目的:观察补肾益气方联合西药治疗肺肾气阳虚型哮喘的临床效果.方法:将80例肺肾气阳虚型哮喘患者随机分为对照组和治疗组各40例,对照组给予常规西药治疗,治疗组在对照组治疗基础上加用补肾益气方治疗,1月为1疗程,2组均连续治疗2疗程.观察比较2组的临床疗效、中医证候积分、不良反应发生情况及治疗结束后随访1月内的复发情况.结果:治疗后,治疗组总有效率为97.5％,高于对照组的77.5％,差异有统计学意义(P＜0.05).对照组中医证候积分与治疗前比较,差异无统计学意义(P＞0.05);治疗组中医证候积分较治疗前降低,且低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).治疗组不良反应发生率为2.50％,复发率为2.50％,低于对照组的17.50％和15.00％,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:应用补肾益气方联合西药治疗肺肾气阳虚型哮喘疗效确切,可有效减轻患者的临床症状,不良反应发生率及复发率低.
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补肾益气方联合黄体酮治疗黄体功能不全所致自然流产临床观察
目的:观察补肾益气方治疗黄体功能不全所致自然流产的临床疗效,及对患者血清人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)、孕酮(P)、雌二醇(E2)水平的影响.方法:选取在本院接受治疗的120例黄体功能不全所致自然流产患者,随机分为对照组、中药组及中西医结合组,每组40例.对照组不做任何处理,中药组给予补肾益气方治疗,中西医结合组在给予补肾益气方治疗时额外肌肉注射黄体酮.中药组和中西医联合组均连续用药3月.观察3组血清β-HCG、P、E2水平的变化,比较3组足月分娩率.结果:孕1月,3组血清β-HCG、P及E2水平比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).孕2月,中药组和中西医结合组血清β-HCG、P及E2水平均高于对照组(P＜0.05),中西医结合组3项指标水平均高于中药组(P＜0.05).孕3月,中药组和中西医结合组血清β-HCG、P及E2水平均高于对照组,中西医结合组3项指标水平均高于中药组(P＜0.05).对照组足月分娩率62.5％(25/40),中药组足月分娩率82.5％ (33/40),中西医结合组足月分娩率90.0％ (36/40).中药组和中西医结合组的足月分娩率均高于对照组(P＜ 0.05,P＜ 0.01).结论:补肾益气方联合黄体酮注射液治疗黄体功能不全所致自然流产,可提高孕妇血清中的β-HCG、P及E2水平,有较好的保胎效果.
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补肾益气方治疗月经过少84例临床观察
目的:分析补肾益气方治疗月经过少的临床疗效.方法:收集2014年03月～ 2015年03月门诊就诊的84例月经过少患者临床资料,按照就诊顺序随机分为观察组及对照组,各42例,对照组取常规西医治疗,观察组采取自拟补肾益气方治疗,对比患者临床疗效.结果:观察组治疗总有效率为92.86％,明显高于对照组的80.95％,差异有显著性(P＜0.05);两组患者治疗后E3、PRL、FSH、LH水平比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);观察组患者治疗后经量、面色、神疲乏力评分均明显低于对照组,差异有显著性(P＜0.05);观察组患者治疗后月经量和子宫内膜厚度均明显高于对照组,差异有显著性(P＜0.05).结论:补肾益气方治疗月经过少,能改善子宫内膜厚度,充分改善患者临床症状,值得临床推广.
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补肾益气方加味治疗足跟痛40例
目的:观察滋补肝肾法,以六味地黄汤加味治疗足跟痛的疗效.方法:采用补肾益气方(党参、泽泻、茯苓、丹皮、当归、焦杜仲、枸杞子、黄芪、熟地、山药、山萸肉等)加味治疗足跟痛40例.结果:总有效率为90%.结论:补肾益气法对本病有较为满意的疗效.
关键词： 足跟痛/中医药治疗 六味地黄丸/治疗应用 补肾益气方
