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局灶性脑缺血再灌注致大鼠大脑皮质tau蛋白异常高度磷酸化
目的 探讨局灶性脑缺血再灌注后大鼠顶叶皮质神经元tau蛋白磷酸化的变化,及其与神经细胞凋亡的关系,以阐明脑梗死和阿尔茨海默病间的关系.方法 制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫印迹法检测局灶性脑缺血再灌注后大鼠顶叶皮质tau蛋白在Serl99/202、Ser396、Ser404和Tyr231位点磷酸化和不溶性磷酸化tau蛋白的变化;TUNEL法和免疫荧光双标法检测脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和磷酸化tau蛋白的关系.结果 缺血再灌注6 h后顶叶皮质tau蛋白在Ser199/202、Ser396、Ser404和Tyr231位点发生异常高度磷酸化,不溶性磷酸化tau蛋白显著增加.脑缺血再灌注后3 d神经细胞的凋亡和tau蛋白高度磷酸化呈显著正相关关系.结论 脑缺血再灌注后发生阿尔茨海默病样病理变化,脑梗死可能促进了阿尔茨海默病的发生、发展.
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冈田酸所致微管相关蛋白tau Ser396位点过度磷酸化抑制细胞凋亡
目的 探讨磷酸酯酶活性降低致tau过度磷酸化与细胞凋亡的关系.方法 稳定表达人tau eDNA的鼠成神经瘤细胞(N2a/tau)分3组.对照组不处理;十字孢碱(staurosporine,STP,凋亡诱导剂)处理6 h为STP组;用磷酸酯酶PP-2A的抑制剂冈田酸(okadaic acid,OA)处理4 h,再用STP处理6 h为OA+STP组.流式细胞仪检测凋亡率,免疫印迹检测Ser396位点磷酸化tau(Ser396 p-tau)和总tau的表达,免疫荧光双标检测Ser396 p-tau的阳性产物与活化的半胱氨酸蛋白酶(Cleaved Caspase-3)阳性产物的共定位关系.结果 ①凋亡率:对照组为(4.37±1.47)%,STP组为(19.84±3.25)%,OA+STP组为(12.12±2.46)%;②免疫印迹:OA+STP组Ser396 p-tau的表达明显高于另两组,总tau表达组间无差异;③免疫荧光双标:进一步印证免疫印迹结果,且3组均显示活化的Caspase-3和Ser396 p-tau阳性产物大多不共定位于相同细胞.结论 PP-2A活性降低所致tau Ser396位点的过度磷酸化可抑制细胞凋亡,结合前期的实验进一步明确特殊位点过度磷酸化的tau可抑制细胞进入快速的凋亡程序.
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1型糖尿病大鼠海马Alzheimer样磷酸酯酶2A活性降低导致tau蛋白过度磷酸化
目的 为探讨1型糖尿病增高阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)发病风险的机制,采用1型糖尿病大鼠模型,研究tau蛋白过度磷酸化及其形成机制.方法 以同龄Wistar大鼠为对照组(CTL),大剂量链脲佐菌素(strepto-zotocin,STZ)造成1型糖尿病大鼠模型(T1DM).葡萄糖氧化酶法检测血糖,放射免疫法检测血浆胰岛素;蛋白质印迹分析海马内总tau蛋白及tau蛋白上部分位点(Ser199/202、Ser214、Ser396及Ser422)的磷酸化水平及胞质内总糖原合成激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)、磷酸化GSK-3β水平;免疫组化技术分析海马神经细胞内tau蛋白上位点Ser396磷酸化状态;蛋白磷酸酯酶2A(PP2A)、蛋白磷酸酯酶2B(PP2B)试剂盒检测PP2A、PP2B活性.结果 T1DM组血糖水平较对照组(CTL)显著升高,血浆胰岛素水平显著下降.TIDM组大鼠海马总tau蛋白水平与CTL组比较差异无显著性意义,但tau蛋白上位点Ser199/202、Ser214、Ser396及Ser422上磷酸化程度有明显升高,Tau-1所检测的Ser199/202位点的非磷酸化水平较CTL组显著降低.免疫组化结果显示T1DM组海马区tau蛋白位点Ser396磷酸化水平显著高于CTL组.两组总GSK-3β水平差异无显著性意义,TIDM组磷酸化GSK-3β水平较CTL组下降,但差异无显著性意义.磷酸酯酶活性检测结果显示,T1DM组PP2A活性显著下降至CTL组的1/3,而PP2B活性不变.结论 1型糖尿病大鼠海马中.主要由于PP2A活性下降导致tau蛋白呈Alzheimer样过度磷酸化改变.
关键词： 1型糖尿病 Alzheimer病 Tau蛋白 蛋白磷酸化 蛋白磷酸酯酶 -
甲状腺功能异常大鼠大脑皮层Alzheimer病样tau蛋白异常修饰
目的 探讨甲状腺功能亢进及减低状态大鼠大脑皮层tau蛋白部分位点磷酸化水平的变化.方法 雌性Wistar大鼠分别以甲状腺片及丙基硫氧嘧啶片灌胃4周造模成甲状腺机能亢进组(甲亢组)及甲状腺机能减低组(甲减组),温度计记录大鼠直肠温度,葡萄糖氧化酶法检测血糖,放免法检测血浆游离T3(FT3)、游离T4(FT4)及促甲状腺激素(TSH).Western blot法分析大脑皮层内总tau蛋白、tau蛋白上部分位点(Ser199、Thr205、Thr212、Ser214、Ser396及Ser422)的磷酸化水平,免疫组化SP法分析tau蛋白Ser396/404位点上磷酸化水平.结果 甲亢组大鼠直肠温度显著高于对照组,而甲减组显著低于对照组.甲亢组血糖水平显著高于对照组,而甲减组与对照组比较则显著下降.3组大鼠海马回总tau蛋白无差异,但在检测磷酸化位点Ser199、Thr212、Ser214、Ser396及Ser422的磷酸化程度上甲减组都显著高于甲亢组及对照组,而后两组磷酸化水平无显著差异.tau蛋白在Ser396/404位点上免疫组化检测结果显示甲减组大鼠海马CA3区大量阳性表达细胞,而其他两组在此区呈弱阳性表达.结论 ①甲状腺功能减低大鼠大脑皮层tau蛋白呈Alzheimer样过度磷酸化改变.②低代谢可能参与了甲状腺功能减低大鼠tau过度磷酸化的形成.③甲状腺功能亢进时虽代谢率及体温都升高,但不影响大脑皮层tau蛋白磷酸化状态.
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脂多糖侧脑室注射对大鼠海马tau蛋白磷酸化水平的影响
目的 研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对大鼠海马神经元细胞tau蛋白磷酸化的影响.方法 大鼠侧脑室注射LPS(5μg和50μg)后2、4、8 h提取海马神经元蛋白,利用免疫印迹法检测tau蛋白磷酸化的情况.结果 ①大鼠海马神经元细胞tau蛋白在LPS注射2 h后出现异常过度磷酸化的表现,之后出现去磷酸化.②注射高剂量LPS后出现了tau蛋白表达总量增加.结论 LPS能引起大鼠海马神经元细胞的tau蛋白异常过度磷酸化.
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褪黑素对花萼海绵诱癌素诱导大鼠前脑脑片tau蛋白过度磷酸化的保护
目的用脑片研究花萼海绵诱癌素(CA)诱导骨架蛋白tau过度磷酸化,以及褪黑素(MT)的保护作用及可能机制.方法培养大鼠前脑脑片,分为5组:A组:正常对照组,B组: 0.1 μmol/L CA组,C组:10 μmol/L MT +0.1 μmol/L CA组,D组: 40 μmol/L MT +0.1 μmol/L CA组,E组:80 μmol/L MT +0.1 μmol/L CA组.用免疫印迹法检测tau的磷酸化程度,同时检测脑片组织丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果0.1 μmol/L CA使tau蛋白在Ser396/404、Ser198/199/202位点的磷酸化程度显著升高,脑片的MDA含量及SOD活性显著升高; MT能使tau蛋白在Ser396/404、Ser198/199/202位点的磷酸化水平显著降低;显著降低CA处理增高的脑片MDA水平,提高SOD活性.结论 CA能够诱导前脑脑片tau蛋白发生过度磷酸化;MT对CA诱导的tau蛋白过度磷酸化具有保护作用.为深入探讨阿尔茨海默病发病机制和防治方法提供了实验依据.
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不同年龄大鼠神经系统tau蛋白的表达特性
通过研究不同年龄组大鼠脑组织中微管相关蛋白tau的表达特性和磷酸化位点的差异，为阿尔茨海默病（AD）脑组织中tau蛋白的研究提供资料。将大鼠分为胎鼠、新生鼠、成年鼠和老年鼠4组，取各组大鼠的脑组织制成匀浆，用免疫印迹法检测各组tau蛋白的分子量范围及磷酸化状态。结果发现非磷酸化依赖性抗tau抗体R134d的免疫显色结果显示：胎鼠和新生鼠主要含低分子量（14.2～28.8 ku）tau蛋白；成年鼠除在脊索中显示高分子量tau（67.5～96.6 ku）外，大脑灰质和白质中的tau蛋白主要集中在中分子量（28.8～42.7 ku）范围；老年鼠的灰质、白质和脊索中均含高分子量tau蛋白，且在灰质和白质组分中中分子量tau的含量比成年组显著增高。Tau-1的显色性质与R134 d相似。PHF-1和M4只在胎鼠和新生鼠显带。认为大鼠神经系统tau蛋白的表达性质及其磷酸化状态随年龄增长而显著不同。
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血清长链非编码RNA BC200水平在阿尔茨海默病诊疗中的应用价值
目的 检测阿尔茨海病(Alzheimer's disease,AD)患者血清长链非编码RNA(LncRNA)BC200表达水平,分析其与患者临床特征的关系,探讨其在AD诊断中与血管性痴呆(vascular dementia,VaD)鉴别诊断中的价值.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应对41例AD患者、37例VaD患者、40例对照组患者血清中的LncRNA BC200表达水平进行检测.同时采用ELISA法检测各组患者脑脊液中Aβ1-42蛋白和Tau蛋白水平,分析LncRNA BC200、Aβ1-42和Tau在3组间进行鉴别诊断的价值.应用ROC曲线分析LncRNA BC200、Aβ1-42和Tau诊断AD的敏感度和特异度.结果LncRNA BC200表达水平和AD病程相关(P<0.05),而与性别、年龄和受教育程度均无显著相关(均P>0.05).AD组患者的LncRNA BC200和Tau水平均明显高于VaD组和对照组,Aβ1-42水平显著低于VaD组和对照组(均P<0.01);VaD组患者的LncRNA BC200和Aβ1-42水平与对照组比较,差异无统计学意义(均P>0.05),而Tau水平显著高于对照组(P<0.01).LncRNA BC200、Aβ1-42和Tau三者联合检测的敏感度(88.5％)、特异度(91.3％)和曲线下面积AUCROC(0.965)均比单独检测高,具有较好的诊断价值.结论 AD患者血清中LncRNA BC200表达水平明显升高 , LncRNA BC200可用于AD和VaD的鉴别诊断 ,LncRNA BC200有望成为AD诊断的潜在生物标志物.
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Tau40蛋白的纯化及其多克隆抗体的制备
目的 快速纯化tau蛋白,制备tau 蛋白的多克隆抗体.方法 依次使用差速离心、热失活、离子交换层析的方法纯化体外重组的人tau蛋白;用此纯化的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,用Western blot检测组织来源的样品,确定所制备抗体的特异性和效价.结果 采用上述方法成功获得人类全长tau蛋白--tau40;同时,所制备的tau蛋白多克隆抗体效价高,特异性好.结论 本方法所获得的tau抗体效价高,特异性好,可以用于进一步的科学研究.
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Tau蛋白的过度磷酸化机制及其在阿尔茨海默病中的作用
阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是为常见的神经退行性疾病之一,其临床表现主要有记忆功能的进行性衰退、认知功能障碍、语言及社交功能减退,乃至人格改变及生活能力丧失等,直至死亡[1].其病因和发病机制至今尚无定论,但大量研究表明,该病病理特征主要表现为神经细胞外的老年斑(senile plaque,SP)、神经元内的神经纤维缠结(neurofibrillarytangles,NFTs)、神经元功能的丧失以及突触数目的减少等[2].细胞内的神经纤维缠结主要由双螺旋纤维细丝(paired helical filaments,PHF)聚集变粗后扭曲而成,双螺旋纤维形成依赖Tau蛋白的过度磷酸化[34].形成老年斑的β-淀粉样蛋白(amyloid β peptide,Aβ)的毒性作用也需要Tau蛋白介导[5-6].表明Tau蛋白异常在AD的发展过程中扮演着重要角色.
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蒺藜总皂苷对AD大鼠的影响
目的 探讨蒺藜总皂苷对AlCl3致AD大鼠的影响.方法 采用AlCl<,3>灌胃制作AD大鼠模型,Morris水迷宫检测大鼠空间记忆能力,免疫印迹检测tau蛋白磷酸化水平.结果 蒺藜总皂苷明显缩短大鼠寻找平台的时间,降低tau蛋白磷酸化水平.结论 蒺藜总皂苷能有效改善因AlCl<,3>所致的大鼠空间记忆障碍,其机制可能与抑制tau蛋白过度磷酸化有关.
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麦芽醇对AD大鼠空间记忆障碍的影响
目的 探讨麦芽醇对AlCl3致阿尔茨海默病(AD)大鼠的影响.方法采用AlCl3灌胃制作AD大鼠模型,Morris 水迷宫检测大鼠空间记忆能力,免疫印迹检测tau蛋白磷酸化水平.结果 麦芽醇明显缩短大鼠寻找平台的时间,降低tau蛋白磷酸化水平.结论 麦芽醇能有效改善因AlCl3所致的大鼠空间记忆障碍,其机制可能与抑制tau蛋白过度磷酸化有关.
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胆固醇在阿尔茨海默病发病机制中的作用
阿尔茨海默病是一种进行性的神经退行性病变,其病理特点是细胞外β-淀粉样蛋白沉积和细胞内神经元纤维缠结.近几年的研究发现胆固醇在AD的发病机制中有重要作用,β-淀粉样蛋白的沉积和神经元纤维缠结的形成都受脑中胆固醇水平的影响.载脂蛋白E在阿尔茨海默病发病中的重要作用也已经为大家所认同.
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阿尔茨海默病与胰岛素信号通路
近年来的研究发现,胰岛素及其受体在中枢神经系统内广泛存在并与阿尔茨海默病的发病关系密切,胰岛素信号通路障碍很可能是阿尔茨海默病多种病理变化的基础因素,β淀粉样蛋白和tau蛋白的代谢是胰岛素信号级联系统调控的两个相互关联的过程,脑老化伴随该信号系统功能紊乱会导致中枢神经内β淀粉样蛋白的积聚和tau蛋白的异常磷酸化,从而导致散发性阿尔茨海默病的发生.研究胰岛素信号系统与阿尔茨海默病的关系对探讨阿尔茨海默病发生、发展的病理过程及其防治途径具有重要意义.
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自噬在阿尔茨海默病发病机制中的研究进展
自噬是一种溶酶体依赖性的降解途径,主要负责真核细胞内细胞器和长寿命蛋白质的降解,在维持细胞稳态中发挥着重要的作用.自噬在阿尔茨海默病(AD)发病机制中起重要作用.研究发现,自噬与β-淀粉样蛋白沉积、轴突运输功能障碍以及tau蛋白磷酸化等神经病理改变相互作用,并且早老素参与了自噬-溶酶体系统功能的维持.
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表面等离子共振技术在阿尔茨海默病相关研究中的应用
表面等离子共振是近年来迅速发展的用于分析生物分子相互作用的一项技术.该技术无需标记、特异性强、灵敏度高、样品用量小,可实现在线连续实时检测,被广泛应用于蛋白质组学、细胞信号转导、受体-配体相互作用等领域,近年来也逐渐用于以β淀粉样蛋白和tau蛋白为靶标的阿尔茨海默病发病机制及药物筛选等相关研究中.本文主要就表面等离子体共振技术生物传感器的基本原理及其在阿尔茨海默病相关研究中的应用做一综述.
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组蛋白去乙酰化酶6在阿尔茨海默病中的作用
组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)是HDAC家族中Ⅱb类成员之一,具有去乙酰化酶活性和参与细胞内异常蛋白降解的功能.近来研究发现HDAC6参与调节Tau蛋白磷酸化、糖原合成酶激酶3β(GSK3β)影响线粒体运输等有关的生化过程,提示HDAC6可能与AD的发生有关,是治疗AD的潜在靶点.本文论述了HDAC6的结构与功能、HDAC6的选择性抑制剂以及在AD中的作用.
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血管性认知功能损害患者血液生物学指标的研究进展
血管性认知功能损害(VCI)的早期诊断和干预对防止其进展成为严重的血管性痴呆具有重要价值.虽然脑脊液变化能反映中枢神经系统疾病的真实情况,但腰椎穿刺不是常规检查手段.本文就血液中β-淀粉样蛋白、tau蛋白、胆固醇、同型半胱氨酸和C反应蛋白等生物学指标在VCI的研究进展进行综述,我们认为血液生物学指标有望用于VCI早期诊断.
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脑源性神经营养因子在阿尔茨海默病中的研究进展
脑源性神经营养因子足神经营养因子家族成员,对神经元损伤后再生修复和防止神经细胞退行性变等方面发挥重要作用的神经营养因子.阿尔茨海默病足一种常见的神经系统退行性疾病,其中Tau蛋白磷酸化促进了疾病的发生,而脑源性神经营养因子通过激活酪氨酸激酶受体可以阻止Tau蛋白磷酸化,从而影响疾病的发生发展.
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阿尔茨海默病的生物学标志
阿尔茨海默病是老年常见的神经系统变性性疾病.为了早期诊断阿尔茨海默病或预测阿尔茨海默病的发生,国内外学者努力寻找阿尔茨海默病的生物学标志,尤其在脑脊液、血浆中寻找到了多种特异性强的物质.基于脑脊液或血浆的多种检测指标的联合应用可能成为今后早期诊断阿尔茨海默病的有利方法 .
