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TIPE2的研究进展
近年来研究证明TIPE2与免疫动态平衡密切相关,并通过竞争抑制信号通路的传导,促进细胞的增殖、抑制细胞的凋亡.TIPE2的研究有望了解其在疾病发生、发展中的作用,阐明疾病的发病机制,有助于疾病的预防和治疗.
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TIPE2在类风湿关节炎发病中的表达及其意义
目的 探讨TIPE2 (tumor necrosis factor-a induced protein 8 like 2)在牛Ⅱ型胶原诱导的CIA模型小鼠脾脏及类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者的外周血淋巴细胞中的表达及其意义.方法 使用牛Ⅱ型胶原免疫DBA-1/j小鼠,建立CIA小鼠模型；半定量RT-PCR法检测CIA小鼠脾脏中TIPE2基因的表达变化,荧光定量RT-PCR检测患者和健康对照者新鲜分离的淋巴细胞中TIPE2基因的表达差异；Western blot检测CIA小鼠脾脏及患者淋巴细胞中TIPE2蛋白表达差异.并研究TIPE2与类风湿关节炎患者病情活动程度的关系.结果 CIA小鼠的脾脏细胞中和患者外周血淋巴细胞中TIPE2在mRNA和蛋白水平表达增强,此外类风湿患者在活动期TIPE2表达更高,差异有统计学意义.类风湿关节炎患者的TIPE2表达水平和DAS28评分成明显正相关(P＜0.001).结论 TIPE2参与了类风湿关节炎的发病过程,TIPE2可能是评价类风湿关节炎患者病情严重程度的标志物.
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促红细胞生成素衍生物抗糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的作用及其机制
目的：探讨氨甲酰促红细胞生成素（CEPO）对实验性糖尿病大鼠心脏的保护作用及其相关的机制。方法高脂高糖饲料喂养联合链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型，建模成功后按处理方式不同分为3组，用TUNEL试剂盒检测糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的情况，免疫组化方法检测心肌TEPE2蛋白表达情况。结果糖尿病组可见较多凋亡细胞（19.43±2.08）个/mm2。CEPO组心肌细胞凋亡增加少于糖尿病组（12.1±2.31）个/mm2（P＜0.05），但仍高于对照组（P＜0.05）。糖尿病组大鼠心肌组织可见有大量TIPE2蛋白表达。与糖尿病组比较，CEPO可以使糖尿病大鼠心肌TIPE2蛋白表达下降（P＜0.05）。结论 CEPO可以抑制糖尿病大鼠心肌细胞凋亡，其作用机制涉及TIPE2信号通路。
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表达TIPE2腺病毒载体的构建及其对结肠癌细胞增殖的影响
目的：结肠癌的发生与结肠慢性炎症密切相关。TIPE2（tumor necrosis factor-α-induced protein 8-like 2）是一种炎症和免疫平衡的调节因子。本实验旨在构建表达TIPE2的腺病毒载体，并初步观察其对结肠癌细胞增殖的影响。方法将TIPE2-cDNA定向克隆至转移质粒pShuttle-CMV多克隆位点，然后与病毒骨架质粒 pAdc68重组，在 HEK293细胞中包装成完整病毒并复制扩增、纯化，获得表达TIPE2的重组腺病毒载体，命名为Adc68-TIPE2。实时荧光定量PCR及Western blot检测病毒感染后TIPE2在结肠癌细胞系HT29及SW620中的表达，MTT法检测TIPE2对结肠癌细胞增殖的影响。结果重组腺病毒载体Adc68-TIPE2构建成功。病毒感染后TIPE2可在结肠癌细胞系HT29及SW620中高效表达。以不同浓度Adc68-TIPE2（分别为108 vp/ml、109 vp/ml、1010 vp/ml）感染HT29及SW620细胞48 h后，HT29细胞的增殖率分别为93%、71%、14%。与空载体相比差异有统计学意义（P＜0.05）；SW620增殖率分别为89%、53%、10%。与空载体相比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论本研究成功构建表达TIPE2的腺病毒载体Adc68-TIPE2，Adc68-TIPE2可抑制结肠癌细胞增殖。
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RA患者血清TNF-α和外周血单个核细胞TIPE2表达的意义
目的 探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血清中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α)和外周血单个核细胞中肿瘤坏死因子α诱导蛋白家族8样蛋白2(tumor necrosis factor-α induced protein 8 like 2,TIPE2)的表达在RA的诊断及疗效评价中的价值.方法 选取开封市第二人民医院风湿科近两年收治的RA患者86例,包括活动期患者42例,缓解期患者44例,门诊健康对照40例,用酶联免疫吸附法检测3组的血清中TNF-α的浓度,无菌抽取各组外周血,提取外周血单个核细胞,用荧光定量PCR及Western blot法检测TIPE2在mRNA及蛋白水平的表达.结果 RA活动组和缓解组患者血清中的TNF-α浓度高于健康对照组,RA活动组血清中TNF-α明显高于缓解组,差异有统计学意义(P＜0.05).TNF-α和RF联合检测的敏感度和特异性分别为75.5％和90％,特异性与单独检测RF相比,差异有统计学意义(P＜0.05).RA活动期患者血清中TNF-α的浓度及TIPE2在mRNA表达水平和DAS28评分呈正相关(P＜0.01),RA患者血清中TNF-α的浓度和TIPE2在mRNA表达水平呈正相关(P＜0.01).RA患者外周血TIPE2在mRNA及蛋白水平均高于对照组,而且活动组高于缓解组(P＜0.01).结论 联合检测RA患者血清中的TNF-α对患者的诊断和病情的监测有重要临床价值,TIPE2参与了RA的发病过程,可以和TNF-α一起作为判断疾病严重程度的指标.
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TIPE2在小鼠巨噬细胞焦亡中的作用
目的 评价肿瘤坏死因子-α诱导蛋白家族8-样蛋白2(TIPE2)在小鼠巨噬细胞焦亡中的作用.方法 采用随机数字表法将J774A.1巨噬细胞分为4组(n=18):空载对照组(C组)、空载对照组+LPS∕ATP组(C+LPS∕ATP组)、TIPE2过表达组(T组)、TIPE2过表达+LPS∕ATP组(T+LPS∕ATP组).C组和C+LPS∕ATP组用不携带TIPE2的慢病毒感染细胞,T组和T+LPS∕ATP组构建TIPE2过表达稳转细胞系,随后C+LPS∕ATP组和T+LPS∕ATP组加入LPS 1.0μg∕ml,孵育5 h后再加入ATP 5.0 mmol∕L孵育1 h.收集细胞,采用Western blot法检测TIPE2、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、IL-1β和IL-18的表达;采用流式细胞术检测焦亡细胞百分比;采用ELISA法检测细胞培养液TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-18的浓度.结果 与C组比较,C+LPS∕ATP组TIPE2表达下调,NLRP3、IL-1β和IL-18表达上调,焦亡细胞百分比、培养液TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-18浓度升高(P<0.05).与T组比较,T+LPS∕ATP组TIPE2表达下调,NLRP3、IL-1β和IL-18表达上调,焦亡细胞百分比、培养液TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-18浓度升高(P<0.05).与C+LPS∕ATP组比较,T+LPS∕ATP组TIPE2表达上调,NLRP3、IL-1β和IL-18表达下调,焦亡细胞百分比、培养液TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-18浓度降低(P<0.05).结论 TIPE2可抑制小鼠巨噬细胞焦亡,机制可能与抑制NLRP3炎症小体激活有关.
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姜黄素对 HepG2细胞中 PI3K 信号通路 TIPE2分子的影响
目的：研究姜黄素对 HepG2细胞 PI3K 信号通路相关分子 TIPE2分子的影响，并探讨其分子机制。方法体外培养 HepG2细胞应用 RT_PCR 方法检测 HepG2细胞中 TIPE2的表达。结果姜黄素可上调 HepG2细胞中 TIPE2的 mRNA。结论姜黄素通过上调 TIPE2抑制 PI3K 信号通路，从而提高了抗肿瘤作用。
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免疫调节因子TIPE2慢病毒载体的构建及病毒包装
目的:TIPE2[Tumor necrosis factor (TNF)-α induced protein 8-like 2 (TNFAIP8L2),TIPE2]慢病毒载体的构建及病毒包装.方法:首先构建带有3×FLAG标签的pCDNA3.1-3×FLAG-TIPE2质粒,确认表达后再将标签连同TIPE2序列一起克隆入pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro慢病毒表达载体,然后与pMD2.G、psPAX2共转染293T细胞并收获上清,进一步用含病毒颗粒的上清感染PLC/PRF/5及HEK293T细胞,Western blot检测感染后TIPE2蛋白表达情况.结果:pCDNA3.1-3×FLAG-TIPE2及pCDH-CMV-MCS-EFl-Puro-TIPE2质粒构建成功,并能终产出具有感染性的病毒颗粒.结论:成功构建了TIPE2慢病毒载体并获得具有感染性的病毒颗粒,为进一步研究TIPE2功能提供了有力的支持.
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TIPE2过表达质粒转染大鼠佐剂型关节炎滑膜成纤维样细胞及分析
目的:通过TIPE2表达质粒转染大鼠佐剂型关节炎 (AA) 成纤维样滑膜细胞 (FLS),体外研究 AA 的发病中 TIPE2 对DR5介导细胞凋亡的作用.方法:应用 MIGR1/TIPE2+/+ 表达质粒,经脂质体法导入AA-FLS细胞中,转染72小时后,荧光显微镜检测质粒自带GFP基因的表达情况确认转染效率,以未作处理的AA-FLS为对照组,用半定量逆转录聚合酶链反应 ( RT-PCR ) 检测 TIPE2 mRNA的表达,用 Western blot 法检测TIPE2 蛋白的表达变化,MTT 法以及流式细胞术检测抗 DR5 功能性单链抗体ZF1对两组细胞生长的影响.结果:成功获得荧光强度90% 的 TIPE2过表达 AA-FLS 细胞,TIPE2 mRNA 及蛋白表达显著提高.抗 DR5 单链抗体 ZF1 对 TIPE2+/+ 的FLS组细胞具有明显生长抑制及凋亡诱导作用,与不作处理的FLS组相比差异显著.结论:TIPE2+/+表达质粒明显提升AA-FLS的TIPE2蛋白表达水平,TIPE2 对 DR5 介导细胞凋亡有重要作用.
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TIPE2抑制AP-1蛋白增加人非小细胞肺癌细胞系NCI-H1975化疗敏感性的机制研究
目的:探讨TIPE2增强非小细胞肺癌细胞系NCl-H1975化疗敏感性及其机制.方法:非小细胞肺癌系NCI-H1975转入TIPE2慢病毒载体后,加入CDDP后使用CCK-8测量IC50值,凋亡细胞用AnnexinV/FITC和PI凋亡检测试剂盒进行检测,Western blot检测转染TIPE2后AP-1及MDR-1的蛋白表达量,实时荧光定量PCR检测转染TIPE2后IL-1、IL-6及TNF-α mRNA水平.结果:(1)TIPE2降低非小细胞肺癌系NCI-H1975细胞IC50值(P＜0.001);(2)TIPE2增加非小细胞肺癌系NCI-H1975细胞对CDDP的凋亡率(P＜0.05);(3) TIPE2可显著降低非小细胞肺癌系NCI-H1975细胞中AP-1及MDR1的表达量;(4) TIPE2可显著降低非小细胞肺癌系NCI-H1975细胞中IL-1、IL-6及TNF-α mRNA水平的表达(P＜0.01).结论:TIPE2可能通过抑制AP-1蛋白增加非小细胞肺癌细胞系NCl-H1975对CDDP的化疗敏感性.
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TIPE2与免疫相关疾病的研究进展
TIPE2作为TNFAIP8家族成员之一,是重要的负性免疫调控因子,通过调节固有免疫反应及适应免疫反应,维持机体的免疫稳态.目前已发现,TIPE2在一些免疫相关疾病中存在异常表达.对TIPE2的相关研究将为免疫相关疾病的治疗和预防提供新思路.
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TIPE2在溃疡性结肠炎中的表达及其意义探究
背景:TIPE2是一种新近发现的免疫负调控蛋白,对于维持免疫稳态和免疫耐受具有重要意义.研究发现TIPE2在人体中广泛表达于各类组织和器官.目的:检测TIPE2在溃疡性结肠炎(UC)患者和非UC个体外周血和结肠黏膜中的表达,探讨其在UC发生、发展中的作用.方法:收集2015年1月—2016年8月就诊于西安交通大学第二附属医院的活动期UC患者的外周血标本42例和结肠黏膜标本30例,同时采集同期非UC个体外周血和结肠黏膜标本作为对照,分别采用 real-time PCR和免疫组化染色检测外周血单个核细胞 TIPE2 mRNA和结肠黏膜TIPE2蛋白表达.结果:TIPE2 mRNA在UC患者外周血中的表达较对照组有增高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);Truelove-Witts分型轻、中、重度UC组间TIPE2 mRNA表达总体差异无统计学意义(P>0.05).TIPE2蛋白在UC患者结肠黏膜中的表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);其表达随UC组织学分级的升高而升高,但总体差异无统计学意义(P>0.05).结论:TIPE2在UC患者结肠局部表达增高,可能与UC发生、发展相关.
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免疫负调控基因TIPE2对H446肺癌细胞MAPKs信号通路的影响
目的 探讨免疫负调控基因TIPE2过表达对小细胞肺癌H446细胞MAPKs信号通路的影响.方法 选取人小细胞肺癌细胞株H446,通过稳定转染系统构建TIPE2过表达小细胞肺癌H446细胞株,分为H446组、H446-Vector组和H446-TIPE2组.免疫细胞化学技术验证小细胞肺癌H446细胞过表达TIPE2情况,蛋白免疫印迹技术检测TIPE2过表达对MAPKs通路P38、ERK和JNK信号磷酸化的影响.结果 过表达TIPE2的H446细胞构建成功,TIPE2蛋白在胞浆中高表达.免疫细胞化学技术检测结果显示,H446-TIPE2组胞质中可见棕褐色阳性着色即为TIPE2蛋白,而H446组和H446-Vector组均未见棕褐色阳性表达.蛋白免疫印迹技术结果显示,三组细胞在内参Actin的标准化下,均有磷酸化ERK、P38和JNK信号表达,但H446-TIPE2组ERK和JNK磷酸化水平低于H446组和H446-Vector组,P38通路磷酸化水平高于H446组和H446-Vector组.结论 TIPE2过表达激活P38通路,但抑制ERK和JNK通路.
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Tipe2过表达对小细胞肺癌H446凋亡相关分子的影响
目的 观察Tipe2过表达对小细胞肺癌细胞H446凋亡相关分子的影响.方法 以脂质体转染技术建立Tipe2过表达的H446小细胞肺癌细胞系,利用荧光显微拍照技术和Western Blot免疫印迹技术分别检测Tipe2过表达情况和细胞凋亡相关分子Bax和Mcl-1的变化.结果 GFP-Tipe2质粒脂质体转染H446细胞高表达Tipe2,并带有标签GFP的绿色荧光.Tipe2过表达的H446细胞促凋亡分子Bax表达增高,而抗凋亡分子Mcl-1表达降低,细胞凋亡明显.结论 Tipe2过表达通过上调Bax和下调Mcl-1促进小细胞肺癌H446凋亡.
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免疫负调控分子肿瘤坏死因子α诱导蛋白8-2与炎症
肿瘤坏死因子α诱导蛋白8-2(turmor necrosis factor α-induced protein-8-1ike2,TNFAIP8L2,TIPE2)是近年来发现的免疫负调控分子,其通过对TCR和TLR进行信号转导,调控固有免疫应答和适应性免疫应答,维持机体免疫稳态.本文总结了TIPE2的组织学分布及其与免疫和炎症性疾病之间的关系.
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新型免疫分子TIPE2在感染性疾病中的诊断价值及其与血清降钙素原相关性分析
目的：探讨新型免疫分子TIPE2在感染性疾病中的诊断价值及其与降钙素原的相关性分析。方法：选取重症监护室收治病人96例，其中PCT阳性即临床诊断细菌感染者60例，PCT阴性即无明显细菌感染者36例；同时选取40名健康人作为对照组，检测外周血单个核细胞中TIPE2的表达水平并分析与降钙素原水平的相关性。结果：重症细菌感染组TIPE2表达水平高于无细菌感染组和对照组（P<0.05），与PCT存在明显相关性；无细菌感染组与对照组相比，结果不具有统计学意义（P>0.05）。结论：新型免疫分子TIPE2与血清降钙素原联合检测可对细菌感染性疾病的临床诊断具有一定指导作用，两者水平在重症感染病人中呈明显正相关。
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2型糖尿病大鼠脑组织TIPE2的表达特征及其与Aβ1-40沉积的相关性
目的 探讨2型糖尿病大鼠脑组织肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样因子2(TIPE2)的表达特征及其与淀粉样蛋白Aβ1-40的相关性.方法 GK大鼠为2型糖尿病模型组(GK组),Wistar大鼠为非糖尿病模型组(Wistar 组).运用免疫组织化学染色法检测脑组织TIPE2和Aβ1-40的表达及空间分布；RT-PCR法和Westem blot法分别检测脑组织TIPE2 mRNA水平和蛋白含量；ELISA法检测脑组织Aβ1-40蛋白含量.结果 TIPE2主要表达于皮层和皮层下组织结构的神经胶质细胞和微/小血管管壁.与Wistar组相比,GK组大鼠脑组织TIPE2蛋白、mRNA、阳染血管数和阳染神经胶质细胞数均显著增高(P均＜0.05).Aβ1-40主要分布于皮质和海马等组织结构的神经元、神经胶质细胞和血管壁.与Wistar组相比,GK组大鼠脑组织Aβ1-40蛋白、阳染血管数和阳染细胞数均显著增高(P均＜0.05).脑组织TIPE2蛋白表达与Aβ1-40水平在Wistar组(r =0.951)和GK组(r=0.954)均呈正相关(P均＜0.05).结论 糖尿病大鼠脑组织TIPE2表达增多,并且与Aβ1-40沉积有关,提示TIPE2可能参与糖尿病脑组织损伤的发生发展.
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人TIPE2基因启动子的鉴定及其表达调控区域的研究
目的 克隆人TIPE2基因启动子区及一系列5′截短片段,并鉴定其DNA表达调控区域.方法 采用PCR技术从人基因组DNA中克隆扩增TIPE2基因5′上游1252 bp启动子序列并对该片段5′端的截短,分别瞬时转染人卵巢癌来源细胞系SKOV3,通过双萤光素酶活性的检测鉴定其启动子活性及表达调控区域.结果 克隆扩增的8个TIPE2基因启动子截短片段经测序证明无误;TIPE2-pGL4-P1重组质粒双萤光素酶活性检测显示其具有明显的启动子活性,约为pGL4-Basic的7.9倍;5′系列截短片段重组质粒的启动子活性检测显示,与1252bp片段相比,TIPE2上游-965～-593bp、-501～-390bp缺失,启动子活性分别升高6.38、7.82倍;-593～-501bp的缺失,使-501～+79 bp片段相对于-593～+79 bp片段的启动子活性降低2.04倍.结论 人TIPE2基因上游1252 bp区域有明显的启动子活性,该片段内存在2个潜在的负性调控区和1个潜在的正性调控区.
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TIPE2和炎性细胞因子在鼠动脉硬化斑块形成中的表达及其相互关系
目的 探讨新的免疫负调控分子TIPE2和炎性细胞因子在ApoE基因敲除鼠(ApoE-/-小鼠)动脉粥样硬化斑块形成中的表达及其相互关系,分析其在动脉粥样硬化中的作用.方法 应用ApoE-/-小鼠构建动脉血管粥样硬化模型,普通C57野生型小鼠为对照组,通过对动脉血管HE染色及油红O染色判定斑块进展情况,并用RT-PCR的方法 检测斑块局部TIPE2及白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-12p40(IL-12p40)、转化生长因子-β(TGF-β)种肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达,定量后分析其直线相关关系.结果 8周龄ApoE-/-小鼠高脂喂养至16周后,动脉已形成明显粥样硬化宽块,同周龄野生型C57小鼠血管壁内未见斑块形成;TIPE2在ApoE-/-小鼠无斑块期(8周)、斑块早期(16周)及斑块中晚期(24用)主动脉中表达均明显高于C57对照组;IL-6在ApoE-/-小鼠主动脉斑块各时期表达与C57小鼠相比均无明显变化;而在无斑块期IL-12p40、,TGF-β及TNF-α表达较C57小鼠已明显升高(P
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靶向TIPE2基因的shRNA慢病毒载体构建及病毒包装
目的：包装表达TIPE2-shRNA的慢病毒颗粒。方法查询并合成7对针对TIPE2的shRNA序列，将其克隆入pLK01．载体，经酶切及测序正确后，将构建好的7种pLKO 1．-TIPE2-shRNA质粒分别与 pCDNA31．／3× FLAG-TIPE2共转染293T细胞，Western blot鉴定干扰效率并进行后续的病毒包装。结果4号质粒沉默效果好，将其与 Non-target-shRNA质粒分别进行病毒包装，Western blot和免疫荧光证实病毒具有良好的感染效率和沉默效果。结论 TIPE2-shRNA的慢病毒载体构建及病毒包装成功。
