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重组人表皮细胞生长因子促进深Ⅱ度烧伤创面愈合的临床观察
目的 探讨重组人表皮细胞生长因子(rhEGF)在治疗深Ⅱ度烧伤中的应用价值.方法 将本院2011年1月～2013年1月收治的60例深Ⅱ度烧伤患者按不同治疗方式随机均分为对照组(常规治疗)和实验组(常规治疗+rhEGF),对两组患者的创面愈合情况及不良反应情况进行综合比较.结果 实验组患者创面愈合90％、100％的时间明显低于对照组患者(P＜0.05)；实验组患者换药时疼痛程度明显轻于对照组患者(P＜0.05)；实验组患者不良反应发生率(0)明显低于对照组患者(36.7％)(P＜0.05).结论 rhEGF有促进深Ⅱ度烧伤患者创面愈合的作用,并且无不良反应.
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重组人表皮细胞生长因子治疗面部皮肤擦挫伤42例疗效观察
面部外伤后患者较其它科室患者对伤口的愈合质量提出了更高层次的要求，尤其是女性患者往往希望伤痕修复的更接近于原来的正常皮肤。针对这一问题，重组人表皮细胞生长因子自进入市场以来，因其具有的高效修复、抗衰老、淡化色斑等作用备受各方关注。现对自2008年9月至2013年8月期间应用重组人表皮细胞生长因子治疗面部皮肤擦挫伤的病例创面恢复情况进行总结记录，效果较好。
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表皮细胞逆分化成表皮干细胞的形态学证据
众所周知,多能(或定向)干细胞能生长或分化成各种(或相应)的组织细胞,但成熟的组织细胞能否逆分化为干细胞,一直缺乏实验证据.近,解放军第三○四医院创伤研究室付小兵教授领导的课题组的研究工作,为表皮细胞的逆分化现象提供了直接的形态学证据.研究结果发表在英国著名的"柳叶刀(Lancet)"医学杂志上.研究人员从经过重组人表皮细胞生长因子(rhEGF)处理过的溃疡创面获得表皮组织,用过氧化酶标记的链霉卵白素染色后,发现表皮棘细胞层中有许多细胞能表达表皮干细胞的标志物——角蛋白19和β1整合素,并观察到在位于角质层与基底层之间的颗粒细胞层和透明细胞层中有成群的角蛋白19和β1整合素阳性的干细胞岛;而未经rhEGF处理的溃疡创面仅在表皮细胞基底膜上有单层细胞表达角蛋白19和β1整合素.进一步的研究发现,采用能区别基底层细胞和角质层细胞的方法——角蛋白10和角蛋白14染色,那些角蛋白19和β1整合素表达强阳性的细胞,角蛋白14染色呈弱阳性,角蛋白10染色阴性,表明这些细胞是低分化的表皮干细胞.为了证实此项发现的普遍性,研究人员分别对正常组织以及处于不同生长发育阶段的表皮组织标本进行研究,均未观察到表皮颗粒细胞层和透明细胞层中有成群的角蛋白19和β1整合素阳性的干细胞岛.为了排除实验误差,研究人员还经多角度和多层切片进行观察,均获得相同的结果.研究者认为 ,此项研究发现为表皮细胞的逆分化现象提供了直接的形态学证据.由于干细胞岛只在经表皮细胞生长因子处理过的溃疡创面中观察到,提示rhEGF可能具有促进表皮细胞逆分化并形成表皮干细胞的潜在作用.
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表皮生长因子提高大鼠肺泡Ⅱ型细胞的肺水转运功能
急性肺损伤引起的肺水肿和呼吸衰竭在临床上通常采用常规的通气支持治疗,但对已经受损的肺泡上皮尚缺乏有效的修复手段,而难以从根本上扭转病情.近年来对干细胞和生长因子的广泛研究为主动修复受损的肺泡上皮提供了可能.现已证明,肺泡Ⅱ型细胞是肺泡上皮干细胞,它不仅具有分泌表面活性物质和清除肺泡内液体等多种功能,而且还能通过增殖和分化,补充减少的肺泡Ⅰ型和Ⅱ型细胞,维持正常肺泡上皮数量.近解放军第三○四医院创伤研究室的科研人员,观察了生长因子对肺泡Ⅱ型上皮清除肺泡内液体功能的影响.研究者首先建立了以125 Ⅰ-白蛋白为示踪剂进行肺灌注检测肺泡液体清除率(alveolar liquid clearance,ALC)的方法.将36只正常SD大鼠随机分为6组,其中5组动物经气管滴入重组人表皮细胞生长因子(rhEGF,100 μg/kg),分别于48、72、120、168和240小时测量 1小时肺泡液体清除率,对照组以生理盐水代替rhEGF.同时监测ALC测量期间血气变化.实验结果显示,对照组ALC为(21.68±3.65)%;气管滴入rhEGF后48、72和120小时AL C显著升高[(43.33±13.21)%,P<0.01;(42.52±10.05)%,P<0.01; (34 .35±3.76)%,P<0.01],168小时后恢复正常水平.48小时组、72小时组在灌注后1 小时动脉氧分压也明显高于对照组.此项研究结果表明,rhEGF能提高肺泡Ⅱ型上皮的液体转运能力 ,促进肺泡内液体清除,从而改善肺泡表面氧气交换,有可能为肺损伤和肺水肿的防治提供一种新的方法.
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转染hEGF基因的表皮细胞G418长期筛选后的表达
目的:探讨外源性基因在转染表皮细胞后稳定表达情况.方法:选用构建的pBK-Signal-EGF质粒,在脂质体LipofectAMINE的介导下,转染培养成60%～70%连片的人表皮细胞,然后用G418长时间筛选出稳定表达的细胞克隆.大量培养传代后,通过ELISA试剂盒检测培养上清中表皮细胞生长因子(EGF)外源性基因稳定表达水平.结果:(1)构建的人表皮细胞生长因子(hEGF)质粒可成功转染到人表皮细胞中;(2)转基因表达在传4代后仍可存在;(3)hEGF表达水平6周内可在培养基中测出.结论:外源性hEGF基因可以在表皮细胞中稳定表达.
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重组人表皮细胞生长因子对Ⅱ度烧伤创面愈合的促进作用
目的: 外用人表皮细胞生长因子(EGF)是否能够促进Ⅱ度烧伤创面愈合,目前尚有争议.笔者通过随机双盲试验进一步临床观察重组人表皮细胞生长因子(rhEGF)对烧伤创面愈合的促进作用.
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重组人表皮细胞生长因子在小儿Ⅱ度烧伤创面的应用
目的观察小儿Ⅱ度烧伤创面应用重组人表皮细胞生长因子(rhEGF)的效果.方法对100例小儿烧伤患者采用随机自身对照法,试验组加用rhEGF,对照组不加,同时观察创面愈合情况、局部刺激、全身毒性反应等.结果试验组浅Ⅱ度、深Ⅱ度创面愈合时间分别为(8.9±2.1)d、(15.7±3.4)d;对照组愈合时间分别为(12.7±4.3)d、(20.9±3.1)d,两组间差异均有显著性意义(均为P＜0.01),试验组未见不良反应.结论rhEGF有促进小儿Ⅱ度烧伤创面愈合的作用,无不良反应.
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湿润烧伤膏与重组人表皮细胞生长因子联合治疗血管瘤溃疡2例
血管瘤具有快速生长的特点,尽管血管瘤是良性的,但它能破坏周围组织,在血液循环差的部位及皱褶处极易发生溃烂,经久不愈.病例简介病例1患儿,男,9个月,因"右大腿多发性红斑9个月,并反复溃疡6个月"于2011年5月3日入院.患儿出生时右大腿内侧可见大片红斑,日渐红斑扩大明显,于3个月大时红斑中间出现破溃,患儿在武汉儿童医院给予重组人表皮细胞生长因子外喷溃疡面,日一次,连续用一星期,溃疡面愈合,半个月后红斑再次出现破溃,溃疡面加大,表面有脓性分泌物,患儿家属再次到该院求诊,遵医嘱清洗创面,外用重组人表皮细胞生长因子,半个月后创面愈合,一星期后红斑再次出现溃烂,其家属依旧重组人表皮细胞生长因子外喷,无明显疗效,溃疡面日渐扩大.
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hEGF cDNA导入培养的人角朊细胞及其表达
目的观察外源性人表皮细胞生长因子(hEGF)基因导入正常角朊细胞后,能否表达及分泌hEGF;为深入探讨hEGF的作用机制及临床应用奠定物质基础. 方法脂质体包埋hEGF cDNA的真核表达质粒pcDNA3-hEGF转染人角朊细胞,经G418筛选、克隆、扩大及传代培养转基因的角朊细胞. 特异性neo探针原位杂交显示转基因细胞内的质粒载体;hEGF抗体免疫细胞化学法观察转基因细胞内hEGF的表达;采用放射免疫分析测定细胞向胞外分泌hEGF的情况. 结果 pcDNA3-hEGF可经脂质体介导有效地转染角朊细胞;G418筛选纯化转基因后的角朊细胞内含转入的真核表达质粒,胞质内有阳性hEGF表达;并向胞外分泌hEGF. 结论由真核表达质粒pcDNA3-hEGF转染人角朊细胞获得的含外源性hEGF基因的角朊细胞具有表达分泌 hEGF的功能.
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表达hEGF导入基因的角朊细胞促进体外培养的正常角朊细胞增殖
目的:观察含外源性人表皮细胞生长因子(hEGF)基因改造的角朊细胞(hEGF-MHK),对正常培养的角朊细胞(NHK)增殖的影响;探讨转hEGF基因HK对创面愈合的生物学效应及作用机理.方法:收集含真核表达质粒pcDNA3-hEGF的hEGF-MHK细胞培养上清,采用放射免疫分析法测定收集的上清液中hEGF含量;以10%的浓度加入由正常人皮肤组织分离培养的NHK细胞培养基内;MTT法测定NHK细胞培养15 d内的增殖速率并绘制细胞生长曲线;3H-TdR掺入法测定细胞培养72 h内的DNA合成速率.结果:转基因HK细胞培养上清内含有高水平的免疫活性hEGF,培养7～9 d的测定值为每天约(37.89±4.13～35.79±4.33)μg·L-1, 而正常HK培养上清、转染空载体的HK培养上清内均低于5 μg·L-1;加10%的转基因HK细胞培养上清的NHK增殖明显加快, 较对照组提前4 d以上融合达到生长平台期;转基因HK细胞培养上清作用24 h后可使NHK细胞DNA合成率明显提高.结论:含hEGF基因真核表达质粒的hEGF-MHK细胞具有表达分泌hEGF的功能, 分泌的hEGF可促进NHK细胞生长增殖, 其机理为启动NHK细胞DNA合成;说明hEGF-MHK细胞可借助旁分泌途径刺激正常角朊细胞增生, 提示其活体移植后促进创面利用残余角朊细胞再生修复的潜在应用价值.
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重组人表皮细胞生长因子在创面愈合中的临床应用进展
表皮生长因子(EGF)于1962年由Cohen从小鼠颌下腺中分离出来并纯化,它由53个氨基酸组成,相对分子质量为6 040.在随后的大量基础研究中发现EGF有广泛的生物学功能,尤其对创面愈合有促进作用[1].
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转基因人表皮细胞移植猪创面后hEGF表达的实验
目的 检测转基因细胞移植于猪的创面后有无人表皮细胞生长因子（hEGF）表达。 方法 将种植于生物硅膜上的转基因细胞和正常表皮细胞移植于猪的创面，在移植后第1、3、5、8、12天取移植创面组织活检，采用免疫组织化学方法，测定移植后创面有无hEGF表达。 结果 移植转基因表皮细胞的创面，hEGF表达阳性；移植正常表皮细胞的创面，hEGF表达阴性。 结论 转染hEGF质粒的表皮细胞可在创面表达hEGF。
