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DDPH 衍生物α1-受体拮抗活性三维定量构效关系的研究
目的和方法应用计算机模拟Apex-3D软件研究DDPH及其衍生物拮抗α1-受体活性的三维定量构效关系.结果结果表明芳氧烷胺结构中芳环邻、对位取代对生物活性有重要影响.结论我们所构建的药效团和三维定量构效关系方程不仅能帮助理解药物与受体的相互作用,而且为设计活性更好的新化合物提供参考.
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大鼠肾脏α1-肾上腺素受体和血管紧张素Ⅱ受体亚型表达水平随增龄的改变
目的 研究a1-肾上腺素受体(α1-adrenergic receptor,α1-AR)和血管紧张素Ⅱ受体(angiotensin Ⅱ receptor,ATR)各亚型在增龄过程中蛋白水平的变化.方法 采用蛋白质免疫印迹(Western blotting)分别对3月龄(青年组)、12月龄(中年组)、18月龄(老年前期组)和24月龄(老年组)Wistar大鼠肾脏a1-AR和ATR亚型蛋白水平进行测定.结果 在α1-AR的哑型中,a1A-AR的表达水平随增龄逐渐下调(P＜0.01);α1Br-AR和α1D-AR的表达在各年龄组差异无统计学意义.在ATR的哑型中,AT1-R表达水平在老年前期组和老年组均较青年组显著下调(P＜0.01),中年组与青年组相比差异无统计学意义;AT2R的表达水平在老年组较青年组显著上调(P＜0.01),青年组、中年组和老年前期组之间差异无统计学意义.结论 肾脏α1-AR和ATR的表达水平随增龄而变化,α1A-AR的下调可能与肾脏在衰老过程中的功能减退相关;AT1R下调可能有利于肾脏在衰老过程中维持其正常的牛理功能;AT2R在老年期表达上调,有利于拮抗AT1R的作用、消除随增龄出现的血管收缩功能增强的不利影响.
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α1-肾上腺素受体通过GABAB受体调控脊髓背角神经元谷氨酸能突触传递
目的 研究下行去甲肾上腺素系统α1-肾上腺素受体通过GABAB受体调控脊髓背角感觉神经元谷氨酸能突触传递的机制.方法 在急性切取的腰段脊髓切片上,利用全细胞膜片钳法记录α1-肾上腺素受体激动剂苯肾上腺素刺激诱发的脊髓背角浅层神经元谷氨酸能兴奋性突触后电流(eEPSCs),给予GABAB受体特异性拮抗剂CGP55845,进一步观察GABAB受体在苯肾上腺素对突触终末eEPSCs调节过程中的作用.结果 苯肾上腺素显著降低初级传入末梢单突触和多突触eEPSCs幅度,在突触后GABAB受体被从胞内阻断的条件下,再灌流CGP55845,阻断谷氨酸能突触前GABAB受体,可部分拮抗苯肾上腺素对刺激引发的EPSCs (eEPSCs)幅度的抑制作用.结论 位于脊髓背角神经元α1-肾上腺素受体,通过GABAB受体抑制初级传入纤维兴奋性谷氨酸能神经冲动的传入,这种突触前对谷氨酸释放的调节可能是下行肾上腺素能系统对伤害性刺激调控的作用机制.
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α1-肾上腺素受体参与调控脊髓背角神经元突触传递的作用机制
目的 研究α1-肾上腺素受体(α1- AR)调控脊髓背角感觉神经元谷氨酸能突触传递的作用机制.方法 在急性切取的腰段脊髓切片上,利用全细胞膜片钳法记录α1- AR激动剂苯肾上腺素对脊髓背角浅层神经元抑制性和兴奋性突触后电流(IPSCs和eEPSCs)的影响.结果 苯肾上腺素对IPSCs频率产生剂量依赖性兴奋作用,此作用可被α1- AR特异性拮抗剂WB4101完全拮抗.苯肾上腺素对eEPSCs振幅的抑制作用可以部分被GABAA受体拮抗剂印防己毒素(picrotoxin,PTX)拮抗.结论 位于脊髓背角神经元的α1-AR,促进初级传入纤维在脊髓背角释放γ-氨基丁酸(GABA),进而主要通过GABAA受体抑制初级传入纤维兴奋性谷氨酸能神经冲动的传入.下行肾上腺素能系统可能通过GABAA受体机制参与突触前对谷氨酸递质释放的调节作用.
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氯化甲基汞抑制脑α1-肾上腺素受体结合及恢复效应的体内及体外实验研究
为研究甲基汞对大鼠脑α1-肾上腺素受体的影响以及拮抗剂对甲基汞引起该受体特异结合抑制的恢复效果,本文应用放射性配体结合技术进行了体内外试验研究.结果显示:氯化甲基汞能明显抑制大鼠脑α1-肾上腺素受体与[3H]prazosin的特异结合,IC50为2.89 μmol/L.二琉基丙磺酸钠、二巯基丁二酸钠,半胱氨酸能使被氯化甲基汞抑制的[3H]prozosin结合得到不同程度的恢复.表明甲基汞与巯基基团的结合是脑α1-肾上腺素受体受其抑制的分子机制.而含巯基的化合物能把与受体上巯基基团结合的甲基汞竞争下来,从而恢复α1-肾上腺素受体与配体的结合能力.
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α1-肾上腺素受体在前列腺Cajal间质细胞上的表达及意义
目的 观察α1-肾上腺素受体在豚鼠前列腺Cajal间质细胞(ICCs)上的表达,并探讨其生理意义.方法取豚鼠前列腺组织冰冻切片以及体外培养的豚鼠前列腺细胞,使用c-Kit标记ICCs,α肌动蛋白(α-actin)标记平滑肌细胞,分别进行c-Kit与α1-肾上腺素受体、α-actin与α1-肾上腺素受体配对的免疫荧光双标记染色.结果 豚鼠前列腺组织及分离培养的c-Kit阳性ICCs细胞膜和细胞浆中均表达α1肾上腺素受体,同时α-actin阳性平滑肌细胞上也有α1-肾上腺素受体表达,但在组织切片中ICCs上α1肾上腺素受体的表达显著强于平滑肌细胞.结论 表达α1-肾上腺素受体的前列腺ICCs作为交感神经的功能靶细胞在前列腺平滑肌活动调控中可能发挥重要的作用.
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激动剂作用下α1-肾上腺素受体亚型在HEK293A细胞中的分布变化
为了明确α1-肾上腺素受体(α1-adrenergic receptor,α1-AR)三种亚型在人胚胎肾(human embryonic kidney,HEK)293A细胞株中的分布特点,及其在激动剂作用下在细胞内的定位改变,本研究采用放射配体结合实验、实时荧光共聚焦成像和Western blot方法检测α1-AR三种亚型在细胞中的定位及蛋白质表达的变化.结果发现:(1)α1-AR三种亚型在HEK293A细胞株转染效率相同,均达90%以上.三株细胞的粗制膜上α1B-AR表达量高,α1D-AR低,α1A-AR居中,但三者的解离常数(Kd)相等;(2)在无激动剂作用时,α1A-AR均匀地分布在HEK293A细胞的胞膜和胞浆,α1B-AR主要位于胞膜,而α1D-AR则主要分布在胞浆中;(3)用α1-AR激动剂苯肾上腺素(phenylephrine,PE)刺激细胞1 h后,α1A-和α1B-AR在胞膜上分布明显减少,而在胞浆中分布增加,其中α1B-AR变化更为显著,α1D-AR的分布在PE作用下无明显变化.以上结果提示,在激动剂作用下,α1-AR三种亚型在HEK293A细胞中的定位特点和分布变化各有不同.
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12月与10周龄大鼠主动脉功能性α1肾上腺素受体亚型比较
本文采用离体血管收缩功能实验方法,比较12月与10周龄大鼠主动脉α1肾上腺素受体(α1-AR)及其亚型的分布.结果显示:12月龄大鼠与10周龄大鼠相比,去甲肾上腺素(NE)引起的大收缩反应显著降低,而半效激动浓度(pD2)值无显著性改变;氯乙基可乐定(CEC,不可逆阻断α1B-AR和α1D-AR亚型)对NE引起血管收缩的抑制作用明显减弱;WB4101(α1A-AR和α1D-AR选择性拮抗剂)拮抗NE缩血管效应的pA2值没有改变;BMY7378(α1D-AR选择性拮抗剂)的半效抑制浓度(pA2)值明显降低;Sertindole(α1A-AR选择性拮抗剂)的pA2值显著增大.上述结果提示,12月龄大鼠介导主动脉收缩效应的α1-AR由10周龄以α1D-AR亚型为主转变为α1A-AR和α1D-AR亚型共同参与,且以α1A-AR亚型为主.
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α1-肾上腺素受体亚型介导细胞内游离Ca2+增高的信号转导途径
本文探讨了α1a,α1b,α1d三种亚型肾上腺素受体(AR)激动时细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)升高的信号转导途径.在稳定表达三亚型α1-AR的HEK293细胞系中,用fura-2方法描记细胞内Ca2+信号强弱的变化.结果显示,百日咳毒素(PTX)对去甲肾上腺素激动三亚型α1-AR而引起的[Ca2+]i升高无影响,U-73122和PMA明显抑制[Ca2+]i升高;Calphostin C和PMA过夜预处理可翻转PMA的抑制作用;Forskolin和Rp-cAMPs对α1-AR介导的[Ca2+]i升高无影响,但Quercetin和Tyrphostin可抑制[Ca2+]i升高峰值,对平台期幅值则无影响.因此,在HEK293细胞,三亚型α1-AR可通过PTX非敏感G蛋白激活PLC而介导磷酸肌醇-Ca2+信号系统,PKC磷酸化系统既抑制α1-AR介导的细胞内贮存Ca2+释放,又抑制细胞外Ca2+内流;cAMP系统不参与α1-AR介导Ca2+信号的调节,酪氨酸激酶可能参与这一过程.
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合成肽检测抗α1-肾上腺素受体自身抗体方法及其临床意义
目的建立抗α1-肾上腺素受体(anti-α1-AdR)自身抗体的ELISA,评价其与高血压的关系.方法以合成的α1-肾上腺素受体细胞外第二环功能表位肽段(α1-192～218位氨基酸)作抗原,建立间接酶联免疫吸附试验(ELISA),检测98例难治性高血压、96例非难治性高血压患者和40例正常人血清中anti-α1-AdR.结果阳性参考血清批内变异系数(CV)和批间CV分别为0.072、0.101.用抗原吸收后,吸光度(A)值降低1.3倍.98例难治性高血压患者中,anti-α1-AdR的阳性率为36.7%(36/98),明显高于非难治性高血压组13.54%(13/96)和正常血压对照组5.0%(2/40).结论检测抗α1-肾上腺素受体自身抗体的方法特异性和敏感性较高,操作简便,检测该抗体有助于评价难治性高血压的原因和指导降压药物的选择.
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一氧化氮及其衍生物导致血管平滑肌细胞α1-肾上腺素受体基因表达下调
目的观察炎症反应时血管平滑肌细胞α1-肾上腺素受体基因转录水平的改变.方法原代培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)分为对照组(含10%FBS的DMEM培养液)、酪氨酸组(Tyr,250μmol/L)、3-硝基酪氨酸组(3-NT,250μmol/L)、硝普钠组(SNP,500μmol/L)、炎性细胞因子组(Cyto,TNF-α100ng/ml+IL-1β50ng/ml)、炎性细胞因子组+Nω-nitro-L-arginine methylester(Cyto+L-NAME,TNF-α100ng/ml+IL-1β50ng/ml+L-NAME5mmol/L)和N-乙酰-5-甲氧基色胺+炎性细胞因子组(Cyto+MLT,TNF-α100ng/ml+IL-150ng/ml+MLT 1mmol/L),每组重复6次.上述各组细胞干预12h后,提取各组细胞的总RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定α1A-AR、α1B-AR、α1D-AR mRNA的表达.结果与对照组相比,SNP组和Cyto组血管平滑肌细胞细胞α1A-AR、α1D-AR mRNA的表达显著下(P＜0.05),Cyto+L-NAME组、Cyto+MLT组上述各受体亚型mRNA的表达比Cyto组显著升高(P＜0.01).与对照组相比,SNP组、3-NT组α1B-AR、α1D-AR mRNA表达明显降低(P＜0.05).结论 NO及NO衍生物3-NT均显著抑制了血管平滑肌细胞细胞α1-肾上腺素受体mRNA的表达,可能为感染性休克时血管低反应性的病理机制之一.抑制NO的产生和抗氧化剂治疗可减轻这种病理反应.
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Ca2+运动对α1-肾上腺素受体引起内源性ClC-3氯通道表达的作用
目的研究Ca2+运动对α1-肾上腺素受体引起ClC-3氯通道表达的作用.方法在A10细胞上,用RT-PCR和Western blot检测ClC-3 mRNA和蛋白质表达情况.结果苯肾上腺素(10 μmol*L-1)和thapsigargin(0.1 μmol*L-1)可促进ClC-3 mRNA和蛋白质的表达;SK&F96365(10 μmol*L-1)和genistein(10 μmol*L-1)可抑制苯肾上腺素引起的ClC-3的表达,nifedipine(10 μmol*L-1)无此作用.结论在A10细胞上,通过钙池操纵性Ca2+通道(SOCC)的Ca2+内流参与了α1-肾上腺素受体引起的内源性ClC-3氯通道的表达,而通过电压依赖性Ca2+通道(VDCC)的Ca2+内流可能与此无关.蛋白酪氨酸激酶参与了ClC-3氯通道的表达.
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氯通道阻断剂对α1-肾上腺素受体亚型引起的Ca2 +内流的影响
目的探讨氯通道阻断剂在α1A、α1B、α1D 肾上腺素受体(AR)亚型触发的Ca2+ 内流中的作用。方法采用Fu ra- 2荧光探针双波长测定胞浆游离Ca2+浓度（［Ca2+］i）。结果在3种亚型的细胞上，肾上腺素(Adr)触发的Ca2+内流均不受nifedipine影响； SK&F9636 5可部分抑制α1A、α1B-AR介导的Ca2+内流，而对α1D-CHO细胞无影响。在α1B-CHO细胞上, niflumic acid（NFA）和furosemide呈浓度依赖性抑制Ca2+ 内流；当Ca2+ 内流被SK&F96365大限度抑制后，NFA和furosemide 可进一步抑制Ca2+ 内流。α1A-AR介导的Ca2+内流可被furosemide抑制，抑制率达14%±5%。NFA可抑制α1D-AR引起的Ca2+内流，抑制率为39%±9 %。结论氯通道参与α1A、α1B及α1D-AR引起的经非电压依赖性Ca2+通道介导的Ca2+内流，其间存有异同。NFA敏感Ca2+ 内流及furosemide敏感的Ca2+ 内流与SK&F96365敏感的Ca2+内流存在非同一性。
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α1肾上腺素受体拮抗剂的研究进展
介绍α1肾上腺素受体拮抗剂的研究进展.α1肾上腺素受体亚型的研究进展,受体的分子生物学研究以及亚型分类的研究,随后介绍了α1肾上腺素受体拮抗剂的药理作用以及药理方面的新发展即在治疗男性良性前列腺增生中的应用.
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α1-肾上腺素受体的研究进展
α1-肾上腺素受体介导了机体内源性儿茶酚胺的大多数反应,参与了机体的许多基本生理过程,诸如交感神经传导、心脏收缩、血管张力、肝脏代谢以及泌尿生殖系统平滑肌活动的调控.本文综述了近年来关于α1-肾上腺素受体的亚型、分布及信号转导等方面的进展,以期为α1-肾上腺素受体的药理、生理及病理生理学作用提供更深入的认识.
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α1-肾上腺素受体亚型的分布及特点
近年来,运用分子生物学技术、放射配体结合技术、拮抗剂功能分析等手段,深入研究α1-肾上腺素受体亚型的分类、分布、受体蛋白结构等方面内容并取得很大进展.现将近几年研究状况综述如下.
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α1-肾上腺素受体与肺动脉高压
本文综述了α1-肾上腺素受体在肺动脉高压形成中的作用.低氧或血管壁张力改变均可引起α1-肾上腺素受体基因转录增加、受体密度增高、敏感性增强;去甲肾上腺素、食欲抑制药、可卡因等通过兴奋α1-肾上腺素受体,可引起肺血管平滑肌收缩、增殖,导致肺动脉高压.
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消癃通闭对犬大脑皮层α1-肾上腺素受体的拮抗作用
消癃通闭浸出液与犬大脑皮层粗制膜及IBE125作用测定其对IBE125与犬大脑皮层α1-AR结合的抑制作用,结果消癃通闭对IBE125犬大脑皮层的结合呈竞争性拮抗作用,IC50为34.0±6.0g/L,Hill系数为0.70±0.06,佐证本方具有α1-AR拮抗作用.
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YM0501手性异构体对大鼠良性前列腺增生的治疗作用
目的 研究YM0501手性异构体在大鼠体内抗良性前列腺增生(BPH)活性的差异.方法 建立大鼠尿生殖窦(UGS)诱导BPH模型,考察α1-肾上腺素受体拮抗剂YM0501消旋体及其手性异构体对BPH的治疗作用.称量湿重、计算湿重指数;于大鼠右侧腹前叶切片,在光镜下观察其组织形态学特征,并进行组织形态计量分析;采用免疫组化定量考察间充质特异表达蛋白波形蛋白(vimentin)及α-平滑肌动蛋白(α-SMA)的阳性表达率.结果 与模型组比较,异构体A及异构体B各剂量组的宿主叶湿重、湿重指数均明显减小;异构体B对宿主叶湿重、前列腺上皮细胞增生程度、间质增生程度及vimentin蛋白的抑制作用优于异构体A.结论 异构体A及异构体B对模型大鼠含UGS的宿主叶间质增生均有抑制作用,异构体B抗BPH的作用优于相同剂量的异构体A.
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YM0501手性异构体抗α1受体亚型的选择活性及其构效关系
目的 研究YM0501手性异构体对α1受体亚型选择拮抗活性及其构效关系.方法 采用双报告基因法研究YM0501手性异构体对α1受体亚型选择拮抗活性,采用分子对接研究手性异构体分别与α1受体亚型蛋白进行分子对接,研究作用的结构和活性关系.结果 B-YM0501对α1受体各亚型受体亲和力:α1A相当于α1B的4.07倍,α1D相当于α1B的4.57倍.分子对接发现α1A受体活性结合口袋中的TYR316和ASP113氨基酸残基与B-YM0501形成非共价键作用.结论 B-YM0501比A-YM0501或消旋体YM0501对α1A/D受体的选择性更好,相对于当前临床上使用消旋体治疗良性前列腺增生,使用手性B-YM0501可能药效更好、不良反应更少.
