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HPSEC法检测中药注射液中的高分子量物质
目的:建立高效分子排阻色谱法( HPSEC)检测中药注射液中的高分子量物质.方法:采用TSK-GEL G2000SWXL(7.8nm×300 mm)凝胶色谱柱；三氟乙酸—乙腈—水(0.05:30:70)为流动相；流速为0.4mL·min-1；检测波长为214 nm.结果:相对分子质量在1521～13700范围内线性关系良好(r=0.995)；检测限以细胞色素C计为50 ng,以血清白蛋白计为15ng;验证实验良好.结论:本方法适合检测中药注射液中的高分子量物质,方法简便,准确,灵敏度好.
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分子排阻色谱法测定水解蛋白注射液中高分子物质
目的:采用分子排阻色谱法测定水解蛋白注射液中小分子肽的分子量.方法:采用TSK-GEL G2000SWXL色谱柱(7.8mm×300 mm,5μm),以磷酸盐缓冲液(pH6.8)(含0.1mol·L-1Na2SO4与0.05％ NaN3)为流动相,流速1.0mL·min-1,柱温30℃,检测波长280 nm.结果:水解蛋白注射液中分子量大于胰岛素的高分子物质含量均在5％以下.结论:该方法简单,重现性好,可以作为控制水解蛋白注射液中高分子物质的方法.
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分子排阻色谱法测定肝素钠注射液分子量与分子量分布的不确定度分析
目的 对分子排阻色谱法测定肝素钠注射液分子量与分子量分布的不确定度进行分析和评价.方法 通过建立分子排阻色谱法测定分子量与分子量分布的数学模型,寻找不确定度的主要来源.结果 计算各变量的不确定度,由此计算合成不确定度,终给出测定结果的扩展不确定度.结论 测量不确定度可用于评价肝素钠注射液分子量与分子量分布测定结果,测量不确定度的评定对于药品检验具有重要意义.
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注射用头孢孟多酯钠聚合物测定方法研究
目的：建立分子排阻色谱法测定注射用头孢孟多酯钠高分子聚合物。方法：色谱柱为SephadexG-10柱，内径1.2mm，柱长40cm，流动相A：磷酸盐缓冲液（pH值7.0），流动相B：0.01%十二烷基硫酸钠，流速：1ml/min，检测波长：254nm，进样量：200μl。结果：头孢孟多酯钠在22.6～226.0μg/ml范围内线性关系良好（r=0.9999）。结论：本测定方法简便，结果准确，重复性好，可有效测定注射用头孢孟多酯钠中头孢孟多聚合物的量。
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分子排阻色谱法检测双黄连注射液中的高分子杂质
目的 分子排阻色谱法考察双黄连注射液中高分子杂质.方法 采用分子排阻色谱法测定了3个厂家6批双黄连注射液,用TSKk-GEL G2000SWxL色谱柱,以乙腈-水-三氟乙酸(体积比40∶60∶0.07)为流动相,流速为0.5 mL·min-1,柱温为30℃,二极管阵列检测器,检测波长为214 nm.结果 相对分子质量对数与出峰时间呈良好的线性关系(r=0.996 8),相对分子质量对照品(人胰岛素)检出限为0.386 mg·L-1,6批双黄连注射液中均未检出高分子物质,加速稳定性试验检测相对分子质量3 108 ＞Mr≥1 638杂质的含量稳定.结论 国内的双黄连注射液质量稳定,在加速稳定性试验中无高分子物质聚合产生,作者建立的检测方法可用于双黄连注射液中高分子杂质的检查.
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HPSEC法检测注射用双黄连（冻干）中的高分子量物质
目的：建立注射用双黄连（冻干）中高分子量物质的检测方法。方法：采用凝胶色谱柱（ TSK-G2000SWxl，5μm，7．8mm ×300mm）；以三氟乙酸-乙腈-水（0．05：20：80）为流动相；蒸发光散射检测器检测；流速为0．7 mL/min。结果：注射用双黄连（冻干）中未检出高分子量物质。结论：所建立的方法简便、准确、灵敏度好，适合检测注射用双黄连（冻干）中的高分子量物质。
关键词： 注射用双黄连(冻干) 高分子量物质 分子排阻色谱法 -
重组人甲状旁腺素1-34分子量测定方法的研究
分别采用基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱法(MALDI-TOF MS)、Tricine-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(Tricine-SDS-PAGE)和分子排阻色谱法(SEC)测定重组人甲状旁腺素1-34的相对分子质量,为制定该品种的质量标准提供依据.MALDI-TOF/MS测定基质溶液为α-氰基-4-羟基肉桂酸(a-cyano-4-hydroxy-cmnamic acid,CCA);Tricine-SDS-PAGE电泳采用Tris-tricine电极缓冲系统;SEC测定色谱柱为TSK-GELG2 000 SWXL(300mm×7.8mm,5μm);流动相为三氟乙酸-乙腈-水(0.05:20:80);检测波长为215nm;流速为0.5 mL·min-1.结果:质谱法测定结果准确,实验值与理论值一致,误差±1;Tricine-SDS-PAGE测定结果与理论值基本一致,误差小于10%;但SEC法测定结果与理论值偏差较大.质谱法适用于产品的质量控制.
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蛋白质复性的分子排阻色谱法的研究进展
包涵体蛋白质复性是生物工程下游技术中的一个重要问题.利用传统的方法复性复性率低和步骤繁琐,无法用于大规模生产.近出现的层析复性方法,具有较强的优势.其原理是将层析技术应用于蛋白质复性和纯化,使变性蛋白质在层析柱上折叠为正确的空间构象,在洗脱的同时实现部分纯化.在层析技术中分子排阻色谱法由于操作简便,复性效率高,成为研究的重点.文章就分子排阻色谱法的研究情况作一综述.
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猪源、牛源肝水解肽的质量对比研究
目的 考查不同原料制得肝水解肽的质量及组分差异.方法 分别选取猪源、牛源肝水解肽溶液,依据标准检测部分项目,并用分子排阻色谱法进行肽图分析.结果 各项目检测结果均符合标准规定,而肽图明显不同.结论 猪源与牛源制品成分类似,多肽总含量接近,但具体组分的相对分子质量分布有所差异.
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头孢克洛分散片中聚合物测定
目的 建立2种头孢克洛聚合物有效的测定方法并对结果进行比较.方法 方法1:采用TSKgel G2000SWxl色谱柱(7.8 mm×300 mm,5μm),流动相为0.01 mol·L-1磷酸盐缓冲液[0.01 mol·L-1 NaH2PO4溶液-0.01 mol·L-1 Na2HPO4溶液(50∶50),调节pH值为7.0]-乙腈(95∶5),流速为0.5 mL·min-1柱温35℃,检测波长为254 nm,进样量20 μL;方法2:采用Sephadex G-10色谱柱(10mm×300mm,40～120 μm),以0.05 mol·L-1磷酸盐缓冲液[取0.05 mol·L-1 Na2HPO4溶液-0.05 mol·L-1 NaH2PO4溶液(50∶50),调节pH至7.0]为流动相A,水为流动相B,流速为1 mL·min-1,柱温35℃,检测波长为254 nm,进样量100 μL.结果 方法1:头孢克洛主峰与聚合物峰分离度＞1.5,头孢克洛质量浓度在0.25～20 μg·mL-1内线性关系良好(r=0.999 9);定量限0.21 μg,检测限0.07 μg.重复性较好(RSD为1.8％,n=6);在拟定的色谱条件下,通过考察破坏坏性实验(高温、强酸、强碱、氧化、光照)能够满足分离度要求,辅料无干扰;方法2:质量浓度在2.5～20 μg·mL-1线性关系良好(r=0.999 7);检测限0.13 μg,定量限0.40 μg.重复性良好(RSD为1.8％,n=6).结论 新建立的2种方法对于头孢克洛分散片聚合物的分离度好,分离效率高,重复性好,均可以作为头孢克洛分散片的质量控制的依据.
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分子排阻色谱法测定注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠中的高分子聚合物
目的 建立注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠中高分子聚合物的测定方法.方法 采用Sephadex G-10凝胶色谱柱(15.0mm×300mm),以pH 7.0的0.05 mol·L-1磷酸盐缓冲液[0.05 mol·L-1磷酸氢二钠溶液-0.05 mol·L-1磷酸二氢钠溶液(61:39)]为流动相A,以水为流动相B,流速为1.2 mL·min-1,检测波长为254nm.结果 头孢哌酮高分子聚合物与头孢哌酮药物单体能较好分离,头孢哌酮自身对照的线性范围为5.01～250.71μg·mL-1(r=0.999 9);在10.13～30.24 mg·mL-1内,供试品溶液浓度与聚合物峰面积呈良好线性关系(r=0.9999)；定量限为0.14μg；方法精密度良好(RSD=0.50％,n=5)；样品测定重复性与重现性好(RSD=0.82％,n=5；RSD=3.4％,n=3).结论 所建方法操作简便、结果可靠,可用于注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠中高分子聚合物的检测.
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分子排阻色谱法测定阿扑西林高分子聚合物
目的 建立分子排阻色谱法测定阿扑西林的高分子聚合物.方法 采用Xtimate SEC-300球状蛋白亲水改性硅胶分子排阻柱,流动相为pH 7.0的5mmol·L-1磷酸盐缓冲液〔5mmol·L-1磷酸二氢钠溶液-5mmol·L-1磷酸氢二钠溶液(39:61)〕-乙腈(97:3),流速为0.8mL·min-1,检测波长280nm.结果 显示阿扑西林在0.9760～97.60μg·mL-1范围内呈良好的线性关系(r=1.000),阿扑西林浓度在0.25～4.0mg·mL-1范围内与聚合物的峰面积呈良好的线性关系(r=0.9992),专属性试验中聚合物峰与主峰均达到完全分离,pH、高温、光照和氧化使聚合物含量增加,生产中应严格控制pH、温度和光照.结论 该方法简便快速、定量准确、重现性好,可用于阿扑西林中聚合物的检验.
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分子排阻色谱法测定玻璃酸钠相对分子质量及其分布
目的 使用分子排阻色谱(SEC)法测定玻璃酸钠(SH)相对分子质量(Mr)及其分布.方法 考察进样浓度、柱温及流速对SEC法测定SH的Mr及其分布的影响.结果 进样浓度对高分子SH的色谱峰形及测定结果影响较大,降低进样浓度色谱峰形明显改善,且测定结果精密度良好;柱温对SH的Mr测定结果有一定的影响;流速对SH的Mr及其分布基本无影响.结论 在SH进样浓度0.1 mg/mL,柱温30℃,流速0.5 mL/min的色谱条件下,用SEC法测定SH的Mr及其分布的色谱峰形良好,结果准确可靠,可用于SH的质量控制和应用研究.
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盐酸头孢唑兰高分子聚合物的测定
目的 建立难溶于水药物盐酸头孢唑兰中高分子聚合物的测定方法.方法 采用分子排阻色谱法,葡聚糖凝胶G-10(40 μm ～ 120 μm)为填充剂的玻璃柱(1.0 cm×30 cm),分别以pH7.0的0.05 mol/L磷酸盐缓冲液和水为流动相A和流动相B;流速1.0 ml/min,检测波长为254 nm,进样量为100μl.以头孢曲松替代不完全聚合的头孢唑兰作为对照,加校正因子外标法定量(头孢唑兰∶头孢曲松=1.19∶1).结果 头孢唑兰浓度在2.00 mg/ml～ 20.0 mg/ml范围内与盐酸头孢唑兰中高分子聚合物峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),头孢曲松对照品浓度在24.56 μg/ml～245.6 μg/ml范围内与头孢曲松中高分子聚合物峰面积呈良好的线性关系(r=0.9997).检测限为0.025 μg,定量限为0.083 μg.结论 经验证该方法能够较好地分离头孢唑兰和高聚物,可用于注射用盐酸头孢唑兰的高分子聚合物的检测.
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HPLC法在干扰素α-2b的纯化和蛋白纯度测定中的应用研究
目的:为开发干扰素α-2b新剂型提供纯化和质控的技术指标.方法:用反相离子对色谱法对千扰素α-2b的粗品进行分离纯化;用分子排阻色谱法测定其蛋白纯度.结果:反相离子对色谱法可使纯度为85%粗品提高到95%以上:分子排阻色谱法可通过峰面积比,快速、客观地确定表达蛋白的百分比,对主峰、次峰的分离度大于1.5.结论:反相离子对HPLC法可作为干扰素α-2b的纯化方法;分子排阻色谱法是鉴定基因工程干扰素的不可缺少的指标之一,它可对提纯工艺起到有效的监控作用.
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分子排阻色谱-多角度激光散射法测定注射用核糖核酸分子量及其分布
目的 测定注射用核糖核酸中核糖核酸的分子量及其分布.方法 采用分子排阻色谱-多角度激光散射联用技术,以含0.02％叠氮钠的0.1 mol·L-1氯化钠溶液为流动相,流速0.5 mL·min-1,采用TSKgel G2000SWXL色谱柱,柱温为30℃.结果 获得了样品的dn/dc值、分子量与分子量分布等分子特征参数.测得样品dn/dc值为0.1547,分子量(Mw)在4.6～234.2 kDa,分子量分布系数(Mw/Mn)在1.3～2.9.结论 本文尝试以新的思路建立测定生物大分子核糖核酸分子量的方法,该方法快速、简便,可用于核酸类药物分子量及其分布的测定.实际样品检测结果表明,市售的注射用核糖核酸的分子量及分布差异均较大,原料及生产工艺有待进一步规范,加强质量控制.
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山羊角提取物中氨基酸的种类研究与含量测定
目的 研究山羊角提取物中氨基酸的种类和含量,为建立山羊角提取物质量控制提供依据.方法 采用分子排阻色谱法检测山羊角提取物中物质的分子量范围.利用稳定同位素iTRAQ标记/液质联用法对山羊角提取物进行42种全谱氨基酸检测.结果 山羊角提取物中物质的分子量范围在50～389 Da.090903批、090904批、091001批山羊角提取物中分别包含34种氨基酸(蛋白质氨基酸19种、非蛋白氨基酸15种),31种氨基酸(蛋白质氨基酸19种、非蛋白氨基酸12种)、33种氨基酸(蛋白质氨基酸19种、非蛋白氨基酸14种),山羊角提取物中未检出多肽及大分子物质.天门冬氨酸及谷氨酸加热易破坏,故在提取物制备过程中应严格控制干燥时间和温度.结论 本研究建立了快速、稳定检测山羊角提取物中42种全谱氨基酸种类及含量的方法,为建立山羊角提取物质量检测标准提供参考依据.
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注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠(4∶1)聚合物测定方法研究
目的 建立注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠(4∶1)聚合物含量的测定方法.方法 分子排阻色谱法,色谱条件:以葡聚糖凝胶G-10(40～ 120 μm)作为填充剂,玻璃柱内径1.0～1.4cm,柱长30 ～40cm,流动相A为pH8.0的0.1 mol/L磷酸盐缓冲溶液,流动相B为水,流速1.5 ml/min,检测波长254 nm.结果 在0.01～0.15 mg/ml浓度范围内,对照溶液浓度与主峰面积具有良好的线性关系(r=0.999 9),重复性RSD为2.3％(n＝6).结论 方法操作简便,准确快速,重复性好,可用于注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠聚合物含量的测定.
关键词： 分子排阻色谱法 注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠 高分子杂质 -
盐酸头孢吡肟中高分子聚合物含量测定方法学研究
目的 采用高效液相色谱法测定盐酸头孢吡肟中高分子聚合物,并进行方法学研究.方法 采用分子排阻色谱法,色谱柱:Sephadex G-10柱(13.0 mm ×400 mm,TIANHE)；流动相:流动相A为pH7.0的0.01mol/L磷酸盐缓冲液[0.01 mol/L Na2HPO4溶液-0.01 mol/L NaH2PO4溶液(体积比61:39)],流动相B为水；流速:1.0 mL/min；检测波长:254nm；进样量:100 μL；以头孢噻肟作为对照品加校正因子外标法定量[Mr(头孢吡肟)/Mr(头孢噻肟)=1.055].结果 头孢吡肟在0.88～51.70 mg/mL范围内与盐酸头孢吡肟高分子聚合物峰面积呈良好的线性关系(r=0.9997)；头孢噻肟在58.55～136.611μg/mL范围内与头孢噻肟缔合物的峰面积呈良好的线性关系(r =0.9998).检测限为2.7×10-3 μg,定量限为5.4×10-3 μg.结论 该方法能较好地分离盐酸头孢吡肟及其高分子聚合物,可用于盐酸头孢吡肟中高分子聚合物的检查.
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阿莫西林胶囊中高分子聚合物测定方法的改进
目的:改进2010年版《中国药典》中阿莫西林胶囊中高分子聚合物的测定方法.方法:采用反相高效液相色谱法,使用高效凝胶色谱柱TSK-GEL G2000SWXL代替SephadexG-10凝胶柱,流动相用0.005 mol/L磷酸盐缓冲液(pH值7.0)-乙腈(等度洗脱)代替pH 8.0磷酸盐缓冲液-水(梯度洗脱),进样量由20μl代替100～200 μl,柱温为25℃,检测波长为254nm.结果:阿莫西林主峰与高分子聚合物峰实现完全基线分离,分离度大于1.5,分析时间为20 min左右,理论板数不低于2 000；阿莫西林检测质量浓度线性范围为1.528～21.388 μg/ml(r=0.999 9),重复性试验RSD=1.27％ (n=5),检测限为6.012 ng.而原方法理论板数不低于700,分析时间约为50 min.结论:改进后方法比原方法柱效高、峰形对称,重复性更好,进样量更小,分析时间更短,操作更简便快捷,且结果可靠.
