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骨元肽分子量分布及大鼠在体结肠吸收的实验研究
目的 研究骨元肽分子量分布及大鼠在体结肠吸收率.方法 采用高压凝胶色谱法测定骨元肽均重分子量(Mw).大鼠在体结肠吸收实验分为3组,分别用14.0、28.0和84.0 mg/L骨元肽结肠灌流4 h,紫外可见分光光度计测定骨元肽含量,观察骨元肽的大鼠结肠吸收率.结果 骨元肽Mw为189～1000 D,其中189～512 D组分占68.5%以上;结肠吸收率为45.69%、50.64%和52.50%(P＜0.05).结论 低分子量骨元肽对大鼠结肠吸收有剂量依赖作用.
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聚乙二醇400分子量测定方法比较研究
目的:建立高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定聚乙二醇400(PEG400)分子量及其分布,并与《中国药典》所用的端基分析滴定法比较.方法:采用Shodex OHpak SB-802.5HQ与Shodex OHpakSB-803HQ色谱柱串联分离,以0.1 mol·L-1硝酸钠(0.02％叠氮钠)为流动相,流速0.5 mL·min-1,柱温30℃,样品浓度2 mg·mL-1,采用示差折光检测器进行测定.结果:HPGPC测定的聚乙二醇400的分子量结果与《中国药典》2015年版所用的端基分析法测得的平均分子量结果接近,采用不同厂家色谱柱、对照品可影响PEG400的分子量测定结果,选用Shodex OHpak SB色谱柱串联测定聚乙二醇400重均分子量的范围为407 ～ 440,分子量分布宽度1.0～1.1,该方法的精密性RSD为0.2％,重复性为2.89％,24 h内样品稳定性RSD为0.66％.结论:经方法学验证,HPGPC法准确、重复性好,可用于聚乙二醇400分子量及其分布测定.
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肝素的标准化
肝素于19世纪30年代作为抗血栓药用于临床[1].因为它的不均一性和化学结构的不确定性,自1942年建立供效价测定用第1次肝素国际标准品[2],至今已更替了4次.为建立第5次国际肝素标准品,1998年,WHO生物标准化中心英国国家检定所(NIBSC)组织了对近50年来肝素样品(其中包括历次国际肝素标准品和主要国家的现行标准品及广泛来源的商业产品)的协作研究[3].参与研究的实验室采用本国药典中肝素的生物测定法,有些实验室还采用了欧洲药典中肝素通则项下推荐的低分子肝素特异活性测定法[4]测定样品的生物效价,用凝胶渗透层析和高分辨核磁共振图谱分析法, 测定样品的组成和分子量及分子量分布.通过实验研究,从中选出2个样品作为第5次肝素国际标准品的候选品;还发现我国提供的肝素国家标准品(批号:509-9010)的特异活性仅相当于70年代初期的第3次国际肝素标准品;与目前市场上肝素原料和近建立的国际及欧洲肝素标准品的高分辨核磁共振(NMR)图谱有一定的差距;多分散性指数PD值(PD＝Mn/Mw即分子数平均分子量/重量平均分子量)也高.
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酶法制备大豆多肽的分子量分布和抑瘤实验观察
目的 观察复合酶法制备的大豆多肽,其分子量分布和体内外的抑瘤作用.方法 Flavourzyme、Alealase和中性蛋白酶,pH 7.0,50～55℃酶解,经分离、离心、喷雾干燥等工艺制成多肽干粉;样品以0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液为洗脱液,流速0.5 ml/min过SephadexG25凝胶柱,分别收集,紫外分光仪280 nm波长测定各管的吸收值,并用高效液相排阻色谱法对比同样品测定,计算确定分子量分布;小鼠脑胶质瘤G422体内抑瘤实验,给药剂量1.25、2.50、5.00 g/kg bw,人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞体外抑瘤实验,分5个样品浓度mg/ml.结果 复合酶法生产制备大豆多肽3批,各批干基肽含量分别54.6%、51.9%、51.8%;Mr≤1000 U占总量50%以上.小鼠脑胶质瘤G422体内实验,剂量5g/kg bw组与对照相比多肽有41.2%的抑瘤率(P＜0.05),人喉癌Hep-2体外实验结果多肽无直接细胞毒作用.结论 紫外分光法与高效液相色谱法测定大豆多肽分子量分布结果基本相同.小鼠G422实验在高剂量组观察到有抑瘤作用.
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微污染地表水的组合微滤工艺处理
目的考察用粉末活性炭-膜生物反应器(PAC-MBR)组合工艺处理微污染地表水的出水水质,并分析造成膜污染的主要物质的分子量范围.方法常规项目采用国家环保局颁布的标准检测方法.用空间排阻液相色谱法(SE-LC)测定分子量分布,将膜污染物的分子量分布与进水、混合液和出水的分子量分布进行对比,确定主要膜污染物质的分子量范围.结果经该组合工艺处理后,出水的浊度和耗氧量(CODMn)均可达到<生活饮用水水质卫生规范>(2001)的要求,且该工艺对氨氮也有良好的去除.结论大分子物质是造成膜污染的主要物质,且其从混合液中的去除主要通过膜分离来实现,粉末活性炭(PAC)和生物作用对去除分子量在500～10000 Dalton之间的物质较为有效.
关键词： 水处理 微污染地表水 PAC-MBR组合工艺 膜污染 分子量分布 -
高效凝胶色谱法测定聚乙烯亚胺的分子量及其分布
目的:探讨高效凝胶色谱法测定聚乙烯亚胺(PEI)及其衍生物的分子量及其分布.方法:采用Ultrahydrogel 250(300mmx7.8mm)色谱柱;以已知相对分子量的PEI为标样;醋酸-醋酸盐缓冲液(0.2mol/l醋酸-0.1mol/l醋酸钠)为流动相;柱温40℃;流速lml/min;示差折光检测器.结果:测得自制PEI衍生物的重均分子量(Mw)为5093,数均分子量(Mn)为2090、Z均分子量(Mz)为11031,分布宽度(Mw/Mn)为2.44.结论:高效凝胶色谱法操作简单、灵敏度高,适合于快速、简便地测定PEI及其衍生聚合物的分子量及其分布.
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HPSEC-ELSD法测定固元胶囊中多糖的分子量及其分布
目的:建立HPSEC-ELSD法测定固元胶囊(黄芪粗多糖、人参芦头)中多糖分子量及其分布的方法.方法:将Shodex Ohpak SB-805/804/803凝胶色谱柱串联使用;流动相:水,流速:0.4 mL/min;ELSD撞击器:开,漂移管温度:50℃,进样体积:30μL.结果:标准曲线的线性范围为1.8 × 102～2.0×106,R2=0.997 2;重复进样:RSD=0.08%(n=5).结论:该方法稳定,重现性好,但是相比于HPSEC-RID,其结果有差异.
关键词： HPSEC-ELSD 固元胶囊 多糖 分子量 分子量分布 -
藻酸双酯钠分子量及其分布的测定
采用示差折光检测器,以高效凝胶色谱法测定藻酸双酯钠分子量及其分布.以已知分子量的右旋糖酐为对照,采用Shodex OHpak SB-803HQ色谱柱,2.8%硫酸钠溶液(含0.02%叠氮钠)为流动相,检测池温度40℃,柱温35℃,流速0.5ml/min.
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酶解条件对透明质酸提取及其分子量分布的影响
使用胃蛋白酶和胰蛋白酶从鸡冠中提取透明质酸,考察不同酶解条件对透明质酸质量与分子量分布的影响.结果显示,胃蛋白酶用量30 g/kg,胰蛋白酶用量3 g/kg,各酶解2h,胰蛋白酶酶解pH 8.5,酶解温度45℃时,透明质酸得率为0.5％～0.6％,葡萄糖醛酸含量为41.2％～44.3％,透明质酸平均相对分子质量大于1.0× 106,分子量分布指数接近1.
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高效凝胶渗透色谱法测定硫酸软骨素的分子量及其分布
目的用高效凝胶渗透色谱法对硫酸软骨素的相对分子量及其分布进行测定.方法色谱柱为TSK 4 000 PW(7.8 mm×300 mm),以已知相对分子量的葡聚糖为标样,0.2 mol / L硫酸钠溶液(用稀硫酸调pH5.0)为流动相,柱温35℃,示差折光检测器.结果测得硫酸软骨素的重均分子量(Mw)为37 000～48 000 D,分布宽度(Mw / Mn)为1.34～1.45.结论该法操作简便,快速,可用于硫酸软骨素的分子量及其分布的质量控制.
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HPGPC法测定麦芽糖铁糖浆分子量与分子量分布
目的 建立测定麦芽糖铁糖浆的分子量与分子量分布的方法.方法 采用高效凝胶色谱法(high performance gel permeation chromatography,HPGPC) ,色谱柱为PSS HEMA凝胶色谱柱,检测器为示差折光检测器,流动相为磷酸盐缓冲液(pH6.8) ,柱温为45℃,流速为0.5 mL/min.结果 3批样品的重均分子量分布在45000~47000 Da之间,精密度、重现性好.结论 该方法简单,重现性好,可以作为控制麦芽糖铁糖浆中分子量与分子量分布的方法.
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中药水提液中可溶性有机物分子量分布及其对陶瓷膜通量的影响
目的初步研究生地等7种药材和清络通痹复方8种中药水提液中可溶性有机物分子量分布的特点,以及与0.2 μm孔径Al2O3陶瓷膜稳定通量的相关性.方法原水提液经0.45 μm孔径混合纤维素微滤膜过滤,所得滤液作为初始液.初始液依次经截留分子量为14万、10万、5万、1万和4 000的超滤膜逐级超滤,得一系列滤液,采用紫外分光光度计法测定其在254 nm处的吸光值,与初始液在该波长处的吸光值对比, 可得分子量分布的结果.结果①除半夏和生地外,水提液中分子量小于4 000的溶解性有机物所占比例均超过30%,金银花和清络通痹复方达到50%左右;②膜稳定通量近似的体系,则其分子量分布变化规律基本一致.结论膜稳定通量与中药水提液中可溶性有机物分子量分布情况存在一定的相关性.
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鱼皮胶原蛋白水解液中小分子寡肽的分子量分布测定
目的 建立测定鱼皮胶原蛋白水解液中小分子寡肽相对分子量分布的方法.方法 采用高效凝胶排阻色谱法用3根TSK-GEL G2000SWXL,色谱柱(300mm×7.8mm,5μm)串联,室温;流动相为乙腈-0.1%三氟乙酸溶液(15:85),流速0.6mL.min(-1),检测波长220 nm.结果 在相对分子量149～2,490Da内,寡肽相对分子量的对数与其保留时间具有良好的线性关系(r=0.995,6);精密度和重复性RSD均＜0.1%.结论 本方法简便准确,重复性好,可作为测定小分子寡肽分子量分布的方法.
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达肝素钠分子量及分子量分布的测定与计算方法改进
目的 建立用高效分子排阻法测定达肝素钠分子量与分子量分布的方法,并与欧洲药典(EP) 7.0版低分子肝素专论中的方法比较.方法 采用高效分子排阻法,示差检测器,色谱柱TSK G3000SWXL(300 mm×7.8 mm,5μm)和TSKG2000SWXL(300 mm×7.8 mm,5μm)串联,柱温30℃,流动相0.1 mol/L乙酸铵溶液,流速0.5 mL/min.结果 方法专属性强,重复性试验中重均分子量(Mw)的RSD为0.6％,M＜3000级分比例的RSD为2.1％,M3000～8000级分比例的RSD为0.9％,样品测定结果与EP7.0方法测定结果接近.结论 本方法操作简便,重复性好,结果准确可靠,可用于测定达肝素钠分子量与分子量分布.
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多糖色谱指纹图谱的研究方法进展
多糖作为生物大分子,其单糖组成、结构类型、分子量分布都与生物活性息息相关,因此多糖指纹图谱的建立在多糖的质量控制上起着重要的作用.多糖分子量大、结构复杂、无紫外吸收,建立指纹图谱相对困难.本文对近年来多糖色谱指纹图谱的研究方法进行研究,多糖色谱指纹图谱的研究主要包括组成分析与分子量分布两个方面.
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中药多糖的分子量及结构研究进展
目前中药多糖药理作用研究比较活跃,而其分子量和分子量分布及化学结构确定成为进一步深入研究多糖特异性和构效关系以及药效机理的基础.该文归纳总结了多糖分子量和分子量分布及化学结构研究的方法.
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分子排阻色谱-多角度激光散射法测定注射用核糖核酸分子量及其分布
目的 测定注射用核糖核酸中核糖核酸的分子量及其分布.方法 采用分子排阻色谱-多角度激光散射联用技术,以含0.02％叠氮钠的0.1 mol·L-1氯化钠溶液为流动相,流速0.5 mL·min-1,采用TSKgel G2000SWXL色谱柱,柱温为30℃.结果 获得了样品的dn/dc值、分子量与分子量分布等分子特征参数.测得样品dn/dc值为0.1547,分子量(Mw)在4.6～234.2 kDa,分子量分布系数(Mw/Mn)在1.3～2.9.结论 本文尝试以新的思路建立测定生物大分子核糖核酸分子量的方法,该方法快速、简便,可用于核酸类药物分子量及其分布的测定.实际样品检测结果表明,市售的注射用核糖核酸的分子量及分布差异均较大,原料及生产工艺有待进一步规范,加强质量控制.
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安徽霍山产3种石斛多糖组成的比较研究
目的:安徽霍山为兰科石斛属植物地理分布的北端,主产3种石斛:霍山石斛、细茎石斛和铁皮石斛,其多糖提取物具有显著的药理活性,本研究旨在探究同一特殊生境下3种石斛所含多糖在组成上的相似和差异.方法:实验以越冬茎条为供试材料,采用苯酚-硫酸法分析多糖含量差异,利用HPSEC法分析分子量分布差异,通过柱前衍生化HPLC法分析单糖组成差异.结果:霍山石斛、细茎石斛和铁皮石斛多糖含量分别为其干重的(18.65±1.50)％、(11.32±1.30)％和(20.78±1.60)％;其多糖分子量呈连续分布状态,其中分子量介于50～200 kDa的高活性多糖在3种石斛多糖中的比例分别为:(16.38±1.40)％、(21.61±1.30)％和(14.19±1.50)％;3种石斛多糖水解产物中检出葡萄糖(Glc)、甘露糖(Man)、半乳糖(Gal)、木糖(Xyl)、葡萄糖醛酸(GlcUA)、半乳糖醛酸(GalUA)、阿拉伯糖(Ara)共7种单糖,且都以甘露糖和葡萄糖为主要单糖组分,但铁皮石斛中的甘露糖和葡萄糖的相对峰面积比值大.结论:同一生境下3种石斛所含多糖在含量、分子量分布和单糖组成上既存在共性也存在明显差异,实验探究了同一特殊生境下3种石斛多糖组分间的异同,其结果对石斛的鉴别和组效关系的研究提供了重要参考.
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高效凝胶色谱法测定罗勒多糖的分子量与分子量分布
目的 建立测定罗勒多糖的分子量与分子量分布的方法.方法 应用高效凝胶色谱法,色谱柱为Shodex SB-804HQ凝胶色谱柱,检测器为示差折光检测器,流动相为0.7%硫酸钠溶液(含0.02%叠氮化钠),柱温为35℃,流速为0.5 mL/min.结果 6批样品的重均分子量分布在80 000-100 000之间,精密度、重现性良好.结论 试验方法快速、准确,结果可靠,为质量控制提供了基础.
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冻干人胎盘因子的高效液相色谱法测定及生物质谱的应用
建立反相高效液相色谱法检测了冻干人胎盘因子,并用生物质谱法测定其分子量范围.采用Kromasil-C18柱,以0.05mol/LCH3COONa-CH3COOH(体积比100:0.5)为流动相,紫外检测器214 nm波长处检测.结果表明:同一样品连续5次进样,各峰的保留时间和峰总面积的变异系数小于2.0%;分子量分布范围在10000以下且连续3批产品色谱图一致.该法快速灵敏、结果准确,可以作为冻干人胎盘因子质量控制的常规检验方法.
