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氧化型低密度脂蛋白对内皮细胞的损伤机制与干预研究
目的 观察过氧化物酶体增生物激活受体α激活物(K877)对血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)及前蛋白转化酶枯草溶菌9(PCSK9)表达的影响.方法 制备氧化低密度脂蛋白(ox-LDL),体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),将细胞分为5组:正常对照组、模型组、多聚肌苷酸组、K877组和联合组(K877+多聚肌苷酸组).正常组,以DMEM培养基培养;模型组,在培养基中加入ox-LDL 50μg·mL-1培养24 h.多聚肌苷酸组,多聚肌苷酸250μg·mL-1预先作用内皮细胞2h,再加入ox-LDL 50 μg·mL-1培养24h.K877组,K877 0.2μmol·L-1预先作用内皮细胞2h,再加入ox-LDL 50μg·mL-1培养24 h.联合组,加入多聚肌苷酸250 μg·mL-1和K877 0.2μmol·L-1预先作用内皮细胞2h,后加入ox-LDL 50 μg·mL-1培养24h.以逆转录聚合酶链反应检测PCSK9与LOX-1 mRNA的表达.结果 正常对照组、模型组、多聚肌苷酸组、K877组和联合组的PCSK9 mRNA分别是0.35-0.02,1.05±0.03,0.79±0.02,0.58±0.02,0.46±0.01;这5组的LOX-1 mRNA相对值分别是0.12±0.01,0.88±0.02,0.46±0.01,0.25±0.01,0.11±0.01,模型组与正常组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.01);多聚肌苷酸组和K877组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05);联合组与单一药物组比较,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).结论 K-877可抑制oX-LDL诱导HUVEC的PCSK9 mRNA表达,LOX-1参与了该过程.
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苯扎贝特对脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶-9表达的影响及机制
目的 观察苯扎贝特对氧化型低密度脂蛋白所诱导的人脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响及是否与血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达相关.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,逆转录聚合酶链反应检测MMP-9和血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA的表达.结果 与对照组(0.151±0.004、0.562±0.021)比较,氧化型低密度脂蛋白组LOX-1 mRNA(0.943±0.003)、MMP-9 mRNA(1.020±0.039)表达均明显增加(P<0.05);与氧化型低密度脂蛋白组比较,苯扎贝特组和多聚肌甘酸(血凝素氧化型低密度脂蛋白受体1阻滞剂)组血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA(0.258±0.002、0.463±0.007)、MMP-9 mRNA(0.894±0.041、0.872±0.046)表达均减少(P<0.05);与苯扎贝特组比较,苯扎贝特组加多聚肌甘酸组血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA(0.144±0.003)、MMP-9 mRNA(0.541±0.030)表达均明显减少(P<0.05).结论 血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1可能参与苯扎贝特下调内皮细胞MMP-9基因的表达.
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血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1在人脐静脉内皮细胞表达CD40中的作用
目的研究氧化低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞表达CD40中血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1的作用.方法在氧化低密度脂蛋白作用人脐静脉内皮细胞前预先用血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1阻断剂角叉(菜)胶(κ-carrageenan)和多聚肌苷酸(PIA)作用1 h,应用亲合组织化学技术检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1的表达,流式细胞技术检测细胞表面CD40的表达.结果预先加入血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1阻断剂PIA和角叉(菜)胶的CD40的表达低于氧化低密度脂蛋白组(P＜0.05).结论在人脐静脉内皮细胞的炎症反应中,氧化低密度脂蛋白通过血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1途径激活了CD40的表达.
关键词： 内皮细胞 CD40 血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 -
Lox-1介导氧化型低密度脂蛋白促进内皮细胞MMP-2的表达
目的 探讨氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)对人脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)表达的影响及血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1,Lox-1)介入表达的过程.方法 制各氧化低密度脂蛋白,体外培养人脐静脉内皮细胞,分如下5组进行试验:对照组用普通培养基培养;25、50、100ng/L ox-LDL组培养基中分别加入相应浓度ox-LDL培养24小时;100ng/L ox-LDL联合多聚肌苷酸组预先加入250ng/ml多聚肌苷酸预先作用2小时,再加入100ng/L ox-LDL培养24小时.反转录聚合酶链反应检测MMP-2 mRNA及Lox-1 mRNA的表达,并观察予以Lox-1抑制剂作用后,人脐静脉内皮细胞MMP-2 mRNA、Lox-1 mRNA表达的变化.结果 加入ox-LDL培养24小时后,与对照组比较,各浓度ox-LDL组MMP-2 mRNA、Lox-1 mRNA表达均增加,且25ng/L ox-LDL组、50ng/Lox-LDL组、100ng/L ox-LDL组MMP-2 mRNA、Lox-1 mRNA表达逐渐增强:与100ng/L ox-LDL组比较,100ng/L ox-LDL联合多聚肌苷酸组MMP-2 mRNA、Lox-1 mRNA表达明显下降.结论 ox-LDL能促进内皮细胞MMP-2 mRNA、Lox-1 mRNA的表达,Lox-1参与了ox-LDL诱导内皮细胞MMP-2 mRNA表达的过程.
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凝血素样氧化低密度脂蛋白受体结构与动脉粥样硬化
动脉粥样硬化(As)早期改变是内皮功能紊乱,新型受体-植物凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)在氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导的内皮功能紊乱过程中起关键性作用.LOX-1主要在内皮细胞表达,其结构和功能与其他可吞噬ox-LDL的清道夫受体显著不同,但与自然杀伤细胞受体却高度一致.目前对LOX-1基因和蛋白结构以及功能尚不完全清楚.因此,进一步研究LOX-1的功能及其表达的调控机制,不仅有助于了解脂代谢和As发病机制,对心血管病防治也有十分重要的意义.本文对LOX-1其结构、功能及其调控因素等新研究进行综述.
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心痛泰通过降低Lp-PLA2、IL-6、hs-CRP、LOX-1水平减轻兔动脉粥样硬化炎症反应
目的 研究心痛泰对动脉粥样硬化兔血清脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、白细胞介素6(IL-6)以及主动脉组织高敏C反应蛋白(hs-CRP)和血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)的影响.方法 120只日本大耳白兔随机分为空白组、模型组、心痛泰低剂量组、中剂量组、高剂量组和瑞舒伐他汀组.采用前瞻性研究,造模的同时予以相应药物灌胃.60天后采血,测定血清Lp-PLA2和IL-6水平;免疫组织化学法检测胸主动脉hs-CRP和LOX-1含量.结果 心痛泰低剂量组、中剂量组和高剂量组血清Lp-PLA2和IL-6水平比模型组低(P＜0.01);与心痛泰低剂量组比较,心痛泰中剂量组和高剂量组、瑞舒伐他汀组血清Lp-PLA2和IL-6水平降低(P＜0.01或P＜0.05).心痛泰中剂量组和高剂量组的hs-CRP和LOX-1表达水平比模型组低(P＜0.01);与心痛泰低剂量组比较,心痛泰中剂量组和高剂量组、瑞舒伐他汀组的hs-CRP和LOX-1表达水平降低(P＜0.05).免疫组织化学染色显示,模型组主动脉内膜hs-CRP和LOX-1大量表达;与模型组比较,心痛泰低剂量组、中剂量组、高剂量组和瑞舒伐他汀组主动脉内膜hs-CRP和LOX-1表达减轻.结论 心痛泰能降低动脉粥样硬化兔Lp-PLA2、IL-6、hs-CRP、LOX-1的水平,从而达到抗动脉粥样硬化炎症反应的作用.
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ox-LDL促进树突状细胞LOX-1表达及炎症因子分泌
目的 应用小鼠高脂模型及树突状细胞株研究血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)高表达树突状细胞(DC)在动脉粥样硬化中的作用.方法 氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导原代培养的C57小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDC),采用Western blot检测BMDC LOX-1蛋白水平;采用流式细胞术检测高表达LOX-1和低表达LOX-1细胞亚群的比例;MACS磁珠分选LOX-1表达水平不同的两种细胞亚群,观察ox-LDL对两种细胞亚群的影响及释放炎症因子的影响;采用C57小鼠高脂模型,在高脂喂养的不同时间(4周、6周、8周)检测小鼠总胆固醇水平和主动脉中DC数量;用不同浓度的Dil标记的ox-LDL(Dil-ox-LDL)刺激DC2.4细胞,荧光显微镜观察各组细胞吞噬作用的差异,Western blot检测LOX-1的表达.结果 DC可分为高表达和低表达LOX-1两种细胞亚群,且ox-LDL能增加LOX-1high DC的比例;分选后的阳性细胞被ox-LDL刺激后,TNF-α和IL-1β mRNA的表达明显上调(P＜0.01),且阳性细胞的上升比例高于阴性细胞.在C57小鼠高脂模型中,高脂喂养组总胆固醇水平明显升高,且随着总胆固醇水平的升高,小鼠主动脉中DC增多,且LOX-1high DC比例明显增加.用不同浓度的Dil-ox-LDL刺激DC2.4细胞,随着Dil-ox-LDL浓度的升高,DC2.4细胞对ox-LDL的吞噬也增加,并且ox-LDL可以诱导DC2.4细胞表面LOX-1表达,20 mg/L和40 mg/L的ox-LDL对LOX-1表达的诱导作用明显.结论 ox-LDL能够上调DC表面受体LOX-1,增加LOX-1high DC比例,促进炎症因子表达.
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ox-LDL经由LOX-1受体对PPARγ-LXRα-ABCA1通路激活的作用研究
目的 探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)经由血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)受体对PPARy-LXRα-ABCA1通路激活的作用.方法 浓度梯度ox-LDL(0～ 40 mg/L,12 h)刺激J774A.1巨噬细胞,检测LXRα、ABCA1的表达.构建293T细胞LOX-1过表达的PPARy双荧光素酶报告基因系统,激光共聚焦及Western blot检测LOX-1的分布与表达,双荧光素酶报告基因系统检测PPARγ的转录活化情况.对J774A.1巨噬细胞分别进行LOX-1 siRNA和PPARγ siRNA沉默,ox-LDL(30 mg/L,12 h)孵育后检测LXRα、ABCA1蛋白的表达.结果 ox-LDL可显著上调J774A.1细胞LXRα和ABCA1的表达(P＜0.01,n=3).LOX-1过表达的PPARγ双荧光素酶报告基因系统检测显示ox-LDL能够通过LOX-1增加PPARγ的转录活性;对J774A.1巨噬细胞分别进行LOX-1siRNA、PPARγ siRNA沉默后发现,LXRα和ABCA1的表达均显著降低(P＜0.01,n=3).结论 ox-LDL可通过LOX-1受体激活PPARγ转录活性,从而上调LXRα、ABCA1蛋白表达,完成PPARγ-LXRα-ABCA1信号通路的激活.
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人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1双顺反子表达载体的构建及其在293T细胞中的表达
目的 尝试构建人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)基因双顺反子表达载体并检测其在293T细胞中的表达情况和生物学活性,为深入探讨LOX-1在动脉粥样硬化中的作用和以LOX-1为靶点建立干预机制治疗动脉粥样硬化奠定基础.方法 首先根据Primer5.0软件设计引物,采用聚合酶链反应法以LOX-1 cDNA片段为模板扩增LOX-1基因完整编码区,克隆至T载体,经测序成功后亚克隆到双顺反子真核表达载体pIRES2-AcGFP 1-Nuc.利用脂质体转染法将双顺反子重组表达质粒转染至293T细胞,倒置荧光显微镜检测质粒转染情况.采用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法鉴定LOX-1基因在核酸和蛋白水平的表达,采用激光共聚焦检测LOX-1基因在293T细胞膜上的表达,激光共聚焦和流式细胞术检测表达在293T细胞膜上的LOX-1结合氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的生物学活性.结果 成功构建pIRES2-LOX-1双顺反子重组表达载体,将其转染293T细胞后,观察到绿色荧光蛋白基因的表达,初步表明LOX-1基因转染至293T细胞.进一步分子水平鉴定结果表明LOX-1基因在293T细胞核酸和蛋白水平均得到表达,激光共聚焦结果证明LOX-1基因在293T细胞膜上表达.后激光共聚焦和流式细胞术结果证实表达在293T细胞膜上的人LOX-1基因可以结合氧化型低密度脂蛋白.结论 成功构建人LOX-1基因双顺反子表达载体,在此基础上证明其在293T细胞膜上得到表达,并且具有结合ox-LDL的生物学活性,为后续体外研究其在动脉粥样硬化中的作用以及以此为靶点建立干预机制奠定了基础.
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RNA干扰LOX-1表达对氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护机制
目的 构建血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)基因的RNA干扰慢病毒载体并转染人脐静脉内皮细胞.观察干扰LOX-1表达后对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导内皮细胞损伤的保护机制.方法 针对已经筛选确定的小干扰RNA有效干扰序列,合成慢病毒LV-si-OLR1佳干扰序列,测定滴度.转染人脐静脉内皮细胞96h后,通过荧光显微镜观察转染效率,逆转录聚合酶链反应和Western blot检测LOX-1的抑制效率.转染72 h后加入150 mg/L ox-LDL处理24h;噻唑蓝比色法检测细胞存活率;硝酸还原酶法检测各组内皮细胞培养液一氧化氮(NO)的含量;Western blot检测各组细胞间黏附分子1(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、RhoA、Rho激酶1(ROCK1)、Rho激酶2(ROCK2)的表达.结果 测序结果证实,靶向人LOX-1的干扰慢病毒载体构建成功,包装后慢病毒滴度为6×1011 TU/L.转染组与未转染组比较,LOX-1 mRNA与蛋白的表达明显减少(P＜0.01).与正常对照组相比,ox-LDL处理组能明显减低内皮细胞的存活率及NO的生成量,增高ICAM-1、MCP-1、RhoA、ROCK1、ROCK2的表达(P＜0.05);与ox-LDL处理组相比,干扰LOX-1表达后对ox-LDL诱导的内皮细胞存活率、NO生成量减低和ICAM-1、MCP-1、RhoA、ROCK1、ROCK2表达增高均有明显抑制作用(P＜0.05).结论 干扰LOX-1表达,对ox-LDL诱导内皮细胞引起的ICAM-1、MCP-1高表达和RhoA/Rho激酶信号通路的激活及细胞存活率、NO生成量的减低均有明显抑制作用,起到对内皮细胞损伤的保护作用.本研究为LOX-1作为靶基因治疗动脉粥样硬化提供了实验依据.
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吡格列酮对高脂血症大鼠主动脉血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1和凋亡蛋白表达的影响
目的 观察吡格列酮对高脂血症大鼠主动脉血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 (LOX-1)和凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达的影响,并探讨其作用机制及LOX-1在吡格列酮调节凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达中的作用.方法 清洁型SD大鼠26只,随机分为对照组(n=9)、高脂饮食组(n=17),高脂饮食组喂养12周后再随机分为模型组(n=8)和吡格列酮组(n=9),分别干预4周后,检测各组血脂水平,HE染色观察主动脉病理形态学改变,免疫组织化学法检测主动脉LOX-1、Bax和Bcl-2的表达.结果 高脂饮食组喂养12周后,血脂明显升高(P＜0.01)；给药4周后,与模型组比较,吡格列酮组甘油三酯、总胆固醇水平明显降低(P＜0.01),且主动脉血管内皮基本完好,偶有脱落,平滑肌细胞增殖不明显.与对照组相比,模型组主动脉LOX-1和Bax蛋白表达明显升高(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax比值显著降低(P＜0.01)；与模型组相比,吡格列酮组主动脉LOX-1和Bax蛋白表达明显降低(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax比值明显升高(P＜0.01).结论 高脂饮食可引起主动脉LOX-1和凋亡蛋白Bax、Bcl-2及Bcl-2/Bax比值的改变,而吡格列酮可降低血脂,调节LOX-1和凋亡蛋白表达,抑制内皮细胞凋亡,从而改善内皮细胞功能和动脉粥样硬化病理进程.
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睾酮对动脉粥样硬化雄兔血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响
目的 探讨睾酮对动脉粥样硬化雄兔血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响.方法 选取雄性新西兰白兔18只,随机分为假手术组、去势-安慰剂组和去势-睾酮组,并建立动脉粥样硬化模型α化学发光法测定各组血清总睾酮.胸主动脉HE染色,图像分析测定内膜和中膜厚度.夹心双抗酶联免疫法检测血清氧化型低密度脂蛋白水平.半定量RT-PCR、免疫组织化学分析法测定血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1的mRNA和蛋白表达.结果 雄兔去势-安慰剂组血清总睾酮水平显著下降,而去势-睾酮组血清总睾酮水平未见降低,较假手术组差异无显著性.去势-安慰剂组雄兔胸主动脉内膜和内膜/中膜厚度较假手术组显著增加.各组雄兔血清氧化型低密度脂蛋白水平差异无显著性.去势-安慰剂组雄兔胸主动脉血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1的mRNA和蛋白表达较假手术组显著升高,而去势-睾酮组胸主动脉均无明显改变.结论 睾酮对动脉粥样硬化雄兔血清氧化型低密度脂蛋白没有显著影响,但是可影响血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因的转录和翻译,睾酮可能通过调节血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1而非氧化型低密度脂蛋白,进而影响动脉粥样硬化的进程.
关键词： 睾酮 动脉粥样硬化 血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 -
阿托伐他汀对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞Toll样受体4及炎症因子表达的影响
目的 研究阿托伐他汀对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞Toll样受体4及血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1、肿瘤坏死因子α及细胞间黏附分子表达的影响,探讨阿托伐他汀对炎症性疾病的影响及防治动脉粥样硬化的机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,用脂多糖刺激人脐静脉内皮细胞2h后,加入阿托伐他汀干预24 h,收集细胞,荧光定量PCR法测定Toll样受体4、髓样分化因子88、肿瘤坏死因子受体相关因子6、血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1、肿瘤坏死因子α及细胞间黏附分子1的mRNA表达；Western Blotting法测定其蛋白表达.结果 用脂多糖刺激人脐静脉内皮细胞后,引起Toll样受体4、髓样分化因子88、肿瘤坏死因子受体相关因子6、血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1、肿瘤坏死因子α及细胞间黏附分子1的高表达(P＜0.01),用阿托伐他汀干预后显著抑制Toll样受体4、髓样分化因子88、肿瘤坏死因子受体相关因子6、血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1、肿瘤坏死因子α及细胞间黏附分子1的表达(P＜0.01).结论 阿托伐他汀可抑制Toll样受体4信号转导通路主要原件及血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1、肿瘤坏死因子α及细胞间黏附分子1的表达,这可能是其治疗炎症性疾病及防治动脉粥样硬化作用的机制之一.
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血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因沉默抑制人脐静脉内皮细胞表达分形趋化因子和单核细胞趋化蛋白1
目的 探讨血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因沉默后能否抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的分形趋化因子和单核细胞趋化蛋白1的表达.方法 分别用不同浓度的氧化型低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共孵育,及预先对人脐静脉内皮细胞转染pGenesil-1 LOX-1 shRNA后再用氧化型低密度脂蛋白刺激,半定量RTPCR、Western blot及酶联免疫吸附法检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1、分形趋化因子和单核细胞趋化蛋白1的mRNA和蛋白表达.结果 氧化型低密度脂蛋白能呈浓度依赖性诱导血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1、分形趋化因子和单核细胞趋化蛋白1的mRNA和蛋白表达(P＜0.01).用RNA干扰抑制血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1的表达后,显著抑制了氧化型低密度脂蛋白诱导的分形趋化因子和单核细胞趋化蛋白1的mRNA和蛋白表达(P＜0.01).结论 氧化型低密度脂蛋白能呈浓度依赖性诱导人脐静脉内皮细胞中分形趋化因子和单核细胞趋化蛋白1表达;这种诱导作用可以被血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因沉默抑制.
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替米沙坦对糖尿病大鼠主动脉组织血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响
目的 观察糖尿病大鼠主动脉组织中血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(1ectin-like oxidizedlow-density lipoprotein receptor-1,LOX-1)的表达以及替米沙坦的干预作用,从而探讨糖尿病动脉粥样硬化的发病机制.方法 雄性6周龄SD大鼠32只,分为对照组(n=8)及实验组(n=24),实验组予高脂高糖饲料喂养4周后应用链脲佐菌素45 mg/kg腹腔注射一次建立糖尿病模型.造模成功的大鼠再分为糖尿病组(n=9)和替米沙坦组(n=11),对照组和糖尿病组给予蒸馏水灌胃,替米沙坦组予替米沙坦20mg/kg灌胃,药物干预共8周.全自动生化分析仪检测血脂水平,应用HE染色观察主动脉弓病理组织学变化,应用Real-time PCR和Western blot杂交技术观察大鼠主动脉组织中LOX-1 mRNA及蛋白表达水平的变化及替米沙坦对LOX-1表达的影响.结果 三组大鼠间总胆固醇(P=0.13)、甘油三酯(P=0.35)差异无统计学意义.糖尿病组高密度脂蛋白较对照组(0.99±0.12 mmol/L比1.37±0.23 mmol/L)显著降低(P=0.001),且低密度脂蛋白(0.48±0.08 mmol/L比0.34±0.03mmol/L)有明显升高(P=0.001).大鼠主动脉病理组织学提示对照组内膜层薄,内皮细胞排列整齐,内膜光滑;糖尿病组可见局部内皮细胞脱落,内膜不光滑,局部内膜增厚;替米沙坦组无明显改善;三组均未见明显动脉粥样斑块形成.与对照组相比,糖尿病组LOX-1 mRNA(0.316±0.055比0.154±0.029)和蛋白(1.271±0.238比0.739±0.113)的相对表达量增高(P=0.000),替米沙坦干预后,LOX-1 mRNA(0.192±0.030比0.316±0.055)和蛋白(0.691±0.198比1.271±0.238)的相对表达量较糖尿病组降低(P=0.000).结论 SD大鼠糖尿病成模8周,可见动脉粥样硬化的早期表现,但未见明显动脉粥样斑块形成;糖尿病大鼠主动脉LOX-1的mRNA和蛋白表达水平增高;替米沙坦可抑制大鼠主动脉LOX-1 mRNA和蛋白的表达.
关键词： 糖尿病 动脉粥样硬化 血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 替米沙坦 -
血管紧张素(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响
目的 观察血管紧张素(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达水平的影响并探讨其可能作用机制.方法 采用胰蛋白酶消化法原代培养人脐静脉内皮细胞,取2～5代用于实验,培养的人脐静脉内皮细胞随机分为对照组、血管紧张素Ⅱ组、血管紧张素(1-7)组、血管紧张素Ⅱ+血管紧张素(1-7)组、血管紧张素Ⅱ+血管紧张素(1-7)+血管紧张素(1-7)特异性受体拮抗剂A-779组,通过半定量逆转录聚合酶链反应和流式细胞术分别检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因和蛋白表达水平;用免疫印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶磷酸化的表达水平.结果 血管紧张素Ⅱ(10-6mol/L)可以诱导血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达增加(P<0.05),血管紧张素(1-7)(10-9～10-6mol/L)随着浓度的增加抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达水平增强(P<0.05);血管紧张素(1-7)特异性受体拮抗剂A-779可阻断血管紧张素(1-7)的上述效应(P<0.05).与对照组相比,血管紧张素Ⅱ(10-6 mol/L)诱导后p38丝裂原活化蛋白激酶磷酸化表迭水平显著增加(P<0.05);血管紧张素(1-7)(10-9～10-6 mol/L)随着浓度的增加抑制血管紧张素Ⅱ诱导的p38丝裂原活化蛋白激酶磷酸化表达水平增强(P<0.05),血管紧张素(1-7)特异性受体拮抗剂A-779可阻断血管紧张素(1-7)的上述效应(P<0.05).结论 血管紧张素Ⅱ可诱导血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1及p38丝裂原活化蛋白激酶磷酸化表达增加,血管紧张素(1-7)抑制血管紧张素Ⅱ的上述效应,并且是通过其特异性受体发挥作用.
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苯扎贝特对脐静脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶表达的影响及机制
目的 观察苯扎贝特对氧化型低密度脂蛋白所诱导的人脐静脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶表达的影响及是否与血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达相关.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,逆转录聚合酶链反应检测内皮型一氧化氮合酶及血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA表达,Western Blot检测内皮型一氧化氮合酶及血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白含量表达.结果 与氧化型低密度脂蛋白组比较,苯扎贝特组和多聚肌苷酸(血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1阻断剂)组内皮型一氧化氮合酶mRNA和蛋白表达均增加,血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA和蛋白表达均减少(P＜0.05);与苯扎贝特组比较,苯扎贝特组+多聚肌苷酸组内皮型一氧化氮合酶mRNA和蛋白表达均明显增加,血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA和蛋白表达均明显减少(P＜0.01).结论 血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1可能介导苯扎贝特上调内皮细胞内皮型一氧化氮合酶基因和蛋白的表达.
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C反应蛋白和高密度脂蛋白对血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响
目的 观察C反应蛋白和高密度脂蛋白对单核细胞株THP-1来源的巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和mRNA表达的影响,以及血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的变化与细胞内胆固醇含量变化的关系.方法 THP-1单核细胞株经佛波酯诱导分化为巨噬细胞.用不同浓度C反应蛋白或高密度脂蛋白在体外干预巨噬细胞,测定干预前后巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和mRNA表达的变化, 并采用高效液相色谱测定巨噬细胞内胆固醇含量的变化.结果 与对照组相比,C反应蛋白或高密度脂蛋白均可以诱导THP-1来源的巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和mRNA表达增加(P<0.05),C反应蛋白使巨噬细胞内总胆固醇和胆固醇酯含量显著增加(P<0.01),而高密度脂蛋白使细胞内总胆固醇和胆固醇酯显著降低(P<0.01).结论 C反应蛋白和高密度脂蛋白都能引起THP-1来源的巨噬细胞表面血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达上调,提示血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1并不是介导巨噬细胞参与炎症反应病理生理变化的关键性受体.
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靶向血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因的发卡样siRNA表达载体的构建及其效应
目的 设计合成有效的靶向血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因的发卡样siRNA(shRNA)表达载体.方法 根据siRNA的设计原则,以血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1为靶基因设计并合成小发卡结构两端配对的siRNA寡核苷酸链,再经变性、复性后形成双链血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 shRNA.采用DNA重组技术,将血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 shRNA双链与线性化pGenesil-1质粒表达载体连接,脂质体法转染人脐静脉内皮细胞株,半定量逆转录聚合酶链反应法检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA的表达.结果 测序鉴定发现插入的发卡样序列正确,成功合成了发卡样血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因RNA干扰表达载体;靶向血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因的发卡样siRNA表达载体转染人脐静脉内皮细胞株后,其凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA的表达显著下调.结论 成功构建了能有效抑制血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA表达的发卡样血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因RNA干扰表达载体,为进一步利用RNA干扰技术防治动脉粥样硬化提供一种研究基础.
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动脉粥样硬化兔血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达及雷米普利的干预作用
目的探讨血管紧张素转化酶抑制剂对动脉粥样硬化家兔血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响.方法以家兔动脉粥样硬化模型为研究对象,采用免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应方法评价动脉粥样硬化家兔血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和信使核糖核酸表达及口服雷米普利的干预效应.结果高脂组血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和信使核糖核酸表达均显著增加,雷米普利组血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和信使核糖核酸表达水平较高脂组显著下降(P均＜0.05).结论结果提示,服用雷米普利可明显抑制动脉粥样硬化病变血管血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和信使核糖核酸表达,从而可能在动脉粥样硬化的预防中起重要作用.
