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c-Jun氨基端激酶通路抑制剂SP600125对大鼠脑缺血再灌注后自噬的影响
目的 研究c-Jun氨基端激酶(JNK)特异性抑制SP600125对大鼠脑缺血再灌注后自噬性蛋白Beclin1、髓样细胞白血病基因-1 (Mcl-1)蛋白和B淋巴瘤-2基因相关X(Bax)蛋白表达的影响.方法 按照体重将SD大鼠随机分为3组,每组10只:假手术组、模型组和实验组.模型组和实验组均采用线拴法制作SD大鼠大脑中动脉阻塞再灌注(MCAO)模型,脑缺血1h再灌注72 h.造模前,实验组先向大鼠侧脑室内注射3 μg·μL-1 SP600125溶液10 μL,1h后进行MCAO制模.以组织免疫荧光染色方法测定MCAO后JNK与Beclin1的表达;以免疫印迹法测定MCAO后JNK、Beclin1、Mcl-1和Bax蛋白表达.结果 给药后,假手术组、模型组、实验组的JNK条带光密度值分别是0.11±0.05,0.83 +0.03,0.56±0.04;这3组的Beclin1条带光密度值分别为0.14±0.04,1.77±0.05,0.86±0.05;这3组的Mcl-1条带光密度值分别为0.17±0.03,0.79±0.04,1.46±0.05;这3组的Bax条带光密度值分别为0.26±0.05,1.15±0.06,0.47±0.04.模型组与假手术组比较,JNK、Beclin1、Mcl-1和Bax值均明显增高,差异均有统计学意义(均P＜0.01);实验组与模型组比较,JNK、Beclin1和Bax值均明显下降而Mcl-1值明显升高,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 通过抑制JNK可下调脑缺血再灌注后Bax与Beclin1的表达、上调Mcl-1蛋白表达,推测JNK可能参与调节缺血再灌注后神经元的自噬.
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Bcl-2高表达、Bax及Beclin1表达缺失与子宫肌瘤发生的关系
目的 探讨凋亡基因Bcl-2、Bax及Beclin1与子宫肌瘤发生的关系.方法 选取88例子宫肌瘤组织和同源正常子宫肌层组织,采用免疫组织化学法检测两种组织中凋亡基因Bcl-2、Bax及Beclin1的表达并进行比较.结果 在正常子宫肌层标本中,bcl-2蛋白主要为弱阳性表达,而在子宫肌瘤标本中主要呈中等至强阳性表达.Bax和Beclin1在子宫肌瘤组织中表达弱,而在正常子宫肌层中,Bax蛋白在94.32％ 的组织中呈阳性表达,Beclin1全部为阳性表达,且主要为中等阳性至强阳性染色.两种组织中Bcl-2、Bax及Beclin1的表达阳性率比较均有显著差异(P<0.05).结论 Bcl-2高表达、Bax及Beclin1表达缺失与子宫肌瘤的发生具有一定的相关性.
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Beclin1进化保守区-SA融合蛋白偶联生物素-A10适配子制备PSMA靶向系统及其对前列腺癌细胞的抑制
目的:构建链霉亲和素(streptavidin,SA)与Beclin1进化保守区(evolutionary conserved district,ECD)融合蛋白原核表达载体,将融合蛋白与生物素-前列腺特异性膜抗原(prostate specific membrane antigen,PSMA)特异性适配子A10偶联制备PSMA靶向系统,鉴定其促进PSMA+前列腺癌细胞凋亡及自噬的功能.方法:采用基因合成技术获得融合基因SA-ECD,克隆至PUC57载体鉴定无误后,再将其定向插入原核表达载体PET30a,IPTG诱导融合蛋白表达,镍亲和凝胶层析柱纯化融合蛋白,Western blotting鉴定.按照生物素-A10∶ SA-ECD摩尔比为4∶1的比例制备PSMA特异性的偶联物即靶向系统,凝胶迁移阻滞实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)验证SA-ECD与生物素的结合,流式细胞术、Western blotting、锥虫蓝染色分别检测靶向系统对前列腺癌细胞凋亡、自噬相关蛋白表达和细胞活力的影响.结果:双酶切及基因测序证实重组质粒PET30a-SA-ECD构建成功,IPTG诱导SA-ECD融合蛋白在大肠杆菌中获得高效表达并经亲和凝胶层析成功纯化.EMSA实验证明SA-ECD能有效结合生物素-A10.靶向系统可促进PSMA+前列腺癌细胞凋亡和自噬,同时抑制癌细胞活力.结论:成功表达并纯化融合蛋白SA-ECD,构建的生物素-A10∶ SA-ECD靶向系统能够杀伤PSMA+前列腺癌细胞.
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结肠癌组织中 Beclin1及 Bcl-2表达变化及意义
目的：观察结肠癌组织中Beclin1、Bcl-2表达变化，探讨其意义。方法手术治疗的结肠癌患者97例，术中分别取肿瘤组织、癌旁组织、距离肿瘤边缘6 cm以上的正常结肠组织；免疫组化法检测各组织中的Beclin1、Bcl-2，分析二者与结肠癌临床病理参数的关系。结果结肠癌组织中Beclin1、Bcl-2的阳性表达率分别为80．4％、75．3％，癌旁组织分别为60．8％、64．9％，正常结肠组织分别为36．1％、26．8％；结肠癌组织Beclin1、Bcl-2阳性表达率均高于癌旁组织及正常结肠组织（P均＜0．01）。 Beclin1表达与结肠癌肿瘤浸润深度、肿瘤直径、TNM分期有关（P均＜0．01）；Bcl-2表达与结肠癌肿瘤直径、TNM分期有关（P均＜0．05）。结肠癌组织中Beclin1、Bcl-2表达呈正相关（r＝0．324，P＜0．01）。结论 Beclin1、Bcl-2高表达与结肠癌的发生及恶性生长行为相关，可作为预后不良的判断指标。
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汉防己甲素诱导人胃癌BGC-823细胞自噬和凋亡的作用及机制
目的 观察汉防己甲素诱导人胃癌BGC-823细胞自噬与凋亡的作用,并探讨两者发生以及相互关联的分子机制.方法 用不同浓度的汉防己甲素作用于人胃癌BGC-823细胞,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western-blot法检测各组细胞Bcl-2和自噬标记蛋白LC3、Beclin1的表达,MDC自噬特异性染料荧光染色观察自噬泡的聚集.结果 TET对BGC-823细胞的生长有显著抑制作用,呈明显的时间、剂量依赖性;TET可诱导BGC-823细胞发生凋亡;TET可诱导BGC-823细胞发生自噬,自噬作用在8、10 μg/mL TET给药组达到高峰,后随着浓度的增加逐渐下降;在TET给药前用3-甲基腺嘌呤(3-MA)阻断自噬后,低浓度(8 μg/mL) TET诱导的凋亡率明显升高;高浓度(20 μg/mL) TET诱导的凋亡率差别无统计学意义.结论 TET能明显抑制人胃癌BGC-823细胞的生长,并诱导其发生凋亡和自噬.TET诱导的自噬作为保护性机制,可发挥拮抗凋亡的作用.
