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间尼索地平通过Rho/ROCK通路抑制5-羟色胺诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖
探讨Rho/ROCK通路在5-羟色胺(5-HT)诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖中的作用以及间尼索地平(m-Nis)对此的影响.组织贴块法原代培养大鼠PASMCs;噻唑蓝(MTT)比色法观察1μmol·L-15-HT作用不同时间对大鼠PASMCs增殖的影响以及m-Nis的干预作用;Western blot及RT-PCR等方法检测5-HT作用下大鼠PASMCs增殖中RhoA、ROCK1 mRNA和p-MYPT1蛋白表达的变化以及m-Nis对此的影响,深入探讨其作用机制.结果显示:1 μmol·L-1 5-HT作用12～72 h可明显诱导大鼠PASMCs增殖(P＜0.05或P＜0.01);m-Nis (1×10-5、1×10-6、1×10-7和1×10-8 mol·L-1)均可明显抑制5-HT诱导的大鼠PASMCs增殖,并呈现一定的浓度依赖性(P＜0.05或P＜0.01);另外,不同浓度m-Nis还明显抑制了5-HT诱导的RhoA和ROCK1 mRNA的表达以及ROCK的活化(P＜0.05或P＜0.01).结果表明Rho/ROCK通路在5-HT诱导的大鼠PASMCs增殖中起重要作用,m-Nis明显抑制了5-HT诱导的大鼠PASMCs增殖,该作用可能与其抑制Rho/ROCK通路有关.
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间尼索地平对野百合碱诱导的肺动脉高压防治作用及其抗5-羟色胺-细胞外信号调节激酶通路的机制探讨
研究间尼索地平对野百合碱诱导的肺动脉高压的防治作用及其作用机制.大鼠单剂量皮下注射野百合碱(60 nag·kg-1)制备肺动脉高压模型.导管法测定肺血流动力学指标;光镜观察肺小动脉结构的改变;同时测定血清中MDA及SOD的含量(活性);免疫印迹法测定PCNA、ERK1和p-ERK的表达水平;免疫组化法观察5-HT和PCNA的表达.结果表明,与正常对照组相比,模型组大鼠的平均肺动脉压及右心指数明显增加;肺小动脉肌化程度加重;丙二醛含量显著升高,超氧化物歧化酶活性明显降低;PCNA和5-HT阳性细胞数目明显增加;PCNA蛋白表达及p-ERK/ERK1比率也显著增加,不同剂量间尼索地平在一定程度上逆转了上述变化.间尼索地平对野百合碱诱导的肺动脉高压表现出一定的保护作用.这一作用可能与其降低5-HT的表达,抑制ERK/MAPK信号通路有关.
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间尼索地平对5-羟色胺诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中 Ca~(2+)/CaM/CaN通路的影响
探讨Ca~(2+)/CaM/CaN信号通路在5-羟色胺(5-HT)诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖中的作用以及间尼索地平(m-Nis)对此的影响.采用细胞培养、噻唑蓝(MTT)比色检测、激光共聚焦显微镜及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法,研究5-HT(1 μmol·L~(-1))对大鼠PASMCs细胞增殖的影响以及m-Nis对此的抑制作用,并通过检测m-Nis对5-HT诱导的大鼠PASMCs增殖中Ca~(2+)/CaM/CaN通路的影响深入探讨其作用机制.结果显示,5-HT(1 μmol·L~(-1))可明显诱导大鼠PASMCs增殖(P<0.01),m-Nis对此有明显的抑制作用,并呈现一定的浓度依赖性(P<0.05或P<0.01);另外,m-Nis还明显抑制了5-HT引起的[Ca~(2+)]_i的升高(P<0.01)、CaM和CaN mRNA的表达以及CaN活性的升高(P<0.05或P<0.01).结果表明,Ca~(2+)/CaM/CaN信号通路在5-HT诱导的大鼠PASMCs增殖中起重要作用,m-Nis抗5-HT诱导的增殖作用可能与抑制[Ca~(2+)]_i增高从而阻断了Ca~(2+)/CaM/CaN信号通路有关.
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间尼索地平含量测定方法的研究
目的:建立间尼索地平的含量测定方法.方法:采用铈量法、紫外分光光度法和高效液相色谱法测定间尼索地平含量,并将测定结果进行比较.结果:3种方法的测定结果基本一致,重复性好,回收率高.结论:3种方法均可用于间尼索地平含量测定.铈量法操作简便易行、重现性好、准确度高,为首选方法.
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间尼索地平在心血管方面的研究进展
间尼索地平是一个新型的二氢吡啶类钙通道拮抗药,可望成为防治冠心病、心绞痛、高血压病的理想新药.本文综述近年来对间尼索地平在心血管方面的研究成果,为其进一步的临床研究打下基础.
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间尼索地平光解产物的分离和结构
目的分离、制备间尼索地平的光解产物,确定其结构.方法将光照分解的间尼索地平乙醇溶液用TLC法找出分离条件,用柱层析制备光解产物,经1HNMR谱确认其结构;用化学法合成其参照物,进一步证实其结构.结果光解产物为2,6-二甲基-4-(4-硝基苯基)-3,5-吡啶二羧酸甲酯异丁酯.结论间尼索地平乙醇溶液对光不稳定,生产过程应避免光照,在光解过程中二氢吡啶环被氧化成吡啶环的同时4-位苯环上的硝基发生重排.
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间尼索地平对低氧性肺动脉高压大鼠的作用
目的探讨间尼索地平(m-nisoldipine,M-NIS)对低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension,HPH)大鼠肺动脉压和肺动脉重构的作用.方法 ①将50只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、M-NIS组,硝苯地平(nifedipine,NIF)组,模型组20只,其他组各10只.正常对照组在自然环境下饲养4周.剩余3组均置于低压低氧舱中饲养4周,8 h/d.自第2周起,各组每天进舱前给药1次,连续给药3周.4周后,比较各组大鼠的平均肺动脉压(mean pulmonary arterial pressure,mPAP)、右心室收缩压(right ventricular systolic pressure,RVSP)、右心室肥厚指数(right ventricular hypertrophy index,RVHI),计算出管壁厚度占外径的百分比(WT%)和管壁面积占血管总面积的百分比(WA%).②取模型组大鼠的肺动脉干制备血管环,用离体血管实验法,以KCl、去氧肾上腺素(phenylephrine,PHE)在含钙离子和不含钙离子的K-H液中预收缩离体大鼠肺动脉环,观察M-NIS对血管收缩的影响.结果 ①M-NIS和NIF组大鼠的mPAP、RVSP、RVHI、WT%、WA%显著低于模型组(P<0.05),模型组大鼠的上述指标显著高于正常对照组(P<0.05).② 在含钙离子的K-H液中,M-NIS抑制KCl(30 mmol/L、50 mmol/L)和PHE(5×10-8 mol/L、5×10-7 mol/L)所致血管收缩的IC50分别为8.52×10-9 mol/L、1.29×10-7 mol/L和2.81×10-8 mol/L、5.23×10-7 mol/L.在无钙离子K-H液中,间尼索地平无抑制离体血管收缩的作用.结论间尼索地平对大鼠的HPH有治疗作用.
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液质联用分析间尼索地平消旋体大鼠组织分布特征
目的：利用液质联用技术研究大鼠体内间尼索地平消旋体的组织分布特征。方法20℃下，利用C18柱，以乙腈-水（70∶30， v／v）为流动相，流速为0破．8 ml／min，检测波长237 nm。扫描方式采用多重反应监测，离子化模式采用ESI选择性负离子检测。组织匀浆液采用正己烷-乙醚（1∶1）萃取，进样LC-MS-MS分析。结果大鼠灌胃给予间尼索地平消旋体20 mg／kg后，在大鼠小肠、肺和肝中，30和150 min的分布量均较90 min高，在脑组织中也有一定的分布。结论本法灵敏度高，操作方便，适合于大鼠体内间尼索地平消旋体的组织分布研究，为其临床实验研究与新药申报提供了理论依据。
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HPLC-MS-MS测定犬血浆中间尼索地平含量
目的：利用HPLC-MS-MS测定Beagle犬血浆中间尼索地平的含量，并计算药动学参数。方法利用Symmetry C18柱，20℃下，以乙腈-水（70∶30，v／v）为流动相，流速为0A．8ml／min，检测波长237nm。采用负离子多离子反应监测，用于定量分析的离子反应为m／z387．0→m／z122．0。血浆样品采用乙腈沉淀蛋白，进样质谱分析。结果方法的低定量下限为0．25ng／ml；间尼索地平检测浓度在0．25～20ng／ml的范围内线性关系良好（r＝0．9943）。药代动力学参数：Cmax为（13．86±3．12）ng／ml，Tmax为（2．6±2．25）h，t1／2为（9．37±2．74）h，ke为（1．24±0．52）×10－3，AUC0-t为（88．46±4．79）ng·h－1·ml－1，AUC0-∞为（98．35±1．89）ng·h－1·ml－1。结论本法灵敏度高，操作方便，适合于Beagle犬血浆中间尼索地平的药动学研究。
关键词： 间尼索地平 HPLC-MS-MS 药动学 -
间尼索地平的胶束电动毛细管电泳法测定
建立了胶束电动毛细管电泳法测定间尼索地平.采用未涂层融硅石英毛细管,10 mmol/L磷酸二氢钠-5 mmol/L硼砂缓冲液(含30 mmol/L SDS,pH 8.1)为运行缓冲液,分离电压30 kV,检测波长214nm.间尼索地平浓度在30～120μg/ml范围内线性关系良好,检测限为0.9μg/ml.
关键词： 间尼索地平 胶束电动毛细管电泳:测定 -
间尼索地平异构体的手性拆分及HPLC测定
建立了HPLC法拆分间尼索地平光学异构体及其含量测定.采用ES-OVM柱,以甲醇-乙腈-0.1%冰醋酸(15:15:70,pH 4.5)为流动相,检测波长237nm.(R)、(R)-间尼索地平在1.25～25mg/L浓度范围内线性关系良好,检测限均为5ng.
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大鼠肝微粒体中间尼索地平的HPLC法测定与酶促反应动力学
建立了HPLC法测定大鼠肝微粒体中的间尼索地平及相应的酶促反应动力学.采用C18色谱柱,乙腈-水(62:38)为流动相,检测波长237nm,样品经氢氧化钠溶液碱化后用乙醚-正己烷(1:1)萃取.间尼索地平在1.56～100μmol/L浓度范围内线性关系良好.本法的相对回收率为93.0%,RSD为3.75%;日内、日间RSD分别为6.04%和1.53%.
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间尼索地平的毛细管GC-电子捕获检测器法测定
建立了毛细管GC法测定间尼索地平的含量.以尼莫地平为内标,采用HP-1毛细管柱及Ni-63电子捕获检测器.间尼索地平在0.25～5.0μg/ml浓度范围内与其和内标的峰面积比值线性关系良好(r=0.9993);检测限为0.52pg.
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大鼠肠内菌转化间尼索地平的代谢产物
应用LC-MS/MS法研究肠内菌转化间尼索地平的代谢产物.将间尼索地平与大鼠肠内菌于体外厌氧温孵培养,放大制备转化产率高的代谢物.依据1H NMR和ESI-MS/MS数据确认代谢物结构,推断可能的代谢途径.结果在温孵液中发现了间尼索地平及其2种代谢产物.
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间尼索地平在大鼠体内的组织分布、排泄及血浆蛋白结合率的测定
建立了HPLC法测定生物样品中间尼索地平的含量,并研究了其在大鼠体内的组织分布、排泄及血浆蛋白结合率等特征.以尼莫地平为内标,样品采用液-液萃取.采用C18柱,流动相为乙腈-20mmol/LKH2PO4溶液(60:40),检测波长237nm.间尼索地平在2～1000ng/ml范围内,线性关系良好.间尼索地平在大鼠体内分布广泛,经粪便及胆汁的排泄量均较少,而尿中则未检出药物原型,间尼索地平的血浆蛋白结合率达97%以上.
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RP-HPLC法测定Beagle犬血浆中间尼索地平浓度及其药代动力学
目的:建立间尼索地平的高效液相色谱分析方法,研究其在Beagle犬体内的药代动力学.方法:血浆样品经液-液萃取后,用HPLC法进行分析.色谱柱为Diamond C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-20mmol/L KH2PO4(60:40);流速为1mL/min;紫外检测波长为237nm.结果:Beagle犬口服3种不同浓度的间尼索地平(1.0,2.5,12.5mg/kg)后,血药浓度经时曲线均呈现明显的双峰现象.第1次达峰时间在1h左右,第2次达峰时间在2～3h,血药浓度峰值cmax较低.cmax与AUC均与剂量呈正相关.结论:间尼索地平经口服给药后,吸收较迅速,cmax较低可能与肝脏的首过效应有关;双峰现象可能与药物存在肝肠循环有关.
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间尼索地平控释微丸Beagle犬体内药动学研究
目的 建立间尼索地平血药浓度的高效液相色谱-质谱联用方法,研究Beagle犬单剂量口服间尼索地平控释微丸的药动学.方法 用HPLC-MS法测定健康Beagle犬单剂量口服间尼索地平控释微丸和普通微丸的血药浓度,以DAS 2.0软件计算药动学参数.结果 单剂量给药后,控释微丸和普通微丸的tmax分别为(11.154±0.5077)h和(2.213±0.3225)h,Gmax分别为(79.40±10.60)ng·mL-1和(116.7±20.35)ng·mL-1,AUC分别为(1227.8±296.0)ng·h·mL-1和(867.8±146.7)ng·h·mL-1,控释微丸的相对生物利用度为141.5％.结论 本方法准确、灵敏,间尼索地平控释微丸血药浓度平稳,可较长时间保持血药浓度.
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间尼索地平对5-羟色胺诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移的影响及其机制
目的 探讨间尼索地平(m-Nis)对5-羟色胺(5-HT)诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖和迁移的影响,并深入研究其作用机制.方法 采用植块法培养大鼠PASMCs.实验分为6组:空白对照组、5-HT(1 μmol·L~(-1))组,m-Nis(10~(-5)、10~(-6)、10~(-7)、10~(-8) mol·L~(-1))组.噻唑蓝(MTT)比色法、Transwell迁移小室法分别测定PASMCs的增殖和迁移,Western blot法检测大鼠PASMCs中增殖细胞核抗原(PCNA)的蛋白表达及细胞外信号调节激酶1和2(ERK1/2)的磷酸化水平,研究m-Nis对ERK1/2/MAPK信号通路的影响.结果 不同浓度m-Nis明显抑制了5-HT诱导的大鼠PASMCs增殖(P<0.05或P<0.01)和迁移(P<0.01),并呈现一定的浓度依赖性;另外,Western blot结果 显示m-Nis对5-HT诱导的大鼠PASMCs中PCNA的蛋白表达有不同程度的抑制作用(P<0.05或P<0.01),10~(-5),10~(-6),10~(-7) mol·L~(-1) m-Nis还明显抑制了5-HT诱导的大鼠PASMCs中ERK1/2磷酸化水平的升高,p-ERK1/2/ERK1/2比值均有不同程度地降低(P<0.05或P<0.01).结论 m-Nis对5-HT诱导的大鼠PASMCs增殖和迁移有明显的抑制作用,可能与其抑制PCNA蛋白表达及ERK1/2/MAPK信号通路有关.
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聚乙二醇6000对间尼索地平溶解性能的影响
目的：研究聚乙二醇6000对间尼索地平溶解度和体外溶出度的影响,为间尼索地平剂型的选择提供参考。方法以聚乙二醇(PEG)6000为载体,采用溶剂-熔融法制备间尼索地平固体分散体。应用差示扫描量热分析法( DSC)、X射线粉末衍射光谱( XRD)对固体分散体进行鉴定,紫外分光光度法测定固体分散体的溶解度和体外溶出度。结果固体分散体的DSC、XRD图谱与原料药及其物理混合物均不同,不同比例的间尼索地平-聚乙二醇固体分散体的溶解度及体外溶出度均高于原料药,2 h的溶出百分率：原料药26.80%,固体分散体(13,15,17)分别为35.31%,38.71%,41.48%,比例相同的固体分散体的溶出率高于其物理混合物。结论间尼索地平与聚乙二醇6000形成了低共熔物,聚乙二醇6000作为间尼索地平的载体,可加速其体外溶出。
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间尼索地平胃内漂浮型缓释片的制备与体外释放
目的:根据流体动力学平衡体系(HBS)原理研制以羟丙甲基纤维素(HPMC)为骨架材料的胃内漂浮型缓释片,并对其体外释放度和释放机制进行探讨.方法:以硬脂酸和聚乙二醇6000(PEG6000)为栽体,采用熔融法制备间尼索地平固体分散体;采用正交设计优化处方,以HPMC为缓释骨架,十八醇为助漂剂,碳酸氢钠为发泡剂,乳糖为填充荆,湿法制粒压片法压片.结果:体外释药符合Higuchi方程,体外释药量与释药时间有良好的相关性.缓释片的药物释放机制是通过药物的扩散和骨架溶蚀协同作用.结论:该法制备的胃内漂浮型缓释片具有起漂快,漂浮时I可长,缓释效果好,制备工艺简单等优点.
