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α2－巨球蛋白活性检测方法的建立与优化
目的：建立α2－巨球蛋白（α2－macroglobulin ，α2－M）活性检测方法，检测Cohn组分Ⅳ中α2－M的活性。方法α2－M可与胰蛋白酶相互作用形成“α2－M－胰蛋白酶复合物”，利用酶标仪检测出“α2－M－胰蛋白酶复合物”与小分子底物Na－苯甲酰－DL－精氨酸－对硝基酰胺盐酸盐（ Na－benzoyl－DL－arginine 4－nitroanilide hydrochloride ，BAPNA）显色反应后的光密度值（410 nm），根据建立的血浆α2－M活性标准曲线，定量计算出Cohn组分Ⅳ浓缩液中α2－M的活性。结果通过对实验体系中几个关键实验条件进行优化，建立了血浆α2－M活性标准曲线，并计算出Cohn组分Ⅳ浓缩液中α2－M活性的平均值为1．578 PU／ml。结论以正常人混合血浆作为参考标准品，用发色底物法检测Cohn组分Ⅳ浓缩液中α2－M的活性，方法简便易行，为α2－M制备过程中活性测定提供了实验基础。
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α2巨球蛋白与基质金属蛋白酶-2,9在重症急性胰腺炎中作用的研究
目的 本实验旨在利用SAP大鼠动物模型测胰腺组织中基质金属蛋白酶-2,9(MMP-2,9)的表达情况,以及血清中α2-巨球蛋白含量的变化.比较分析SAP中的α2-巨球蛋白和MMP-2,9的改变特征,进一步地分析各指标对SAP的影响及其作用,为SAP的防治提供理论依据,方法(1)建立SAP大鼠动物模型,观察大鼠胰腺湿重、胰腺组织病理改变. (2)成模后采用免疫组化方法检测MMP-2,9的表达;采用ELISA法检测血清中α2-巨球蛋白含量的变化结果(1)胰腺光镜观查:SAP组肉眼可见胰腺坏死出血灶,光镜见间质肿胀,大量交细胞浸润,红细胞渗出,腺泡细胞和脂肪坏死.对照组无明显异常变化.(2)ELISA法显示,实验组同对照组大鼠比较,α2-巨球蛋白含量升高. (3)免疫组化结果显示,SAP组MMP-2,9呈高表达,结果可见胰腺毛细血管内皮细胞胞浆及细胞外基质细小的棕黄染色颗粒 SAP组MMP-2,9表达阳性率为100%,其中强阳性有12例,而对照组表遮阳性率为10%,其中弱阳性2例.2组间比较差异有显著性(P<0.01).结论 (1)MMP-2、9在SAP中因爽性细胞受炎症因子的激活而大量释放,与SAP病情发生发展有密切关系; (2)α2-巨球蛋白在SAP中含量升高,对SAP有诊断和判定预后作用,从而成为SAP诊治的新靶点.
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肺癌患者胸腔积液中α2-巨球蛋白含量的测定及其临床意义
目的:为了研究肺癌病人胸腔积液中α2-巨球蛋白(α2-M)含量的变化,分析其与肺癌发展、转移的关系,探讨肺癌胸腔积液诊断的新方法及恶性胸腔积液治疗的新思路. 方法: 采用免疫浊度法分别测定了肺癌病人、肺结核病人胸腔积液和漏出性胸腔积液中α2-M的含量,并对测定结果进行统计学处理.结果:肺癌病人胸腔积液中α2-M的含量较肺结核病人胸腔积液中的含量有显著降低(P<0.001),而漏出性胸腔积液中α2-M的含量与结核性、肺癌性胸腔积液相比较有显著性降低(P<0.001,P<0.05).结论:肺癌病人胸腔积液中存在α2-M的代谢紊乱.监测胸腔积液中α2-M的含量有利于良性、恶性胸腔积液的鉴别诊断.使用α2-M制剂可能有助于抑制恶性肿瘤的发展、有利于恶性胸腔积液的治疗.
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α2-巨球蛋白及其糖基化在恶性肿瘤中的研究进展
α2-巨球蛋白(α2-MG)是血浆中相对分子质量大的蛋白质,由肝细胞与单核-巨噬细胞系统合成,是由4个相同的亚基组成的同源四聚体结构.α2-MG是血浆中一种广谱的蛋白酶抑制剂,参与多种疾病的病理生理过程.文章对α2-MG的结构和功能及其糖基化进行了简要阐述,并对α2-MG与肝癌、卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、非小细胞肺癌和其他常见恶性肿瘤的关系以及α2-MG糖基化与恶性肿瘤关系的研究进展进行了综述.
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尿α2-巨球蛋白检测在血尿来源鉴别中的意义
自20世纪90年代以来,已有不少尿α2-巨球蛋白(α2-MG)临床应用的研究报告,认为对血尿来源的鉴别具有重要价值.现就270例血尿患儿α-MG测定结果及临床意义报道如下.
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中枢神经系统感染患儿脑脊液α2-MG检测的临床意义
目的探讨脑脊液(CSF)中α2-巨球蛋白(α2-MG)在小儿中枢神经感染中的临床意义.方法应用速率散射比浊法检测了27例细菌性脑膜炎(BM)、62例病毒性脑炎(VE)和49例对照组患儿CSF中α2-MG含量.结果BM组CSF中α2-MG阳性率明显高于VE组和对照组,差异有非常显著性意义(p<0.001).结论CSF中α2-MG检测在BM与VE的鉴别诊断方面有一定的临床价值.
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肝再生中α2-巨球蛋白的表达动态分析
目的确定更多的与肝再生相关的基因.方法借助4～8正向抑制性消减文库(0-4-8-12短间隔连续部分肝切除)产生的α2-巨球蛋白基因片段,运用cDNA芯片分析了其mRNA在再生肝中的表达动态.结果肝再生中α2-巨球蛋白呈上调表达,而且变化幅度很大,至高点超过21倍.大部分肝切除中α2-巨球蛋白的表达高峰出现在8 h和16 h.短间隔连续部分肝切除中α2-巨球蛋白的表达呈现不同的变化趋势,4 h短间隔的连续肝切除诱导α2-巨球蛋白表达不断升高,而第二次的36 h短间隔的连续肝切除才能诱导α2-巨球蛋白表达显著升高.结论肝再生中α2-巨球蛋白可能在早期的正相急性反应中起重要作用,减少切除伤害带来的炎症,促进肝再生的顺利进行.
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α2-巨球蛋白在不同时相的激素性股骨头坏死组织中的表达
目的 探讨α2-巨球蛋白(α2M)和不同时相的激素性股骨头坏死之间的关系.方法 随机选取就诊的股骨头坏死患者和股骨近端骨折的患者,根据股骨头坏死国际骨循环研究会(ARCO)分期,随机分成5组,包括对照组和实验Ⅰ～Ⅳ组,每组20例,总共100例.通过组织病理学观察、免疫组织化学和实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)等,对比不同组之间各组织α2M的表达水平等.结果 (1)组织病理学:实验组Ⅰ～Ⅳ组的空骨陷窝率[(15.66±2.76)％、(28.29±1.38)％、(39.43 ±5.47)％和(51.27±4.85)％]明显高于对照组[(8.54±3.25)％],各组间差异有统计学意义(P=0.000、0.000、0.008、0.010);(2)免疫组织化学:对照组的分值(1.88±0.22)明显高于实验Ⅰ～Ⅳ组(1.24±0.16、1.17 ±0.19、0.73±0.11和0.26±0.09),差异有统计学意义(P=0.000、0.000、0.001、0.009);(3)FQ-PCR对照组关节囊滑膜组织α2M的mRNA表达量(18.67±2.37)明显高于实验Ⅱ～Ⅳ组(13.67±1.87、7.59±1.01和4.89±0.54),差异有统计学意义(P=0.000、0.000、0.000);实验Ⅰ～Ⅳ组关节液α2M的mRNA表达量(13.26±1.06、12.78±1.98、4.56±0.89和3.34±0.56)明显低于对照组(17.87±2.26),差异有统计学意义(P =0.000、0.000、0.000、0.000);对照组(16.56±2.18)股骨头组织α2M的mRNA表达量明显高于实验Ⅰ～Ⅳ组(13.01±1.06、10.76±1.93、3.76 ±0.96和1.34±0.56),差异有统计学意义(P=0.000、0.000、0.000、0.000).结论 α2M在激素性股骨头坏死的不同时相和不同组织中起重要作用.
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α2-巨球蛋白在神经系统疾病中的研究进展
α2-巨球蛋白(A2M)是血浆中的一种重要糖蛋白,是一种非特异性的蛋白酶抑制剂,同时可与大量免疫炎症因子、细胞因子结合,广泛地参与多种神经系统疾病的病理生理过程,但对其是否作为保护性因素存在仍有争议.本文就A2M在神经退行性疾病、脑血管病、周围神经病等疾病中的研究进展作一综述.
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鼻咽癌放疗患者血清α2-巨球蛋白水平及临床意义
目的 检测鼻咽癌放疗患者血清中不同放疗时段α2-巨球蛋白含量,了解其变化规律,探讨其作为反映放疗损伤的血清标志物的可行性.方法 采集23例鼻咽癌初诊患者在单纯放疗前、放疗10、20、30、33次5个时段的血标本,检测α2-巨球蛋白水平.采用SPSS17.0软件包,以配对t检验分析5个时段血清α2-巨球蛋白水平差异.结果 患者血清中α2-巨球蛋白水平随放疗次数增加而升高.放疗10次后鼻咽癌患者的血清α2-巨球蛋白浓度(12.04±5.72)U/L高于放疗前(10.81±5.38)U/L,差异具有统计学意义(t=-4.818,P<0.05);放疗20次后鼻咽癌患者的血清α2-巨球蛋白浓度(12.26±5.77)U/L高于放疗前,差异具有统计学意义(t=5.237,P<0.001);放疗30次后鼻咽癌患者的血清α2-巨球蛋白浓度(12.91±5.55)U/L高于放疗前,差异具有统计学意义(t=6.076,P<0.05);放疗结束时鼻咽癌患者的血清α2-巨球蛋白浓度13.43±6.05 U/L高于放疗前,差异具有统计学意义(t=5.189,P<0.05).结论 放射治疗可引起血清α2-巨球蛋白改变,α2-巨球蛋白可成为反映颌骨电离辐射损伤的血清标志物.
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α2-巨球蛋白对X线照射后人皮肤成纤维细胞的抗氧化及抗纤维化的作用
[目的]研究α2-巨球蛋白(α2M)对X线照射后人皮肤成纤维细胞(HSF)超氧阴离子(.O2-)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和HSF细胞向肌成纤维细胞转化过程中的影响.[方法]分别使用0、5、10、15、20 Gy X线照射HSF细胞,在照射后第1天检测细胞培养基上清液中.O2-含量、SOD活性的变化,在照射后第5天采用Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达变化,以选定合适的照射剂量.用以上合适剂量照射HSF细胞,分别于照射前1 h、照射后1 h实验组细胞培养基中加入终浓度为0.25 mg/mL,0.5 mg/mL的α2M,检测并比较不同实验组细胞培养基上清液中.O2-含量、SOD活性和α-SMA蛋白表达的变化情况.[结果]5~20 Gy X线照射HSF细胞后,.O2-含量逐渐增多,SOD活性逐渐降低,α-SMA蛋白表达量逐渐升高,差异具有统计学意义(P<0.05).10 Gy X线照射后1 h加入α2M,可明显减少照射后HSF细胞.O2-含量,提高SOD活性,下调放射后HSF细胞α-SMA的蛋白表达,差异具有统计学意义(P<0.05),照射前1 h给药则无明显变化.[结论]X线照射后的HSF细胞明显增加.O2-释放量,同时SOD活性降低,并有向肌成纤维细胞转化的趋势;而X线照射后加入α2M可明显减少受照射HSF细胞的.O2-释放量,提高其SOD活性,并抑制向肌成纤维细胞转化的趋势,说明α2M可通过抗氧化和抗纤维化起到放射保护作用.
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α2-巨球蛋白基因I1000V多态性与散发阿尔茨海默氏病的关联研究
目的近年来有研究发现α2-巨球蛋白基因(α2-macroglobulin, A2M)Ile1000Val多态与阿尔茨海默氏病(Alzheimer's disease, AD)发病有关联,但也有相悖的研究结果报道.因此,我们利用较大的样本,观察了 A2M基因Ile1000Val多态在广州及成都地区汉族老年人中的分布,并探讨其与散发AD的相关性.方法以广州地区257例散发AD患者和242名正常老年人、成都地区112例散发AD患者和113名正常老年人为对象进行病例-对照研究.用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法分析 A2M基因I1000V多态性和载脂蛋白E基因(apolipoprotein E, apoE)多态性.结果 (1)在两地合并样本中,AD患者与对照组中等位基因A2M-1000V的频率分别为7.7%与8.7%,广州与成都地区AD患者与对照组中 A2M基因I1000V多态的分布差异无统计学意义.(2)散发AD无论按是否伴有apoE-ε4或按发病年龄分成不同亚组后, A2M基因I1000V多态的分布在病例组与对照组之间差异无统计学意义.结论广州与成都汉族人群中 A2M基因I1000V多态与散发AD不具有关联.
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α2-巨球蛋白基因多态性与Alzheimer病的关联研究
目的 观察α2-巨球蛋白基因(α2-macroglobulin, A2M)内含子17一种五核苷酸缺失突变在广州地区汉族老年人中的分布，探讨其与晚发Alzheimer病(AD)的相关性。方法 以97例晚发AD患者和111名健康老年人为对照进行病例-对照研究。用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法分析A2M缺失／插入多态性和载脂蛋白E(apolipoprotein E， apoE)基因多态性。结果 (1)A2M基因缺失突变在晚发AD患者中的频率为2.6%，在正常老年人中的频率为2.7%，在所有受试者中未检测到A2M突变纯合体，晚发AD患者和健康老年人之间不存在A2M等位基因和基因型分布的差异，A2M基因多态性与晚发AD无关联。(2)晚发AD患者中apoE等位基因ε4频率显著升高(Z=3.32，P＜0.01)。晚发AD与ε3／ε4基因型正关联(RR=2.62，χ2=6.89，P＜0.01)，和等位基因ε4正关联(RR=2.67，χ2=10.71，P＜0.01)。(3)晚发AD无论是否伴有apoE-ε4均与A2M不存在相关性。结论 广州汉族人群中A2M基因缺失突变多态性与晚发AD不具有关联。
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α2-巨球蛋白的特性与功能
α2-巨球蛋白(α2-M)是1种大分子糖蛋白,广泛存在于脊椎动物及非脊椎动物的体液中,属于巨球蛋白超家族的一员;其由4个相同的单体组成的同源四聚体,每个单体均含有5个功能区域,这决定了其特性及生物学功能.α2-M能够广泛参与机体的生理及病理活动,其基本的功能是作为广谱蛋白酶抑制剂以清除内源性及外源性蛋白酶,同时它能够与一些重要的细胞因子,如碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、白介素-1β(lL-1β)、白介素-6(IL-6)、神经生长因子(NGF)等,结合并调节其生物活性.有研究显示α2-M也具有抗辐射、抑制肿瘤及参与凝血平衡等作用.除此之外,α2-M还能够作为诊断或预测某些疾病的生物标记物.对α2-M生物特性及制备工艺研究的深入将有助于推进α2-M在临床的应用.
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唾液中差异性蛋白在2型糖尿病早期诊断中的临床研究
目的：探讨唾液中的胱抑素C（Cys‐C）、α2‐巨球蛋白（α2‐MG）、α1‐抗胰蛋白酶（A1AT）及转甲状腺素蛋白（TTR）在2型糖尿病早期诊断中的临床意义及运用。方法选取体检正常人群38例（正常组），空腹血糖升高患者23例（IFG组），糖耐量患者31例（IGT组）及2型糖尿病患者86例（2‐DM组），通过免疫印迹检测4组人群唾液中Cys‐C、α2‐MG、A1AT 及TTR蛋白的表达并进行半定量分析。同时通过ELISA方法对唾液及血液中Cys‐C、α2‐MG、A1AT及TTR进行定量分析后研究其相关性。同时，根据 ELISA 定量结果对Cys‐C、α2‐MG、A1AT 及TTR绘制ROC曲线，确定各指标检测的特异性和灵敏度。结果免疫印迹条带进行半定量及ELISA定量检测均表明2‐DM 组患者唾液中 Cys‐C、α2‐MG、A1AT 明显上调，而 TTR蛋白无明显变化。唾液及血液中 Cys‐C、α2‐MG、A1AT及 TTR呈正相关，且唾液中Cys‐C、α2‐MG与血液中血糖浓度呈正相关。ROC曲线表明唾液中Cys‐C、α2‐MG可作为2‐DM早期诊断标志物。结论通过唾液中Cys‐C、α2‐MG的检测，可在2‐DM 早期进行筛查，并在糖尿病早期予以干预治疗，具有潜在的临床运用价值。
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白癜风患者血清α2-巨球蛋白测定的临床意义
目的探讨血清α2-巨球蛋白(α2-M)水平变化与白癜风的关系及临床意义.方法采用免疫扩散法对79例白癜风患者进行血清α 2-M水平及免疫球蛋白IgG,IgA,IgM浓度的测定,与正常对照组比较分析.结果与对照组相比,白癜风寻常型与节段型血清α2-M水平均显著性升高(P＜0.01,P＜0.05),以寻常型中进展期尤甚;白癜风患者血清中免疫球蛋白IgG,IgA,IgM的浓度也有显著性变化;血清α 2-M水平的升高与免疫球蛋白浓度的变化相一致.结论白癜风患者血清α2-M水平的升高与白癜风的发病有一定关系.
