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MACC1基因影响宣威肺腺癌细胞XWLC-05促血管生成的机制研究
目的：探讨结肠癌转移相关基因1（metastasis-associated in colon cancer 1，MACC1）影响宣威肺腺癌细胞XWLC-05促进血管生成的可能分子机制。方法将MACC1小干扰RNA（ siRNA）-3转染XWLC-05宣威肺腺癌细胞株，采用Western印迹法检测细胞中MET、MEK/p-MEK、ERK/p-ERK、AKT/p-AKT蛋白的表达；ELISA法检测细胞中血管内皮细胞生长因子（ VEGF）、IL-8和碱性成纤维细胞生长因子（ bFGF）的表达。结果 Western印迹结果显示，MACC1 siRNA-3转染细胞中的MET、p-MEK和p-ERK表达水平显著降低，但总MEK和ERK蛋白表达无明显差异。同时，AKT及其磷酸化蛋白水平均未受影响。 ELISA结果显示，MACC1 siRNA-3转染细胞48和72 h后的VEGF、bFGF和IL-8细胞因子的表达水平明显受到抑制。结论推测MACC1基因通过抑制XWLC-05宣威肺腺癌细胞中的HGF/c-MET和MEK/ERK信号通路，减少细胞中VEGF、bFGF和IL-8细胞因子的分泌，终导致肺癌血管生成。
关键词： 结肠癌转移相关基因1 小干扰RNA MEK/ERK AKT 细胞因子 -
锌对体外海马神经细胞MEK/ERK信号通路的调控作用研究
目的：探讨锌对海马神经细胞MEK/ERK通路的调控机制。方法将原代培养乳鼠海马神经细胞分为3组。(1)对照组（Control组）：不加任何处理因素。(2)四吡啶甲基乙二胺[N, N, N', N'-tetrakis(2-pyridylmethyl) ethylenediamine，TPEN]干预组（TPEN组）：2μmol/L TPEN处理海马神经细胞24h，以诱导海马神经细胞缺锌。(3) TPEN＋5μmol/L Zn组：同时加入终浓度为2μmol/L TPEN及5μmol/L的ZnSO4。采用Western-Blot法检测pMEK, perk, Total-MEK、Total-ERK蛋白表达；免疫荧光法检测细胞内[Ca2+]i浓度；分子探针DCFH-DA检测细胞内活性氧（ROS）含量。结果(1)与对照组比较，TPEN组海马神经细胞上清液中LDH活性明显升高(P<0.05)；加入5μmol/L Zn后LDH活性显著降低(P<0.05)。(2)与对照组比较，TPEN组pMEK及pERK蛋白表达均明显下降(P<0.05)；5μmol/L Zn可明显抑制TPEN诱导的海马神经细胞pMEK及pERK蛋白表达的降低(P<0.05)。(3)与对照组比较，TPEN组细胞内[Ca2+]i浓度及ROS水平明显升高(P<0.05)；5μmol/L Zn能明显抑制细胞内[Ca2+]i及ROS水平的升高(P<0.05)。结论缺锌可下调海马神经细胞MEK/ERK信号通路，其作用机制可能与细胞内[Ca2+]i及ROS的调控有关。[营养学报，2016，38（4）：366－370]
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龙葵碱体外诱导人结肠癌SW480细胞凋亡及其对相关因子的影响
目的 观察龙葵碱对人结肠癌SW480细胞凋亡及ERK/MEK、PI3K/AKT信号通路中相关因子的影响.方法 SW480结肠癌细胞培养后共设5组,分别为空白对照组、培养液对照组及龙葵碱不同剂量(4、8、16 mmol/L)组,各组进行相应干预.采用MTT法检测龙葵碱对结肠癌细胞株的增殖作用,流式细胞法检测龙葵碱对结肠癌细胞凋亡的影响,RT-PCR及Western blotting法检测龙葵碱处理的SW480细胞中ERK/MEK和PI3K/AKT的表达水平.结果 MTT生长曲线显示,龙葵碱能抑制结肠癌SW480细胞株增殖.流式细胞仪检测显示,龙葵碱能够促进SW480的凋亡.RT-PCR结果显示,龙葵碱可以抑制ERK1/2 mRNA的表达.Western blotting结果表明,龙葵碱可以降低MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路中相关蛋白的表达.结论 龙葵碱可以抑制结肠癌细胞增殖,其对肿瘤的诱导凋亡作用可能是通过MEK/ERK和PI3K/AKT信号途径实现的.
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胰岛素通过PI3K/Akt和MEK/ERK信号通路增强大鼠骨骼肌成肌细胞的增殖
本文旨在探讨胰岛素对大鼠骨骼肌成肌细胞增殖的影响.分离和培养大鼠骨骼肌成肌细胞,用胰岛素作用于培养的骨骼肌成肌细胞,采用3H-TdR渗入法、BrdU检测法、MTT实验分析检测骨骼肌成肌细胞的增殖情况,用Western blot检测Akt和ERK的磷酸化水平,同时使用PI3K和MEK特异性抑制剂干预胰岛素对骨骼肌成肌细胞的增殖作用影响.结果显示,胰岛素能明显促进骨骼肌成肌细胞对3H-TdR的摄入,促进细胞的DNA合成和增殖,并且胰岛素促细胞增殖作用具有一定的量效关系,骨骼肌成肌细胞原代细胞和成肌细胞株L6、C2C12都显示该促增殖作用可被PI3K和MEK特异性抑制剂阻断,胰岛素还提高了骨骼肌成肌细胞Akt和ERK的磷酸化水平.本研究证实胰岛素可能通过PI3K/Akt和MEK/ERK信号通路促进骨骼肌成肌细胞增殖.
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反式玉米素抑制紫外线诱导的水通道蛋白3下调有关的信号通路
目的:观察能特异性诱导水通道蛋白-3(AQP3)表达的反式玉米素(trans-zeatin,tZ)对紫外线导致的AQP3丢失的影响及PD98059、U0126和MEK/细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂对紫外线引起的AQP3丢失的作用.方法:蛋白质免疫印迹方法分析各蛋白的表达.结果:tZ抑制了紫外线诱导的MEK/ERK活化,后者作为关键信号通路调节由紫外线诱导的AQP3丢失.tZ的预处理很大程度上抑制了MEK的磷酸化,且具有剂量-效应关系.MEK/ERK的抑制剂PD98059和U0126抑制紫外线引起的AQP3下调,而c-Jun氨基端激酶(JNK),P38或丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)的抑制剂则没有抑制效应.结论:tZ对抗紫外线引起AQP3丢失的保护作用是由抑制紫外线引起的MEK/ERK活化介导的.
关键词： 反式玉米素 水通道蛋白3 MEK/ERK MEK/ERK抑制剂 -
低氧预适应诱导C6细胞对氧葡萄糖剥夺的耐受
目的: 研究低氧预适应诱导神经胶质细胞瘤细胞(C6 Glioma Cells,简称C6细胞)对氧葡萄糖剥夺(OGD)的耐受及其机制.方法: C6细胞通过低氧(1%)预处理,在经受OGD打击后,观测其对细胞活力的影响.利用Western blot分析低氧预适应对C6细胞磷酸化-ERK(p-ERK)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和红细胞生成素(EPO)蛋白的影响;通过PD98059和LY294002的使用,分析低氧诱导C6细胞预适应现象与MEK/ERK通路的关系.结果: 低氧能诱导细胞预适应的发生,而且对于24 h的OGD,有效的低氧预适应时间为16 h;低氧能诱导细胞p-ERK信号蛋白的上调,激活HIF-1α和增加EPO的表达,且能被PD98059所抑制.结论: 低氧预适应能增强C6细胞对24 hOGD的耐受,产生预保护作用,其中以低氧预适应16 h效率高;MEK/ERK信号转导途径参与了低氧预适应作用;低氧预适应可通过激活HIF-1α和增加EPO表达水平来实现.
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水飞蓟宾通过降低MEK/ERK途径依赖的MMP-9蛋白表达抑制人乳腺癌细胞生长和侵袭转移机制的实验研究
目的：探讨水飞蓟宾对人乳腺癌细胞生长和侵袭转移的影响及机制。方法用不同浓度水飞蓟宾处理人乳腺癌细胞系MCF-724h，采用MTT（噻唑蓝）法和台盼蓝染色法检测水飞蓟宾对MCF-7细胞的抑制作用；采用transwell技术检测水飞蓟宾对MCF-7细胞侵袭转移的影响；West原ern blot检测水飞蓟宾对MCF-7细胞MEK及ERK（均为丝裂原激活的蛋白激酶）蛋白磷酸化水平及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达水平的影响。结果水飞蓟宾可显著抑制MCF-7细胞的增殖并造成肿瘤细胞死亡，与对照组比较，水飞蓟宾增殖抑制率[20μM（8.9±3.8）%、50μM（19.7±4.2）%、100μM（29.8±5.7）%比0]、台盼蓝染色率[50μM（16.1±4.8）%、100μM（25.3±5.1）%比（3.4±1.4）%]，均升高（P<0.05，P<0.01）；水飞蓟宾通过抑制MEK（水飞蓟宾20μM：0.26±0.03、50μM：0.15±0.03、100μM：0.11±0.02比对照组：0.35±0.04）和ERK （水飞蓟宾20μM：0.23±0.03、50μM：0.12±0.02、100μM：0.07±0.01比对照组：0.32±0.05）的磷酸化降低MMP-9（水飞蓟宾50μM：0.18±0.03、100μM：0.14±0.02比对照组：0.29±0.04）的表达并抑制MCF-7[水飞蓟宾20μM：（14.3±2.1）%、50μM：（35.6±5.7）%、100μM（53.1±6.5）%比对照组：0]细胞侵袭转移的能力（P<0.05，P<0.01）。结论水飞蓟宾抑制人乳腺癌细胞的生长和侵袭转移。
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BRAF干扰对甲状腺癌SW579细胞系的影响
目的:研究BRAF干扰对甲状腺癌SW579细胞系的影响.方法:设计合成了2对siRNA干扰序列,脂质体转染进入甲状腺癌SW579细胞,采用RT-PCR检测干扰的效果.对干扰成功的细胞系,检测细胞增殖、细胞周期和丝裂原活化蛋白/细胞外信号调节激酶(mitogen-activated protein signa1-regulated kinase/extracellular signal-regulated kinase,MEK/ERK)信号通路相关蛋白的变化.结果:2种siRNA转染甲状腺癌SW579细胞系后,显著地抑制了BRAF mRNA及蛋白水平的表达(P＜0.01),SW579的生长增殖受到抑制,细胞周期发生改变,G1/S期增加,同时,MEK/ERK信号通路的激活受到抑制.结论:干扰BRAF可能通过失活MEK/ERK信号通路而抑制SW579细胞系的生长和增殖.
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联合抑制Notch2和MEK/ERK通路对胃癌细胞增殖的影响
目的：探讨Notch2和MEK／ERK信号通路在胃癌细胞SGC‐7901中是否存在交叉作用。方法采用体外化学合成的特异性针对 Notch2的 siRNA（Notch2 siRNA）和丝裂原激活蛋白激酶（MEK）／细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路的抑制剂 PD98059，分别单独和联合处理体外培养的胃癌 SGC‐7901细胞，以转染阴性对照siRNA（control siRNA）细胞作为 siRNA 对照组，并设不给予任何转染的空白对照组。免疫印迹（Western Blotting）法检测磷酸化 ERK1／2（p‐ERK）1／2和 Notch2蛋白的表达水平。比色法（M TT ）检测癌细胞增殖抑制率。结果Notch2 siRNA 能降低蛋白 Notch2的表达水平，并抑制癌细胞增殖[（38．26±1．82）％]，而 p‐ERK 的表达水平则较对照组增加。 PD98059能降低 p‐ERK 的表达水平，并抑制癌细胞的增殖[（30．05±3．16）％]，Notch2水平则无明显变化，联合应用 Notch2 siRNA 和 PD98059能明显降低 p‐ERK 和 Notch2蛋白的表达水平，与 Notch2 siRNA 或PD98059单独应用比较，显著抑制癌细胞增殖率，差异有统计学意义[（72．55±5．30）％，P＜0．01]。结论特异性抑制 Notch2信号通路，且抑制 MEK／ERK 通路可进一步增强抑制 Notch2通路的抗肿瘤增殖效果，提示 MEK／ERK 和 Notch22条信号通路在胃癌 SGC‐7901细胞中存在交叉作用。
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MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路抑制剂在诱导恶性黑色素瘤细胞凋亡中的协同作用
目的 通过联合抑制MEK和AKT信号通路关键靶点分子,探讨克服细胞耐药性的靶向治疗方法.方法 体外培养和新鲜分离恶性黑色素瘤细胞株,分别在0.5％和5％血清浓度下单独或同时抑制靶点MEK(U0126,20μmol/L)和AKT(LY294002,20μmol/L),MTT法检测细胞增殖,PI染色流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 当培养液血清浓度从0.5％提高到5％时,U0126和LY294002对肿瘤细胞增殖的抑制效应明显降低.LY294002以抑制细胞增殖为主,U0126主要诱导细胞凋亡,二者作用效果与细胞是否具备该通路关键靶点活化变异无关.联合用药时诱导细胞凋亡普遍增强,LY294002和U0126具有协同效应.结论 联合抑制MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路可较好地克服恶性黑色素瘤细胞的耐药性.
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PI3K/Akt抑制剂对内质网应激下肝癌细胞MEK/ERK途径的影响
目的:研究内质网应激介导的PI3K/Akt抑制剂对肝癌细胞MEK/ERK途径的影响.方法:采用PI3K抑制剂LY294002/激活型突变载体myr-Akt分别阻断/激活内质网应激介导的Akt和ERK活化,并利用Western blot ting技术分析内质网应激条件下PI3K/Akt和MEK/ERK途径间的关系.结果:阻断PI3K/Akt促进内质网应激介导的MEK/ERK活化,过度激活PI3K/Akt则抑制内质网应激介导的MEK/ERK活化.结论:PI3K/Akt和MEK/ERK信号途径间在内质网应激肝癌细胞中可能存在信号交流.
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姜黄素对人结肠癌细胞PI3-K/Akt和MEK/ERK信号通路的影响
目的:探讨姜黄素对人结肠癌RKO细胞PI3-K/Akt和MEK/ERK通路的影响.方法:MTT法检测细胞活力,Western blot检测p-Akt、Akt、p-ERK,ERK及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达.结果:姜黄素作用人结肠癌RKO细胞,24h和48h的IC50值分别为51.69μg/ml和36.12 μg/ml.选用50μg/ml的姜黄素分别作用24h和48h,RKO细胞凋亡百分比为26.79％和42.16％,与对照组相比有显著差异(P＜0.05).进一步检测发现姜黄素(50μg/ml)显著下调了p-Akt和p-ERK的表达,同时Bcl-2与Bax的比值显著下调.结论:姜黄素可能通过抑制PI3-K/Akt和MEK/ERK信号通路的活化、下调Bcl-2与Bax的比值,从而抑制RKO细胞增殖和诱导细胞凋亡.
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MEK/ERK通路阻断剂对黑素瘤细胞增殖的影响
目的 研究MEK/ERK通路阻断剂U0126对黑素瘤细胞A375增殖的影响,并探讨其作用机制.方法 噻唑蓝法(MTT)测定U0126和传统抗癌药物达卡巴嗪(DTIC)分别及联合作用时对黑素瘤细胞A375的增殖抑制作用；流式细胞术检测不同药物处理组的细胞周期及凋亡情况；Western blot检测U0126处理后细胞p-ERK1/2的表达.结果 药物作用24h时U0126单一用药组对细胞的增殖抑制率高于DTIC单一用药组(P＜0.01)；联合应用U0126和DTIC对细胞的增殖抑制率明显高于DTIC用药组(P＜0.01)；U0126组与对照组相比,G1期细胞比例数提高了21.83％ (P ＜0.01),凋亡率提高了13.96％ (P ＜0.01),联合用药组与对照组相比G1期比例增加了26.64％ (P ＜0.01),凋亡率亦明显提高了25.20％ (P ＜0.01)；不同浓度U0126处理细胞后,细胞的p-ERK1/2均明显降低(P＜0.01).结论 MEK/ERK通路阻断剂U0126可显著抑制黑素瘤细胞的增殖,其机制可能与降低p-ERK1/2的表达从而参与细胞周期调控有关；联合U0126用药有望成为治疗黑素瘤新的有效途径.
