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基于差异蛋白质组学技术解析xCT缺陷诱导的细胞死亡机制
目的：对Sut黑色素细胞和野生型黑色素细胞进行高分辨率差异蛋白质组学分析，探讨xCT缺陷引起细胞生长抑制的机制。方法分离Sut黑色素细胞和野生型黑色素细胞总蛋白，进行双向电泳和串联质谱分析，获得数值经Mascot软件处理后通过NCBI及Swiss-Prot蛋白质数据库检索，结合双向凝胶电泳相应点的表观等电点、相对分子质量、匹配肽段的多少和序列覆盖率等综合分析筛选差异蛋白质；逆转录-PCR分析Sut细胞差异蛋白mRNA表达水平，用蛋白免疫印迹法对xCT缺陷的Sut黑色素细胞进行自体吞噬分析。结果与结论得到20个明显上调或下调的蛋白，经MALDI-TOF质谱分析鉴定差异蛋白质，发现与自体吞噬和囊泡运输相关的调控因子（ Anxa3、Hist 1h2bk、NDRG1、CaM）以及与细胞转移相关的调控因子（S100A-4、S100A-6、波形蛋白）表达发生了改变；对自噬标志蛋白分析发现，在xCT缺陷的Sut细胞中发生了自体吞噬。结果表明，xCT缺陷可能通过与细胞外基质的黏附异常以及激活Sut黑色素细胞中自噬相关的信号通路，从而导致细胞的生长抑制和自噬性死亡。
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xCT缺陷的Sut黑色素细胞蛋白质组学研究
目的 为研究xCT缺陷引起细胞生长抑制的机理提供理论依据.方法 提取xCT缺陷的Sut黑色素细胞和野生型Mela黑色素细胞2组细胞总蛋白,分别进行二维凝胶电泳,分离2组细胞总蛋白.以Mela细胞做对照,以PDQuest软件分析Sut细胞蛋白质表达谱的变化.选择部分表达量明显变化的蛋白质进行质谱分析,将质谱分析结果输入MASCOT软件,在SWISS-PROT数据库中搜索,鉴定出差异蛋白质.结果 和野生型Mela细胞相比,Sut细胞中有20个蛋白质发生了明显变化,其中10个蛋白质表达上调,10个蛋白质表达下调,分别选取上调蛋白质点和下调蛋白质点各4个进行鉴定.鉴定结果显示表达量上调的蛋白质为:Tubulin alpha-1b,S100-A6,Nucleoside,S-formylglutathione;表达量下调的蛋白质为:Calumenin,NDRG1,DPYSL2,14 ku未知蛋白.结论 获得了一些与xCT缺陷相关的蛋白质,为研究xCT缺陷引起的Sut细胞生长抑制机理提供理论依据.
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xCT影响肝癌细胞转移的作用机制研究
目的:探讨人类肝细胞癌中xCT(氨基酸转运系统system xc-的功能性亚基)的表达对于自噬、EMT(上皮细胞间质化)和肿瘤细胞转移的影响.方法:用Western Blot和RT-PCR方法检测肿瘤细胞在xCT抑制剂SASP(柳氮磺胺毗啶)的作用下,其自噬和EMT过程相关基因的表达水平的改变.伤口愈合实验和Transwell分析xCT在受到抑制后,肿瘤细胞迁移能力的改变.结果:SASP处理过的97H人类高转移肝癌细胞与对照组相比,自噬相关蛋白LC3和Beclin1表达升高,EMT的标志物E-cadherin表达升高,Vimentin的表达降低,参与EMT过程的重要转录因子Snail表达降低.结论:抑制xCT的表达可以使人类高转移肝癌细胞发生自噬,降低转录因子Snail的表达,从而减弱EMT过程的发生并降低人类高转移肝癌细胞的转移能力.
