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洋金花总碱对TGF-β1诱导的人肺腺癌细胞A549细胞EMT的影响
目的 探讨洋金花总碱对人肺腺癌细胞株A549在体外经转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导后发生上皮细胞间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用.方法 将体外培养的A549细胞随机分为5组:空白对照组、TGF-β1组及低、中、高浓度药物组,分别作用24、48、72 h时,观察各组A549细胞形态变化,通过蛋白免疫印迹(Western blot)及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测各组A549细胞人细胞角蛋白19(CK-19)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果 TGF-β1组的细胞形态逐渐由鹅卵石状向梭形改变;低、中、高浓度药物组形态与TGF-β1组相似;个浓度药物组细胞形态间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).Western blot结果显示:与空白对照组比较,TGF-β1组CK-19表达下调,α-SMA表达上调(P＜0.01);与TGF-β1组比较,低、中、高浓度药物组CK-19表达上调(P＜0.01),α-SMA表达有所抑制(P＜0.01);3个浓度药物组间比较,72 h时的高浓度药物组CK-19表达上调(P＜0.01),α-SMA表达抑制(P＜0.01).Real-time PCR结果显示:与TGF-β1组比较,3个浓度药物组细胞CK-19 mRNA表达增多;α-SMA mRNA表达减少(P＜0.01).结论 洋金花总碱对TGF-β1诱导的肺腺癌细胞A549 EMT形态改变无明显影响,能一定程度上逆转A549细胞EMT过程中特征性标记物CK-19及α-SMA的表达,使上皮标志物CK-19表达增多,间质细胞标志物α-SMA表达减少,且在作用72 h时的高浓度药物组为明显,并呈浓度依赖性和时间依赖性.
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Kazrin在肝癌组织中的表达及与上皮细胞间质化的关系
目的 检测Kazrin蛋白在肝癌中的表达情况、分析Kazrind表达与患者临床病例特征的关系,并探讨肝癌中Kazrin与上皮细胞间质化(EMT)的关系.方法 应用蛋白质免疫印迹法和免疫组织化学法检测正常肝组织、肝癌组织及对应的癌旁组织中Kazrin表达.根据肿瘤组织免疫组织化学检测结果分成Kazrin高表达组和低表达组,统计分析Kazrin表达水平与肝癌的临床病理特征的关系,用免疫组织化学检测肝癌中Kazrin、E-cadherin和Vimentin蛋白表达,并分析三者之间的相关性.结果 Kazrin在肝癌组织中相对高表达.相关性分析显示Kazrin的表达水平与肿瘤结节数目、有无包膜、Edmondson-Steiner分级相关.与癌旁组织相比,肝癌组织中Kazrin蛋白表达显著升高,肝癌中阳性表达率为55.4％(36/65).相关性分析显示肝癌中Kazrin的表达水平与肿瘤结节数目(P=0.007)、肿瘤包膜(P<0.001)、血管侵犯(P=0.015)、Edmondson-Steiner分级(P=0.001)有关.Kazrin的表达与E-cadherin低表达和Vimentin的高表达之间呈显著正相关(r=0.349;r=0.411,P<0.01).结论 肝癌组织中Kazrin的表达水平显著升高且其高表达与肝癌不良临床病理特征密切相关;Kazrin可能通过调控E-cadherin和Vimentin的表达来促进EMT,进而在肝癌的侵袭和转移过程中发挥重要作用.
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上皮细胞间质化预测胰腺癌预后的价值
目的:探讨上皮细胞间质化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)与胰腺癌预后的关系.方法:采用免疫组织化学的方法检测60例胰腺癌组织中E-cadherin、Vimentin蛋白的表达,根据E-cadherin和Vimentin的表达将EMT程度分为3级:1级:E-cadherin(+)和Vimentin(-);2级:E-cadherin(-)和Vimentin(-);3级:E-cadherin(-)和Vimentin(+).通过生存分析研究上皮间质化程度与预后的关系.结果:60例胰腺癌患者的1、2、3年累计生存率分别是50％、29％、21％.E-cadherin高表达与胰腺癌较好预后相关(P=0.006);而Vimentin的表达与胰腺癌预后呈负相关(P=0.002).EMT l级、2级、3级中位生存时间分别为24.07 mo±4.50 mo、11.97 mo±0.92mo、6.30 mo±0.52 mo,上皮细胞-间质化程度越高预后越差(P=0.001).Cox比例风险模型提示EMT程度是影响患者预后的独立因素(P=0.025),其HR值为1.779(95％CI:1.077-2.939).结论:上皮细胞-间质化是胰腺癌预后的独立危险因素,其间质化程度越高,预后越差.
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结肠癌组织CBX7表达及其对SW480细胞侵袭影响机制探讨
目的 染色盒同源物7(chromobox homolog 7,CBX7)是黑腹果蝇的异染色质蛋白在人类细胞中的同源物,主要分布于细胞核的染色质中,通过与染色质的结合而发挥其调节功能.本研究探讨CBX7在人结肠癌中的表达及其对结肠癌SW480细胞上皮细胞间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及细胞侵袭能力的影响.方法 收集成都肛肠专科医院2014-01-01-2015-01-01行手术切除的48例结肠癌组织及对应癌旁组织(距离组织边缘＞2 cm),免疫组化检测CBX7蛋白表达,采用卡方x2检验分析结肠癌组织中CBX7蛋白表达与临床特征的关系.通过重组质粒在SW480细胞中过表达CBX7,Transwell侵袭小室检测过表达CBX7后SW480细胞侵袭能力的变化;检测过表达CBX7后SW480细胞内E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达改变.结果 结肠癌组织中CBX7蛋白的表达量为1.13±0.44,显著低于癌旁组织的3.43±0.37,差异有统计学意义,t=3.874,P＜0.001.过表达CBX7后采用Transwell侵袭小室检测发现CBX7组侵袭细胞数量为25.324±5.157,较对照组的50.208±7.071减少,差异有统计学意义,t=10.336,P＜0.001.CBX7过表达质粒转染后SW480细胞内上皮标志物E-cadherin的表达量为0.79±0.12,高于转染前的0.21±0.10,差异有统计学意义,t=11.365,P＜0.001.转染后N-cadherin和Vimentin的表达量分别为0.37±0.05和0.22±0.03,较转染前的0.75±0.09和0.35±0.04下调,差异均有统计学意义,均P值＜0.001.结论 结肠癌组织CBX7表达下调,过表达CBX7通过抑制SW480细胞上皮细胞间质化改变而抑制结肠癌细胞侵袭.
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上皮细胞间质化在胃癌发生发展中的作用
胃癌是世界范围内常见的肿瘤之一.因为其复杂的发生发展机制,早期发现与有效治疗尤为困难.上皮细胞间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是胚胎发育、伤口愈合、纤维疾病发展中的重要过程.近有研究表明,胃癌的发生与EMT的异常激活有密切关系.EMT的激活使得胃癌上皮细胞具有间质细胞的特征,上皮极性减少,而且间质细胞获得干细胞侵袭、转移、抗凋亡、耐药等特征.至今发现多种分子与EMT有关,如E-钙黏蛋白等.也有研究发现EMT可能与表观遗传机制有关.现已发现的与EMT有关分子可以作为胃癌早期诊断的标志,而EMT的发现也会为胃癌靶向治疗提供新的思路.本文就其研究进展做一综述.
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miR-30通过调节CD90表达抑制肝细胞肝癌
目的：miRNA能通过转录后调节靶基因的表达量，并在致癌过程中发挥抑癌或促癌作用。研究发现miR-30家族在人类肿瘤中起着重要作用，并参与维持干细胞特性的上皮细胞间质化过程，本研究主要识别miR-30家族与肝细胞肝癌的关系。方法：应用qRT-PCR实验方法检测93例肝细胞肝癌患者癌组织和癌旁正常组织中miR-30c，miR-30b和miR-30e表达水平，另对121例肝细胞肝癌患者癌组织进行miR-30家族的表达及CD90免疫组织化学表达检测，分析miR-30家族与CD90在肝细胞肝癌中的相关性。结果：本研究发现miR-30c（P<0.001）、miR-30b（P=0.004）和miR-30e（P<0.001）与癌旁正常组织相比，癌组织中表达显著下调。CD90蛋白在癌组织中的表达水平显著高于癌旁正常组织（P=0.007）。MiR-30c（P=0.032）和miR-30e（P=0.015）在CD90阴性表达的患者中表达水平显著高于CD90阳性表达的患者。结论：miR-30家族在肝细胞肝癌中可作为抑癌miRNA，并通过调节CD90蛋白来发挥这一作用。
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xCT影响肝癌细胞转移的作用机制研究
目的:探讨人类肝细胞癌中xCT(氨基酸转运系统system xc-的功能性亚基)的表达对于自噬、EMT(上皮细胞间质化)和肿瘤细胞转移的影响.方法:用Western Blot和RT-PCR方法检测肿瘤细胞在xCT抑制剂SASP(柳氮磺胺毗啶)的作用下,其自噬和EMT过程相关基因的表达水平的改变.伤口愈合实验和Transwell分析xCT在受到抑制后,肿瘤细胞迁移能力的改变.结果:SASP处理过的97H人类高转移肝癌细胞与对照组相比,自噬相关蛋白LC3和Beclin1表达升高,EMT的标志物E-cadherin表达升高,Vimentin的表达降低,参与EMT过程的重要转录因子Snail表达降低.结论:抑制xCT的表达可以使人类高转移肝癌细胞发生自噬,降低转录因子Snail的表达,从而减弱EMT过程的发生并降低人类高转移肝癌细胞的转移能力.
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Mir-30a抑制自噬及上皮细胞间质化增强肺腺癌细胞对克唑替尼的敏感性
目的 探索上调肺腺癌细胞中Mir-30a的表达水平能否增强细胞对克唑替尼的敏感性,观察细胞增殖率的变化及克唑替尼IC50等的变化,并探索相关的机制.方法 使用Lipofectamine2000携带Mir-30a对H3122细胞进行瞬时转染,并与克唑替尼共同作用.将肺腺癌H3122细胞分为对照组、克唑替尼与联合组.MTTT法检测各组细胞增殖率变化,Transwell检测细胞侵袭性.Western blot检测ALK、c-MET、Beclin-1、E-eadherin及Vimentin蛋白的表达.结果 在H3122细胞中Mir-30a转染与克唑替尼共同作用较克唑替尼单独作用有更显著的细胞杀伤作用.转染后的细胞较单独应用克唑替尼组侵袭力减弱.转染与克唑替尼联合组Beclinl、ALK、c-MET及Vimentin的蛋白的表达有明显下降,E-cadherin稍有增强.结论 Mir-30a增强肺腺癌细胞对克唑替尼的敏感性,可能与过量表达的Mir-30a抑制癌细胞的自噬及上皮细胞间质化相关.
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细胞自噬参与诱导慢性阻塞性肺病患者气道上皮细胞间质化的研究
目的：探讨细胞自噬如何参与诱导慢性阻塞性肺病（COPD）患者气道上皮细胞间质转化。方法 A549细胞置于37℃5％的二氧化碳培养箱中培养，培养基为添加10％胎牛血清的 DMEM。结果香烟提取物处理可以显著提高 A549细胞的自噬水平。结论 CPOD 患者气道上皮细胞间质化与细胞自噬有关。
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腺病毒介导的siRNA沉默PNUTS基因对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭的影响
目的·探讨腺病毒介导小RNA干扰(small interfering RNA,siRNA)下调蛋白磷酸酶1核目标亚基(phosphatase nuclear targeting subunit,PNUTS)的表达对喉癌细胞Hep-2增殖、侵袭、迁移和上皮细胞间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及机制.方法·用携带表达PNUTS siRNA序列的重组腺病毒感染喉癌Hep-2细胞.实验分为空白对照(PBS)组、腺病毒空载(Ad-GFP)组和实验(Ad-siPNUTS)组.实时荧光定量PCR及Western blotting检测细胞中PNUFS的表达.MTT法检测细胞增殖情况.Transwell 法检测细胞侵袭、迁移能力.Westem blotting检测细胞中总Rb、磷酸化Rb (p-Rb)、PI3K、磷酸化AKT (p-AKT)、E2F1、E-cadherin、N-cadherin和ZEB1蛋白的表达.结果·与Ad-GFP组比较,Ad-siPNUTS组Hep-2细胞中PNUTS mRNA和蛋白(均P=0.000)表达水平降低;细胞增殖在第2日(p=0.004)、第3日(P=0.001)、第4日(P=0.000)受到抑制;细胞侵袭及迁移(均P=0.000)能力降低;总Rb (P=0.000)、p-Rb(P=0.000)、PI3K (P=0.023)、p-AKT (P=0.000)、E2F1 (P=0.000)、N-cadherin (P=0.005)、ZEB1 (P=0.000)蛋白表达水平降低,E-cadherin(P=0.003)蛋白表达水平增加.结论·Ad-siPNUTS抑制喉癌细胞Hep-2的增殖、侵袭及转移能力,并逆转EMT,其可能与PI3K/AKT信号通路、Rb信号通路有关.
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GPC5过表达对人肺腺癌A549肿瘤起始细胞生物学功能的影响
目的:探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖-5 (glypican 5,GPC5)基因对人肺腺癌A549肿瘤起始细胞(cancer-initiating cells,CICs)生物学功能的影响.方法:采用前期构建的过表达GPC5慢病毒载体稳定转染的细胞株GPC5-A549,无血清培养方法富集A549细胞中的CICs微球,通过定量分析检测微球大小,流式细胞术检测CD133阳性细胞比率,Matrigel和Tanswell小室检测细胞侵袭迁移能力,Western blot检测上皮细胞间质化相关蛋白表达.结果:与对照组相比,过表达GPC5后A549细胞中CICs微球形成数目明显减少,体积变小,CD133阳性率明显下降(P＜0.05);细胞侵袭、迁移能力显著降低(P＜ 0.05);E-cadherin的蛋白表达明显上调,Vimentin、N-cadherin的表达显著被抑制(P＜ 0.05).结论:GPC5过表达能够抑制肺腺癌细胞株A549中CICs的发生、侵袭和迁移,调控上皮细胞间质化相关蛋白表达.
关键词： 肺腺癌 磷脂酰肌醇蛋白聚糖-5 肿瘤起始细胞 上皮细胞间质化 -
核转录因子Snail与骨肉瘤关系的研究进展
骨肉瘤是常见的骨恶性肿瘤,但其发生机制目前尚未阐明.而核转录因子Snail不仅参与与骨肉瘤复发转移及预后有关的上皮细胞间质化过程,而且在肿瘤干细胞特性产生和维持、细胞生存和凋亡以及免疫调节中起着重要的作用,其有望成为骨肉瘤等恶性肿瘤治疗的一个新靶点.
关键词： 核转录因子Snail 骨肉瘤 上皮细胞间质化 -
洋金花总碱对人肺腺癌A549细胞EMT过程中E-cad表达的影响
目的：观察洋金花总碱对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导的A549细胞向间质细胞转化（EMT）过程中E-钙黏蛋白（E-cad）表达的影响。方法将体外培养的A549细胞随机分为空白对照组，TGF-β1组及洋金花总碱低、中、高浓度药物组，分别作用24、48、72h后，通过Western-blot及RT-PCT检测各组A549细胞E-cad表达的变化。结果24、48、72hE-cad表达，空白对照组分别为（1.49±0.12）、（2.52±0.07）、（2.58±0.21）；TGF-β1组分别为（0.66±0.01）、（0.50±0.13）、（0.52±0.08）；洋金花总碱低、中、高浓度药物组分别为24h [（0.67±0.12）、（0.67±0.12）、（1.12±0.05）]、48h [（0.70±0.28）、（1.02±0.08）、（1.10±0.13）]、72h[（0.68±0.04）、（1.25±0.11）、（1.30±0.09）]。与空白对照组比较，TGF-β1组和洋金花总碱低、中、高浓度药物组的E-cad表达均明显减少（P<0.01）；与TGF-β1组比较，各时间段的洋金花总碱低浓度组E-cad表达无明显变化（P>0.05），但48、72h洋金花总碱中、高浓度组E-cad表达明显增加（P<0.01）；与24h低浓度药物组比较，24h中浓度药物组E-cad表达差异无统计学意义（P>0.05），但作用48、72h后，中浓度药物组的E-cad表达明显增加（P<0.01），而高浓度药物组3个时间点的E-cad表达均明显增加（P<0.01）。与中浓度药物组比较，24h高浓度药物组E-cad表达增加（P<0.05），48、72h高浓度药物组E-cad表达差异无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组比较，不同浓度作用的洋金花总碱药物组使E-cad mRNA表达上调（P<0.01），并且在72h及高浓度时明显（P<0.01）。结论洋金花总碱通过增加上皮标志物E-cad表达，可抑制A549细胞的上皮间质转化。
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TGFβ、HNF4α在原发性肝癌中的表达及临床意义
目的 研究TGFβ和HNF4α在肝癌及癌旁组织中的表达,探讨其在肝癌发生、发展中的作用和意义.方法 采用qRT-PCR和Western blotting方法检测54例原发性肝癌患者肝癌及对应癌旁组织中TGFβ和HNF4αmRNA及蛋白表达水平;免疫组化检测所有肝癌组织中TGFβ和HNF4α蛋白的表达水平,统计学分析两者与肝癌患者临床病理特征的关系.结果 (1)与癌旁组织比,TGFβ mRNA在肝癌组织中表达升高[(0.294±0.142)vs(0.231±0.149),P=0.020];HNF4αmRNA在肝癌组织中表达降低[(0.104±0.130 vs(0.151±0.079),P=0.037];(2)Western blotting结果显示:与癌旁组织比,TGFβ蛋白在肝癌组织中高表达[(0.224±0.060)vs(0.051±0.019),P=0.025],HNF4α蛋白在肝癌组织中表达下[(0.103±0.033)vs(0.315±0.024),P=0.017];(3)免疫组化检测显示,肝癌组织中TGFβ蛋白阳性表达率66.7%,HNF4α蛋白阳性表达率为57.4%.在肝癌组织中TGFβ蛋白表达水平与肿瘤分化(χ2=4.339,P=0.037)及TNM分期(χ2=4.488,P=0.034)相关;HNF4α蛋白与肿瘤分化(χ2=5.032,P=0.025)相关.TGFβ蛋白与HNF4α蛋白呈负相关(r=-0.291,P=0.033).结论 TGFβ和HNF4α基因相互调控EMT进程,参与原发性肝癌的发生发展.
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转化生长因子 β 在肝癌中的作用研究进展
转化生长因子 β(TGF-β)是一种多功能蛋白,也是肝细胞肝癌肿瘤微环境的重要组成成分.TGF-β 在肝癌早期对肝癌细胞起抑制作用,在肝癌中后期则促进肝癌细胞增殖、侵袭和转移,且诱导机体免疫抑制、微血管生成及肝癌细胞耐药,对肝癌起双向调节作用.TGF-β 在肝癌中的作用机制较为复杂,对TGF-β 在肝癌发生、发展过程中扮演的角色及相关机制进行深入研究可为寻找肝癌治疗的新靶点提供理论参考.本文就TGF-β 在肝癌中的作用研究进展作一综述.
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Vimentin及E-Cadherin在子宫颈癌中的表达及其与上皮细胞间质化的相关性
目的 探讨子宫颈鳞癌组织中E-Cadherin和Vimentin的表达及其与上皮细胞间质化(EMT)的相关性.方法 采用免疫组化SP法检测42例子宫颈鳞癌组织中E-Cadherin和Vimentin的表达,并分析两者与EMT之间的相关性.结果 子宫颈鳞癌组织中E-Cadherin和Vimentin的表达率分别为52.2%和24.4%;在转移淋巴结组织中E-Cadherin的表达率为28.2%,而Vimentin的表达率为39.6%;在指状侵袭中,E-Cadherin的阳性表达率为88.3%,而在播散状侵袭中,E-Cadherin的阳性表达率为36.1%;而在指状侵袭中,Vimentin的阳性表达率为26.3%,而在播散状侵袭中,Vimentin的阳性表达率为68.2%.在E-Cadherin表达阳性的子宫颈鳞癌组织中,Vimentin的阳性率为10.9%,在E-Cadherin表达阴性的子宫颈鳞癌组织中,Vimentin的阳性率为78.5%,两者呈负相关.结论 E-Cadherin的表达降低和Vimentin的表达升高与子宫颈鳞癌的侵袭方式密切相关,E-Cadherin和Vimentin参与了EMT过程,在子宫颈鳞癌转移中具有重要作用.
关键词： 子宫颈癌 E-cadherin Vimentin 上皮细胞间质化 -
同源异型盒DLX基因调控妇科恶性肿瘤机制的探讨
同源异型盒基因DLX编码重要的调控胚胎发育、细胞分化的转录因子家族.研究证实,肿瘤中存在DLX基因表达紊乱,并且与肿瘤进展相关.妇科恶性肿瘤中,DLX表达失调控涉及上皮细胞问质化、促肿瘤血管生成、影响细胞凋亡等许多机制.DLX基因的多途径调控,为探索肿瘤的诊治提供了新思路.
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MicroRNA-199a-5p在胃癌组织中的表达及其意义
目的 探讨MicroRNA-199a-5p在胃癌的发生 、发展 、转移中的作用.方法 应用实时聚合酶链式反应(Real-Time RT-PCR)技术检测MicroRNA-199a-5p在胃癌组织及正常胃粘膜组织中的表达量,并分析其表达量与胃癌临床特征的关系.结果 MicroRNA-199a-5p在肿瘤组织中的表达量(1.15±0.18)要明显低于正常胃粘膜组织(2.84±3.14)(P<0.05),而且其表达量与肿瘤的大小 、分期 、分化程度 、有无淋巴结转移具有相关性.结论 MicroRNA-199a-5p的低表达在胃癌的发生 、发展及侵袭和转移具有重要的作用.
关键词： 胃癌 microRNA-199a-5p 上皮细胞间质化 TNM分期 -
微小RNA-145通过调控上皮细胞间质化抑制肺腺癌起始细胞的发生
目的 在肺腺癌细胞株A549中探讨微小RNA(miRNA)-145调控肺腺癌起始细胞发生及其分子机制.方法 采用无血清培养方法富集A549起始细胞微球,脂质体转染miR-145阻遏物及模拟物,进行细胞微球定量分析,流式细胞术检测CD133+细胞比例,Western blot检测上皮细胞间质化(EMT)相关转录因子Snail、Slug、上皮细胞标志E-钙黏蛋白(E-cadherin)、角蛋白18(Cytokeratin 18)及间充质细胞标志波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)的蛋白水平.结果 与对照组比较,过表达miR-145可显著下调A549起始细胞微球中CD133+细胞比例[(25.39±12.37)％比(43.70±17.58)％,P＜0.05]；Snail、Slug、Vimentin、N-cadherin的蛋白水平明显下调,E-cadherin、Cytokeratin 18的蛋白水平明显上调.抑制miR-145可显著增加A549起始细胞微球CD133+细胞比例[(58.89±23.54)％比(45.60±18.58)％,P＜0.05]；上调Snail、Slug、Vimentin、N-cadherin的蛋白水平,下调E-cadherin、Cytokeratin 18的蛋白水平.结论 miR-145可抑制肺腺癌起始细胞的发生,其机制与调控EMT通路相关.
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HIF诱导EMT在肿瘤侵袭转移中的作用
缺氧是肿瘤微环境的主要特点,通过缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)激活众多靶基因,从而影响肿瘤的代谢、增殖、凋亡、侵袭转移、耐药等多个方面.上皮细胞间质化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)是肿瘤发生侵袭转移的重要起始过程,缺氧亦是EMT的诱发因素之一并可通过多条信号转导通路包括TGF-β,Notch,Wnt/β-catenin等调节EMT.研究缺氧诱导EMT的机制并阻断其进程,可成为治疗肿瘤的新靶点.
