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洋金花总碱对TGF-β1诱导的人肺腺癌细胞A549细胞EMT的影响
目的 探讨洋金花总碱对人肺腺癌细胞株A549在体外经转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导后发生上皮细胞间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用.方法 将体外培养的A549细胞随机分为5组:空白对照组、TGF-β1组及低、中、高浓度药物组,分别作用24、48、72 h时,观察各组A549细胞形态变化,通过蛋白免疫印迹(Western blot)及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测各组A549细胞人细胞角蛋白19(CK-19)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果 TGF-β1组的细胞形态逐渐由鹅卵石状向梭形改变;低、中、高浓度药物组形态与TGF-β1组相似;个浓度药物组细胞形态间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).Western blot结果显示:与空白对照组比较,TGF-β1组CK-19表达下调,α-SMA表达上调(P＜0.01);与TGF-β1组比较,低、中、高浓度药物组CK-19表达上调(P＜0.01),α-SMA表达有所抑制(P＜0.01);3个浓度药物组间比较,72 h时的高浓度药物组CK-19表达上调(P＜0.01),α-SMA表达抑制(P＜0.01).Real-time PCR结果显示:与TGF-β1组比较,3个浓度药物组细胞CK-19 mRNA表达增多;α-SMA mRNA表达减少(P＜0.01).结论 洋金花总碱对TGF-β1诱导的肺腺癌细胞A549 EMT形态改变无明显影响,能一定程度上逆转A549细胞EMT过程中特征性标记物CK-19及α-SMA的表达,使上皮标志物CK-19表达增多,间质细胞标志物α-SMA表达减少,且在作用72 h时的高浓度药物组为明显,并呈浓度依赖性和时间依赖性.
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洋金花总碱对人肺腺癌A549细胞EMT过程中E-cad表达的影响
目的：观察洋金花总碱对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导的A549细胞向间质细胞转化（EMT）过程中E-钙黏蛋白（E-cad）表达的影响。方法将体外培养的A549细胞随机分为空白对照组，TGF-β1组及洋金花总碱低、中、高浓度药物组，分别作用24、48、72h后，通过Western-blot及RT-PCT检测各组A549细胞E-cad表达的变化。结果24、48、72hE-cad表达，空白对照组分别为（1.49±0.12）、（2.52±0.07）、（2.58±0.21）；TGF-β1组分别为（0.66±0.01）、（0.50±0.13）、（0.52±0.08）；洋金花总碱低、中、高浓度药物组分别为24h [（0.67±0.12）、（0.67±0.12）、（1.12±0.05）]、48h [（0.70±0.28）、（1.02±0.08）、（1.10±0.13）]、72h[（0.68±0.04）、（1.25±0.11）、（1.30±0.09）]。与空白对照组比较，TGF-β1组和洋金花总碱低、中、高浓度药物组的E-cad表达均明显减少（P<0.01）；与TGF-β1组比较，各时间段的洋金花总碱低浓度组E-cad表达无明显变化（P>0.05），但48、72h洋金花总碱中、高浓度组E-cad表达明显增加（P<0.01）；与24h低浓度药物组比较，24h中浓度药物组E-cad表达差异无统计学意义（P>0.05），但作用48、72h后，中浓度药物组的E-cad表达明显增加（P<0.01），而高浓度药物组3个时间点的E-cad表达均明显增加（P<0.01）。与中浓度药物组比较，24h高浓度药物组E-cad表达增加（P<0.05），48、72h高浓度药物组E-cad表达差异无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组比较，不同浓度作用的洋金花总碱药物组使E-cad mRNA表达上调（P<0.01），并且在72h及高浓度时明显（P<0.01）。结论洋金花总碱通过增加上皮标志物E-cad表达，可抑制A549细胞的上皮间质转化。
