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Rb和P-Rb在乳腺癌组织中的表达及其在癌细胞上皮间质转化中的意义
目的:分析视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)基因和磷酸化Rb(P-Rb)在人乳腺癌组织中的表达及在乳腺癌上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的意义.方法:选取2009年1月至2009年8月在河北医科大学第四医院进行手术切除的65例乳腺癌患者标本,利用免疫组织化学法检测乳腺癌组织中Rb、P-Rb、上皮细胞标记物CDH1和间质细胞标记物Vimentin的表达状况,分析二者表达与乳腺癌患者临床病理学指标和预后的关系.利用real-time PCR及Western blotting方法检测在TGFβ诱导的EMT过程中Rb及P-Rb的表达变化.结果:乳腺癌组织中,Rb和P-Rb蛋白表达阳性率分别为55.38％和50.77％.P-Rb蛋白表达与乳腺癌患者的肿瘤大小、临床分期及淋巴结转移状况呈正相关.CDH1和Vi-mentin蛋白表达阳性率分别为76.92％和43.08％.CDH1蛋白表达与乳腺癌患者的肿瘤大小、临床分期及淋巴结转移状况呈负相关.Vimentin蛋白表达与乳腺癌患者的肿瘤大小、临床分期及淋巴结转移状况呈正相关.Rb及P-Rb蛋白表达均与CDH1蛋白表达呈正相关,与Vimentin蛋白表达呈负相关.P-Rb蛋白表达阳性的乳腺癌患者的总五年生存率明显低于P-Rb蛋白表达阴性的患者;CDH1蛋白表达阳性的乳腺癌患者的总五年生存率明显高于CDH1蛋白表达阴性的患者,Vimentin蛋白表达阳性的乳腺癌患者的总五年生存率明显低于Vimentin表达阴性的患者.在TGFβ诱导的HMLE细胞发生EMT的过程中,Rb的表达显著下降,P-Rb的表达显著上升.结论:Rb的磷酸化失活影响了乳腺癌细胞上皮间质转化的过程,与乳腺癌的转移密切相关.
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腺病毒介导的siRNA沉默PNUTS基因对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭的影响
目的·探讨腺病毒介导小RNA干扰(small interfering RNA,siRNA)下调蛋白磷酸酶1核目标亚基(phosphatase nuclear targeting subunit,PNUTS)的表达对喉癌细胞Hep-2增殖、侵袭、迁移和上皮细胞间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及机制.方法·用携带表达PNUTS siRNA序列的重组腺病毒感染喉癌Hep-2细胞.实验分为空白对照(PBS)组、腺病毒空载(Ad-GFP)组和实验(Ad-siPNUTS)组.实时荧光定量PCR及Western blotting检测细胞中PNUFS的表达.MTT法检测细胞增殖情况.Transwell 法检测细胞侵袭、迁移能力.Westem blotting检测细胞中总Rb、磷酸化Rb (p-Rb)、PI3K、磷酸化AKT (p-AKT)、E2F1、E-cadherin、N-cadherin和ZEB1蛋白的表达.结果·与Ad-GFP组比较,Ad-siPNUTS组Hep-2细胞中PNUTS mRNA和蛋白(均P=0.000)表达水平降低;细胞增殖在第2日(p=0.004)、第3日(P=0.001)、第4日(P=0.000)受到抑制;细胞侵袭及迁移(均P=0.000)能力降低;总Rb (P=0.000)、p-Rb(P=0.000)、PI3K (P=0.023)、p-AKT (P=0.000)、E2F1 (P=0.000)、N-cadherin (P=0.005)、ZEB1 (P=0.000)蛋白表达水平降低,E-cadherin(P=0.003)蛋白表达水平增加.结论·Ad-siPNUTS抑制喉癌细胞Hep-2的增殖、侵袭及转移能力,并逆转EMT,其可能与PI3K/AKT信号通路、Rb信号通路有关.
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糖氧剥夺诱导神经元磷酸化Rb蛋白表达特点及其与凋亡关系研究
目的 观察糖氧剥夺(OGD)诱导体外培养的皮层神经元细胞内磷酸化Rb蛋白(p-Rb)的表达特点并探讨其与神经元凋亡的关系.方法 将体外培养的皮层神经元随机分为对照组、OGD1 h后恢复糖氧供给(OGD/R)6 h、12 h和24 h组.应用免疫荧光细胞化学染色观察神经元p-Rb表达特点及其与TUNEL染色的关系.结果 p-Rb在OGD/R各组神经元的表达率较对照组明显增高,主要在神经元细胞浆内强表达,OGD/R6h组p-Rb与TUNEL染色共定位细胞比例开始增高,12 h达高,与对照组比较差异明显(P<0.01).OGD/R 24 h组很少观察到两者共定位染色.结论 Rb磷酸化介导的神经元细胞周期紊乱可能是缺血缺氧诱导的神经元早期凋亡机制之一.
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大鼠皮层神经元中磷酸化的细胞周期相关蛋白在发育过程中的表达
目的 观察正常Wistar大鼠发育过程中皮层神经元的细胞周期相关蛋白及其磷酸化蛋白的表达,探讨发育过程中皮层神经元的细胞周期变化以及磷酸化细胞周期相关蛋白在其中的调控作用.方法 采用免疫荧光方法 观察不同发育时期CyclinD1、CDK2、P27以及磷酸化CDK2、磷酸化CDC2、磷酸化Rb表达的规律.结果 在各年龄组NeuN阳性细胞数量随着年龄增加而逐渐减少.细胞周期相关蛋白(CyclinD1、CDK2、P27)在皮层神经元中广泛表达,各组间差异无显著性;磷酸化CDK2、磷酸化Rb阳性细胞的数量随着年龄增加而逐渐增多,各组间差异有显著性;磷酸化CDC2阳性细胞在各年龄组神经元中均无表达.结论 随着年龄的增长,磷酸化CDK和Rb逐渐增多,使得进入细胞周期的皮层神经元增加.细胞周期相关蛋白的磷酸化调控作用可能与衰老时皮层神经元的凋亡有关.
关键词： 磷酸化细胞周期素依赖激酶K 磷酸化Rb 细胞周期蛋白D1 p27 NeuN
