LPS对小鼠肺组织及RAW264.7细胞Akt蛋白表达及磷酸化的调控

目的 探讨脂多糖 (lipopolysaccharide, LPS)在体内外对Akt蛋白表达和磷酸化水平的影响.方法 用不同剂量LPS攻击RAW264.7细胞,检测不同时相点细胞Akt蛋白表达和磷酸化水平.小鼠腹腔注射LPS 6 h 后检测肺组织Akt蛋白表达和磷酸化水平.结果 不同剂量LPS攻击RAW264.7细胞,细胞Akt蛋白表达没有显著差异(P>0.05),磷酸化水平增加.而内毒素血症小鼠肺组织Akt蛋白表达没有显著变化(P>0.05),磷酸化水平减低.结论 LPS在体内外对Akt蛋白磷酸化作用不同,体外Akt蛋白磷酸化水平增高,但在内毒素血症小鼠体内出现Akt蛋白磷酸化水平异常减低.

内毒素血症大鼠颈迷走神经传出放电变化

目的观察内毒素血症时大鼠颈迷走神经传出放电的变化.方法SD大鼠随机分为两组:内毒素组静脉注射内毒素5 mg/kg;对照组注射等容量生理盐水.应用神经电生理技术,记录并分析内毒素注射后30 min、1、2、4 h颈迷走神经传出放电频率的改变.结果两组基础放电差异无显著性意义(P＞0.05).大鼠注射内毒素后各时间点放电频率明显升高,与基础放电及注射生理盐水组的对应时间点相比,差异有显著性意义(P＜0.05).结论内毒素血症时颈迷走神经传出活动增强,这种改变可能是机体发挥其内源性抗炎保护作用的途径之一.

抗氨基端脂多糖结合蛋白单链抗体的生物学活性研究

目的观察制备的抗NH-LBP单链抗体的体内外生物学活性.方法采用流式细胞术观察抗NH-LBP单链抗体阻断LPS与U937细胞的结合能力;采用ELISA法检测抗体干预后不同时相点的烧伤合并内毒素血症小鼠血浆中炎性细胞因子TNF-α、IL-6含量的变化;同时观察小鼠部分内脏器官的病理形态学改变.结果经抗NH-LBP单链抗体干预后,U937细胞表面的荧光强度明显下降.烧伤合并内毒素血症小鼠经scFv抗体干预后,与模型组相比肝、肺组织的炎性改变明显减轻、浸润的炎细胞减少;肾组织的炎性改变不明显;小鼠血浆中TNF-ot浓度在烧伤合并内毒素处理后即显著增高,模型组与对照组相比,差异有显著性(P＜0.01,P＜0.05),干预组与相应时相点的模型组相比,在初3 h内差异有显著性(P＜0.05).IL-6含量在建模3 h以后与对照组相比差异有显著性(P＜0.01,P＜0.05);干预后IL-6的含量下降比较明显.结论抗人源化氨基端脂多糖结合蛋白的单链抗体对内毒素血症有一定的保护作用;进一步明确了LBP在内毒素生物学效应中的作用.

内毒素结合肽在烧伤合并内毒素血症大鼠模型中的作用

目的观察重组人内毒素结合肽蛋白在烧伤合并内毒素血症大鼠中的作用.方法采用烧伤合并内毒素血症大鼠模型,分为模型组(n=36)、治疗组(n=36)及对照组(n=6).模型组在烧伤后立即腹腔内注射1 mg/kg 内毒素(用1 ml生理盐水配制);治疗组腹腔内注射1 mg/kg内毒素(用0.5 ml生理盐水配制)后,再注入400 μg/kg制备好的内毒素结合肽(用0.5 ml生理盐水配制);模型组和治疗组分别在处理后1、3、6、12、24、48 h取血和肝、肺组织,对照组仅在脱毛后腹腔内注入1 ml生理盐水,取血和肝、肺组织作总体对照.采用生化速率法、ELISA法及组织学切片染色和电镜制样等方法,测定血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的含量变化以及光、电镜观察肝、肺组织的病理学变化.结果模型组于伤后1 h血清TNFα显著高于对照组(P<0.01),6 h达峰值;治疗组与模型组比较各时相点血清TNFα含量均显著降低(P<0.01, P<0.05).血清IL-6含量测定结果,模型组于伤后1 h血清IL-6显著高于对照组(P<0.01),12 h达峰值.治疗组3～48 h各时相点血清IL-6含量均显著低于模型组(P<0.01, P<0.05).大鼠血清中谷丙转氨酶的动态变化提示,模型组大鼠血清ALT水平较正常组显著升高(P<0.01),治疗组大鼠的血清ALT水平和模型组相比显著降低(P<0.01, P<0.05).组织病理学变化方面,治疗组中肝细胞的变性程度减轻,炎细胞浸润减少;肺间质充血、出血及肺泡间隔的炎性改变也有不同程度减轻.结论重组人内毒素结合肽EBP在烧伤合并内毒素血症大鼠中具有一定的生物活性和保护作用.

脂多糖结合蛋白mRNA在大鼠烧伤复合内毒素血症早期肝组织中的表达及意义

目的探讨烧伤复合内毒素血症早期肝脏损害的发病机制.方法健康Wistar大鼠156只 ,随机分为烧伤复合内毒素注射组(BCEG)、单纯烧伤组(SBG)、单纯内毒素注射组(SEG)和正常对照组(NCG),采用光、电镜观察、血清肝功能ALT,ALB测定、肝组织LBP mRNA分子原位杂交等方法.结果大鼠20%体表面积Ⅲ度烧伤复合内毒素注射较单纯烧伤和单纯内毒素注射后,光、电镜可见较为严重的肝组织损害.烧注组在伤后0.5 h ALT已明显升高(P<0.01),峰值见于12, 72 h则降至正常,烧注组在伤后12～24 h ALB 明显下降(P<0.05).烧注组LBP mRNA在3～6 h表达较强,主要定位于肝细胞胞浆,呈全胞浆和部分胞浆型表达,且阳性表达细胞较为散在.结论烧伤复合内毒素血症早期肝脏损害具有协同损害效应,急性期反应调节蛋白 LBP在早期损害中即在肝脏合成表达.

氯喹对内毒素血症小鼠的保护作用以及对细胞因子的影响

目的探讨氯喹对内毒素血症小鼠的保护作用以及抑制内毒素引起的细胞因子释放情况.方法清洁级昆明小鼠40只,随机分为LPS、氯喹、氯喹+LPS和对照组,每组动物10只.LPS组,给予10 mg/kg的LPS; 氯喹组,给予20 mg/kg的氯喹; LPS+氯喹组在给予20 mg/kg氯喹后,立即给予10 mg/kg的LPS;对照组给予注射用水,注射体积为200 μl/20 g.观察尾静脉给药后7 h内小鼠的死亡率.体外培养小鼠ANA-1细胞,观察培养体系中预先加入氯喹3 h后,不同浓度的LPS引起的TNF-α、IL-6的释放情况.结果氯喹可降低内毒素引起的小鼠死亡,死亡率由100%降低为50%(P<0.05);培养体系中预先加入氯喹后LPS引起的TNF-α、IL-6的释放显著降低,尤其以IL-6的下降明显,在LPS(4.0 μg/ml)刺激组IL-6降幅可达68倍之多.结论氯喹对内毒素血症小鼠具有显著保护作用,可明显抑制内毒素引起的细胞因子释放,提示氯喹可能是治疗内毒素血症的有效药物.

大鼠烧伤复合内毒素血症致肝脏细胞凋亡实验研究

目的研究大鼠烧伤复合内毒素血症早期肝细胞的凋亡规律,并初步探讨其机制.方法烧注组以大鼠体表面积20%Ⅲ度烧伤复合内毒素血症为模型,与正常对照、单烧组、单注组比较,观察其肝脏病理变化、TUNEL检测、DNA凝胶电泳的改变,并测量血浆MDA浓度和SOD活性.结果烧注组凋亡细胞的数量明显比后两组多且发生时间早,于伤后6 h达到峰值.血浆MDA含量升高趋势和SOD活性降低趋势与肝细胞凋亡发生相一致.结论烧伤复合内毒素血症大鼠早期肝细胞损伤以凋亡为主,脂质过氧化是其发生机制之一.

梗阻性黄疸并发肾功能损害的实验研究

目的研究梗阻性黄疸(OJ)并发肾功能损害的模式及肠源性内毒素血症在其中的作用.方法雄性Wistar大鼠50只随机均分为假手术(SO)、胆总管结扎术后5 d(CBDL5d)、10 d(CBDL10d)、15 d(CBDL15d)及胃饲脱氧胆酸钠治疗 (CBDL+DC)组,监测血浆内毒素(ETX)水平和肾功能指标对氨基马尿酸清除率(CPAH)、菊粉清除率(CIN)及钠排泄分数 (FENa+)的变化.结果 CBDL大鼠血浆ETX水平随时间推移持续性升高(P<0.05或 P<0.01);CBDL5d组FENa+较SO组显著升高(P<0.01)、而CIN和CPAH无明显改变,术后10 d起肾功能指标进行性减低、CBDL15d组FENa+已较SO组显著降低(P<0.01);胃饲DC治疗可明显降低血浆ETX水平、改善肾功能指标(P<0.05或 P<0.01).结论肾小管水钠重吸收功能抑制是OJ并发肾损害的早期表现,随OJ时间延长,肾血流量和肾小球滤过率显著降低、肾小管水钠重吸收功能由抑制转向激活状态;肠源性内毒素血症在OJ并发肾功能损害中有重要作用.

PAF拮抗剂BN50739对大鼠急性肺损伤的作用研究

目的观察PAF拮抗剂BN50739在治疗烧伤内毒素血症所致的急性肺损伤中的作用,为临床治疗提供依据.方法采用烧伤复合内毒素血症大鼠模型,于致伤前5 min腹腔注射BN50739.动态观察肺病理改变、血气分析、支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量及肺内TNF表达.结果 BN50739可以明显减轻肺水肿,使BALF中蛋白含量明显低于生理盐水对照组,使伤后1.5 h和6 h血氧分压明显提高.BN50739尚能部分抑制TNF表达.结论 BN50739能部分改善烧伤复合内毒素血症所致的急性肺损伤.

TGF-β1在烧伤合并内毒素血症骨髓粒单系造血变化中的作用

目的探讨TGF-β1与c-kit相互关系及其在烧伤合并内毒素血症骨髓粒单系造血变化中的作用.方法采用免疫组化法检测20%TBSAⅢ度烧伤合并内毒素(1μg/g体重)腹腔注射后1周内小鼠骨髓细胞TGF-β1、c-kit表达,并对骨髓粒单系造血变化进行了动态观察.结果烧伤合并内毒素血症早期骨髓粒单系略呈增生反应,继而呈现造血抑制.烧注后1、3 d骨髓细胞TGF-β1表达增强,c-kit表达减弱;且TGF-β1与骨髓CFU-GM和c-kit变化趋势相反.结论TGF-β1在烧伤合并内毒素血症骨髓粒单系造血抑制中起着重要作用,其机制与下调骨髓细胞c-kit表达有关.

大鼠内毒素血症时外周血及肺泡内PMN死亡方式及呼吸爆发的检测

目的观察大鼠内毒素血症时肺组织中及外周血中性粒细胞(PMN)凋亡、坏死及功能改变的差异.方法Wistar大鼠25只,腹腔注射内毒素(LPS)(O55:B,5 mg/kg)造成内毒素血症,分别在给予LPS前(对照)及给予LPS后2、4、8、12 h(每组5只动物)取血及支气管肺泡灌洗,密度梯度法分离PMN,用流式细胞仪测定凋亡和坏死比例以及呼吸爆发功能的改变.结果内毒素血症时,外周血和支气管肺泡灌洗液中PMN凋亡细胞比例相似.但与对照相比,外周血PMN坏死比例明显增加,呼吸爆发能力明显受抑,而支气管肺泡灌洗液PMN坏死比例显著减少,呼吸爆发能力显著增强.结论在内毒素血症时,扣押于肺组织中的PMN在凋亡和坏死上表现出与外周血PMN不同的改变,其结果是组织中PMN存活PMN增加,并持续处于活化状态,这与PMN造成组织损伤有关.

胞液型磷脂酶A2在大鼠内毒素血症时肾脏中的表达

单磷酰脂质A预处理对内毒素血症小鼠的保护作用观察

单磷酰脂质A（Monophosphoryl lipid A,MPLA）预处理能诱导内毒素耐受性，提高机体对内毒素的耐受力，从而预防内毒素血症的发生、发展，降低脓毒症休克的发生率和死亡率。本实验旨在探讨MPLA对内毒素血症的预防性保护作用及其可能的机制。

内毒素血症犬白细胞去除后组织因子及组织因子途径抑制物的变化

目的：观察部分外周血白细胞去除（LCAP）后内毒素血症犬血浆中组织因子（TF）及组织因子途径抑制物（TFPI）的变化，探讨去除白细胞对内毒素血症犬凝血功能的影响。方法雄性杂种犬30只，采用随机数字表法分为血清脂肪酶（LPS）组（L组）、假 LCAP组（S组）及 LCAP处理组（T组），每组10只。L组仅经静脉输注2 mg/kg LPS建立内毒素血症犬模型，不行LCAP；T组在建模后12～14 h使用自动连续血流血细胞分离机进行LCAP；S组建模后12～14 h行假LCAP（将去除的终产物回输入体内）。观察建模后12、36 h各组动物血浆中的TF及TFPI水平，并计算TF/TFPI值。结果在36 h时，与 L组及 S组比较，T组犬 LCAP后血浆中TF水平明显降低（P＜0．05），TFPI水平明显升高（P＜0．05），TF/TFPI值降低（P＜0．05）。而 L组与 S组各指标比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论部分 LCAP可降低血浆中TF/TFPI值，从而改善凝血功能障碍。

肝硬化患者肠源性内毒素血症发生的机制及干预方法

肝硬化是一种由不同病因引起的慢性、进行性、弥散性肝病,其主要组织学表现是肝脏的纤维组织弥散性增生.肝硬化患者随着肝功能的减退和门静脉高压的不断进展,发生内毒素血症的概率逐渐增大,也加速肝硬化进展.内毒素水平与Child-Pugh分级存在正相关关系,分级越高,血清内毒素水平越高[1].内毒素在促进肝脏纤维化的多个环节中起到了重要作用,同时与肝硬化患者的感染、腹水、上消化道出血、肝肾综征、肝性脑病等并发症也存在密切关系[2].内毒素血症的发生主要与肝硬化肠道菌群失调、肠道细菌过度生长、肠黏膜屏障功能障碍以及机体免疫力下降有关.因此,近年来关于内毒素血症的发生机制以及干预方面的研究也越来越多.

原花青素对脂多糖所致内毒素血症小鼠的保护作用研究

目的 探讨原花青素对内毒素血症小鼠的保护作用及对相关炎症细胞因子的影响.方法 建立脂多糖诱导的小鼠内毒素血症模型,取昆明小鼠64只,随机分为模型1组、原花青素1组(100 mg/kg)、原花青素2组(50 mg/kg)、原花青素3组(25 mg/kg),各16只;取昆明小鼠50只,随机分为空白组、模型2组、原花青素4组(100 mg/kg)、原花青素5组(50 mg/kg)、原花青素6组(25 mg/kg),各10只.比较各组血清一氧化氮(NO)、白细胞介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平变化.结果 模型1组小鼠存活率为18.75％,原花青素1、2、3组小鼠生存率分别为68.75％ 、56.25％ 和43.75％,差异均有统计学意义(P<0.05).模型2组小鼠血清IL-1β、TNF-α及NO水平显著高于空白组,差异均有统计学意义(P<0.01).原花青素4、5、6组小鼠血清IL-1β、TNF-α水平低于模型2组,差异均有统计学意义(P<0.01).与模型2组比较,原花青素4、5组小鼠对NO的产生或分泌有抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05).结论 原花青素能提高内毒素血症小鼠的存活率,对机体具有保护作用,其作用机制可能与抑制炎症因子NO、IL-1β、TNF-α的表达有关.

外科脓毒性感染

外科脓毒性感染(sepsis)的特点是具有化脓性感染灶和有可能造成全身性反应和器官功能的改变.一过性菌血症及内毒素血症均非脓毒性感染.脓毒性感染(以下简称感染)的细菌可来自外界侵入,也可来自机体本身,称内源性感染.无论外源性或内源性,都涉及感染源、传染途径与易感部位三个环节.

滋阴保肝汤治疗肝硬化的远期疗效以及对内毒血症的影响

目的:观察滋阴保肝汤治疗肝硬化的远期疗效以及对内毒血症的影响.方法:将86例肝硬化患者平均分为观察组和西医组,每组43例,两组均给予还原性谷胱甘肽、甘草酸二胺氯化钠治疗,西医组在此基础给予培菲康治疗,中药组给予滋阴保肝汤治疗,治疗疗程为6个月.比较治疗前后中医症候积分、肝功能、内毒素水平、血清炎性因子IL-6、PAF以及TNF-α水平,治疗疗效及1年随访复发率.结果:研究结果显示,治疗后观察组中医症候积分显著低于西药组(P＜0.05);肝功能指标ALT、AST、TBIL和内毒素水平显著低于西药组(P＜0.05);两组治疗后IL-6、PAF以及TNF-α水平较治疗前均有显著下降,观察组下降幅度较西药组更加明显(P＜0.05);观察组治疗总有效率为90.70％,显著高于西药组74.42％ (P＜0.05);1年随访复发率为6.98％,显著低于西药组的23.26％ (P＜0.05).结论:滋阴保肝方能改善肝硬化的临床症状,降低内毒素水平,抑制炎性因子活性,有显著的临床治疗效果和较为理想的远期疗效,值得临床推广应用.

柔肝健脾活血利湿方对肝硬化患者肠道菌群及内毒素血症的影响

目的:观察柔肝健脾活血利湿方对肝硬化患者肠道菌群及内毒素血症的影响.方法:收集2013年5月～2015年11月我院收治的78例肝硬化患者为研究对象,依据治疗方法不同分为西医组(38例)及中医组(40例),2组分别实施常规西药及柔肝健脾活血利湿汤治疗,观察治疗前后2组肠道菌群[大便肠球菌、酵母菌、双歧杆菌]数量、肠黏膜屏障功能[二胺氧化酶(DAO)、血清内毒素(ET)、降钙素(PCT)]、肝功能[丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)]、药物安全性及1年随访复发率.结果:治疗前2组大便肠球菌、酵母菌、双歧杆菌菌群数量、DAO、ET、PCT、ALT、AST、TBIL相较无明显差异(P＞0.05),治疗后2组大便肠球菌、双歧杆菌菌群数量较治疗前明显增加,酵母菌明显减少,DAO、ET、PCT、ALT、AST、TBIL明显降低,且中医组增加、减少、降低幅度较西医组明显,中医组1年后随访复发率5.00％较西医组明23.68％显低,有统计学意义(P＜0.05).结论:柔肝健脾活血利湿方可有效改善肝硬化患者肠道菌群、内毒素血症、肠粘膜屏障功能及肝功能,且复发率低、安全性高,有临床应用价值.

解毒化瘀颗粒治疗慢性重型肝炎内毒素血症的临床研究

目的:观察解毒化瘀颗粒对慢性重型肝炎内毒素血症的临床疗效.方法:将110例慢性重型肝炎患者随机分为对照组55例和治疗组55例；对照组给予西医综合治疗,治疗组在对照组的基础上加用解毒化瘀颗粒口服,比较两组患者的肝功能和内毒素等的变化情况及预后.结果:经治疗后,治疗组患者肝功能的改善率及血清LPS下降的程度,与对照组比较均具有显著性差异(P＜0.05)；治疗组的总有效率明显高于对照组(P＜0.05).结论:解毒化瘀颗粒对慢性重型肝炎内毒素血症具有较好的临床疗效,值得对其疗效机制做进一步深入研究.