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孕激素受体膜成分1在子宫内膜癌中表达及对细胞增殖的影响
目的:检测子宫内膜癌组织中孕激素受体膜成分1(PGRMC1)的蛋白表达特点,分析其临床意义;并探讨PGRMC1对子宫内膜癌细胞增殖调控的影响.方法:采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测70例子宫内膜癌组织及28例对照子宫内膜组织中PGRMC1蛋白表达水平;应用细胞免疫组化方法检测三种人子宫内膜癌细胞系中PGRMC1的表达定位;将PGRMC1的小分子抑制剂Ag205以不同浓度分别刺激人子宫内膜癌细胞Ishikawa、Hec-1A、KLE 72小时,应用CCK-8(cell counting kit 8)方法检测Ag205对细胞活力的影响.结果:子宫内膜癌组织中PGRMC1表达较正常内膜显著升高(P =0.038);PGRMC1在各期子宫内膜癌组织中的表达无差异,但在Ⅰ期患者中,PGRMC1在Ⅰ a期表达较Ⅰb期显著高(P =0.019);PGRMC1表达与子宫内膜癌组织中ER表达水平相关(P=0.015),但与分化程度、淋巴结转移及脉管癌栓无关,与PR、p53、Ki-67及bcl-2表达亦无显著相关性;20μM Ag205显著抑制三种子宫内膜癌细胞的增殖活力,其中以KLE细胞的抑制作用明显,从低浓度(5μM)即出现抑制效应,并随浓度增加抑制作用逐步增强.结论:子宫内膜癌内膜中PGRMC1表达显著增高;增高的PGRMC1参与调控子宫内膜癌细胞的增殖活性.
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急性肺栓塞后线粒体前凋亡蛋白的表达及其促细胞凋亡机制研究
目的 研究大鼠急性肺栓塞(APE)后肺组织中线粒体前凋亡蛋白(ARTS)的表达变化及其诱导的细胞凋亡.方法 采用自体血栓栓塞颈总动脉制备大鼠APE模型.分别在APE前(对照)和APE后1、8、24和48 h开胸取肺脏.常规提取肺组织的总RNA和总蛋白,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测ARTS mRNA表达水平,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)进一步验证ARTS以及ARTS诱导凋亡相关蛋白Bcl-2、Bcl-xL、XIAP和H2Ax的表达变化,用免疫组化法检测肺组织中ARTS在APE前后的表达变化及其组织分布情况,用原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测肺组织内细胞凋亡情况.结果 APE后ARTS的mRNA及蛋白表达水平均升高,于1 h和48 h升高明显(P
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OSAS模式IH对肺癌细胞系YAP以及P-YAP表达的影响
目的：探讨阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（OSAS）模式间歇低氧（IH）对肺癌细胞系A549细胞YES相关蛋白（YAP）及磷酸化YAP（P-YAP）表达的影响。方法 IH分别处理A549细胞1 h、3 h、6 h（IH1组、IH3组、IH6组）， IH频率为：5%O2300 s，21%O2300 s，并设置常氧对照组（N组）。qRT-PCR检测YAP mRNA表达；Western blot检测YAP及P-YAP蛋白表达。结果 IH1组（2.50±0.18）、IH3组（4.07±0.25）、IH6组（9.18±0.58）YAP mRNA的相对表达量显著高于N组（1.00±0.01），差异有统计学意义（均P＜0.05），IH1组、IH3组、IH6组YAP蛋白的表达量较N组上调，并随暴露时间增加而上调；IH1组、IH3组、IH6组P-YAP蛋白的表达量较N组下调，并随暴露时间增加而下调。结论 YAP信号通路可能在OSAS模式IH促进肿瘤发生发展的过程中起重要的调控作用。
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肿瘤侵犯相关蛋白自分泌运动因子在瘢痕疙瘩中的表达
背景:肿瘤侵犯相关蛋白自分泌运动因子在肿瘤细胞中表达量增高,并可增强肿瘤细胞的生长、侵犯和转移能力,而瘢痕疙瘩具有恶性肿瘤生物学特性.目的:了解肿瘤侵犯相关蛋白自分泌运动因子在人体瘢痕疙瘩、增生性瘢痕、生理性瘢痕组织中的表达情况.方法:生理性瘢痕、增生性瘢痕、瘢痕疙瘩患者各20例,切取3种瘢痕组织;用组织免疫荧光染色法观测3种瘢痕组织中自分泌运动因子的分布及相对表达量;用蛋白质免疫印迹法和荧光定量PCR检测3种瘢痕组织中的自分泌运动因子蛋白水平和基因水平的表达.结果与结论:在组织水平、蛋白水平、基因水平上,生理性瘢痕和增生性瘢痕组织中自分泌运动因子的表达较低,且二者分布及相对表达量差异无显著性意义,而瘢痕疙瘩组织中,自分泌运动因子在3个水平上的表达强度明显增高,与前二者比较差异有显著性意义(P < 0.01).结果提示自分泌运动因子与瘢痕疙瘩的肿瘤生物学特征有着密切的关系.
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中枢注射抗Orexin抗体对禁食大鼠摄食的抑制作用
目的:探讨中枢注射抗Orexin抗体对禁食大鼠摄食的抑制作用.方法:采用免疫组织化学法和蛋白质免疫印迹分析法,对Orexin抗体的特异性进行了检测,分析Orexin阳性神经元和阳性神经纤维在大脑中的分布.给予24 h禁食大鼠中枢注射抗Orexin抗体,计算其对大鼠食物摄入量的影响.结果:蛋白质免疫印迹分析显示,Orexin抗体能够检测到合成的Orexin-A.免疫组织化学分析显示,Orexin阳性神经元存在于外侧下丘脑区域和穹窿周核,Orexin阳性神经纤维大量投射至弓状核、下丘脑室周核和下丘脑室旁核、菱形丘脑核、丘脑室旁核、缰内侧核和纹质丘脑、中脑的中央灰质区、蓝斑核和中缝核、脑桥和髓质的网状结构、对疑核和迷走神经复合体.与注射羊血清相比,给予45 μg/10 μL抗Orexin抗体侧脑室注射则抑制了大鼠的食物摄入量(P＜0.05).高剂量抗Orexin抗体能显著地抑制大鼠摄食,并且呈剂量依赖关系(P＜0.05).结论:中枢注射抗Orexin抗体对禁食大鼠摄食具有抑制作用,并呈剂量依赖关系.
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Western blot免疫印迹法检测磷酸化蛋白表达条件优化研究
目的:探讨Western blot免疫印迹法不同转膜方法和不同抗原抗体比例对磷酸化蛋白表达的检测效果.方法:选择肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)及其磷酸化蛋白作为研究对象,比较半干转印法、湿转法和1∶3000、1∶5000、1∶10000等抗体稀释比例对磷酸化蛋白检测效果的影响.结果:半干转印法(恒压16V,30 min)观察到蛋白信号断续;而同样样品利用湿转法(恒压130V,1h)检测发现信号连续且强度明显增高;对于磷酸化蛋白,半干转印法无法观察到磷酸化蛋白信号;而同样样品湿转法检测出现连续信号.统一利用湿转方法进行后续蛋白磷酸化检测,当抗体稀释比为1∶3000时,结果出现非特异性条带;降低抗体稀释比为1∶5000时无非特异性条带,且蛋白信号效果较好;抗体稀释比为1∶10000时条带图像出现弥散且背景较高.结论:选择合适的转膜方式和抗原抗体比例有助于磷酸化蛋白表达检测.
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田鼠巴贝虫抗原组分免疫鉴定与质谱分析
目的 分析田鼠巴贝虫可溶性抗原蛋白组分,寻找敏感、特异的诊断候选抗原.方法 用田鼠巴贝虫感染BALB/c小鼠,待红细胞感染率达到高峰时(感染率＞70％),收集虫体,制备可溶性抗原;同时收集BALB/c小鼠的本底血清和感染田鼠巴贝虫7、14、21、28、35、42、49和56 d后的血清;聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)分析可溶性抗原的蛋白组分,蛋白质免疫印迹法(Western blot)分析可溶性抗原的免疫反应性,选择阳性反应条带进行质谱鉴定和序列分析.结果 可溶性抗原经SDS-PAGE分析,可观察到9条主带和12条次带,蛋白条带的相对分子质量(Mr)介于(12～185)×103(kDa);Western blot结果显示感染后7d的混合鼠血清可识别Mr为40和45 kDa的蛋白条带且反应较强,感染后14d的混合鼠血清可识别Mr为40、45、54和95 kDa的蛋白条带,感染后21 d的混合鼠血清可识别Mr为27、40、45、54、95和110 kDa的蛋白条带,感染后28 d至感染56 d的混合鼠血清均可识别Mr为27、40、45、54、95和110 kDa的蛋白条带且随着感染时间的延长出现其他的弱反应条带.阳性反应条带通过质谱鉴定和序列分析,共确定336个蛋白,包括表面抗原、热休克蛋白70、血清反应抗原、含t-复合物多肽伴侣蛋白的Eta亚基1和未命名蛋白.结论 田鼠巴贝虫可溶性抗原中Mr为40、45、54 kDa的组分是较好的诊断候选抗原,在田鼠巴贝虫病诊断中的应用前景值得进一步研究.
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灵芝多糖对非酒精性脂肪肝大鼠PPARγ和环氧合酶-2表达的影响
目的:探讨灵芝多糖(GLPs)对非酒精性脂肪肝大鼠的防治作用及其对过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR γ)和环氧合酶-2(COX-2)表达的影响.方法:SD大鼠72只随机分为6组,每组 2只,正常对照组(N组),模型组(M组),灵芝多糖低、中、高剂量组(GLPs-L、GLPs-M、GLPs-H组)和辛伐他汀组(SV组).用高脂饲料喂养建立大鼠非酒精性脂肪肝模型.经 2周给药后,分别测定各实验组ALT、AST、脂联素和肿瘤坏死因子-α的含量；透射电镜观察肝组织超微结构；用逆转录聚合酶链反应法和Western Blot检测肝组织中PPARγ和COX-2 mRNA和蛋白的表达情况.结果:(1)灵芝多糖中、高剂量组血清ALT、AST和肿瘤坏死因子-α含量显著降低,而脂联素含量则明显升高(P＜0.05或P＜0.01),差异均有统计学意义；(2)肝组织病理学结果显示,M组大鼠肝组织中充满大小不等的脂滴,线粒体肿胀,染色体边集等；(3)M组肝组织PPAR γmRNA和蛋白的表达显著降低(P＜0.05或P＜0.0 ),而COX-2 mRNA和蛋白的表达显著升高(P＜0.01),灵芝多糖中、高剂量组PPAR γmRNA和蛋白的表达显著升高(P＜0.05或P＜0.01),同时COX-2 mRNA和蛋白的表达显著降低(P＜0.05或P＜0.01),差异均有统计学意义.结论:灵芝多糖能改善胰岛素抵抗,降低炎症因子的表达,对非酒精性脂肪肝有一定的防治作用.
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靶向蛋白酪氨酸磷酸酶1B小分子干扰RNA对结肠癌LoVo细胞增殖和成瘤能力的影响
目的:探讨沉默蛋白酪氨酸磷酸酶2B(PTP1B)基因的RNA干扰对人结肠癌LoVo细胞增殖和成瘤能力的影响.方法:应用小分子干扰RNA(siRNA)技术沉默PTP1B的表达(shRNA-PTP1B),采用逆转录聚合酶链反应和Western Blot分别在mRNA和蛋白水平检测抑制效果.CCK-8被用于检测沉默PTP1B表达对肿瘤细胞增殖的影响.在体外实验的基础上建立裸鼠模型,建立稳定表达干扰RNA细胞系,观察干扰RNA稳定表达对人结肠癌裸鼠移植成瘤的影响.结果:shRNA-PTP1B有效沉默LoVo细胞PTP1B mRNA及蛋白的表达,成功筛选shRNA-PTP1B稳定表达细胞株LoVo/shRNA细胞.在体外试验中与对照组比较LoVo/shRNA细胞的增殖能力明显下降.LoVo/shRNA细胞裸鼠移植成瘤体积,明显减小(P均＜0.05).结论:shRNA-PTP1B可以沉默人结肠癌PTP1B基因的表达,显著抑制LoVo细胞的增殖,降低LoVo细胞的成瘤能力.
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中华眼镜蛇毒F组分对血管平滑肌细胞增殖的影响
目的:研究中华眼镜蛇毒F组分对血管平滑肌细胞增殖的影响.方法:用体外培养的血管平滑肌细胞,观察F组分对20%小牛血清引起的细胞对氚标胸腺嘧啶核苷酸(H3-TdR)掺入的影响,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)测定F组分对20%小牛血清引起的细胞内原癌基因、核增殖抗原(Pro-1iferation cell nuclear antigen,PCNA)表达的影响.结果:F组分呈浓度依赖性抑制20%小牛血清引起的细胞对H3-TdR掺入率和细胞内C-myc、PCNA的表达,其中30、100mg·L-1给药组与对照组比较有显著差异(P＜0.05).结论:中华眼镜蛇毒F组分通过影响细胞内原癌基因C-myc、PCNA的表达,抑制血管平滑肌细胞的增殖.
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中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义
目的:通过研究子宫内膜癌(EC)组织中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的表达情况,初步探讨NGAL在不同临床特征EC中的表达特点及其在EC发生发展中可能的作用.方法:选取1999年1月至2012年12月在北京大学第一医院就诊的子宫内膜癌患者标本77例和正常子宫内膜24例,同期培养子宫内膜癌Ishikawa、HEC-1-A及KLE细胞株,Westem blot法检测NGAL蛋白的表达.结果:(1)NGAL在正常子宫内膜中几乎不表达,EC患者内膜中NGAL表达显著高于正常内膜(P=0.000);(2)正常子宫内膜、非典型伴癌变、高分化癌、中分化癌及低分化癌中NGAL表达有显著差异(P=0.002),其中高、中分化EC中NGAL表达水平均显著高于正常内膜(P=0.010,P=0.000);(3)EC患者中,血清CA125阳性者的NGAL表达水平显著低于阴性者(P=0.026);(4) NGAL的表达与年龄、病理分型、FIGO分期、淋巴结转移及脉管癌栓等均无关(P＞0.05).结论:(1) NGAL在EC的发生发展中可能发挥二重性作用;(2) NGAL与肿瘤分化密切相关,高表达于高分化EC,可能为早期内膜癌变的标记物;(3)联合应用NGAL与血清CA125检测,可能在早期EC筛查和晚期EC的病情监测有一定的临床意义.
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贵州遵义地区82只健康蝙蝠脑组织博尔纳病毒核蛋白检测
目的 观察贵州遵义地区蝙蝠脑组织博尔纳病毒(BDV)感染情况.方法 采用Western blotting法检测贵州遵义地区82只健康蝙蝠脑组织中BDV核蛋白.结果 蝙蝠脑组织BDV核蛋白阳性率为12.2%(10/82).结论 贵州遵义地区健康蝙蝠存在BDV感染.
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风湿性心脏病心房颤动患者心房肌HCN2通道的表达变化
目的 通过研究风湿性心脏瓣膜病(风心病)心房颤动(Af)患者心房肌超极化激活环核苷酸门控通道-2(HCN2)的表达变化,探讨其与Af发生维持的关系,为分析Af发生维持的机制奠定理论基础.方法 选取风心病二尖瓣狭窄患者42例,根据是否合并Af将其分为两组,Af组23例,窦性心律组19例,术中取右心耳组织,应用蛋白质免疫印迹法(Western blot)分别测定两组HCN2通道的表达水平.结果 Af组和窦性心律组中HCN2通道在心房肌组织中的相对表达量分别是(0.45±0.19)和(0.24±0.12),两组间比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 心房肌组织中HCN2通道的表达上调,可能是风心病Af的分子机制之一,参与调控Af的发生和维持.
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糖皮质激素诱导胰岛素抵抗的分子机理
目的探讨糖皮质激素对原代培养老鼠脂肪细胞的糖转运活动及胰岛素信号肽的影响.方法分离的老鼠脂肪细胞在5mmol浓度葡萄糖加地塞米松0.3μmo1分别孵育2h、8h、16h和24h,然后测定糖的转运活动;用Western blotting测定细胞内胰岛素受体底物(IRS)1/2、肌醇磷脂-3-激酶85亚单位(p85)和蛋白激酶B(PKB)的蛋白表达.结果地塞米松治疗抑制了基础的和胰岛素刺激的葡萄糖转运活动,产生大抑制作用时间分别为2h和24h,对IRS1的蛋白表达的抑制作用与培养的时间长短成正比.同时,它也削弱了p85和PKB的蛋白表达;但对IRS2呈现上调作用.结论糖皮质激素可以抑制葡萄糖的转运活动,诱导胰岛素抵抗.其机理可能与改变胰岛素信号肽的表达等因素有关.
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PDGF-AA在宫腔粘连患者子宫内膜组织中的表达及意义
目的 探讨PDGF-AA在宫腔粘连患者子宫内膜组织中的表达及意义.方法 选取2015年6月至2016年3月于本院行宫腔粘连分离术的IUA患者80例为研究组(其中轻度粘连22例,中度粘连30例,重度粘连28例);同期因无孕产史的不孕症、子宫纵膈且病理提示子宫内膜正常的30例为对照组.采用蛋白质免疫印迹法和免疫组化法,比较两组患者子宫内膜组织中PDGF-AA的表达情况,并进行比较分析.结果 研究组子宫内膜组织中的PDGF-AA表达明显高于对照组(P<0.05),且随着粘连程度的增加,PDGF-AA的表达随之增强,重度粘连组中的表达高于中度粘连组(P<0.05),中度粘连组中的表达高于轻度粘连组(P<0.05).结论 宫腔粘连患者子宫内膜组织中PDGF-AA的表达升高可能会促进IUA的发生、发展,且其表达含量的增加与粘连严重程度密切相关.
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化湿行瘀清热方剂对口腔扁平苔藓患者唾液中差异蛋白的影响
目的：筛选鉴定口腔扁平苔藓（OLP）治疗前后唾液中的差异蛋白，探讨化湿行瘀清热方剂对口腔扁平苔藓患者唾液中差异蛋白的影响。方法：收集OLP患者化湿行瘀清热方剂治疗前后的唾液，提取唾液总蛋白，应用双向荧光差异凝胶电泳和液相色谱－质谱联用技术筛选鉴定差异蛋白，蛋白质印迹法检测差异蛋白的表达情况。结果：筛选鉴定出OLP患者化湿行瘀清热方剂治疗前后6种差异蛋白：分泌型IgA、血清白蛋白、IgM、唾液淀粉酶、碳酸酐酶6、锌α2糖蛋白。 OLP 患者治疗后较治疗前唾液中 IgA 表达量升高，血清白蛋白、IgM、碳酸酐酶6 和锌α2糖蛋白治疗后较治疗前表达量下降，差异具有统计学意义（P ＜0．05）。结论：OLP患者化湿行瘀清热方剂治疗前后唾液中存在差异蛋白，并可能在OLP的发生发展中起着重要作用。
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脑源性神经营养因子经由环磷酸腺苷反应元件结合蛋白磷酸化对缺氧大鼠胚脑皮质神经元细胞的保护作用
转录因子环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(Cyclic AMP response element-binding protein,CREB)是胚脑皮质神经元细胞内脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)诱导基因表达的重要调节因子.我们前期的研究表明BDNF对缺氧性神经元损伤具有保护作用,为了阐明BDNF对缺氧性神经元损伤的保护作用是否经过了核蛋白CREB的磷酸化,本研究采用蛋白质免疫印迹法检测单纯缺氧组和BDNF干预组胚脑皮质神经元细胞内CREB及Ser133磷酸化CREB在不同时间点表达水平的变化.结果显示缺氧及BDNF均能刺激胚脑皮质神经元细胞内Ser133磷酸化CREB表达增加,在不同缺氧时间点BDNF干预组Ser133磷酸化CREB表达水平较单纯缺氧组明显增强 (P＜0.01), BDNF干预组1 h后Ser133磷酸化CREB表达至高峰,以后持续表达维持6 h以上,维持时间较单纯缺氧组明显延长;在缺氧0～3 h, BDNF干预组细胞内总CREB表达水平与单纯缺氧组基本一致;随着缺氧时间的延长,单纯缺氧组细胞内CREB表达明显减少,以第5～6 h明显.结果表明,BDNF对缺氧性神经元损伤的保护作用经过了核蛋白CREB的磷酸化.
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LKB1在急性白血病中的表达及临床意义
目的:研究LKB1(liver kinase B1)基因在不同类型急性白血病中的表达情况,探讨LKB1基因与急性白血病发生的相关性.方法:回顾性选取2016年6月至2017年6月初次诊断的急性白血病患者骨髓标本32例,同时选取非恶性血液系统疾病患者骨髓标本12例作为对照组.提取骨髓标本中单个核细胞,应用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测两组间患者LKB1基因表达情况,并分析其与患者年龄、性别及不同类型急性白血病的关系.结果:LKB1基因表达与年龄、性别无显著相关性.对照组12例中,有12例LKB1为阳性.根据疾病类型将白血病组分为3组:急性非淋巴细胞白血病组19例,其中LKB1阳性为9例,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);急性B淋巴细胞白血病组8例,其中LKB1阳性为3例,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);急性T淋巴细胞白血病组5例,其中LKB1阳性为5例,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).追踪患者治疗效果,提示LKB1+组的1疗程CR率及2疗程CR率均较LKB1-组高,且复发难治的患者比例较LKB1-组低.结论:LKB1基因在急性非淋巴细胞白血病及急性B淋巴细胞白血病的发生发展中起到了一定的作用,而急性T淋巴细胞白血病的发病机制可能与前两者不同.LKB1阴性可能提示预后不良.
