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2015年甘肃省白银市食源性腹泻患者诺如病毒检测结果分析
目的 分析2015年甘肃省白银市食源性疾病监测人群诺如病毒检测结果,为科学制定诺如病毒引起食源性疾病的预测、预警及防控提供参考依据.方法 对在医院就诊的344例食源性疾病监测病例进行问卷调查,采集粪便标本,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(荧光定量RT-PCR)方法检测诺如病毒GⅠ和GⅡ基因组.结果 2015年白银市报告的344例食源性疾病病例中,检出诺如病毒阳性病例78例,检出率为22.7％(78/344),其中诺如病毒GⅠ基因组阳性5例,GⅡ基因组阳性71例,GⅠ/GⅡ基因组混合感染2例;男性46例,女性32例;阳性患者中年龄大者83岁,小者仅3个月,平均年龄为20.3岁.结论 2015年白银市食源性疾病病例中,诺如病毒检出率较高,全年均流行,但流行季节主要在秋冬季,诺如病毒GⅡ基因组为优势组,应加强公众科普宣传教育,提高诺如病毒监测检测能力,完善风险管理措施.
关键词： 诺如病毒 食源性疾病 风险监测 实时荧光定量聚合酶链式反应 甘肃 -
含扩增内对照的霍乱毒素基因ctx和不耐热肠毒素基因elt三重real-time PCR检测体系的建立
目的：建立一个含扩增内对照（IAC）的三重TaqMan real-time PCR体系，以检测霍乱毒素基因ctxA和肠产毒性大肠埃希菌的不耐热肠毒素基因elt。方法针对ctxA、elt和IAC设计引物和探针，进行灵敏性和特异性分析，评价三重反应之间的互相影响。结果该检测体系灵敏度为ctxA每个反应94拷贝，elt每个反应79拷贝，扩增效率分别为94.7%与98.1%。ctxA与elt拷贝数比例为1∶1～1∶10时，二者均能良好扩增；elt或ctxA的量是IAC的100倍以上时，IAC扩增受到抑制。结论该检测体系具有良好的灵敏性和特异性，可以用于腹泻粪便中感染病原菌的检测，其中内对照检测可以提示粪便样本中是否存在PCR抑制因子。
关键词： 霍乱毒素 不耐热肠毒素 实时荧光定量聚合酶链式反应 -
视神经横断后生长抑制因子Nogo及其受体NgR mRNA表达的变化及意义
观察大鼠视神经横断后Nogo-A及其受体NgR mRNA表达的变化.将36只正常成年SD大鼠随机分为三组,视神经横断7d组、14d组和正常对照组,每组12只.分别提取视神经组织,使用实时荧光定量聚合酶链式反应法定量分析Nogo-A及NgR mRNA表达量的变化.实验结果显示,在大鼠的视神经组织中存在Nogo-A及其受体NgR基因的表达.与对照组相比,视神经横断7d后Nogo-A表达显著减少(P<0.05);视神经横断14d后,其表达较横断7d组显著增加(P<0.05),但仍明显低于对照组(P<0.05).NgR在视神经横断7d后与对照组相比,表达显著减少(P<0.05),视神经横断14d后,其表达较横断7d组无显著差异(P>0.05).视神经完全横断伤后Nogo-A mRNA表达先下降再升高,NgR mRNA 表达下降并基本保持在同一水平.
关键词： 视神经 轴突横断术 大鼠 生长抑制因子 实时荧光定量聚合酶链式反应 -
巢式PCR和实时荧光定量PCR在莱姆病宿主动物监测中的应用评价
目的 应用巢式PCR和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测啮齿动物中伯氏疏螺旋体的带菌率,对2种方法在莱姆病宿主动物监测中的应用效果进行评价.方法 2017年7-9月,在新疆维吾尔自治区(新疆)古尔图地区野外放置鼠夹,采集啮齿动物,并鉴别种类;采用巢式PCR和qRT-PCR 2种方法检测标本携带伯氏疏螺旋体情况,并对2种方法的检测结果进行统计学分析.对巢式PCR检测的阳性标本进行测序和序列比对分析,以初步确定伯氏疏螺旋体的基因型别.结果 共检测啮齿动物标本134份,巢式PCR和qRT-PCR检测阳性率分别为13.43％和12.69％,差异无统计学意义(x2=0.000,P=1.000);阳性标本均为长尾黄鼠,总阳性率为20.15％,其中8份标本经2种方法检测结果均为阳性;10份巢式PCR检测为阳性的标本经qRT-PCR检测为阴性,9份qRT-PCR检测为阳性的标本经巢式PCR检测为阴性.采用qRT-PCR方法共检出伯氏疏螺旋体阳性17份,阳性样本Ct值为33.49～37.89.结论 2种方法均可用于啮齿动物的伯氏疏螺旋体检测,同时使用2种方法可提高伯氏疏螺旋体的检出率.巢式PCR方法检测可以了解新疆古尔图地区啮齿动物感染伯氏疏螺旋体的基因型别;而qRT-PCR方法则可对标本中的细菌载量进行定量分析.
关键词： 伯氏疏螺旋体 啮齿动物 巢式聚合酶链式反应 实时荧光定量聚合酶链式反应 -
两种方法检测鼠疫耶尔森菌Pla片段的研究
目的 研究Southern印记杂交方法检测鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)Pla片段的有效性.方法 采用Southern印记杂交技术与鼠疫菌核酸测定试剂盒两种方法对鼠疫菌Pla片段进行检测.结果 两种方法检测结果相同,Southern印记杂交技术可直观地观察pla基因拷贝数,杂交效率较高;实时荧光定量PCR检测结果为阳性.结论 Southern印记杂交技术适用于鼠疫菌Pla片段的检测.
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罗格列酮对高脂饮食诱导非酒精性脂肪肝大鼠胰岛素抵抗及脂联素的影响
目的:探讨罗格列酮对高脂饮食所致的非酒精性脂肪肝大鼠模型胰岛素抵抗及脂联素的影响.方法:30只大鼠随机分为3组,即模型组(高脂饮食+蒸馏水ig),空白对照组(正常饲料+蒸馏水ig)和罗格列酮组[高脂饮食+罗格列酮3mg/(kg·d)ig].观察各组血脂、肝功、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的变化和各组肝组织HE染色与脂肪特异性的苏丹Ⅲ染色的变化.采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)和免疫印迹(western blot)检测各组肝组织的脂联素水平.结果:模型组与空白对照组相比,甘油三酯(TG)(1.51±0.37 mmol/L vs 0.98±0.51 mmol/L,P＜0.01),总胆固醇(TC)(2.74±0.65 mmol/Lvs 1.71±0.37 mmol/L,P＜0.05),ALT(450.20±244.12 U/L vs 264.56±48.44 U/L,P＜0.01),AST(460.30±310.13 U/L vs 196.11±52.23U/L,P＜0.01)和HOMA-IR(3.46±1.16 vs 1.07±0.26,P＜0.01)均显著升高.罗格列酮治疗可使TG(1.27±0.50 mmol/L),ALT(360.26±244.37U/L),AST(300.20±233.13 U/L)以及HOMRIR(1.44±0.37)得到明显改善(均P＜0.05).从组织病理学亦可得到证实.肝组织实时荧光定量PCR及免疫印迹显示罗格列酮组的Adiponectin mRNA(552.40±268.1 3 vs 215.95±135.87,P＜0.05)和蛋白表达均较模型组升高.结论:高脂饮食可诱导大鼠NAFLD和IR发生,并使肝功,血脂异常升高.罗格列酮可以改善高脂饮食大鼠的脂肪肝及IR情况,可能与Adiponectin缓解IR和NAFLD改善有关.
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实时荧光定量聚合酶链式反应检测瘢痕疙瘩中核心蛋白多糖的表达
目的 探讨瘢痕疙瘩成纤维细胞中核心蛋白多糖的表达、含量,及其在瘢痕疙瘩形成中的作用和机制.方法对瘢痕疙瘩、正常瘢痕以及正常皮肤成纤维细胞进行体外培养,采用光镜、透射电镜观察成纤维细胞形态、活性及凋亡；应用实时荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)对核心蛋白多糖以及β1转化生长因子(TGF-β1)的mRNA表达进行检测、分析.结果 瘢痕疙瘩成纤维细胞形态不规则、排列紊乱,线粒体增多,粗面内质网扩张呈囊,细胞核常染色质丰富,表明其合成蛋白的功能活跃；瘢痕疙瘩成纤维细胞中核心蛋白多糖mRNA含量较正常瘢痕或正常皮肤成纤维细胞降低,而TGF-β1 mRNA表达则较正常皮肤及瘢痕组织成纤维细胞升高.结论 核心蛋白多糖在瘢痕疙瘩成纤维细胞内含量较正常皮肤明显减少,提示其对成纤维细胞增殖、合成的抑制作用随之减弱,同时使TGF-β1表达上调,导致成纤维细胞的大量增生、迁移,合成过量胶原.表明核心蛋白多糖是抑制瘢痕疙瘩形成的重要因子.
关键词： 瘢痕疙瘩 核心蛋白多糖 β1转化生长因子 成纤维细胞 实时荧光定量聚合酶链式反应 -
关键词：
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实时荧光定量聚合酶链式反应与快速培养法在肺炎支原体检验中的应用效果观察
目的研究实时荧光定量聚合酶链式反应与快速培养法在肺炎支原体检验中的应用效果。方法选择2013年3月～2015年3月我院接诊的200例疑似肺炎支原体感染的患者进行研究，采用实时荧光定量聚合酶链式反应与快速培养法对患者的咽拭子进行支原体检测分析。结果快速培养法的检测结果显示：敏感度为83.48%，特异度为75.29%，诊断符合率为诊断符合率为80.00%。实时荧光定量聚合酶链式反应的检测结果显示：敏感度为84.31%，特异度为81.63%，诊断符合率为83.00%。两种方法联合的检测结果显示：敏感度为90.90%，特异度为91.14%，诊断符合率为91.00%。实时荧光定量聚合酶链式反应联合快速培养法诊断的敏感度、特异度及诊断符合率均明显高于两种检测手段的单独检测，差异有统计学意义（P<0.05）。但两种检测手段的结果不完全一致（一致率为76.00%）。结论实时荧光定量聚合酶链式反应与快速培养法联合对肺炎支原体进行检测，可显著提高检测的灵敏度、特异度和诊断符合率，值得广泛推广。
关键词： 肺炎支原体 实时荧光定量聚合酶链式反应 快速培养法 -
非小细胞肺癌中间质细胞衍生因子-1及神经生长因子的表达及其临床意义
目的:探讨间质细胞衍生因子-1(SDF-1)与神经生长因子(NGF)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床意义.方法:收集2014年2月-2016年5月本院胸外科手术切除的人NSCLC病理标本65例作为观察组,其中观察组按不同病理级别分为了Ⅰ级15例为Ⅰ组,Ⅱ级24例为Ⅱ组,Ⅲ级26例为Ⅲ组.同时随机选择健康者正常肺组织标本64例为对照组,各组组织均使用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测SDF-1与NGF mRNA,同时采用免疫组化法检测各组组织中SDF-1与NGF蛋白的表达情况.并分析比较各组组织中SDF-1与NGF mRNA及蛋白表达情况.结果:观察组SDF-1与NGF mRNA基因表达量及蛋白阳性率均高于对照组(P＜0.05);Ⅲ组SDF-1与NGF mRNA基因表达量及蛋白阳性率均高于Ⅱ组(P＜0.05);Ⅱ组SDF-1与NGF mRNA基因表达量及蛋白阳性率均高于Ⅰ组(P＜0.05);NSCLC组织中SDF-1与NGF mRNA基因表达量及蛋白阳性率随病理级别的增高而增高(P＜0.05).SDF-1和NGF高表达均是预测NSCLC预后不良的独立因素(P＜0.01),SDF-1和NGF的高表达与NSCLC患者整体不良预后显著相关(P＜0.01).结论:NSCLC中SDF-1与NGF高表达对病变进展有一定促进作用,两者与肿瘤的病理级别密切相关,SDF-1与NGF在NSCLC的发生发展中扮演重要的角色,有望为NSCLC的临床检测及治疗提供新思路.
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PARP蛋白在食管癌肿瘤组织中的表达水平及临床意义
[目的]探讨聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)在食管癌肿瘤组织中的表达水平及临床意义.[方法]选取2014年5月至2015年2月在我院进行手术的食管癌患者84例作为观察组,另选20例健康体检者的正常食管黏膜组织作为对照组.采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative Real-time polymerase chain reaction,QRT-PCR)法分别检测两组标本中PARP mRNA的表达水平;采用免疫组化法分别检测两组标本中PARP蛋白表达水平.同时,分析PARP表达水平与临床病理因素的关系.[结果]PARP mRNA在食管癌组织中的表达水平显著高于在对照组正常组织中的表达水平(P＜0.05);PARP蛋白在食管癌组织中的阳性表达率显著高于对照组正常组织(P＜0.05).PARP的表达情况与食管癌分化程度、TNM分期、浸润深度及淋巴结转移等密切相关(P＜0.05),与患者年龄、性别、肿瘤部位等无关(P＞0.05).[结论]PARP的过表达可能参与了食管癌的发生发展过程,检测PARP表达水平可能为食管癌患者的治疗提供重要辅助作用.
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OSAS模式IH对肺癌细胞系YAP以及P-YAP表达的影响
目的：探讨阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（OSAS）模式间歇低氧（IH）对肺癌细胞系A549细胞YES相关蛋白（YAP）及磷酸化YAP（P-YAP）表达的影响。方法 IH分别处理A549细胞1 h、3 h、6 h（IH1组、IH3组、IH6组）， IH频率为：5%O2300 s，21%O2300 s，并设置常氧对照组（N组）。qRT-PCR检测YAP mRNA表达；Western blot检测YAP及P-YAP蛋白表达。结果 IH1组（2.50±0.18）、IH3组（4.07±0.25）、IH6组（9.18±0.58）YAP mRNA的相对表达量显著高于N组（1.00±0.01），差异有统计学意义（均P＜0.05），IH1组、IH3组、IH6组YAP蛋白的表达量较N组上调，并随暴露时间增加而上调；IH1组、IH3组、IH6组P-YAP蛋白的表达量较N组下调，并随暴露时间增加而下调。结论 YAP信号通路可能在OSAS模式IH促进肿瘤发生发展的过程中起重要的调控作用。
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非小细胞肺癌中高迁移蛋白A2和血管内皮生长因子C的表达与淋巴转移的相关性
目的 研究在非小细胞肺癌中高迁移蛋白A2(HMGA2)和血管内皮生长因子C(VEGF-C)的表达与淋巴转移的相关性.方法 提取非小细胞肺癌组与正常肺组织的总RNA后,将其反转录为cDNA,以实时荧光定量聚合酶链式反应方法检测HMGA2和VEGF-C的表达.结果 HMGA2和VEGF-C在非小细胞肺癌组和正常肺组织组之间差异有显著性(P＜0.05).淋巴结转移组的HMGA2和VEGF-C的表达高于无淋巴结转移组(P＜0.05).结论 本研究提示HMGA2和VEGF-C在非小细胞肺癌组织存在高表达,HMGA2和VEGF-C的高表达可能与肺癌的转移有相关性.HMGA2和VEGF的联合检测有助于评价非小细胞肺癌预后,可能为研究非小细胞肺癌靶向治疗提供新思路.
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胶质瘤中间质细胞衍生因子-1及神经生长因子的表达及临床意义
目的 探讨间质细胞衍生因子-1(SDF-1)及神经生长因子(NGF)在胶质瘤中的表达及临床意义.方法 收集手术切除的人脑胶质瘤病理标本86例为观察组,其中观察组按不同病理级别分为Ⅰ级15例为Ⅰ组,Ⅱ级24例为Ⅱ组,Ⅲ级26例为Ⅲ组,Ⅳ级21例为Ⅳ组,同期随机选择颅脑外伤患者正常脑组织标本84例为对照组,2组组织均使用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测SDF-1与NGF mRNA,同时采用免疫组化法检测2组组织中SDF-1与NGF蛋白的表达情况.比较2组组织中SDF-1与NGF mRNA及蛋白表达情况.结果 观察组SDF-1与NGF mRNA基因表达量及蛋白阳性率均高于对照组(P<0.05);Ⅳ组SDF-1与NGF mRNA基因表达量及蛋白阳性率均高于Ⅲ组;Ⅲ组SDF-1与NGF mRNA基因表达量及蛋白阳性率均高于Ⅱ组;Ⅱ组SDF-1与NGF mRNA基因表达量及蛋白阳性率均高于Ⅰ组,胶质瘤组织中SDF-1与NGF mRNA基因表达量及蛋白阳性率随病理级别的增高而增高(P<0.05);胶质瘤组织中SDF-1 mRNA表达量及蛋白阳性率呈正相关(r=0.95,P<0.05),NGF mRNA表达量及蛋白阳性率呈正相关(r=0.96,P<0.05);SDF-1和NGF高表达均是预测胶质瘤预后不良的独立因素(P<0.01),SDF-1和NGF的高表达与胶质瘤患者整体不良预后显著相关.结论 胶质瘤中SDF-1与NGF高表达对病变进展有一定促进作用,二者与肿瘤的病理级别密切相关,两者相互作用,SDF-1与NGF在胶质瘤的发生发展中扮演重要的角色,有望为胶质瘤的临床检测及治疗提供新思路.
关键词： 胶质瘤 间质细胞衍生因子-1 神经生长因子 实时荧光定量聚合酶链式反应 免疫组化 -
血浆miR-21和miR-133a在缺血性心肌病中的表达水平及临床价值研究
目的 探究miR-21和miR-133a在缺血性心肌病(ICM)患者血浆中的表达水平及临床价值.方法 选择2012年9月-2013年5月在郑州大学第一附属医院心内科住院治疗的ICM患者48例为ICM组,同时选取该院30例健康志愿者为对照组.收集两组一般临床资料(性别、年龄、吸烟史、是否患有糖尿病等)及相关指标[总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及N末端B型脑钠肽原(NT-proBNP)、左心室舒张末期容积(LVEDV)、左心室射血分数(LVEF)],运用实时荧光定量聚合酶链式反应法(qRT-PCR)测定两组受试者血浆miR-21和miR-133a的表达水平,分析血浆miR-21和miR-133a水平与有关因素的相关性,评估血浆miR-21和miR-133a在ICM临床诊疗中的价值.结果 ICM组与对照组的性别、年龄、吸烟与否、是否患有糖尿病比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);而在是否行经皮冠状动冠介入术(PCI)方面比较,差异有统计学意义(P＜0.05).ICM组LDL-C、HDL-C及LVEF低于对照组,TG、NT-proBNP及LVEDV高于对照组(P＜0.05);两组舒张压、收缩压及TC比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).与对照组[(4.22±1.78)、(1.37±2.84)]相比,ICM组血浆miR-21和miR-133a水平[(8.10±2.93)、(3.28±1.62)]升高(P＜0.05).ICM组血浆miR-21水平与NT-proBNP和LVEDV呈正相关(r=0.342、0.317,P＜0.05),而ICM患者血浆miR-133a水平与年龄、LVEDV、LVEF、TC、TG、LDL-C、HDL-C及NT-proBNP均无直线相关性(P＞0.05);且经过偏相关分析(调整年龄、性别、吸烟史、糖尿病、高血压及NT-proBNP水平等因素)后,ICM组中血浆miR-21水平仍与LVEDV呈正相关关系(r =0.334,P＜0.05).结论 ICM患者血浆miR-21和miR-133a表达水平升高,血浆miR-21水平与NT-proBNP及LVEDV呈正相关,故血浆miR-21可能参与了ICM患者的心室重构,可作为ICM诊断及进行风险评估的新的生物标志物.
关键词： 心肌疾病 微RNAs 实时荧光定量聚合酶链式反应 -
癌胚抗原相关细胞粘附因子19与乳腺癌相关基因关系
目的 研究癌胚抗原相关粘附因子19(CEACAM19) mRNA表达水平与乳腺癌患者雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progestrone receptor,PR)、Her-2 (human Epidermal growth factor receptor type 2)及CA15-3(carbohydrate atigen 15-3)表达的关系及临床意义.方法 应用实时荧光定量聚合酶链式反应(realtime RT-PCR)方法检测52例乳腺原发癌和配对淋巴转移癌以及130例乳腺原发癌的CEACAM19 mRNA的表达水平,比较52例乳腺原发癌和配对淋巴转移癌以及130例乳腺原发癌的CEACAM19 mRNA的表达水平,分析CEACAM19 mRNA表达水平与ER、PR及Her-2表达的关系.结果 52例乳腺癌淋巴结转移癌CEACAM19 mR-NA表达水平(0.788 ±0.87)明显高于原发癌(0.431±0.381)(t=-3.289,P＜0.05).130例患者中,115例有雌激素受体检测结果,其中雌激素受体阳性组80例,CEACAM19 mRNA高表达者34例(34/80,42.5％);雌激素受体阴性组35例,CEACAM19 mRNA高表达24例(24/35,68.6％),2组CEACAM19 mRNA高表达占比差异有统计学意义(P＜0.05).CEACAM19 mRNA表达水平与孕激素受体、Her-2及CA15-3表达无相关性.结论 CEACAM19 mRNA的表达水平与乳腺癌患者雌激素受体表达水平有关.
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实时荧光定量PCR法检测人粪便中双歧杆菌方法的建立及评价
目的：建立利用实时荧光定量PCR法检测人粪便中双歧杆菌浓度的方法，为检测人肠道内菌群浓度提供有效手段。方法：提取60例儿童粪便样本中细菌总DNA。选择细菌种属的特异性基因16SrRNA作为扩增区，依据双歧杆菌的16 SrRNA序列共设计3条引物，以常规 PCR扩增出的16 SrRNA部分基因片段制作标准品，应用 SYBR Green Ⅰ双链嵌合染料，对连续稀释的标准品及待测样本进行分析，建立绝对定量的标准曲线，同时计算出待测样本双歧杆菌浓度；根据可检测到的标准品低拷贝数计算反应灵敏度；分析 PCR产物熔解曲线评价反应特异性；重复检测梯度稀释的标准品，用相同浓度标准品的Ct值变异系数（CV）评价反应稳定性。结果：常规PCR扩增出双歧杆菌16SrRNA部分基因片段长度约为613 bp，测序结果正确，成功构建了双歧杆菌实时荧光定量PCR反应中的标准品；生成的标准曲线R2＝0.999，低检测限度为每个反应1.48×102个拷贝；实时荧光定量PCR产物的熔解曲线为单峰。对待测样本分批进行荧光定量 PCR检测，各组间每微升1.48×103～1.48×107个拷贝浓度标准品Ct值的变异系数为2.94％、3.39％、3.54％、3.08％和3.34％。60份儿童粪便样本双歧杆菌浓度对数值为7.77±0.86（拷贝数·g-1湿便）。结论：本研究所建立的实时荧光定量 PCR法敏感性高、特异性强，且重复性好，适用于检测人粪便中双歧杆菌的浓度。
关键词： 实时荧光定量聚合酶链式反应 引物 标准曲线 双歧杆菌 -
鱼精蛋白1在结肠腺癌组织中的表达及其临床意义
目的 比较鱼精蛋白1 (Protamines 1,PRM1)在结肠腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 通过实时荧光定量PCR法检测53例结肠腺癌及正常结肠组织中PRM1基因mRNA水平,并分析PRM1 mRNA检测对于结肠腺癌诊断的敏感性;SP免疫组化染色法检测组织中PRM1蛋白的表达水平.结果 结肠腺癌组织中PRM1基因mRNA水平明显高于正常结肠组织,差异有统计学意义(P＜0.05),总体阳性率为96.23％(51/53);结肠腺癌组织高表达PRM1,且能够分泌入腺腔.结论 结肠腺癌细胞在基因及蛋白水平均高表达PRM1,PRM1 mRNA检测对结肠腺癌的诊断具有参考价值.
关键词： 鱼精蛋白 结肠腺癌 实时荧光定量聚合酶链式反应 -
实时荧光定量PCR检测多房棘球蚴感染小鼠肝脏丝氨酸蛋白酶抑制基因方法的建立
目的 建立多房棘球蚴(泡球蚴)感染小鼠肝脏丝氨酸蛋白酶抑制基因(Serpina3g)实时荧光定量PCR(RT-qPCR)的检测方法及与常规RT-PCR检测方法的比较.方法 肉眼直视下肝脏穿刺注射100 μl泡球蚴组织匀浆液建立泡球蚴感染小鼠模型,3个月后将小鼠处死,Trizol法提取肝脏总RNA,反转录获得cDNA.依据Serpina3g的编码基因(NM_009251)保守序列,通过Primer 5软件设计定量引物,以β-actin作为内参.以健康小鼠肝脏获得的cDNA依次10倍梯度稀释制备标准品(1×10~2～1×10~6 pg),利用SYBR Green RT-qPCR方法检测Serpina3g基因,然后根据cDNA浓度与循环值(Ct)的线性关系,绘制标准曲线,确定RT-qPCR检测的佳条件和重复性;并将RT-qPCR结果与常规RT-PCR琼脂糖凝胶电泳结果进行特异性、灵敏度和定量等方面的比较.结果 筛选出Serpina3g基因定量引物,佳退火温度为56.4℃;RT-qPCR无非特异性扩增,标准品及样品熔解温度均在80.5℃,熔解峰单一;标准曲线斜率为-2.833(效率),相关系数r=0.996;5个不同梯度的样本(1×10~2-1×10~6pg)重复检测5次均为阳性,变异<5%;mRNA检出限为1×10~2 pg,总RNA在1×10~2～1×10~6 pg内均可以进行扩增;常规RT-PCR方法mRNA检出限仅为1×10~6 pg.结论 成功建立了小鼠源Serpina3g的PT-qPCR检测方法,在特异性、灵敏度、重复性和定量方面优于常规RT-PCR.
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冠状动脉粥样硬化性心脏病血浆微小RNA-126的表达水平及其临床意义
目的:探讨微小RNA (miRNA)-126在冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者血浆中的表达情况及临床意义. 方法:收集2015年2月至2015年6月在山西医科大学第一医院心内科住院的114例冠心病患者(冠心病组)和40例健康者(对照组)的血浆,将冠心病组分为急性心肌梗死组(AMI组,n=40)、不稳定型心绞痛组(UA组,n=38)、稳定型心绞痛组(SA组,n=36)3个亚组,运用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测各组血浆miRNA-126的表达水平,并分析各组间的表达差异. 结果:AMI组miR-126的相对表达水平(0.65±0.53)与对照组(1.0)、UA组(0.93±0.68)、SA组(0.96±0.55)相比明显下降,差异有统计学意义(P均＜0.05);UA组、SA组与对照组相比有下降趋势,但差异无统计学意义(P均＞0.05).结论:血浆miR-126在冠心病患者中的表达存在差异,miR-126在AMI患者中表达明显下降,可能成为诊断AMI的新型标志物.
