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地龙的化学成分与临床应用概况
地龙又名蚯蚓、曲蟮、虫蟮等,其种类繁多,资源丰富,是重要的动物药材.药用品广地龙(参环毛蚓Pheretima aspergillum),主产于广东、广西等地经剖腹洗净的干燥体.土地龙(缟蚯蚓Allolobophora caliginosa)则是主产于河南、江苏、山东、安徽等地的去内脏、泥沙的干燥体.
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地龙含杂的一个纠正措施
地龙为钜蚓科动物参环毛蚓、通俗环毛蚓、威廉环毛蚓或栉盲环毛蚓的干燥体.前一种习称“广地龙”,后3种习称“沪地龙”.
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参环毛蚓对重金属镉离子耐受能力的考察
目的 考察参环毛蚓对重金属镉离子的耐受能力,为进一步探索参环毛蚓富集重金属机制提供实验依据.方法 在菜园土壤基础上设置7个组别的不同浓度的重金属镉污染环境,观察人工饲养条件下参环毛蚓在不同浓度镉离子环境中的生存状态,并利用原子吸收分光光度法分别测定参环毛蚓不同部位的镉离子量.结果 参环毛蚓在土壤镉离子量为40倍、50倍两组养殖7d后死亡;30倍组在10 d以后也有两条死亡,其余各组生长情况良好;参环毛蚓体内镉离子浓度随土壤镉离子浓度递增而增加.参环毛蚓能够在土壤中镉离子浓度12 mg/kg以下生存良好,其体内脏器中镉浓度可高达70～90 mg/kg.该浓度是中国对外贸易经济合作部发布的<药用植物及制剂进出口绿色行业标准>中镉限量指标的233～300倍.结论 参环毛蚓对重金属印镉离子的耐受能力极强,这可能是其药材重金属超标的重要原因之一.
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参环毛蚓中溶栓活性蛋白酶的纯化和检测
参环毛蚓Pheretima aspergillum(E.Perrier)为<中华人民共和国药典>2000年版一部中收载的地龙药材来源之一.地龙始载于<神农本草经>,具有通络、利尿、清热、定惊、平喘之功,临床常用于高热神昏、惊厥抽搐、关节痹痛、半身不遂、高血压等.日本学者从赤子爱胜蚓中提取出类似尿激酶的物质,用于治疗血栓性疾病[1].近年来,随着分离技术的飞速发展及其广泛应用,对不同品种蚯蚓溶栓活性蛋白酶进行了一系列的研究,但参环毛蚓(广地龙)作为药典品种及市场上流通广的地龙药材研究相对较少.本实验对其抗栓活性部位进行了考察,采用凝胶柱色谱法在溶栓活性部位中分离得到一种溶栓活性的蛋白酶.
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参环毛蚓与赤子爱胜蚓的对比研究
目的:赤子爱胜蚓的抗检活性可靠,为评价参环毛蚓的溶栓的药用价值,进行了相关的对比研究.方法:通过纤维蛋白平板试验对比活性,通过电泳法对比酶谱.结果:2种蚯蚓活性相近,参环毛蚓及赤子爱胜蚓的许多酶谱的分子量都相近,分子量多在60000以下,主要集中在30000左右.结论:参环毛蚓与赤子爱胜蚓活性与酶谱相近,具有进一步开发价值.
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抗栓用参环毛蚓水提取方法的筛选
目的 优选抗栓用参环毛蚓的佳水提工艺.方法 采用L9(34)正交试验法筛选佳水提条件.结果 佳水提条件为第1次加4倍水,浸泡30 min,第2次加3倍水,浸泡30 min.结论 采用本工艺提取参环毛蚓溶栓效价为300 U/g,该工艺稳定、可行.
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参环毛蚓不同部位细胞原代培养及鉴定
目的:筛选出参环毛蚓体内细胞培养的佳部位,为建立参环毛蚓细胞原代培养方法提供实验基础.方法:分别提取参环毛蚓的皮、肠道、嗉囊、前列腺细胞进行培养,观察其细胞生长.结果:参环毛蚓的表皮和肠道细胞经培养后,细胞均有生长,并发现肠道细胞生长良好,5～6天后基本达到融合,细胞呈多边鹅卵石样,透明度及折光性强.另发现参环毛蚓的嗉囊、前列腺等部位的细胞没有增长迹象.结合形态学鉴定,原代培养及传代的细胞98%以上为肠上皮细胞.结论:参环毛蚓的肠道是建立细胞系的首选材料,采用此方法分离培养的肠上皮细胞数量多,均一性生长佳,可重复性强.
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参环毛蚓中纤溶活性蛋白酶研究
分离纯化参环毛蚓中纤溶活性蛋白酶,并对其活性及氨基酸序列进行分析.采用凝胶层析等方法进行蛋白质的分离纯化,SDS-PAGE法进行分子质量的测定,纤维平板法测定纤溶活性,氨基酸自动分析仪分析氨基酸组成,并对一个具有纤溶活性的蛋白酶进行了序列分析.分离纯化得到4种酶,其中EQY 4活性较强,其N-端序列为:Gln-Ile-Gly-Gly-Thr-Asn-Ala-Ser-Pro-Gly-Glu-Phe-Pro-Pro-Gln-Leu-Ser-Gln-Thr.与文献报道中赤子爱胜蚓及粉正蚓中分离得到的蛋白酶对比,主要序列相近,但也有不同.
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地龙炮制经验谈
地龙,又名蚯蚓干,为钜蚓科动物参环毛蚓或缟蚯蚓的干燥体.<神农本草经>列为下品,具有清热定惊、通络、平喘、利尿的功效.常炒制后用于高热、神昏、惊痫抽搐、关节痹痛、肺热喘咳、尿少水肿、高血压等症.主含多种氨基酸.由于生品腥味太重,故入药一般需经炒制.陶弘景谓:"若服干蚓,须熬作屑".传统用地龙,制法很多,主要有药制、醋制、熬制、酒制、油制、蛤粉炒制、盐制等法,使其质地松泡酥脆、去毒性、矫正臭味及便于煎制服用.在实践工作中,我们发现炮制方法的合理有助于临床疗效的发挥.为此笔者比较了几种不同的炮制方法.
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福州地区药用地龙质量的商讨
药用地龙(Dilong Pheretima)为常用中药,中国2000年版药典规定其来源为钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima aspergillum(E.Perrier)、通俗毛蚓Pheretima vulgaris Chen、威廉环毛皮Pheretima guillelmi(Michaelsen)或栉盲环毛蚓Pheretima pectinifera Michaelsen的干燥体.前一种习称"广地龙",后一种习称"沪地龙".广地龙春季至秋季捕捉,沪地龙夏季捕捉,及时剖开腹部,除去内脏及泥沙,洗净,晒干或低温烘干.地龙民间使用较多,常取其清热平肝,滋阴潜阳之功效,小孩多用.福州地区药用地龙也多为广地龙和沪地龙,本文将近在福州地区采集到不同规格的地龙从质量方面作一商讨,并提出建议.
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参环毛蚓对土壤含水量及pH值因子的选择研究
目的 考察参环毛蚓对土壤含水量、pH值二因子的选择性,建立其生活所需要的土壤含水量、pH值单因子数学模型.方法 在养殖槽内设置不同土壤含水量、pH值区域,由参环毛蚓选择适宜的生活区域.结果 参环毛蚓生活适宜的土壤含水量为18.2%～24.6%,pH值为3.7～5.5.结论 参环毛蚓选择在湿度适中,偏酸性的土壤中生活;高湿及较干燥,强酸性和碱性的土壤不适宜其生活.
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地龙的化学及药理研究概况
中药地龙为巨蚓科动物参环毛蚓或正蚓科动物背暗唇蚓等的全体.性味咸寒,有清热、平肝、正喘、通络之功效,主治高热狂躁、惊风抽搐、风热头痛、目赤、中风半身不遂、喘息、喉痛、关节疼痛、齿衄、小便不通、瘰疠、痄腮、疮疡等疾病.近半年来有文献报道,运用中药地龙对治疗癌症、消化性溃疡、烧伤、烫伤等20余种疾病均具有良好的疗效.本研究报道了有关地龙的化学及药理研究概况.
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参环毛蚓脂类挥发性成分分析
为了分析参环毛蚓(Pheretima aspergillum)的脂类成分,我们采用不同溶剂索氏提取法,从该药材得到三种组分,用GC-MS法进行测定,确定了36种化合物的结构.在这三种组分中,乙醚组分中的11种成分均为脂类,不饱和脂肪酸的含量高,占27.70%,如油酸、亚油酸、花生四烯酸和花生三烯酸.丙酮组分的脂类成分8种,占35.75%,不饱和脂肪酸只有亚油酸一种;乙醇组分的脂类成分13种,占72.09%,没有发现不饱和脂肪酸.本研究确定了参环毛蚓脂肪酸,尤其是不饱和脂肪酸的化学组成,为该中药化学物质基础的研究与药物的开发利用提供了依据.
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镉胁迫条件下对参环毛蚓体壁结构影响的研究
目的:研究不同浓度镉离子胁迫条件下对参环毛蚓体壁肌肉结构的影响,探索重金属镉在参环毛蚓体内的生物富集部位.方法:采用不同浓度镉离子胁迫参环毛蚓染毒,HE组织切片染色,光学显微镜下观察体壁肌肉结构的变化,以分析参环毛蚓富集重金属的方式.结果:内侧的斜纹肌损伤要明显比体壁外侧的环肌肉层要严重得多.结论:参环毛蚓体壁的损伤来源于其身体的内部,即对其构成损伤的物质来源于肠道的主动吸收,而不是通过其表皮的被动扩散吸收.
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重金属镉对参环毛蚓胃肠道上皮细胞超微结构损伤的研究
目的:研究不同浓度重金属镉离子胁迫下对参环毛蚓胃肠道结构的影响.方法:采用不同浓度镉离子胁迫参环毛蚓染毒、HE组织切片染色、光学显微镜及透射电镜下观察参环毛蚓胃肠道超微结构损伤的变化.结果:随着镉离子浓度的增加,参环毛蚓的肠道粘膜上皮细胞有大量溶酶体增生,高尔基复合体增生、扩张呈大泡状,微绒毛、纤毛排列不整齐、紊乱,当镉离子浓度达到30mg/kg时,参环毛蚓肠粘膜上皮细胞微绒毛出现萎缩,纤毛细胞出现溃疡坏死病灶,核膜解体、核质外溢,后导致坏死.结论:参环毛蚓胃肠道粘膜上皮细胞超微结构的受损程度,是随土壤重金属的污染量而定.在较低重金属浓度条件下,参环毛蚓肠上皮细胞是以溶酶体增生、存积一定量的重金属元素的方式来应对其毒害作用,也可视为肠上皮细胞对有毒异物的一种应答反应,为可逆性损伤；而在较高重金属浓度条件下,肠上皮细胞是以微绒毛和线粒体损伤为主,核膜解体、核质外溢,后导致坏死,为不可逆性损伤.由此推断,参环毛蚓对重金属的高耐受性或富集作用是通过其肠上皮细胞的这种特性来实现的.
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参环毛蚓体内核苷磷酸化酶的活性测定及动力学分析
目的：建立参环毛蚓体内嘌呤核苷磷酸化酶（PNP）的检测方法，以肌苷为底物，评价该酶的活性。方法采用 HPLC 法，色谱条件：Ecosil C18-AQ 柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流动相为10 mmol·L-1磷酸二氢铵缓冲液（pH4.5）和甲醇，梯度洗脱，流速为0.8 mL·min-1，柱温为室温，检测波长254 nm，用底物肌苷与组织粗蛋白提取液在室温孵育30 min，沸水煮5 min 终止反应，12000 r·min-1离心10 min，取上清过滤后进行 HPLC 分析，以 OriginPro 8.5软件作图，计算酶动力学参数。结果酶反应中产物次黄嘌呤在0.5～40μmol·L-1范围内呈良好的线性关系（r=0.9996）；精密度小于3.5%，回收率大于80%。PNP 酶动力学参数：Vmax 为0.015nmol·min-1·mg-1， Km 为19.8μmol·L-1。结论成功构建了参环毛蚓体内次黄嘌呤代谢酶活性测定相关的实验体系，该法所得数据稳定可靠，可准确反映关键酶活性的动态变化。
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参环毛蚓细胞原代培养灭菌方法的研究
[目的]选择佳灭菌方法,建立参环毛蚓细胞原代培养实验体系.[方法]通过4因素和3水平的正交试验法考察不同浓度比例抗生素组合液对参环毛蚓细胞的灭菌效果,比较不同抗生素种类和浓度对参环毛蚓细胞原代培养的影响.[结果]以抗生素组合液200 U/mL青霉素钠+400μg/mL硫酸链霉素+300U/mL硫酸庆大霉素+5μg/mL两性霉素B对组织块的灭菌效果佳,10 d污染率为0%,且细胞能保持较好活性,并贴壁生长.[结论]组合式灭菌法是参环毛蚓细胞原代培养的佳有效灭菌方法,且操作简捷易行.
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地龙的研究进展
地龙为环节动物门钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima as-pergilum(E.Perrier)、通俗环毛蚓P.vulgaris Chen、威廉环毛蚓P.guillelmi(Michaelsen)或栉肓毛蚓P.pectinifera Michaelsen的干燥体.前一种习称"广地龙",后三种习称"泸地龙",主产于广西、广东、福建.性寒,味咸.
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4种重金属对参环毛蚓金属硫蛋白诱导特性的研究
目的:通过银饱和分析法研究4种重金属(Cu、Pb、Cd、Zn)对参环毛蚓金属硫蛋白(MTs)的诱导特性.方法:Cu、Pb、Cd、Zn 4种重金属诱导参环毛蚓30 d后提取其MTs,进行Ag饱和置换,然后使用原子吸收法测量MTs含量.结果:Cd、Pb多在内脏中诱导MTs,Cu对MTs的诱导在肌肉和内脏中都较平均,Zn则更多地在肌肉中诱导MTs.结论:4种重金属对参环毛蚓MTs存在不同的诱导特性.银饱和分析法具有简便、快速、准确的优点,可用于MTs的准确定量.
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金属硫蛋白在参环毛蚓不同组织中的表达研究
目的:研究金属硫蛋白(MT)在参环毛蚓不同组织中的表达.方法:采用不同浓度镉离子胁迫参环毛蚓染毒,进行HE组织切片染色和免疫组化反应,并在显微镜下观察MT在参环毛蚓体内的分布.结果:在参环毛蚓表皮层和肌肉层均未发现明显的MT表达,而在其肠道的黏膜下腺细胞质之间均有明显的棕黄色斑点,且随着镉浓度的增加,MT的表达越来越强.结论:MT主要在参环毛蚓的肠道中表达,参环毛蚓对重金属的富集是通过肠上皮细胞来完成.
