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FAP和TGFβ1在宫颈癌中的表达及其意义
[目的] 检测FAP和TGFβ1在宫颈癌中的表达及其意义.[方法] 应用免疫组织化学方法对54例宫颈癌进行FAP和TGFβ1的检测.[结果] 在54例宫颈癌间质中FAP表达阳性率为88.89%,正常宫颈组织中无表达.FAP表达与宫颈癌的临床分期有关,与淋巴结转移和病理分级无关.在54例宫颈癌组织中,TGFβ1表达阳性率为87.04%.TGFβ1表达与宫颈癌的临床分期和病理分级有关,与淋巴结转移无关.FAP表达与TGFβ1阳性表达呈正相关(r=0.546,P=0.000).[结论] FAP的表达与宫颈癌演进有关.TGFβ1可诱导癌组织中反应性间质产生.从而促进FAP表达和肿瘤演进.
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成纤维细胞激活蛋白在甲状腺乳头状癌间质中的表达及意义
目的：探讨成纤维细胞激活蛋白（ FAP）在甲状腺乳头状癌（ PTC）中的表达及意义。方法：采用免疫组织化学 SP 法检测66例2010年1月～2013年10月间收集的甲状腺乳头状癌和10例正常甲状腺中的表达情况。结果：FAP 在甲状腺乳头状癌间质成纤维细胞中表达，阳性率为86．36％；而在正常甲状腺间质及PTC癌细胞中不表达。甲状腺乳头状癌间质中FAP 表达与肿瘤TNM分期（χ2＝20．823，P＜0．01）及淋巴结转移（χ2＝11．853，P＜0．01）有关。结论：PTC间质中FAP的表达对PTC的侵袭、转移具有较好的预测价值。
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成纤维细胞激活蛋白对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及机制研究
目的:探讨成纤维细胞激活蛋白(FAP)在胃癌细胞增殖、侵袭和迁徙过程中的作用及机制.方法:体外培养的人胃癌细胞株MGC803,分别加入不同浓度的FAP(50,100和150 pmol/L)处理细胞48 h;采用MTT法检测细胞增殖;细胞划痕实验检测FAP对MGC803迁徙能力的影响;Transwell侵袭实验检测FAP对MGC803侵袭能力的影响;RT-PCR、Western Blot检测细胞上皮间质转化(EMT)相关标志分子(Vimentin、E-cadherin、ZO-1、N-cadherin)及EMT的上游不同信号通路分子表达.结果:不同浓度的FAP可呈剂量依赖性促进胃癌细胞增殖、迁移及侵袭(P＜0.05);RT PCR、Western Blot检测结果显示FAP作用于MGC803细胞后诱导细胞上皮标志分子E-cadherin、ZO-1表达下调,间质标志分子Vimentin、N-cadherin表达上调,且均呈剂量依赖性(P＜0.05);Western Blot检测上游不同信号通路分子表达结果显示,Wnt/β-catenin信号通路分子(DKK1、LEF-1)表达呈剂量依赖性上调,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:FAP可通过激活Wnt/β-catenin信号通路,调控活化EMT,促进胃癌细胞的增殖、迁徙和侵袭.
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成纤维细胞激活蛋白在胃癌中的表达及临床意义
目的:探索胃癌组织中成纤维细胞激活蛋白(FAP)的表达与肿瘤恶性生物学行为和预后的关系.方法:收集2009年2月至2011年4月在我院手术的胃癌患者60例,采用免疫组化法检测胃癌组织和正常胃组织中FAP的表达水平,并分析其与临床病理特征、预后的相关性.结果:FAP在肿瘤间质成纤维细胞胞质内阳性表达,胃癌组织与正常胃组织中FAP阳性细胞数平均值分别为32.80±19.3和0.41±0.21 (P＜0.01).胃癌组织中FAP的表达水平与肿瘤的大小、分化程度及临床分期明显相关(P＜0.05).Kaplan-Meier分析显示FAP低表达组胃癌患者术后的生存时间明显高于高表达组,差异有显著统计学意义(P＜0.05).结论:FAP在胃癌的生长、侵袭和转移中发挥着重要作用,可能作为胃癌预后判断和治疗的一个的潜在靶点.
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不同分期及分化程度乙肝相关肝细胞癌中成纤维细胞激活蛋白的表达
目的 比较不同分期及分化程度的乙肝相关肝细胞癌中成纤维细胞激活蛋白(FAP)的表达,探讨成纤维细胞激活蛋白在肝癌中的表达差异及其意义.方法 采用酶联免疫吸附方法检测成纤维细胞激活蛋白在不同分期及分化程度的乙肝相关肝细胞癌中的表达水平;用免疫组化方法对成纤维细胞激活蛋白的组织分布进行定位检查.结果 成纤维细胞激活蛋白在不同分期的乙肝相关肝细胞癌组织1μg总蛋白中平均含量分别为Ⅰ期(1039.82±248.89)pg/mL,Ⅱ期(1173.57±184.60)pg/mL,Ⅲ期及以上(1344.69±225.47)pg/mL,对照组为(742.15±443.16)pg/mL,差异有统计学意义(F=13.818,P=0.000);在不同分化程度的肝细胞癌组织中分别为高分化(1008.18±148.20)pg/mL,中分化(1126.52±218.38)pg/mL,低分化(1414.96±311.94)pg/mL,差异有统计学意义(F=13.368,P=0.000).免疫组化结果证实肝癌细胞中有成纤维细胞激活蛋白的表达,且其含量与肝癌细胞的病理分化程度具有明显相关性,随着肝癌细胞由高分化向低分化发展,成纤维细胞激活蛋白的表达也逐渐增加.结论成纤维细胞激活蛋白在不同分期及分化程度的乙肝相关肝细胞癌中表达存在差异,分期越晚,分化程度越低,成纤维细胞激活蛋白表达越多.
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结直肠癌组织中成纤维细胞激活蛋白的表达及临床意义
目的 探讨成纤维细胞激活蛋白(FAP)在结直肠癌组织中的表达及其与各病理学指标之间的关系.方法 应用免疫组织化学染色法检测55例结直肠癌组织和50例正常结直肠组织中FAP的表达,观察阳性细胞在不同组织中的分布数量,结合肿瘤分期、有无淋巴结转移及不同浸润深度等病理学指标,评价FAP表达与结直肠癌病理特征的相关性.结果 正常结直肠组织中几乎无FAP表达,少数癌细胞有微弱表达,FAP阳性细胞主要为结直肠癌间质组织中的肿瘤相关成纤维细胞(CAFs).TNMⅢ-Ⅳ期标本中FAP阳性细胞为(40.1±15.9)个,多于Ⅰ～Ⅱ期的(18.3±7.7)个(P＜0.01)；且阳性细胞数量与分期程度相关(r=0.544,P＜0.01).淋巴结转移组中阳性细胞为(44.4±13.3)个,多于无淋巴结转移的(18.5±8.1)个(P＜0.01)；且阳性细胞数量与有无淋巴结转移相关(r=0.793,P＜0.01).不同浸润深度T2、T3和T4组标本中FAP阳性细胞数分别为(25.2±8.9)、(32.4±19.3)和(29.2±16.5)个(P＞0.05);阳性细胞数量与浸润深度无关(r=0.003,P＞0.0S).结论 FAP在正常结直肠组织中无表达,而主要表达于结直肠癌组织中的CAFs中.FAP阳性细胞与结直肠癌的TNM分期及淋巴结转移相关.
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成纤维细胞激活蛋白在大鼠烫伤创面修复过程中的动态表达
目的 观测成纤维细胞激活蛋白(FAP)在大鼠不同深度烫伤创面修复过程中的动态表达特点.方法 制作大鼠浅Ⅱ°和深Ⅱ°两组烫伤模型(每组42只),每组在伤后6、12h,1、3、7、14、21d各处死6只大鼠,另设6只正常大鼠皮肤作为对照.免疫组织化学和免疫印迹技术观测创面组织FAP的含量.结果 FAP在创面成纤维细胞的细胞膜和细胞质表达,尤其是创面新生血管周围.烫伤后6 h FAP表达明显增多.浅Ⅱ°创面6h与12h,1d与3d比较,FAP的表达差异无统计学意义(P＞0.05),余各时间点与相邻时间点比较差异均有统计学意义(P＜0.05).深Ⅱ°创面12h与1d,1d和3d比较,FAP的表达差异无统计学意义(P＞0.05),余各时间点与相邻时间点比较差异均有统计学意义(P＜0.05).两组创面FAP表达的高峰均出现在烫伤后第7天,之后逐渐下降,至伤后第21天FAP的表达量仍高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 FAP的动态表达特点提示它在创面修复过程中起重要作用.
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成纤维细胞激活蛋白与慢性乙型肝炎相关性肝病的关系
目的 通过比较乙型肝炎(乙肝)相关性肝癌、乙肝肝硬化以及慢性乙肝患者肝组织中成纤维细胞激活蛋白(FAP)水平,探讨FAP在乙肝相关性慢性肝脏疾病的表达差异及其意义.方法 收集47例乙肝相关性肝癌、29例乙肝肝硬化(S4期)、22例慢性乙肝(S1～S3期)及17例因良性病变行肝切除术的肝组织,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测其中FAP的表达情况;采用酶联免疫吸附(ELISA)方法检测组织及血清中FAP蛋白表达水平.结果 在肝癌、肝硬化、肝炎以及对照组肝组织中,FAP mRNA表达的差异倍数值分别是4.73±1.60、1.86±1.04、0.98±0.80及1.00±0.00,四者比较差异有统计学意义(F=7.156,P=0.000);ELISA结果显示FAP蛋白在肝癌患者组织中1μg总蛋白平均含量为(1 288.28±695.82) pg/mL,而肝硬化组织为(1 176.11±677.43) pg/mL,肝炎组织为(1 044.58±389.48) pg/mL,对照组为(848.70±540.74)pg/mL,差异有统计学意义(F=3.004,P=0.034).结论 FAP在肝炎、肝硬化、肝癌以及对照组的mRNA及蛋白表达水平存在差异,随着疾病的进展,FAP呈渐进性表达.
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成纤维细胞激活蛋白及其突变体真核表达质粒的构建及鉴定
目的：构建并鉴定人成纤维细胞激活蛋白（ FAPα）真核表达质粒pcDNA－wFAPα（野生型FAPα）、pcDNA－tFAPα（胞外段FAPα）和pcDNA－mFAPα（缺失624～704位氨基酸的突变型FAPα）。方法以口腔癌组织总RNA为模板，采用RT－PCR方法扩增wFAPαcDNA基因片段，连接至真核表达质粒pcDNA3．1（＋）获得重组pcDNA－wFAPα质粒。以重组 pcDNA －wFAPα为模板，扩增 tFAPα基因片段；用 overlap PCR 技术，获得mFAPα基因；分别连接至pcDNA3．1（＋）获得重组pcDNA－tFAPα和pcDNA－mFAPα质粒。结果酶切鉴定和测序验证皆显示pcDNA－wFAPα、pcDNA－tFAPα和pcDNA－mFAPα为正确重组质粒。结论成功构建人野生型FAPα（ wFAPα）、胞外段FAPα（ tFAPα）和突变型FAPα（ mFAPα）真核表达质粒，为进一步研究FAPα在口腔鳞癌发病过程中的分子机制奠定基础。
关键词： 成纤维细胞激活蛋白 真核表达载体 pcDNA3.1(+) -
成纤维细胞激活蛋白在小鼠肺纤维化模型中的表达
目的 探讨成纤维细胞激活蛋白(FAP)在实验性小鼠肺纤维化组织中的表达,及其与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)之间的相互关系.方法 气管内滴入博莱霉素(7 mg/kg)制备肺纤维化模型,采用免疫组化技术检测小鼠肺纤维化组织中FAP、α-SMA和TGF-β1的表达.结果 正常肺组织无FAP表达;纤维化组FAP表达于细支气管和大血管周围的成纤维细胞,成纤维细胞灶中FAP、α-SMA和TGF-β1表达部位相似,但FAP比α-SMA的表达更广泛,比TGF-β1的表达更强.FAP、α-SMA和TGF-β1与小鼠肺纤维化程度均呈正相关(r值分别为0.795、0.766和0.628,P<0.01),且FAP与TGFβ1的表达呈正相关(r=0.706,P<0.01).结论 FAP特异性表达在小鼠肺纤维化组织的成纤维细胞灶中,与肺纤维化程度有关.FAP与TGF-β1可能在肺纤维化形成中起协同作用.
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稳定过表达成纤维细胞激活蛋白的 口腔鳞状细胞癌细胞株的构建
目的 构建人成纤维细胞激活蛋白(FAP)过表达慢病毒载体,转染口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞株SCC9,构建稳定过表达FAP的OSCC细胞株.方法 采用聚合酶链反应(PCR)技术获得FAP片段,利用基因重组技术构建过表达FAP的慢病毒载体,包埋病毒并收集上清液感染SCC9细胞株,通过流式细胞荧光分选技术(FACS)进行筛选,获得稳定过表达FAP的SCC9细胞株.结果 对阳性克隆进行酶切鉴定和基因测序证明FAP的慢病毒载体构建成功,实时荧光定量PCR和Western blot检测结果证明成功构建稳定过表达FAP的SCC9细胞株.结论 本研究有助于获得纯化FAP蛋白,为进一步研究FAP在OSCC发生发展过程中的机制奠定基础.
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酶激活式抗肿瘤前体药物的研究进展
酶激活式抗肿瘤前体药物利用特异表达于肿瘤组织的酶激活本无活性的前体药物而发挥靶向肿瘤细胞的细胞毒作用.本文根据肿瘤组织自身表达酶的部位、种类、结构、功能和性质的不同,阐述了现有几种酶激活式前体药物的工作原理和研究现状,比较了该类前药与人工引入酶激活式前药的优劣,评价其发展前景.
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小鼠成纤维细胞激活蛋白多克隆抗体的制备及应用
目的:表达和纯化小鼠成纤维细胞激活蛋白α(FAPα)二肽基肽酶催化核心序列(FAPαc)融合蛋白(His-FAPαc),制备兔抗小鼠FAPα多克隆抗体,并用此抗体检测FAPα在肿瘤细胞和成纤维细胞以及肿瘤间质中的表达情况.方法:将本实验室构建好的原核表达质粒pET28a(+)-FAPαc转化大肠杆菌BL21,IPTG 诱导表达目的蛋白His-FAPαc;用纯化的目的蛋白免疫新西兰大白兔,获得兔抗小鼠FAPα多克隆抗体;用免疫印迹法和酶联免疫吸附试验检测该多克隆抗体与重组蛋白His-FAPαc 的反应性及检测该多克隆抗体的效价,并用该抗体检测FAPα在肿瘤细胞和成纤维细胞以及肿瘤间质中的表达情况.结果:His-FAPαc融合蛋白可与兔抗小鼠FAPα多克隆抗体特异性结合;该多克隆抗体的效价高,特异性好,并且能检测小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryo fibroblast cells;MEF)及结肠癌和乳腺癌的间质细胞高表达FAPα的全长序列蛋白.结论:制备的兔抗小鼠FAPα多克隆抗体能够有效地识别小鼠胚胎成纤维细胞和肿瘤间质细胞表达的FAPα蛋白,为研究FAPα在肿瘤的发生、发展及转移中的作用和以FAPα为靶点而开展的的抗肿瘤研究奠定基础.
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成纤维细胞激活蛋白在肝纤维化模型大鼠肝组织中的动态表达
目的:观察大鼠肝纤维化形成过程中成纤维细胞激活蛋白(fibroblast activation protein,FAP)的动态表达变化特点.方法:Wistar雄性大鼠分为正常对照组和模型组.模型组ip 0.5％二甲基亚硝胺复制肝纤维化模型,于造模1、2、3周分别收集肝组织标本,造模4周后处死大鼠,收集血清和肝组织标本.全自动生化仪测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、谷氨酰转肽酶(GGT)和白蛋白(ALB),HE、天狼猩红染色观察病理形态,试剂盒测定肝组织羟脯氨酸;real-time PCR和western blotting法检测肝组织FAP基因和蛋白表达.结果:模型组肝功能较正常组明显下降,组织病理形态学和羟脯氨酸测定显示模型组肝损伤明显,纤维化形成.real-time PCR和western blotting显示FAP基因和蛋白随造模时间延长表达逐渐增高.结论:FAP伴随大鼠肝纤维化模型形成逐渐增加,与肝纤维化形成密切相关.
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小鼠皮肤切创愈合过程中FAP和α-SMA的表达
目的 观察小鼠皮肤切创愈合过程中成纤维细胞激活蛋白(fibroblast activation protein,FAP)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达的变化规律. 方法 应用免疫组织化学和West-ern印迹法检测小鼠皮肤切创后各个时间段FAP和α-SMA表达情况.结果 免疫组化结果显示FAP与α-SMA在正常对照组及伤后1 h组小鼠皮肤弱表达,伤后6h阳性细胞率开始升高,伤后5d FAP阳性细胞率达高峰,伤后3 dα-SMA阳性细胞率达高峰,伤后14d FAP与α-SMA恢复至与对照组相同.Western印迹法检测显示FAP和α-SMA从1 d起各个时间段均有表达,其中5 d为FAP的表达高峰,3d为α-SMA的表达高峰.结论 FAP可作为法医学皮肤切创形成时间的推断指标,α-SMA可作为损伤修复中后期的推断指标,FAP与α-SMA联合使用有望成为推断皮肤损伤时间的有效指标.
