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阿托伐他汀对博莱霉素致大鼠肺纤维化的抑制作用及其机制
目的 观察阿托伐他汀对博莱霉素所致大鼠肺纤维化的抑制作用及其机制,探讨防治肺纤维化的新途径. 方法 取SPF级雄性SD大鼠30只,随机分为生理盐水对照组、博莱霉素模型组、阿托伐他汀治疗组,每组各10只.生理盐水对照组气管内注入生理盐水0.2ml,其他2组气管内注入博莱霉素5mg/kg建立肺纤维化模型,此后阿托伐他汀治疗组每天给予阿托伐他汀10mg/kg灌胃,生理盐水对照组和博莱霉素模型组给予等量生理盐水灌胃.于第7天和第28天3组均各处死5只,苏木精-伊红(HE)染色法及Masson染色病理学观察肺泡炎性改变及肺纤维化改变;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织羟脯氨酸和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot法检测肺组织Kruppel-样因子2(KLF2)的蛋白表达;采用实时聚合酶链反应(PCR)检测肺组织KLF2的mRNA表达. 结果 博莱霉素模型组与生理盐水对照组比较病理学检查显示,大鼠肺组织在第7天出现出血渗出等炎性反应,第28天出现纤维化;而阿托伐他汀治疗组第7天肺组织的炎性反应及第28天纤维化程度都比博莱霉素模型组明显减轻.与生理盐水对照组比较,博莱霉素模型组肺组织羟脯氨酸和TNF-α水平明显升高(均P＜0.05),而KLF2蛋白含量和KLF2-mRNA的表达均明显降低(均P＜0.05);阿托伐他汀治疗组上述变化减轻,其肺组织的羟脯氨酸和TNF-α含量低于博莱霉素模型组(均P＜0.05),同时阿托伐他汀治疗组肺组织KLF2蛋白含量和KLF2-mRNA表达则高于博莱霉素模型组(均P＜0.05). 结论 阿托伐他汀可减少炎性细胞分泌TNF-α、减轻博莱霉素导致的肺纤维化反应;其对于纤维化的抑制机制与上调KLF2-mRNA表达有关.
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胃癌中抑癌基因Kruppel样因子6 mRNA与蛋白的表达及其意义
目的 研究Kruppel样因子6(KLF6)基因表达与胃癌发生、发展的关系.方法 采用免疫组织化学(SP法)与反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对73例胃癌及癌旁组织的KLF6蛋白与mRNA表达进行检测,分析KLF6表达与临床病理因素间的关系.结果 KLF6蛋白在胃癌及癌旁组织中的表达率分别为39.7％(29/73)、90.4％(66/73) (P＜0.01),在低、高-中分化癌组织中的表达率分别为25.0％(10/40)、57.6％(19/33)(P＜0.01).KLF6mRNA在胃癌及癌旁组织中表达水平(与GAPDH吸光度比值)分别为0.1586±0.1071、0.8899±0.0638 (P＜0.01).结论 KLF6蛋白与mRNA在胃癌组织中呈低表达,且在低分化胃癌中低于高-中分化胃癌,表明KLF6与胃癌的发生、发展及分化关系密切,可作为判断胃癌生物学行为的重要指标.
关键词： 胃肿瘤 反转录聚合酶链反应 免疫组织化学 Kruppel样转录因子类 -
亲环素A和Krüppel样转录因子2及内皮型一氧化氮合酶在大鼠动脉粥样硬化病变过程中的表达变化
目的：观察大鼠动脉粥样硬化病变过程中血管壁亲环素A( CyPA)、 Krüppel样转录因子2(KLF2)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达变化。方法将雄性Wistar大鼠32只按数字表法随机分为对照组及动脉粥样硬化8、12、15周组,每组8只。给予动脉粥样硬化组高脂饲料喂养,并给予维生素D3注射液60万IU/kg一次性腹腔注射；给予对照组大鼠基础饲料喂养。在喂养第8、12、15周时处死大鼠,分离腹主动脉,行苏木素-伊红染色,免疫组化法检测动脉壁CyPA、KLF2、eNOS的表达水平。结果随着动脉粥样硬化病变进展,对照组以及动脉粥样硬化8、12、15周组大鼠分别呈现出血管正常结构、内皮细胞破坏、平滑肌细胞增生、粥样斑块形成以及钙化斑块形成等不同的特征。对照组与动脉粥样硬化8、12、15周组间血管壁CyPA、KLF2、eNOS的表达水平差异均有统计学意义( CyPA：0．0037±0．0018、0．0276±0．0090、0．0526±0．0129、0．1080±0．0388；KLF2：0．0932±0．0331、0．0415±0．0076、0．0207±0．0059、0．0014±0．0003；eNOS：0．0358±0．0185、0．0148±0．0080、0．0049±0．0025、0．0037±0．0026；F值分别为36．395、42．108、21．255,均P<0．05),且组间CyPA的表达呈增高趋势,组间两两比较差异有统计学意义(均P<0．05)；KLF2表达水平呈进行性下降趋势,组间两两比较差异有统计学意义(均P<0．05)；eNOS表达动脉粥样硬化12周组与15周组差异无统计学意义,其他组间差异均有统计学意义(均P<0．05)。结论伴随动脉粥样硬化病变进展,CyPA的表达进行性增高,KLF2、eNOS表达进行性下降。 CyPA可能是致动脉粥样硬化病变的途径之一。
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携带小鼠KLF4基因重组慢病毒的构建及对RAW264.7细胞增殖的影响
目的 构建小鼠Krüppel样因子4(KLF4)慢病毒表达载体,并建立KLF4过表达小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7细胞株.方法 采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增目的基因KLF4后,构建重组质粒pLVX-KLF4,并通过PCR、双酶切和测序方法对其进行鉴定.重组质粒与pSPAX2、pMD2.G辅助质粒通过Lipofectamine?3000共转染293T细胞,包装病毒并测定病毒滴度.将获得的慢病毒感染RAW264.7细胞,实时定量PCR法检测KLF4 mRNA的表达.分选流式细胞仪分选GFP阳性RAW264.7细胞.流式细胞术检测KLF4对RAW264.7细胞周期的影响.EdU法检测KLF4对RAW264.7细胞增殖的影响.结果 经PCR、双酶切鉴定和测序证实,成功构建了包含小鼠KLF4基因的慢病毒穿梭质粒,RT-PCR证实Lenti-KLF4感染的RAW264.7细胞中KLF4 mRNA表达高于未感染的对照组RAW264.7细胞(P<0.05).初次浓缩后测定小鼠KLF4基因重组慢病毒的滴度为2.05×108 TU/mL.分选出KLF4过表达的RAW264.7细胞.KLF4过表达的RAW264.7细胞周期变化显示为S期延长,G0/G1期缩短.EdU检测显示KLF4过表达的RAW264.7细胞增殖活性增高.结论 成功构建了KLF4的慢病毒表达载体,并建立KLF4过表达的RAW264.7细胞株,KLF4过表达促进了RAW264.7细胞的增殖.
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锌指蛋白转录因子5在肾癌组织中的表达及其临床意义
目的：检测锌指蛋白转录因子5（ KLF5）在肾癌组织中的表达，探讨其临床意义。方法选择2009年5月—2012年10月南昌大学附属赣州医院收治的肾癌患者50例，收集所有患者手术切除的肾癌组织及其中15例患者的癌旁组织，采用免疫组织化学S－P法检测KLF5的表达，并分析其与肾癌患者临床病理特征的关系。结果肾癌组织和癌旁组织均有一定水平的KLF5表达，肾癌组织KLF5阳性表达率〔84.0％（42／50）〕高于癌旁组织〔26.7％（4／15）， P＝0.000〕。不同性别、年龄、肿瘤直径肾癌患者KLF5阳性表达率比较，差异无统计学意义（ P＞0.05）。不同组织学分型、组织学分级肾癌患者KLF5表达强度比较，差异均无统计学意义（ P＞0.05）；不同临床分期及有无淋巴转移肾癌患者KLF5表达强度比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 KLF5阳性表达率在肾癌组织中明显升高，其表达强度与肾癌临床分期及淋巴结转移密切相关，或许可以成为判断肾癌发生、发展、预后的一个理想指标。
关键词： 肾肿瘤 Kruppel样转录因子类 锌指蛋白转录因子5 -
人前列腺癌组织Krüppel-like factor 4(KLF4)和E-cadherin蛋白的表达及其与危险因素等级间的关系
目的 检测人前列腺癌(PCa)组织中KLF4及E-cadherin蛋白,研究其表达水平与危险因素等级间的关系.方法 免疫组化SP两步法检测56例PCa标本中KLF4和E-cadherin蛋白的表达水平;用Spearman相关分析明确PCa组织中两种蛋白的相关性;用x2检验分析其与PCa危险因素等级中PSA、Gleason分值和临床分期间的关系.结果 (1)Spearman分析显示KLF4与E-cadherin蛋白表达正相关;(2)与BPH相比,Pca中KLF4和E-cadherin蛋白均降低; (3)KLF4蛋白表达与Pca 临床分期及PSA相关;(4)E-cadherin蛋白表达与PSA、Gleason分值及临床分期相关.结论 Pca组织中KLF4和E-cadherin蛋白表达水平与危险因素等级密切相关,均是重要的临床分期指标,联合检测PSA能精确判断Pca预后.
关键词： 前列腺肿瘤 Kruppel样转录因子类 钙黏着糖蛋白类 -
微RNA-25通过调控Klf4表达促进肝癌细胞的增殖和迁移
目的:探讨肝癌细胞中微RNA-25(microRNA-25,miR-25)对核转录因子Krüppel样因子4(Krüppel-like factor4,Klf4)基因表达的靶向调控作用,以及对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响.方法:通过生物信息学工具预测miR-25可能调控的靶基因.将miR-25模拟物和抑制子分别转染人肝癌细胞Sk-hep-1和Bel-7402后,采用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法和双荧光素酶报告基因实验验证miR-25对Klf4基因的调控作用;同时,将Klf4过表达质粒共转染至以上细胞株,然后采用CCK-8法和Transwell细胞迁移实验分别检测miR-25和Klf4表达变化对肝癌细胞增殖和迁移的影响.结果:生物信息学分析表明,miR-25可与K1f4基因3'端非翻译区的2个潜在结合位点相结合.miR-25可以调控Klf4基因的表达,其中miR-25模拟物转染后Klf4表达明显下调(P＜0.05),而miR-25抑制子转染后Klf4表达明显上调(P＜0.05).miR-25模拟物转染能促进肝癌Sk-hep-1和Bel-7402细胞的增殖和迁移能力(P值均＜0.05),miR-25抑制子可抑制Sk-hep-1和Bel-7402细胞的增殖和迁移能力(P值均＜0.05);而肝癌细胞转染Klf4过表达质粒后,miR-25模拟物对肝癌细胞增殖和迁移能力的促进作用明显减弱(P值均＜0.05),miR-25抑制子对肝癌细胞增殖和迁移能力的抑制作用则明显增强(P值均＜ 0.05).结论:miR-25可促进肝癌细胞的增殖和迁移,其作用机制可能与靶向调控抑癌基因Klf4的表达有关.
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Krüppel样转录因子8在肝细胞癌中经PI3K/Akt通路调控VEGFA的表达
目的:探讨肝细胞癌中Krüppel样转录因子8(Krüppel-like transcription factor 8,KLF8)对血管内皮生长因子A (vascular endothelial growth factor A,VEGFA)表达的调控作用及其可能的分子机制.方法:采用免疫组织化学染色法检测配对的肝细胞癌及癌旁组织中KLF8与VEGFA的表达,分析两蛋白表达水平之间的相关性.将重组质粒pcDNA3.1-KLF8及其对照质粒分别转染人肝癌SMMC7721细胞后,采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测SMMC7721细胞中VEGFA及磷酯酰肌醇3激酶(phosphoinositide-3-kinase,PI3K)/Akt通路相关蛋白磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)、磷酸化磷酸肌醇依赖激酶1(phospho-phosphoinositide-dependent kinase 1,p-PDK1)和磷酸化染色体10缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物(phospho-phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10,p-PTEN)的表达水平;同时,蛋白质印迹法检测PI3K/Akt通路抑制剂LY294002对过表达KLF8的SMMC7721细胞中VEGFA蛋白表达的作用.采用鸡胚绒毛尿囊膜模型检测上调KLF8表达的SMMC7721细胞对鸡胚血管生成的诱导作用.结果:与癌旁组织相比,KLF8与VEGFA蛋白在肝细胞癌组织中表达水平均明显升高(P＜0.01).肝癌组织中,KLF8与VEGFA蛋白表达之间具有正相关性(r=0.622,P＜0.01).与对照组相比,转染pcDNA3.1-KLF8的SMMC7721细胞中,KLF8、VEGFA、p-Akt、p-PDK1和p-PTEN蛋白的表达水平均升高(P＜0.05);LY294002可抑制KLF8过表达的SMMC7721细胞中VEGFA的表达(P＜0.05).上调KLF8表达的SMMC7721细胞具有更强的诱导鸡胚血管生长的作用(P＜0.01).结论:KLF8基因在肝细胞癌中可能通过PI3K/Akt信号通路诱导VEGFA的表达,进而调控肿瘤血管新生.
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大鼠腹膜组织增龄性衰老的分子病理学改变
目的 观察不同年龄段大鼠腹膜结构的改变,寻找腹膜增龄性衰老的分子病理特点.方法 18只雄性SD大鼠随机分为3组:幼年组(1个月龄)、成年组(8个月龄)、老年组(18个月龄),每组6只;取壁层腹膜行H-E染色及β-半乳糖苷酶染色,观察大鼠腹膜形态改变.半定量计算腹膜厚度、腹膜间皮细胞数及单位面积腹膜血管数;用RT-PCR及蛋白质免疫印迹法观察脏层腹膜转化生长因子31(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)、锌指蛋白转录因子15 (Krüppel like factor 15,KLF15) mRNA和蛋白的表达情况.结果 随着年龄增加,大鼠腹膜增厚,腹膜间皮细胞减少,间皮下基质血管增生明显(P＜0.05).脏层腹膜TGF-β1表达逐渐上调(P＜0.05),KLF15表达逐渐减少(P＜0.05).TGF-β1表达与KLF15表达呈负相关.结论 推测TGF-β1可能在大鼠腹膜增龄性衰老过程中起到促进作用,而KLF15因子可能抑制腹膜衰老.
关键词： 腹膜 衰老 转化生长因子β1 Kruppel样转录因子类 -
转录因子KLF9与肿瘤的研究进展
Kruppel样因子9（KLF9）是参与基因转录调控的锌指蛋白之一，广泛参与了细胞的增殖、分化以及组织器官的分化发育等过程。KLF9在多种肿瘤组织及肿瘤细胞中低表达，对肿瘤细胞的增殖及凋亡发挥重要作用。KLF9可以通过多种信号途径以及与细胞内不同蛋白的相互作用，影响肿瘤细胞的增殖及凋亡，影响肿瘤的形成和发展，在内分泌相关肿瘤方面KLF9的作用尤为明显。
关键词： 肿瘤形成过程 基因表达 细胞凋亡 Kruppel样转录因子类 -
Krüppel样转录因子9在胰腺癌中的表达及其临床意义
目的:探讨Krüppel样转录因子9(KLF9)在胰腺癌中的表达并探讨其与胰腺癌患者临床病理参数、预后的关系.方法:收集200例配对的胰腺癌组织与癌旁组织标本,分别用RT-PCR(28对)、Western blot(4对)和免疫组化(全部标本)检测KLF9的表达,分析KLF9的表达水平与患者临床病理参数以及生存率的关系.结果:RT-PCR结果显示,在28例配对标本中,21例(75％)胰腺癌组织中KLF9 mRNA的表达水平明显低于其癌旁正常胰腺组织.Western blot结果显示,与癌旁正常胰腺组织比较,胰腺癌组织中KLF9蛋白表达水平明显下调.免疫组化显示,在胰腺癌组织中KLF9的染色强度明显减弱.与患者临床病理参数关系分析结果显示,KLF9的表达水平与肿瘤的分化程度(P=0.008)和血管侵犯(P=0.006)有关.生存分析显示,KLF9阳性表达患者1、2、3年总生存率明显高KLF9阴性表达患者(41％、31％、16％vs.18％、6％、6％)、中位生存时间明显长于KLF9阴性表达患者(21.05个月vs.11.82个月)(均P＜0.05).结论:KLF9在胰腺癌中表达下调,且可能与不良预后密切相关.
关键词： 胰腺肿瘤 Kruppel样转录因子类 预后 -
miR-103/KLF4在肺癌A549细胞及耐药细胞中的表达检测及靶向关系验证
目的 研究miR-103/KLF4(Krüppel样因子4)在肺癌A549细胞及耐药细胞中的表达及其靶向关系.方法 培养肺癌细胞系A549及耐药细胞系A549/DDP(顺铂).采用噻唑蓝(MTT)检测细胞的存活率,RT-PCR和Western blot等方法测定两细胞株中miR-103/KLF4的表达情况,双荧光素酶报告基因实验对二者的靶向关系进行验证.结果 miR-103在耐药株细胞A549/DDP中存在高表达,KLF4在耐药株细胞A549/DDP中表达明显降低.在肺癌细胞中,miR-103可以直接靶向KLF4-3'非翻译区(3'UTR).结论 在A549/DDP中miR-103可以直接靶向调控KLF4.
关键词： 微RNAs/代谢 Kruppel样转录因子类 肺肿瘤/病理学/代谢 抗药性 肿瘤
