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肠黏膜屏障与常见老年慢性病的相关研究进展
肠道作为机体与外界相通的器官,其屏障功能是否健全直接关系到整个机体的稳态.近年来广受学者关注的肠黏膜屏障与多种慢性病的联系则是屏障功能与机体稳态的直接表现.肠道菌群构成与年龄有关,婴儿肠道菌群个体差异较大,分娩方式、喂养方式等均可能影响初始化肠道菌群结构,约1岁以后肠道菌群逐渐达到稳态[1].随着机体的老化,肠道菌群多样性下降,双歧杆菌、乳杆菌等检出率下降,而肠球菌、肠杆菌等数量增加[2].现就肠黏膜屏障构成、破坏机制及肠黏膜生物屏障与常见老年慢性病关系做一综述,以期为老年慢病的防治寻找新的切入点.
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唾液乳铁蛋白和溶菌酶含量与乳牙患龋的关系
目的 分析高龋和无龋儿童唾液乳铁蛋白和溶菌酶的含量,初步探讨唾液乳铁蛋白和溶菌酶含量与乳牙患龋的关系,为乳牙龋病防治提供依据.方法以高龋(龋、失、补牙数≥5,高龋组)和无龋(龋、失、补牙数=0,无龋组)儿童各40名为研究对象,双金鸡纳酸法测定唾液总蛋白含量,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳分析唾液蛋白条带,免疫印迹法检测唾液乳铁蛋白和溶菌酶含量.结果高龋组总蛋白含量[(852.02±206.14)mg/L]低于无龋组[(1032.44±221.99)mg/L],差异有统计学意义(P<0.001),相对分子质量为77 000蛋白的百分含量[(12.50±7.73)IA/μg]显著高于无龋组[(8.71±4.28)IA/μg,P=0.009],相对分子质量为14 500蛋白的百分含量两组间差异无统计学意义(P=0.137).高龋组乳铁蛋白百分含量[(229.04±197.14)IA/μg]显著高于无龋组[(144.07±99.91)IA/μg,P=0.018],溶菌酶含量两组差异无统计学意义(P=0.091).结论唾液蛋白与乳牙患龋密切相关,乳铁蛋白可能是其中一种重要的成分.
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创悦?联合负压封闭引流治疗车祸伤伴感染1例
1 病例资料1.1 一般资料患者,男,39岁,于2016年7月7日发生车祸,左下肢撞伤,伤后即感疼痛剧烈,出血活跃,伴左下肢活动受限,紧急送往当地医院,查看病情并简单包扎处理,7 h后转诊至北京朝阳中西医结合急诊抢救中心.入院检查见左小腿中部内侧、外侧两处不规则伤口,创缘不整齐,皮下组织外露,深及肌层,创面污染严重,左足背大面积皮肤和软组织缺损,部分肌腱断裂伴缺损,关节脱位明显,压痛明显,左小腿及左足感觉减退,左小腿后外侧、足外侧缘及足根部感觉消失,足背动脉及胫后动脉搏动良好,左足各趾及踝关节活动受限,膝、髋关节活动正常.X线片见左腓骨中部骨折,未见位移,足第2、3、4跖趾关节脱位,第4、5跖跗关节脱位,余各骨未见明显骨质结构异常.凝血4项:纤维蛋白原1.46 g/L↓,凝血酶时间21.80 s↑.血中总蛋白50.8 g/L↓,白蛋白35.9 g/L↓,球蛋白14.9 g/L↓,葡萄糖2.80 mmol/L↓.白细胞13.95×109/L↑,中性粒细胞百分比90.10%↑,淋巴细胞百分比5.40%↓,红细胞3.19×1012/L↓.血红蛋白106.0 g/L↓.细菌培养结果为铜绿假单胞菌感染.
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蛋清溶菌酶对乙肝病毒的抑制作用
目的:观察蛋清溶菌酶(HEWL)对人乙型肝炎病毒(HBV)的抑制作用.方法:以2.2.15细胞为模型,以苦参碱为阳性对照药,采用细胞病变法(CPE)和酶联免疫吸附实验(ELISA)判定溶菌酶对2.2.15细胞乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)表达水平的抑制效果.结果:HEWL对细胞的大无毒浓度(TC0)和半数中毒浓度(TC50)均>1 000 μg·mL-1,HEWL对2.2.15细胞HBsAg抑制作用的半数有效浓度(IC50)为(213.0±71.3) μg·mL-1,对细胞HBeAg无抑制作用.苦参碱对2.2.15细胞的TC0和TC50均>250 μg·mL-1.苦参碱对2.2.15细胞HBsAg抑制作用IC50的为(54.2±17.1) μg·mL-1,对HBeAg无抑制作用.结论:蛋清溶菌酶对2.2.15细胞的HBsAg表达有较明显的抑制作用,对其HBeAg无抑制作用.
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蛋清溶菌酶对人单纯疱疹病毒Ⅰ型抑制作用的实验研究
目的:观察蛋清溶菌酶(HEWL)对人单纯疱疹病毒Ⅰ型(hHSV-1)的抑制作用.方法:以HSV-1的敏感细胞BHK-21为实验细胞模型,以更昔洛韦为阳性对照药,以0.5%12-烷基磺酸钠(SDS)为阻断剂,采用细胞病变法(CPE)判定溶菌酶对hHSV-1的抑制效果.结果:HEWL对细胞的大无毒浓度(TC0)和半数中毒浓度(TC50)均>1 000μg·mL-1,HEWL对hHSV-1抑制作用的小有效浓度(MIC)为104.17 μg·mL-1,半数有效浓度(IC50)为46.88μg·mL-1,治疗指数(TI)为10.67.在平行对照试验中,更昔洛韦对BHK-21细胞的TC0和TC50均>500 μg·mL-1.更昔洛韦对hHSV-1抑制作用的MIC为7.81μg·mL-1,IC50为3.91 μg·mL-1,TI为64.0.5%SDS完全阻断了HEWL的抗病毒能力.结论:蛋清溶菌酶对HSV-1有较明显的抑制作用,作用强度与溶菌酶的浓度相关.
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人溶菌酶-木聚糖酶融合基因在毕赤酵母中的表达
目的 在毕赤酵母中表达人溶菌酶(Human lysozyme,hLY)-木聚糖酶(Xylanases,Xyn Ⅱ)融合基因.方法 通过PCR技术将hLY基因与Xyn Ⅱ基因连接,中间插人肠激酶识别位点序列;将其克隆至载体pPIC9K上,构建重组表达质粒pPIC9K-Xyn Ⅱ-EKsite-hLY,经Sac Ⅰ线性化后,电转化毕赤酵母GS115,通过G418抗性筛选得到高拷贝转化子,PCH鉴定为阳性的克隆用甲醉进行诱导;表达的融合蛋白经Sephadex G-75凝胶柱层析纯化后,用肠激酶酶切,分别采用改良舒加法和DNS法测定hLY和Xyn Ⅱ的活性.结果 获得的融合基因序列与理论序列完全一致;重组表达质粒构建正确;融合蛋白的hLY和Xyn Ⅱ活性分别为170和158 U/ml,经肠激酶酶切后,hLY的活性为520 U/ml,Xyn Ⅱ的活性达244 U/ml.结论 已在毕赤酵母中成功表达了Xyn Ⅱ-EKsite-hLY融合基因,经肠激酶酶切后的目的蛋白活性均有较大提高.
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溶菌酶对体外培养的人成纤维细胞基质金属蛋白酶-1和12及赖氨酸氧化酶基因表达的影响
目的 探讨溶菌酶对体外培养的人成纤维细胞基质金属蛋白酶-1和12及赖氨酸氧化酶基因表达的影响.方法 采用酶消化法进行体外人皮肤成纤维细胞原代培养,然后将不同浓度的溶菌酶(0,1×10~(-8)×10~(-7)mol/L)加入体外培养的人皮肤成纤维细胞中,待药物作用后,提取总RNA,通过逆转录反应获得cDNA并进行体外扩增,对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,根据条带的平均光密度A值的比值来判断人成纤维细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-12及赖氨酸氧化酶(LOX)mRNA的表达水平.结果 对体外培养的人成纤维细胞进行溶菌酶干预,经β肌动蛋白内参校正后,RT-PCR示对照组、低剂量组、高剂昔组MMP-1、MMP-12 mRNA表达水平三组问差异具有统计学意义(F值分别为6.98和4.44,P值均<0.05). SNK-q检验显示,低剂量组与对照组、高剂量组比较,差异均无统计学意义(P>0.05),高剂量组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).LOX mRNA表达水平三组间差异具有统计学意义(F＝5.24,P<0.05),SNK-q检验显示,低剂量组、高剂量组与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05),低剂量组与高剂量组相比,差异无统计学意义(P>0.05).结论 溶菌酶可以下调MMP-1和MMP-12及上调LOX基因的转录水平.
关键词： 成纤维细胞 胞壁质酶 基质金属蛋白酶1 基质金属蛋白酶12 蛋白赖氨酸6-氧化酶 -
溶菌酶在医药中的应用及其研究进展
溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞质聚糖水解酶,它能专一性的作用于目的微生物的细胞壁而不能专一性的作用于其它物质.是一种无毒,无害安全性很高的盐基水解蛋白酶.被广泛应用于食品,饲料,医药等行业.本文重点介绍了溶菌酶在医药中的应用,并展望了其发展及应用前景.
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复合溶葡萄球菌酶消毒剂的抗菌作用及其对全层皮肤缺损大鼠移植人工真皮后感染的预防作用
目的 研究复合溶葡萄球菌酶消毒剂的抗菌作用及其对全层皮肤缺损大鼠移植人工真皮后感染的预防作用. 方法 (1)取肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌、金黄色葡萄球菌标准菌株各1株,采用随机数字表法选取从笔者单位2014年1月-2016年12月收治烧伤患者创面分泌物中分离出的肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌、金黄色葡萄球菌各20株,测定复合溶葡萄球菌酶消毒剂对上述菌株的低抑菌浓度(MIC)及低杀菌浓度(MBC),实验重复3次.临床菌株MIC和/或MBC高于对应标准菌株者判定为对该消毒剂敏感性降低,计算3种细菌各自的敏感性降低菌株百分比.(2)将人工真皮于复合溶葡萄球菌酶消毒剂中分别浸泡5 min、1h、2h、4h(每个时间点21块),另分别于静置0(即刻)、12、24、36、48、60、72 h(每个时间点3块)后测量其对金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌标准菌株抑菌圈直径,实验重复3次.以浸泡消毒剂的人工真皮可形成有效抑菌圈(直径＞7 mm)的长静置时间所对应的短浸泡时间为该消毒剂对人工真皮的充分浸泡时间.(3)取40只SD大鼠,采用随机数字表法分为伤后3、7、14、21 d取材组,每组10只.于每只大鼠背部脊柱两侧各做1个直径20 mm的全层皮肤缺损创面,伤后即刻脊柱左侧创面移植未进行任何处理的人工真皮(下称对照创面),脊柱右侧创面移植充分浸泡复合溶葡萄球菌酶消毒剂的人工真皮(下称消毒剂创面).伤后3、7、14、21 d,观察所有存活大鼠创面大体情况,计算对照创面和消毒剂创面的新发感染率,随后处死对应时间取材组大鼠,取所有包含人工真皮的全层创面组织行细菌定量,对比未感染对照创面和未感染消毒剂创面的细菌含量.对数据进行x2检验和Wilcoxon秩和检验. 结果 (1)复合溶葡萄球菌酶消毒剂对金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌标准菌株的MIC分别为该消毒剂原始浓度的1/32、1/32、1/512,MBC分别为该消毒剂原始浓度的1/32、1/16、1/512.肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌、金黄色葡萄球菌临床菌株对复合溶葡萄球菌酶消毒剂敏感性降低菌株百分比分别为15％(3/20)、20％(4/20)、10％(2/20).(2)浸泡复合溶葡萄球菌酶消毒剂2、4h后人工真皮对肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌、金黄色葡萄球菌标准菌株可形成有效抑菌圈的长静置时间均分别为24、36、48 h,久于浸泡5 min的12、24、24 h和浸泡1h的24、24、36 h.2h为该消毒剂对人工真皮的充分浸泡时间.(3)伤后3d,大鼠所有创面均未见感染症状,对照创面及消毒剂创面新发感染率均为0.人工真皮透亮,但与创面尚未建立良好连接.伤后7d,大鼠对照创面新发感染率为20.00％(6/30),明显高于消毒剂创面的3.33％ (1/30),x2=4.043,P＜0.05.感染创面可见大量脓性分泌物,人工真皮与创面未形成连接且部分降解;未感染创面人工真皮透亮,并与创面建立部分连接.伤后14、21d均未观察到新的感染创面,大鼠对照创面及消毒剂创面新发感染率均为0.感染创面未见明显好转;未感染创面人工真皮胶原层与创面已建立良好连接,硅胶层和胶原层逐渐分离.伤后7、14、21 d取材组大鼠分别有2、3、1个对照创面出现感染,且伤后14d取材组大鼠1个消毒剂创面出现感染,创面组织细菌含量为0.79×106 ～7.22 ×109集落形成单位(CFU)/g.伤后3、7、14 d取材组大鼠未感染对照创面组织细菌含量分别为(3.43±1.88) ×102、(2.37±0.43) ×103、(8.40±1.03)×103 CFU/g,明显高于未感染消毒剂创面组织的(0.33±0.12) ×102、(0.43±0.17) ×103、(2.16±0.52)×103 CFU/g(Z=-3.780、-3.554、-3.334,P＜0.05);伤后21 d取材组未感染对照创面与未感染消毒剂创面组织细菌含量相近(Z=-0.490,P＞0.05). 结论 复合溶葡萄球菌酶消毒剂对肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌、金黄色葡萄球菌具有较强的抗菌能力,这3个菌种的临床菌株对该消毒剂的敏感性均较高;人工真皮浸泡复合溶葡萄球菌酶消毒剂2h后吸收饱和,静置24、36、48 h后仍分别对肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌、金黄色葡萄球菌具有抑菌作用,移植于大鼠全层皮肤缺损创面后感染率降低,并减少了创面组织细菌含量.
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海洋低温溶菌酶对阴道炎常见致病菌的作用
①目的评价海洋低温溶菌酶对阴道炎常见致病菌的体外抗菌活性.②方法采用琼脂平皿二倍稀释法测定海洋低温溶菌酶对阴道炎常见致病菌白色念珠菌、生孢梭菌以及金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的低抑菌浓度(MIC)和低杀菌浓度(MBC).③结果海洋低温溶菌酶对白色念珠菌、生孢梭菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌均有较好的抗菌活性,其MIC分别为39.07、9.75、10.94、10.94 μmol/L,MBC分别为39.07、19.57、10.94、21.88 μmol/L.④结论海洋低温溶菌酶对一些阴道炎常见致病菌有较好的抗菌活性.
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海洋低温溶菌酶的急性毒性试验
①目的对海洋杆菌产低温溶菌酶进行安全性评价.②方法应用小鼠急性毒性试验,观察海洋低温溶菌酶对小鼠一次灌胃后和尾静脉注射后所产生的急性毒性反应.③结果小鼠一次灌胃的大耐受量为10 400.00 mg/kg体质量;小鼠一次尾静脉注射的LD50为4 530.54 mg/kg体质量,LD50的95%可信限为4 193.19～4 867.89 mg/kg体质量,LD50的99%可信限为4 088.24～4 972.84 mg/kg体质量.④结论海洋低温溶菌酶为实际无毒物.
