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阿托伐他汀对慢性心力衰竭小鼠心肌组织赖氨酰氧化酶表达的影响
目的 研究阿托伐他汀对慢性心力衰竭(CHF)小鼠心肌组织赖氨酰氧化酶(LOX)表达的影响及机制.方法 选取C57BL/6小鼠复制CHF小鼠模型,再随机分为CHF组10只、阿托伐他汀组11只[阿托伐他汀3 mg/(kg·d)灌胃]和β氨基丙腈组10只[β氨基丙w100 mg/(kg·d)灌胃].另设对照组9只.在4周末将小鼠处死,提取心肌组织RNA及蛋白质,RT-PCR法测定心肌组织LOX、基质金属蛋白酶9(MMP-9)及NF-κB的mRNA表达水平,Western blot测定心肌组织LOX、磷酸化p38及p38蛋白表达水平.结果 CHF组小鼠心肌组织LOX、MMP-9、NF-κB mRNA表达明显高于对照组(P＜0.01)；阿托伐他汀组心肌组织LOX、MMP-9、NF-κB mRNA表达较CHF组明显下调(P＜0.01).CHF组心肌组织LOX及磷酸化p38蛋白表达明显高于对照组(P＜0.01)；与CHF组比较,阿托伐他汀组及β氨基丙g组心肌组织LOX及磷酸化p38蛋白表达明显下降(P＜0.01).结论 阿托伐他汀可逆转CHF小鼠心肌组织LOX的表达,LOX可通过调节CHF小鼠心肌组织MMP-9表达,从而抑制心脏重构,这可能是延缓CHF进展的重要机制.
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子宫主韧带弹性蛋白、赖氨酰氧化酶和弹性蛋白酶抑制剂基因表达与盆腔器官脱垂发生的关系
目的 探讨子宫主韧带中弹性蛋白、赖氨酰氧化酶和弹性蛋白酶抑制剂基因表达变化与盆腔器官脱垂(POP)发生、发展的关系.方法 选择因子宫脱垂而行子宫全切除术的患者60例(POP组),其中绝经前27例,绝经后33例;选择同期因妇科良性疾病、无压力性尿失禁或POP而行子宫全切除术的患者60例为对照组,其中绝经前42例,绝经后18例.于手术中取子宫主韧带,采用RT-PCR技术检测弹性蛋白、赖氨酰氧化酶和弹性蛋白酶抑制剂mRNA的表达,免疫组化蛋白印迹法检测3种基因的蛋白表达.结果 (1)弹性蛋白mRNA及蛋白表达:POP组患者绝经前、后子宫主韧带弹性蛋白mRNA的表达分别为0.42±0.22、0.26±0.20,子宫主韧带弹性蛋白的蛋白表达分别为0.44±0.32、0.20±0.19;对照组患者绝经前、后子宫主韧带弹性蛋白mRNA的表达分别为0.79±0.30、0.63±0.23,子宫主韧带弹性蛋白的蛋白表达分别为0.89±0.27、0.78±0.25,两组绝经前及绝经后患者子宫主韧带弹性蛋白mRNA及蛋白表达分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)赖氨酰氧化酶mRNA及蛋白表达:POP组患者绝经前、后赖氨酰氧化酶mRI~A的表达分别为0.37±0.18、0.20±0.14,赖氨酰氧化酶的蛋白表达分别为0.45±0.27、0.26±0.21,对照组患者绝经前、后子宫主韧带赖氨酰氧化酶mRNA表达分别为0.65±0.22、0.53±0.20,子宫主韧带赖氨酰氧化酶的蛋白表达分别为0.85±0.39、0.69±0.31,两组绝经前及绝经后患者子宫主韧带赖氨酰氧化酶mRNA及蛋白表达分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).POP组患者绝经后子宫主韧带弹性蛋白、赖氨酰氧化酶mRNA及蛋白表达均明显低于绝经前患者(P＜0.05).(3)弹性蛋白酶抑制剂mRNA及蛋白表达:POP组患者绝经前、后子宫主韧带弹性蛋白酶抑制剂mRNA表达分别为1.33±0.35、1.47±0.37,子宫主韧带弹性蛋白酶抑制剂的蛋白表达分别为0.85±0.30、0.76±0.35,对照组患者绝经前、后子宫主韧带弹性蛋白酶抑制剂mRNA表达分别为0.62±0.25、0.55±0.24,子宫主韧带弹性蛋白酶抑制剂的蛋白表达分别为0.21±0.15、0.29±0.22,两组绝经前及绝经后患者子宫主韧带弹性蛋白酶抑制剂mRNA及蛋白表达分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);POP组患者绝经前、后弹性蛋白酶抑制剂mRNA及蛋白表达比较,差异无统计学意义(P＞0.05).POP患者子宫主韧带弹性蛋白与赖氨酰氧化酶mRNA及蛋白表达量呈明显的直线正相关关系(r=0.9959、0.9708,P＜0.05),而弹性蛋白与弹性蛋白酶抑制剂mRNA及蛋白表达量无直线相关性(r=-0.0402、-0.0365,P＞0.05).结论 POP患者子宫主韧带弹性蛋白、赖氨酰氧化酶表达下调及弹性蛋白酶抑制剂表达上调,可能与POP发生有关.
关键词： 子宫脱垂 弹性蛋白 蛋白赖氨酸6-氧化酶 蛋白质类 -
铜及赖氨酰氧化酶与胎膜早破的相关性研究
目的探讨孕妇血清铜(Cu)、羊膜Cu、羊膜赖氨酰氧化酶(LOX)、羊膜Ⅲ型胶原的水平之间的相关性,以及与胎膜早破的关系.方法 100例胎膜早破孕妇作为胎膜早破组,其中妊娠37～42周40例、34～36周+6 40例、28～33周+6 20例;与胎膜早破组孕周、例数相对应的100例非胎膜早破孕妇作为对照组.应用火焰原子吸收法检测两组孕妇血清Cu和羊膜Cu水平,荧光发光法检测羊膜LOX水平,免疫组化法和图像分析法检测羊膜Ⅲ型胶原水平.将不同孕周孕妇血清Cu、羊膜Cu、羊膜LOX、羊膜Ⅲ型胶原测定结果进行直线相关分析,并比较胎膜早破组与对照组在这些指标上的差异. 结果 (1)妊娠37～42周:两组孕妇血清Cu与羊膜Cu水平呈正相关,r为0.82(P<0.001),其他各指标均无相关关系.(2)妊娠34～36周+6和28～33周+6:两组孕妇血清Cu、羊膜Cu、羊膜LOX、羊膜Ⅲ型胶原水平之间均呈正相关(P<0.01).(3)妊娠37～42周:两组孕妇血清Cu水平与羊膜Cu比较,差异无统计学意义(P>0.05);胎膜早破组及对照组孕妇羊膜LOX水平分别为(0.53±0.10)和(0.75±0.10)μg/g(P<0.01),羊膜Ⅲ型胶原吸光度(A)值分别为0.36±0.01和0.37±0.01(P<0.05);(4)妊娠34～36周+6:胎膜早破组及对照组孕妇血清Cu水平分别为(115.23±9.56)、(139.03±10.59)mg/L,羊膜Cu水平分别为(0.19±0.04)、(0.29±0.04)μg/mg,羊膜LOX水平分别为(0.54±0.10)、 (0.70±0.13)μg/g,羊膜Ⅲ型胶原A值分别为0.36±0.01、0.37±0.01.胎膜早破组以上各指标均低于对照组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01).(5)妊娠28～33周+6:胎膜早破组及对照组孕妇血清Cu水平分别为(120.31±8.04)、(136.40±8.21)μg/L,羊膜Cu水平分别为(0.21±0.04)、(0.26±0.03)μg/mg, 羊膜LOX水平分别为(0.62±0.09)、(0.72±0.09)μg/g,羊膜Ⅲ型胶原A值分别为0.35±0.01、0.38±0.01.胎膜早破组以上各指标均低于对照组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论足月妊娠的胎膜早破孕妇,其羊膜LOX和羊膜Ⅲ型胶原水平下降不受血清Cu水平的影响,这可能与羊膜的退行性变加快有关;未足月妊娠的胎膜早破孕妇血清Cu、羊膜Cu、羊膜LOX和羊膜Ⅲ型胶原的水平降低则与胎膜早破的发生直接相关.
关键词： 胎膜早破 铜 蛋白赖氨酸6-氧化酶 胶原Ⅲ型 -
赖氨酰氧化酶在乳腺癌侵袭转移中的作用机制
目的 探讨赖氨酰氧化酶(LOX)基因特异性RNA干扰对乳腺癌细胞侵袭转移的影响及机制.方法 构建LOX基因特异性的慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV),转染至乳腺癌细胞MDA-MB-231,实时定量荧光PCR检测MDA-MB-231细胞中LOX及转移相关因子基质金属蛋白酶(MMP)2、9的表达,Western印迹检测LOX蛋白的表达,细胞侵袭试验(Transwell小室)检测转染前后细胞侵袭迁移能力变化.免疫组织化学法检测111例乳腺癌组织、癌旁乳腺组织及20例乳腺良性病变组织中LOX的表达,并对其与临床病理资料及MMP-2、MMP-9的相关性进行分析.结果 转染LOX-RNAi-LV后乳腺癌细胞MDA-MB-231中的LOX mRNA和蛋白被明显抑制,抑制率分别为89.2％±1.3％和84.4％±0.4％;干扰组细胞MMP-2、MMP-9 mRNA相对表达量分别为0.496±0.021和0.571±0.099,均明显低于阴性对照组(0.846±0.047,0.786±0.042)和空白对照组(1.000±0.000,1.000±0.000)(均P＜0.05)；Transwell侵袭和迁移实验中,干扰组穿过Transwell小室滤过膜细胞数分别为47±2和63±2,均明显少于阴性对照组(100±1,118±2)和空白对照组(100±1,118±2)(均P=0.000)；LOX蛋白在人乳腺癌、癌旁乳腺组织及乳腺良性肿瘤组织中的表达率分别为48.6％(54/111)、26.1％(29/111)、20.0％(4/20),乳腺癌组织中LOX蛋白的表达率明显高于癌旁乳腺组织及乳腺良性肿瘤组织(P=0.019).LOX蛋白在不同肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移的表达率差异有统计学意义.相关分析显示,LOX蛋白表达与MMP-2(r=0.262,P=0.005)、MMP-9(r=0.424,P=0.000)蛋白之间呈显著正相关.结论 LOX可以促进乳腺癌的侵袭转移；LOX和MMP-2、MMP-9转移因子可能具有协同促进作用,促进了乳腺癌的侵袭转移.
关键词： 乳腺肿瘤 蛋白赖氨酸6-氧化酶 RNA干扰 肿瘤侵袭 肿瘤转移 -
干扰LOX基因对喉鳞癌Hep-2细胞增殖、侵袭及放疗敏感性的影响
目的：探讨抑制赖氨酰氧化酶（LOX）基因表达对喉鳞癌Hep-2细胞增殖、侵袭及放疗敏感性的影响。方法将Hep-2细胞分为空白对照组（正常培养对照）、阴性对照组（转染试剂对照）、转染组（转染LOX siRNA），用Real-time PCR法、Western blot法分别检测各组细胞LOX、增殖细胞核抗原（Ki-67、PCNA）、基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达水平；MTT法检测不同剂量X射线（0、3、6、9、12、15、18 Gy）照射对Hep-2细胞生存率的影响，流式细胞术（FCM）检测Hep-2细胞凋亡情况。结果转染LOX siRNA后转染组Hep-2细胞中的LOX、Ki-67、PCNA、MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白表达明显低于阴性对照组和空白对照组。用剂量为12、15、18 Gy X射线照射Hep-2细胞后24 h，可明显抑制细胞生存率（P<0.05），并呈剂量依赖性。转染组联合放疗组的细胞凋亡指数明显高于空白对照组、阴性对照组及放疗组（%：79.11±1.26 vs 5.01±1.02、4.95±1.12、43.21±2.12，P<0.05）。结论转染LOX siRNA可下调Hep-2细胞LOX表达，抑制细胞增殖，并且可增强放疗敏感性，作用机制可能与Hep-2细胞中Ki-67、PCNA、MMP-2、MMP-9表达下调有关。
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溶菌酶对体外培养的人成纤维细胞基质金属蛋白酶-1和12及赖氨酸氧化酶基因表达的影响
目的 探讨溶菌酶对体外培养的人成纤维细胞基质金属蛋白酶-1和12及赖氨酸氧化酶基因表达的影响.方法 采用酶消化法进行体外人皮肤成纤维细胞原代培养,然后将不同浓度的溶菌酶(0,1×10~(-8)×10~(-7)mol/L)加入体外培养的人皮肤成纤维细胞中,待药物作用后,提取总RNA,通过逆转录反应获得cDNA并进行体外扩增,对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,根据条带的平均光密度A值的比值来判断人成纤维细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-12及赖氨酸氧化酶(LOX)mRNA的表达水平.结果 对体外培养的人成纤维细胞进行溶菌酶干预,经β肌动蛋白内参校正后,RT-PCR示对照组、低剂量组、高剂昔组MMP-1、MMP-12 mRNA表达水平三组问差异具有统计学意义(F值分别为6.98和4.44,P值均<0.05). SNK-q检验显示,低剂量组与对照组、高剂量组比较,差异均无统计学意义(P>0.05),高剂量组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).LOX mRNA表达水平三组间差异具有统计学意义(F＝5.24,P<0.05),SNK-q检验显示,低剂量组、高剂量组与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05),低剂量组与高剂量组相比,差异无统计学意义(P>0.05).结论 溶菌酶可以下调MMP-1和MMP-12及上调LOX基因的转录水平.
关键词： 成纤维细胞 胞壁质酶 基质金属蛋白酶1 基质金属蛋白酶12 蛋白赖氨酸6-氧化酶 -
赖氨酰氧化酶前肽与肿瘤
赖氨酰氧化酶(LOX)是一种铜依赖的单胺类氧化酶,能稳定细胞外基质,与肿瘤细胞分化、恶性转化和侵袭性密切相关.赖氨酰氧化酶前肽(LOX-PP)是LOX分泌到细胞外,在溶胶蛋白酶的作用下被分解成的一个片段,研究发现LOX-PP具有自身特有的结构及生物学功能,并能够抑制肿瘤细胞的生长,在肿瘤发生、发展过程中具有重要作用,有望成为肿瘤治疗的新靶点.
关键词： 蛋白赖氨酸6-氧化酶 肿瘤 基因 肿瘤抑制 -
赖氨酰氧化酶样蛋白2与肿瘤的相关性及作用机制
赖氨酰氧化酶样蛋白2( LOXL2)是赖氨酰氧化酶(LOX)家族成员之一.目前,大多数学者认为LOXL2是一种促进转移基因,也有一些认为是肿瘤抑制基因.研究发现LOXL2与多种基因联合协同作用,促进肿瘤侵袭、转移,且与不良预后相关,相关研究为判断肿瘤的转移和预后及寻找肿瘤治疗的新靶点提供了新思路.
关键词： 蛋白赖氨酸6-氧化酶 肿瘤 赖氨酰氧化酶样蛋白2 -
绝经前盆腔器官膨出患者子宫主韧带中Elastin、LOX基因表达的研究
目的 检测女性盆底器官膨出(pelvic organ prolapse,POP)患者子宫主韧带中弹性蛋白(Elastin)和赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)表达水平,探讨Elastin、LOX基因与POP发生机制间的关系.方法 选择因POP而行全子宫切除术的绝经前患者42例,同期选择因妇科良性疾病、无压力性尿失禁(stress urinary incontinence,SUI)或POP行全子宫切除术绝经前患者27例作为对照.术中取子宫主韧带,采用逆转录一聚合酶链式反应(TR-PCR)法测定Elastin和LOX的mRNA表达,免疫蛋白印迹法(Western blotting)检测两种蛋白的表达.结果 POP组子宫主韧带中Elastin、LOX mRNA及其蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.05),POP组患者子宫主韧带中Elastin与LOX mRNA 及蛋白表达水平呈明显的正相关(P<0.05).结论 POP患者子宫主韧带Elastin表达减弱影响弹性纤维形成,同时LOX表达减弱可通过影响胶原与弹性纤维的交联亦使盆腔支持结构稳定性降低,进而参与POP的发生.
关键词： 盆底器官膨出 弹性蛋白 蛋白赖氨酸6-氧化酶 -
沉默赖氨酰氧化酶基因对喉癌Hep-2细胞凋亡及化疗敏感性的影响
目的 探讨沉默赖氨酰氧化酶(LOX)基因表达对喉鳞癌Hep-2细胞凋亡及化疗敏感性的影响.方法 将LOX siRNA转染至Hep-2细胞,免疫细胞化学及免疫印迹(Western blot)检测喉鳞癌Hep-2细胞中LOX蛋白表达情况,实时聚合酶反应(RT-PCR)检测LOX mRNA;MTT法检测不同浓度顺铂对Hep-2细胞生长抑制率的影响;流式细胞术(FCM)检测Hep-2细胞凋亡.结果 转染LOX siRNA后Hep-2细胞中LOX蛋白和mRNA表达水平下调(P＜0.05);用浓度为2、3、4mg/L顺铂作用Hep-2细胞后,可明显抑制细胞生长(P＜0.05).转染组细胞联合顺铂作用后细胞凋亡指数及生长抑制率显著高于阴性对照组、空白对照组、顺铂组及转染组(均P ＜0.05).结论 特异性抑制LOX表达可诱导Hep-2细胞凋亡,并增强喉鳞癌Hep-2细胞对顺铂的敏感性.
