首页 > 文献资料
-
先天性巨结肠Pax3和Cx43基因突变及表达
目的:探讨Pax3(pairedbox3)和Cx43(connexin43)基因在先天性巨结肠(Hirschsprungs disease,HD)中突变及表达的意义,分析HD与Pax3和Cx43基因异常的关系.方法:应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和银染单链构像多态性(SSCP)方法检测Pax3和Cx43基因突变和mRNA表达情况.结果:正常人38例肠段对照组织中DNA未发现Cx43 SSCP异常泳动带,而仅有3例(7.9%)出现Pax3 PCR产物单链异常泳动带;HD38例肠管组织中17例(44.7%)出现Pax3PCR产物单链异常泳动带,11例(28.9%)出现Cx43 PCR产物单链异常泳动带.HD各段肠管组织中均有Pax3基因mRNA的表达,痉挛段、移行段和扩张段肠管组织中Pax3mRNA高表达,表达率分别为92.1%,86.8%和76.3%(mean±SD=1.63±0.37;1.42±0.41和1.25±0.17);而正常肠段组织中Pax3 mRNA无表达,有显著性差异(aP＜0.05).Cx43基因mRNA在痉挛段、移行段肠管组织中低表达,表达率为23.7%和18.4%(mean±SD=0.62±0.11和0.51±0.07);而扩张段肠管组织中Cx43有较高表达,表达率为55.3%(mean±SD=1.37±0.19).38名正常人肠段对照组织中无1例Cx43 mRNA阳性表达.结论:HD组织中Pax3和Cx43基因突变及表达异常可能与HD的发生相关密切,Pax3和Cx43突变可能造成信息传递缺陷,扰乱了神经嵴细胞的迁移,从而导致HD的发生.
-
胰岛素受体基因多态性与缺血性脑血管病的关系
本研究拟在分析脑梗死患者胰岛素受体（INSR）基因突变热区第17、20外显子序列变异的基础上，探讨该基因在脑血管病发病中的作用。 1．资料与方法：缺血性脑卒中患者149例，其中动脉粥样硬化(AS)性血栓性脑梗死(ACI)68例，男46例，女22例，年龄（66.6±9.5）岁；腔隙性脑梗死(LI)81例，男51例，女30例，年龄（66.4±9.8）岁。同时选择年龄、性别匹配的健康体检者62例作为正常对照者（HC），男40例，女22例，年龄（65.3±7.3）岁。对3组间分别以χ2 检验性别（χ2 =0.27，P＞0.05）、以F检验年龄（F=2.52，P＞0.05）差异未见显著性。以苯酚-氯仿法抽提白细胞基因组DNA；根据Seino等［1］对INSR基因研究，PCR扩增第17、20外显子序列；以8%非变性聚丙酰胺凝胶（Acr∶Bis为49∶1）电泳对扩增产物进行单链构像多态性（SSCP）分析。血糖(Glu)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、载脂蛋白(Apo)B和ApoA-Ⅰ等由医院检验科测定。
-
载脂蛋白B-100受体结合缺陷新变种的检测
目的筛查导致家族性载脂蛋白B-100(apoB-100)受体结合缺陷的未知突变,以阐明高胆固醇血症的遗传背景,了解apoB-100 受体结合区的定位.方法以原发性高胆固醇血症患者为对象,用聚合酶链反应(PCR)扩增apoB基因第26外显子编码2980-3084位氨基酸残基的核苷酸序列,长363碱基对, 产物进行单链构像多态性(SSCP)分析,以筛查可能存在的突变.结果 341例样本的SSCP图谱均未发现异常电泳带.结论 (1)广东原发性高胆固醇血症患者上述区段不存在突变,或突变率很低.(2)不支持2980-3084残基是apoB-100 的受体结合区的假说.
-
3种常用单核苷酸多态性检测方法的应用比较
目的:通过比较变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)、单链构像多态性(single-stranded conformational polymorphisn,SSCP)、限制性酶切检测单核苷酸多态性(single nucleotide po1ymorphism,SNP)的优缺点,为不同条件下选择适合的SNP检测方法提供借鉴.方法:DGGE、限制性酶切检测150例大肠癌APEX基因第3外显子,SSCP检测第5外显子,后结果经直接测序验证.结果:DGGE检测出17例异常泳动条带;测序结果证实该17例均存在1247A→G的SNP;SSCP检测到57例异常条带;经直接测序证实38例有2197T→G的SNP;PCR-限制性酶切结果与DGGE所测结果完全吻合.结论:DGGE检测结果无假阳性,重复性好,准确率高,而且可判断基因型;SSCP简便易行,但存在假阳性与假阴性,而且不能判断基因型;限制性酶切对SNP位点检测及基因分型均能进行较准确的判断.
-
PCR-RFLP和PCR-SSCP技术对常见食源性感染致病菌23S rDNA基因的鉴定
目的探讨应用PCR-RFLP和PCR-SSCP进行食源性感染常见致病菌鉴定的可行性.方法选择细菌23S rDNA基因作为靶基因,设计合适的通用引物进行PCR扩增,对13种食源性感染常见致病菌扩增产物的酶切片段进行RFLP和SSCP分析.结果通用引物可以扩增出13种食源性感染常见致病菌的23S rDNA基因,HpaⅡ酶切产物的RFLP分析表明,不同种属的致病菌表现出不同的RFLP图谱;SSCP分析表明,13种食源性感染常见致病菌SSCP图谱变异性更大,不利于种属间鉴别,但有利于种内的鉴定.结论运用PCR-RFLP和PCR-SSCP可以进行食源性感染常见致病菌的鉴定诊断.
-
散发性大肠癌APEX基因两个单核苷酸多态性的检测及分析
目的检测分析中国人散发性大肠癌APEX基因1247位点、2197位点的单核苷酸多态性(single nucleotidepolymorphism,SNP)状况,探讨其与散发性大肠癌发生的关系.方法变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gelelectrophoresis,DGGE)、单链构像多态性(single strand conformation polymorphism,SSCP)分别检测150例大肠癌及其周围正常粘膜DNA的APEX基因1247位点、2197位点SNP,并直接测序验证结果.结果1247位点经DGGE检测及测序证实有17例存在A→G的SNP,导致I 64V改变;经SSCP检测和测序证实2197位点有38例T→G的SNP,并导致D148E改变.结论APEX基因SNP分布可能具有明显的种族差异,1247A→G SNP可能与中国人大肠癌发生和恶性程度相关.
-
三种方法在检测Leber's视神经萎缩mt-DNA突变的比较
比较MSP-PCR、SSCP、RFLP在检测Lebers视神经萎缩(LHON)线粒体DNA(mt-DNA)11778突变中的优缺点.77例受试者,分别用MSP-PCR、SSCP、RFLP法检测mt-DNA11778突变.被MSP-PCR检出的48例阳性者同时也被SSCP检出,另外SSCP还检出6例杂合性突变;MSP-PCR和SSCP检测阳性的9例患者,再用RFLP(MaeⅢ)检测也得出一致结果.表明多条件SSCP在mt-DNA未知突变筛查中具有优势,而MSP-PCR有助于确定突变的性质.
-
小儿先天畸形重点实验室小儿横纹肌肉瘤p16基因缺失及突变的研究
目的探讨小儿横纹肌肉瘤p16基因缺失及突变的临床意义.方法应用控制模板DNA量的银染PCR-SSCP技术检测18例小儿横纹肌肉瘤手术切除标本中p16基因第1外显子.结果 18例中有7例发生纯合性缺失,其纯合缺失率为38.8%(7/18);1例发生突变,缺失,突变率为44.3%.结论 p16基因的纯合性缺失是p16基因失活的主要机制,在小儿横纹肌肉瘤的发生和发展中起重要作用.
-
湖南汉族群体HLA-DR2等位基因多态性与系统性红斑狼疮的相关性研究
以HLA-DRB基因类扩增为参照,通过HLA-DR2组特异性扩增确定HLA-DR2携带者,PCR/ SSP作亚型分型,并用银染PCR/SSCP分析HLA-DR2等位基因第二外显子单链构像,调查湖南地区汉族群体SLE(系统性红斑狼疮)患者58例和健康对照59例HLA-DR2等位基因分布.结果示,HLA-DR2与SLE相关(RR=2.71,P<0.01),HLA-DRB1*1501为疾病相关等位基因(RR=3.10,Pc<0.05),该群体中检出的另外两种亚型DRB1*1502,1602在两组间频率分布差异无显著性.此外,PCR/SSCP分析表明湖南汉族HLA-DR2等位基因在第二外显子内不存在其他序列变异.
-
新型核酸染料SYBR-Green在检测基因扩增产物中的应用
目的:将核酸SYBR-Green染料应用于端粒酶活性检测和食物中毒致病菌的PCR-SSCP分析.方法:采用TRAP法检测A549肺腺癌细胞株、293细胞株、HL-60白血病细胞株端粒酶活性.金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、大肠埃希氏菌、福氏志贺氏菌、腊样芽胞杆菌标准株增菌后,进行PCR-SSCP分析.在上述两种检测方法中,扩增产物电泳后均采用SYBR-Green染色.结果:TRAP-SYBR-Green染色法检测HL-60白血病细胞株端粒酶活性的灵敏度可达15个细胞左右.PCR-SSCP检测常见食物中毒致病菌的敏感性可达10～15个鼠伤寒沙门氏菌细胞.结论:SYBR-Green染色法用于端粒酶活性的检测和致病菌的PCR-SSCP分析,具有快速、简便、灵敏度高、安全的特点.
-
大鼠肝癌变中p53点突变及其蛋白表达的研究
目的研究大鼠肝癌变中突变型P53蛋白（mP53）的表达及p53基因第6外显子点突变。方法通过DEN诱发的启动模型和肝癌模型，应用免疫组化、MDT-PCR-SSCP和直接测序技术分别研究mP53表达和p53基因第6外显子点突变。结果 mP53阳性细胞仅见于癌前个别肝细胞增生结节中，8/18例（44.44%）肝细胞癌呈mP53阳性；8例mP53阳性肝癌中仅有1例（12.50%）被检出p53基因第6外显子发生点突变，即第208位密码子第1碱基C→G颠换。结论在DEN诱发的启动模型和肝癌模型中p53基因突变可发生于大鼠肝癌变之癌前及肝癌形成阶段，且第6外显子突变率低。
-
大鼠肝癌变过程中几种癌基因的原位表达及c-Ha-ras1点突变的研究
目的 研究大鼠肝癌变过程中几种癌基因的表达和c-Ha-ras 1点突变。方法 通过DEN诱发癌变启动模型和肝癌模型，应用免疫组化、原位杂交和MDT-PCR-SSCP分别观测癌基因的表达和c-Ha-ras1点突变。结果 c-Ha-ras和c-myc基因的过表达参与了肝癌变的全过程，其中c-Ha-ras的过表达与癌前嗜碱性肝细胞灶、c-myc基因的过表达与卵圆细胞增殖关系密切。IGF-Ⅱ基因的过表达对癌前肝细胞增生灶/结节向肝细胞癌的演进起重要作用。fms基因过表达仅与个别大鼠肝细胞癌有关。结论 大鼠肝癌变过程与c-Ha-ras、c-myc、IGF-Ⅱ和fms基因的过表达及c-Ha-ras1点突变有关，并与形态演变相联系。
