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胃癌患者幽门螺杆菌感染和Smad4表达及其临床病理学意义的研究
目的 检测幽门螺杆菌(Hp)阳性和阴性胃癌患者的病变组织中Smad4的表达分布,并分析其与胃癌患者临床病理学特征之间的关系.方法 选取39例胃癌患者的胃镜活检组织标本,采用快速尿素酶试验(RUT)结合Giemsa染色判断Hp感染,采用冰冻切片免疫组化染色方法在蛋白水平检测Smad4的表达分布.结果 胃癌组织中Hp阳性者Smad4表达(42.9%)显著低于其阴性者(90.9%,P<0.05),胃癌患者Hp的感染与Smad4的表达呈负相关(r=-0.436,P<0.05).Smad4在胃癌组织中的表达(56.4%)显著低于其在正常胃黏膜中的表达(100%,P<0.05).Smad4的表达与胃癌的浸润及细胞分化程度相关,浸润程度越重、分化程度越低,其阳性表达率亦越低(P<0.05);而Smad4蛋白的表达与性别、年龄、TNM分期、淋巴结及远处转移无关.结论 胃癌患者中Hp感染与Smad4的表达有相关性,Smad4在胃癌发生、发展中发挥着重要作用,可能作为胃癌诊断和预后的分子标志,Hp可能通过Smad4而在胃癌的发生发展中起到重要作用.
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Smad4与女性生殖系统恶性肿瘤关系的研究进展
Smad4作为转化生长因子(TGF)-β信号通路中的细胞内信使,越来越受到关注.众多研究发现,Smad4在女性生殖系统恶性肿瘤中起着抑癌基因的作用.Smad4蛋白在肿瘤中表达降低或缺失,可促进肿瘤发生、发展.Smad4与女性生殖系统恶性肿瘤患者的低生存率及不良预后关系密切.随着研究的深入,Smad4有望成为女性生殖系统恶性肿瘤有价值的诊断与预后评估标志物,以及治疗靶点.笔者拟就Smad4与女性生殖系统恶性肿瘤关系的研究进展进行综述如下.
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Smad4条件基因敲除小鼠内耳前庭的组织学变化
目的 观察Smad4条件基因敲除小鼠内耳前庭的组织学变化,探讨Smad4基因在内耳前庭发育中的作用.方法 应用冰冻切片、免疫荧光化学、激光扫描共聚焦显微镜、扫描电镜、透射电镜等技术,观察软骨组织Smad4条件基因敲除小鼠内耳前庭组织形态的变化.结果 Smad4 -/-小鼠内耳软骨囊Smad4免疫反应阴性,Smad4+/-小鼠阳性,Smad4+/+小鼠强阳性,而在前庭感觉上皮——壶腹嵴和囊斑里Smad4免疫反应均呈阳性,三个基因型间没有差别；通过扫描电镜和透射电镜以及神经丝免疫荧光染色观察,三个基因型小鼠内耳前庭均未发现病变.结论 Smad4条件基因敲除小鼠的内耳软骨囊里Smad4基因被有效剔除,但其对内耳前庭的组织结构和形态影响有限.
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TGF-β1/Smads信号通路介导支气管上皮细胞分泌型白细胞蛋白酶抑制因子下调
目的 探讨支气管上皮细胞分泌型白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)表达下调与TGF-β1/Smads信号通路的关系.方法 将人正常支气管上皮HBE细胞分为正常对照组、转化生长因子β1(TGF-β1)刺激组(刺激组)、Smad4小分子干扰RNA(siRNA)预处理后再行TGF-β1刺激组(干扰组)、阴性对照siRNA预处理后再行TGF-β1刺激组(干扰对照组),采用免疫细胞化学及蛋白质印迹法检测各组细胞中Smad4、SLPI的表达,反转录聚合酶链反应法检测各组细胞中Smad4 mRNA及SLPI mRNA的表达.每次试验每组各取1孔细胞,每项检测各重复4次.结果 刺激组HBE细胞中Smad4蛋白及mRNA表达水平(分别为1.18±0.17、1.33±0.16)明显高于而SLPI蛋白及mRNA表达水平(分别为0.17±0.10、0.11±0.05)明显低于正常对照组(分别为0.29±0.06、0.31±0.07、1.29±0.21、0.83±0.13,均P<0.01)和干扰组(分别为0.27±0.08、0.34±0.09、1.22±0.18、0.81±0.11,均P<0.01),干扰对照组Smad4和SLPI表达水平与刺激组比较差异无统计学意义.结论 TGF-β1可促使支气管上皮细胞SLPI表达下调,其作用可能是通过TGF-β1/Smads信号通路介导的.
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姜黄素的抗胰腺癌作用及相关机制研究
目的：探讨姜黄素(curcumin)的抗胰腺癌作用及其可能的机制。方法采用免疫组化法检测35例胰腺癌组织及相邻非癌组织中Smad4、Jab1的表达情况，并从中抽取21例胰腺癌组织测定Jab1与Smad4染色的阳性细胞百分比，分析两者相关性。将人胰腺癌细胞系PANC-1细胞分为PANC-1对照组（不做处理）和PANC-1 cur?cumin组（含10μmol/L姜黄素的细胞培养液处理），采用Western Blot检测姜黄素对肿瘤抑制物p53、Smad4及细胞循环抑制剂p27蛋白表达的影响。将人胚肾细胞系293T细胞分为293T对照组（不做处理）、293T curcumin组（含10μmol/L姜黄素的细胞培养液处理）和293T Jab1组（转染HA-Jab1质粒），采用免疫共沉淀法检测姜黄素对β-TrCP1与Smad4结合的蛋白表达影响。结果与相邻非癌组织比较，胰腺癌组织中Smad4呈低表达，Jab1呈高表达（均P＜0.01），Jab1与Smad4的表达呈负相关(n=21，r=-0.71，P=0.007)。姜黄素可增加PANC-1细胞中Smad4、p53和p27蛋白表达的水平，降低293T细胞中β-TrCP1与Smad4结合的蛋白表达水平；Jab1可增加293T细胞中β-TrCP1与Smad4结合的蛋白表达水平（均P＜0.05）。结论姜黄素可能通过上调Smad4、p53和p27的蛋白表达进而起到抗胰腺癌作用，其上调Smad4表达的机制可能与其抑制Smad4蛋白的泛素化进程有关，而Jab1也可能通过参与Smad4的泛素化进程影响Smad4蛋白降解。
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转化生长因子β1和Smad4蛋白在肝癌组织中的表达及其意义
目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)和Smad4蛋白在肝癌组织中的表达及其意义.方法 选取2008年3月-2011年4月入住我院并接受治疗的肝癌患者54例,采用原位杂交显色法(IHCABC法)分析TGF-β1和Smad4蛋白在肝癌组织中表达和半定量情况.结果 肝癌组织中Smad4蛋白高表达率(38.9%)低于癌旁组织(46.3%),差异有统计学意义(χ2=16.59,P=0.01).肝癌组织中TGF-β1和Smad4蛋白高表达率在男女间差异无统计学意义(P＞0.05);以45岁为界,肝癌组织中TGF-β1和Smad4蛋白高表达率在不同年龄间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);在不同病理分期间比较,差异亦均有统计学意义(P＜0.05),且随着病理分期增加,TGF-β1和Smad4蛋白高表达率升高.结论 肝癌组织中Smad4蛋白高表达率低于癌旁组织,TGF-β1和Smad4蛋白高表达与患者性别无关,而与病理分期和年龄增长(≥45岁)有关.
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Smad4基因沉默对胰腺上皮内瘤变细胞基因表达谱影响的初步研究
背景:抑癌基因Smad4失活可使由Kras基因突变启动的胰腺上皮内瘤变(PanIN)细胞发生恶性转化,但其具体机制尚未阐明.目的:探讨Smad4基因沉默的PanIN细胞(PanIN-S细胞)基因表达谱的变化,分析Smad4基因沉默致PanIN细胞增殖和恶性转化的可能分子机制.方法:通过RNA干扰沉默PanIN细胞的内源性Smad4基因表达以构建PanIN-S细胞,小鼠全基因表达谱芯片筛查PanIN细胞与PanIN-S细胞的基因表达谱差异,实时荧光定量RT-PCR验证基因芯片筛选出的细胞周期相关差异表达基因.结果:基因芯片共筛选出237个差异表达基因,其中148个基因在PanIN-S细胞中表达上调,89个表达下调.差异表达基因主要涉及细胞周期、增殖、凋亡、黏附、转录活性等.实时荧光定量RT-PCR验证示细胞周期相关基因p27、p19、细胞周期蛋白(cyclin)D1表达在PanIN细胞与PanIN-S细胞间存在显著差异,与基因芯片筛选结果一致.结论:PanIN-S细胞p27、p19和cyclin D1基因表达发生明显改变,可能参与了PanIN-S细胞的增殖和恶性转化.
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大鼠非酒精性脂肪性肝病转化生长因子β1/Smad4信号通路表达的研究
目的 观察转化生长因子(TGF)β1、转化生长因子β受体(TβR)-Ⅰ、TβR-Ⅲ和胞内Smad4信号通道蛋白以及转录因子激活剂蛋白-1(AP-1)家族中Jun蛋白质因子在大鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的表达.探讨NAFLD发生肝纤维化的可能机制.方法 将18只大鼠分为对照组与模型组,每组9只.对照组喂饲普通饲料,模型组喂饲高脂饲料(88%标准普通饲料+10%猪油+2%胆固醇)造模.在20周处死所有大鼠,免疫组化法检测TGFβ1、Smad4的表达;RT-PCR检测肝组织TGFβ1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ的表达;Western印迹法测定磷酸化C-Jun蛋白的表达.结果 成功建立NAFLD动物模型,免疫组化法检测结果显示,TGFβ1和Smad4在对照组大鼠肝实质细胞的胞质内均有少量表达.TGFβ1在模型组大鼠肝实质细胞胞质、肝血窦周围的表达明显增强,尤其在汇管区更为明显.Smad4在模型组大鼠肝实质细胞胞质表达亦明显增强,而在汇管区的表达更为明显.RT-PCR检测结果显示,模型组大鼠肝组织TGFβ1、TβR-Ⅰ、TβR-ⅡmRNA的A值分别为0.46±0.12、5.24±2.70和3.35±1.95,明显高于对照组(0.21±0.09、1.36±0.77和0.52±0.19,P值均＜0.01).Western印迹检测显示,模型组磷酸化C-Jun蛋白表达同内参灰度值比为0.93±0.41,较对照组显著增高(0.32±0.25,P=0.001).结论 TGFβ1/Smad4信号通路可能参与了NAFLD进展为肝纤维化的过程.阻断TGFβ/Smad4信号传导通路,可开辟治疗NAFLD新的思路.
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Smad4、Smad7在大鼠慢性前列腺炎前列腺组织中的表达及意义
目的 研究慢性前列腺炎SD大鼠前列腺组织Smad4和Smad7的表达,并初步探讨它对慢性前列腺炎发病机制的意义.方法 将40只6月龄SD大鼠随机分为正常对照组和CP实验组,每组20只.实验组采用去势+高剂量苯甲酸雌二醇肌注方法建模,并以免疫组化和蛋白免疫印迹实验方法检测Smad4、Smad7在前列腺组织中的表达变化.结果 与正常对照组相比,Smad7表达显著下调(P<0.01),Smad4表达亦显著下调(P<0.01);Smad4与Smad7在慢性前列腺炎大鼠前列腺组织中表达无相关性.结论 Smad4、Smad7在慢性前列腺炎前列腺组织中表达异常,提示可能参与CP的病理过程.
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Smad4表达异常与结直肠癌的相关性研究
目的 探讨结直肠组织Smad4 mRNA及其蛋白表达水平变化、Smad4基因CpG岛异常甲基化与结直肠癌及其临床病理特征的关联性.方法 应用RT-PCR方法及测序、半定量RT-PCR方法、甲基化特异性PCR(MSP)技术和免疫组织化学方法,各自检测43例患者的结直肠癌组织、癌旁组织及30例结直肠腺瘤组织、12例健康人结肠黏膜组织.结果 43例结直肠癌组织中有25例(58.14%)Smad4 mRNA检测到阳性表达,其阳性表达率(58.14%)及表达水平(0.73±0.25)均低于相应的癌旁组织(88.37%,0.95±0.29)、腺瘤组织(90.63%,1.01±0.37)和健康人黏膜组织(100.00%,1.18±0.33),差异均有统计学意义(P＜0.05).Smad4基因启动子甲基化阳性率结直肠癌组织(60.53%)明显高于癌旁组织(27.03%)、腺瘤组织(25.00%)和健康人黏膜组织(16.67%),差异均有统计学意义(P＜0.05).Smad4蛋白表达的阳性率结直肠癌组织(44.19%)明显低于癌旁组织(81.40%)、腺瘤组织(87.50%)和健康人黏膜组织(91.67%),差异均有统计学意义(P＜0.05),并随着浸润深度加深和淋巴结转移,阳性率也随之下降.结论 Smad4的低表达与结直肠癌的发展、生物学行为和预后可能有关,可作为重要的生物学标志及病期评估的标志之一.
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Smad4、雌激素受体表达与乳腺癌临床病理特征的相关性
目的 探讨Smad4和雌激素受体(ER)在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌临床病理特征之间的关系,以及二者的相关性.方法 应用免疫组织化学SP法检测50例浸润性乳腺癌、12例原位癌及15例正常乳腺组织中Smad4和ER的表达,分析二者在不同的临床分期、分化程度及淋巴结转移中的表达差异,探讨二者的相关性.结果 Smad4在浸润性乳腺癌和正常乳腺组织中的阳性表达率为分别为52.00％、93.33％,差异有统计学意义(x2=8.329,P=0.004),ER阳性表达率分别为60.00％、40.00％,差异无统计学意义(x2=1.868,P=0.172).原位癌与浸润性乳腺癌比较,Smad4阳性表达率分别为75.00％和52.00％,差异无统计学意义(x2=2.082,P=0.149),ER阳性表达率表达分别为58.33％、60.00％,差异无统计学意义(x2 =0.011,P=0.916).Smad4表达与乳腺癌TNM分期(x2=6.392,P=0.011)和淋巴结转移(x2=6.738,P=0.009)有关,与组织学分级(x2=0.542,P=0.462)无关.ER表达与乳腺癌淋巴结转移(x2 =4.133,P=0.042)和组织学分级(x2 =5.357,P=0.021)有关,与TNM分期(x2=1.159,P=0.282)无关.Smad4蛋白与ER在乳腺癌组织中的表达呈正相关(r=0.263,P=0.032).结论 Smad4在乳腺癌中表达低于正常组织,Smad4与ER的表达与乳腺癌不同的临床病理特征之间具有一定的相关性,且二者表达呈正相关.
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Smad4 siRNA对乳腺癌细胞侵袭力和MMP-9表达的影响
目的:探讨Smad4特异性小分子干扰RNA( siRNA)对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭力及MMP-9表达的影响.方法:构建Smad4 siRNA,将细胞分为空白对照组,Smad4 siRNA转染组,TGF-β处理组,Smad4 siRNA转染+TGF-β处理组.首先用Western blot法检测转染Smad4 siRNA后细胞中Smad4蛋白的表达,以及用荧光素酶报告基因法检测TGF-β处理后细胞Smad结合元件(4xSBE)的活性；然后用Transwell小室模型和Western blot法检测各组细胞的黏附侵袭能力以及基质金属蛋白酶9( MMP-9)蛋白的表达水平.结果:转染Smad4 siRNA后,乳腺癌细胞的Smad4蛋白表达及其TGF-β诱导的4xSBE活性增强均被明显抑制(均P＜0.05)；与对照组细胞比较,细胞经TGF-β刺激后的侵袭能力及MMP-9的表达量均明显增加(均P＜0.05),但预先转染Smad4 siRNA的细胞的上述TGF-β刺激作用被明显抑制(均P＜0.05),单纯Smad4 siRNA转染对细胞的侵袭能力及MMP-9的表达量无明显影响.结论:Smad4 siRNA能减弱TGF-β诱导的MDA-MB-231细胞的侵袭能力,该作用可能与其抑制MMP-9的表达有关.
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NLK 通过Smad4负调控 TGFβ信号通路
目的：探讨NLK对转化生长因子β（TGFβ）信号通路的影响及其分子机制。方法采用蛋白质稳定性实验检测NLK对Smad4蛋白质降解的影响；体内泛素化实验检测过表达NLK对Smad4泛素化修饰的影响；荧光素酶报告基因实验检测NLK对TGFβ信号通路报告基因载体CAGA‐luc和3TP‐luc的影响；实时定量PCR技术检测NLK对TGFβ信号通路靶基因p21和PAI‐1的影响。结果在 HEK293T细胞内，过表达NLK促进Smad4的降解和泛素化修饰；在HEK293T细胞内过表达NLK抑制细胞因子 TGFβ对CAGA‐luc和3TP‐luc的激活作用；在 HepG2细胞内过表达 NLK 抑制 TGFβ信号通路靶基因p21和PAI‐1的表达。结论 NLK促进Smad4的泛素化修饰和降解，进而抑制TGFβ信号通路。
