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四硫化四砷诱导K562细胞凋亡的机制研究
为了探讨四硫化四砷(As4S4)诱导慢性粒细胞性白血病(CML)细胞株K562凋亡及机制,用台盼蓝染色和MTS方法观察四硫化四砷对K562细胞生长抑制的影响,用瑞氏染色检测药物处理后的细胞形态学变化和细胞凋亡发生,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期改变,实时定量逆转录聚合酶链反应(real-time quantitative PCR)检测BCR-ABL、Bcl-2、Bcl-XL、Bad和Bax等mRNA的表达,Western blot方法检测BCR-ABL、Akt和pAkt蛋白的表达.结果表明:四硫化四砷能明显抑制K562细胞活力,在0.5 μmol/L浓度下培养24小时,细胞生长明显受抑制且有剂量和时间依赖关系.小于0.1 μmol/L的四硫化四砷对K562细胞活力无明显影响.K562细胞经与四硫化四砷培养24至48小时后,出现典型的凋亡改变.与四硫化四砷培养12小时后,1.0 μmol/L条件下,K562细胞凋亡率上升,大于2.0 μmol/L浓度的四硫化四砷能明显诱导细胞凋亡,四硫化四砷能使K562细胞周期阻滞于G2/M期.四硫化四砷能使K562细胞Bcl-XL的mRNA表达下调,但对Bcl-2、Bad、Bax和BCR-ABL等的mRNA表达无影响.四硫化四砷能使K562细胞的pAkt蛋白表达下调,而BCR-ABL蛋白表达无变化.结论:四硫化四砷能有效地通过诱导凋亡抑制K562细胞生长,其机制可能与抑制凋亡途径因子Bcl-XL和pAkt等表达有关.
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四硫化四砷治疗急性早幼粒细胞白血病过程中PML/PML-RARα蛋白的变化
为了研究四硫化四砷(As4S4)对急性早幼粒细胞白血病(APL)患者白血病细胞中PML/PML-RARα蛋白的作用,在患者治疗前和治疗后不同时间多次留取骨髓或外周血标本,用抗PML蛋白单抗对APL细胞进行间接免疫荧光染色,并在荧光显微镜下观察荧光信号的演变规律.结果显示:治疗前APL细胞表现为细胞核内弥漫分布的大量微颗粒荧光信号.As4S4治疗后,早于第2天即可出现荧光分布的改变,表现为微荧光颗粒消失,出现数个大荧光颗粒,并出现核周荧光,终大荧光颗粒也消失.当As4S4合用全反式维甲酸(ATRA)时,PML蛋白荧光信号变化规律与单用As4S4基本相同.但单独应用ATRA治疗后,PML蛋白荧光信号的改变与前两组明显不同,主要差别为微荧光颗粒不会很快消失,而是在微荧光颗粒逐渐减少的基础上,出现越来越多的大荧光颗粒,终微荧光颗粒消失,而大荧光颗粒始终存在. 结论:As4S4使患者体内APL细胞的PML/PML-RARα蛋白发生重新分布,与ATRA治疗后完全不同.
关键词： 四硫化四砷 急性早幼粒细胞白血病 PML蛋白 免疫荧光 -
『雄黄』有望治愈白血病
北京大学人民医院血液病研究所陆道培院士一项长达6年之久的研究成果显示,四硫化四砷(中药雄黄的主要成分)可成功治疗急性早幼粒细胞白血病.110位接受治疗的患者目前全部生存了5年以上,实际无病生存率达到95.8%.在近召开的全国肿瘤大会上,陆道培院士首次报告了这一令人振奋的消息.
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砷剂治疗急性早幼粒细胞白血病过程中细胞形态学及遗传学变化
目的观察四硫化四砷(TATS)治疗初治和复发急性早幼粒细胞白血病(APL)过程中细胞形态学及细胞遗传学变化,探讨其作用机制.方法应用骨髓短期培养法、染色体荧光原位杂交(FISH)技术及形态学技术,对13例初治及7例复发APL患者进行细胞遗传学和形态学分析.结果8例患者的骨髓APL细胞中均出现分化现象.20例患者中,19例在TATS治疗过程中t(15;17)阳性细胞呈逐渐下降,与形态学APL细胞百分比的下降具有相关性(r值范围0.729 8～0.998 9).19例具有t(15;17)染色体易位的患者治疗后均达血液学完全缓解(CR),16例达细胞遗传学CR,1例具有t(11;17)易位的患者未达血液学CR.结论TATS对初治及复发APL有一定的诱导分化作用,单药TATS治疗初治及复发APL患者可达到血液学和细胞遗传学缓解.应用FISH技术监测t(15;17)阳性细胞可以客观反映APL细胞变化规律.
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四硫化四砷对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4的凋亡作用
目的研究四硫化四砷对NB4细胞的促凋亡作用及这一过程中早幼粒细胞白血病-维甲酸受体α(PML-RARα) 融合基因及其表达产物的变化.方法通过细胞形态学观察, 流式细胞仪检测及DNA电泳等方法观察四硫化四砷对NB4细胞的诱导凋亡作用,用荧光染色体原位杂交技术, 反转录PCR及Western 印迹技术测定这一过程中PML-RARα融合基因及其表达产物的改变.结果四硫化四砷在0.5～3μmol·L-1之间能诱导NB4细胞凋亡,在此过程中,PML-RARα融合基因无明显变化,但PML-RARα融合蛋白和野生型RARα蛋白的表达明显减少.结论四硫化四砷能诱导NB4细胞凋亡,其作用靶点可能在PML-RARα融合蛋白和野生型RARα蛋白.
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四硫化四砷联合维甲酸、蒽环类药物治疗体系下附加染色体对急性早幼粒细胞白血病预后的影响
目的 分析在以维甲酸联合四硫化四砷、蒽环类药物为主的治疗体系下附加染色体对预后的影响以及有附加染色体异常患者的临床表现和对含四硫化四砷诱导治疗方案的反应性.方法 回顾性分析158例初治急性早幼粒细胞白血病患者临床资料.结果 附加染色体异常在急性早幼粒细胞白血病中占18.4%.其中三体8以及i17q-是常见的附加异常,有附加染色体异常组患者弥散性血管内凝血发生率增高(P<0.05).在附加染色体异常组完全缓解率降低(75.9%vs 90.7%)、复发率增高(13.8%vs 6.2%)、中枢神经系统白血病的发生率增高(17.2%vs 6.2%),但差异未见统计学意义.两组生存率差异无统计学意义(P=0.160).结论 在此三类药物治疗体系下,尚未发现附加染色体对预后影响的统计学意义.
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四硫化四砷对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤抑瘤作用的研究
目的 探讨四硫化四砷(As4S4)对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的生长和瘤细胞凋亡的影响.方法 建立卵巢癌SKOV3裸鼠皮下移植瘤模型,观察As4S4对肿瘤生长的抑制情况;RT-PCR法检测As4S4对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤组织中bcl-2和bax mRNA表达水平的影响;Western blot法检测As4S4对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤组织中bcl-2和bax蛋白表达的影响.结果 As4S4作用于卵巢癌裸鼠皮下移植瘤后,肿瘤的体积和重量明显减小,而且随药物剂量的增加抑瘤率明显增加.As4S4作用后,RT-PCR可见bcl-2 mRNA表达强度减弱,bax mRNA表达强度增强;Western blot法可见bcl-2蛋白带变细,bax蛋白带增粗.结论 As4S4可以抑制卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的生长,诱导肿瘤细胞凋亡,其作用机制可能与调节Bcl-2/Bax的表达有关.
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四硫化四砷对荷NB4细胞SCID小鼠生存期的影响
目的:探讨四硫化四砷(As4S4)对荷NB4细胞SCID小鼠生存期的影响.方法:34只荷NB4细胞腹水瘤的SCID小鼠均分为2组:治疗组给予As4S4悬液(100 mg/kg)腹腔内注射,隔日1次,共3次;对照组同法给予5 g/L甲基纤维素溶液.观察2组小鼠的生存期.结果:治疗组小鼠的生存期为(22.44±6.77)d,比对照组((16.27±2.34)d)明显延长(P＜0.01);As4S4治疗过程中无明显的毒副作用,小鼠终死于NB4细胞增殖所致的腹水.结论:As4S4可抑制SCID小鼠体内NB4细胞的增殖,延长荷瘤小鼠的生存期.
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四硫化四砷对急性早幼粒细胞白血病细胞凋亡及Caspase-3活性的影响
目的:探讨四硫化四砷(As4S4)对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞内Caspase-3活性的影响.方法:2例APL患者给予As4S4(2.5 g/d,分3次口服)治疗,治疗前、治疗后7 d及14 d,分离外周血单个核细胞(PBMNC).NB4细胞与2μmol/L的As4S4共同培养24 h.取APL患者的PBMNC和处理前后的NB4细胞,用流式细胞仪分析亚二倍体细胞数,用荧光分析法检测Caspase-3活性.结果:经As4S4处理的NB4细胞,亚二倍体细胞数(58.9±5.2)%,高于处理前的(1.2±0.5)%(t=23.616,P＜0.05);Caspase-3活性为(21.5±3.1)×106s-1,高于处理前的(8.7±1.2)×106s-1.治疗后APL患者的PBMNC内Caspase-3活性较治疗前升高,2例患者均获血液学缓解.结论:As4S4通过激活Caspase-3诱导NB4细胞凋亡,这可能是As4S4治疗APL的主要机制之一.
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四硫化四砷通过磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路对乳腺癌细胞生长的抑制作用
目的 观察四硫化四砷(As4S4)通过磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制作用.方法 利用噻唑蓝(MTT)法分别检测0、20、40、60、80μmol/L的As4S4处理24、48、72 h及10 μmol/L LY294002处理48 h后MCF-7细胞的增殖;细胞划痕实验及Transwell实验检测As4S4处理48 h对MCF-7细胞迁移及侵袭的影响;流式细胞仪检测As4S4及10 μmol/L LY294002处理48 h对MCF-7细胞凋亡的影响;Western blot检测As4S4及10 μmol/L LY294002处理48 h对MCF-7细胞PI3 K/Akt/mTOR通路相关蛋白PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、mTOR表达的影响.结果 与0μmol/L处理比较,20 μmol/LAs4S4处理24 h时对细胞增殖无明显抑制(P =0.065),处理48、72 h时对细胞增殖具有明显抑制作用(P =0.033),抑制率分别达到11.1％和14.3％.As4 S4浓度为40、60、80 μmol/L时对MCF-7细胞增殖具有明显抑制作用(P =0.002),处理72 h后,抑制率分别达到47.9％、58.8％、67.1％.As4S4的抑制作用与时间、浓度呈正相关.和对照组比较,60 μmol/L As4S4作用48 h后,MCF-7细胞迁移及侵袭能力下降42.4％,差异有统计学意义(P=0.005);细胞的凋亡率增加至(19.56±1.12)％,差异有统计学意义(P=0.009),PI3K的表达无明显变化,p-Akt的表达显著下降64.3％,mTOR的表达显著下降58.7％(P=0.008).As4S4处理后MCF-7的增殖与凋亡与抑制剂LY294002处理结果一致.结论 As4S4可能通过抑制PI3 K/Akt/mTOR信号通路抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖及转移,促进细胞凋亡.
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四硫化四砷诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡的研究
0引言含砷化合物的药物制剂治疗各种疾病有着悠久的历史[1].砷类矿物中药主要包括砒霜(主成分是As2O3)、雄黄(主要成分是As4S4)和雌黄(主要成分As2S).随着As2O3注射液于1999年作为国家二类新药正式上市销售以及美国FDA也于不久前特批该药上市,其临床应用逐步展开[2-6].近年来国内学者发现四硫化四砷(As4S4)具有抗肿瘤作用,尤其是对恶性血液病的治疗效果显著[7].我们以人卵巢癌细胞株SKOV3为实验对象,研究As4S4对其生长抑制作用,探讨其作用机制,旨在为卵巢癌的临床治疗提供新的科学依据.
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四硫化四砷STI571和除莠霉素诱导K562细胞凋亡的研究
目的目前慢性粒细胞性白血病(CML)的化疗效果仍不理想,为寻找对CML敏感的药物,该研究探讨四硫化四砷、STI571和除莠霉素对CML细胞株K562的作用.方法通过MTS方法检测三种药物在不同浓度(0.01,0.1,1.0,2.0,5.0,10.0 μmol/L)下对K562细胞活力的影响.采用瑞氏染色、荧光染色和琼脂糖凝胶电泳观察药物处理后细胞形态学的变化和细胞凋亡的发生.用流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果用5.0 μmol/L的四硫化四砷、STI571和除莠霉素培养3天,K562细胞活力明显下降,其吸光值分别为0.32±0.04,0.49±0.01,0.69±0.02,其中四硫化四砷和STI571对细胞的抑制作用强于除莠霉素(P<0.01),前两者间无明显差异(P>0.05).1.0,5.0,10.0 μmol/L的四硫化四砷对K562细胞的抑制作用呈时间依赖关系(P<0.01).小于1.0 μmol/L的四硫化四砷对K562细胞活力无明显影响.四硫化四砷培养24至48小时后,K562细胞出现染色质浓缩、核碎片及凋亡小体等典型的凋亡形态学改变.用5.0 μmol/L的四硫化四砷、STI571和除莠霉素培养72小时后,K562细胞的凋亡率分别为68.8%、56.7%和35.5%,2.0与3.0 μmol/L的四硫化四砷诱导K562细胞凋亡率分别为25.7%和45.3%,5.0与10.0 μmol/L的四硫化四砷诱导细胞凋亡的差异不明显.结论 2.0 μmol/L的四硫化四砷能有效地通过诱导凋亡抑制K562细胞生长.
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四硫化四砷对人胃癌细胞SGC7901增殖的抑制作用
目的:研究四硫化四砷(As4S4)对人胃癌细胞SGC7901增殖的抑制作用及其作用机制.方法:体外培养SGC7901,取对数生长期的细胞分为空白对照组(不加药物)和20、40、60、80 μmol/L As4S4处理组,分别作用24、48、72 h.采用MTT法检测细胞增殖的抑制率,透射电镜观察细胞的形态,流式细胞仪分析细胞的周期分布,逆转录-聚合酶链式反应法和蛋白质印迹法检测作用48 h后细胞中凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA和蛋白的表达.结果:与空白对照组比较,20(作用48、72h)、40、60、80 μmol/L As4S4处理组细胞增殖的抑制率明显升高(P＜0.01),与浓度和时间呈正相关;从40 μmol/L As4S4处理组细胞开始出现凋亡,60 μmol/LAs4S4处理组细胞开始出现大量凋亡,细胞周期阻滞于S期;与空白对照组比较,As4S4处理组细胞中Bcl-2 mRNA和蛋白表达随As4S4浓度的增加而减弱,Bax mRNA和蛋白表达随As4S4浓度的增加而增强.结论:As4S4具有抑制SGC7901细胞增殖的作用,其机制可能与诱导细胞凋亡、下调Bcl-2表达、上调Bax表达有关.
关键词： 四硫化四砷 人胃癌细胞SGC7901 增殖抑制率 凋亡基因 -
四硫化四砷抑制人胃癌SGC7901细胞增殖及其作用机制
目的:探讨四硫化四砷(As4S4)对人胃癌细胞系SGC7901增殖抑制作用及其作用机制.方法:MTT法检测四硫化四砷对体外培养SGC7901细胞的抑制作用,透射电镜观察细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞周期的变化,RT-PCR法检测bcl-2和bax mRNA的表达,Western blot法检测bcl-2和bax蛋白的表达.结果:四硫化四砷具有体外抑制SGC7901细胞增殖的作用,能诱导细胞凋亡,细胞中bcl-2的表达降低,bax 的表达增强.结论:四硫化四砷具有抑制胃癌细胞系SGC7901细胞生长的作用,其机制可能与诱导细胞凋亡和调节bcl-2与bax表达有关.
