旋毛虫抗小鼠体内A549肺癌细胞作用的研究

目的 观察旋毛虫对BALB/c小鼠体内A549瘤细胞生长的抑制作用. 方法 将实验小鼠(BALB/c)随机分为7组,每组10只,1～6组分别接种未处理或不同方法处理的旋毛虫,在不同时间段接种A549细胞.7组为不接种旋毛虫对照组.荷瘤后第30 d解剖小鼠,测定小鼠体内肿瘤的体积、重量和无瘤生长小鼠比率,检测T淋巴细胞亚群变化. 结果 未处理旋毛虫接种组,紫外线处理及60Co处理旋毛虫接种组小鼠肿瘤体积和重量均显著低于未接种对照组(P＜0.01),脾脏CD3+、CD4+、CD8+百分率、CD4+/CD8+比值及无瘤生长小鼠比率显著高于未接种对照组(P＜0.05或P＜0.01);接种前7 d和接种后11 d荷瘤组小鼠的肿瘤体积、重量均显著低于未接种对照组(P＜0.01),脾脏CD3+、CD4+、CD8+百分率及CD4+/CD8+比值显著高于未接种对照组(P＜0.05). 结论 未处理旋毛虫和经不同方法处理的旋毛虫对BALB/c小鼠体内的A549肺癌细胞的生长均有抑制作用,接种11 d后荷瘤组的抑瘤效果更显著.

X线照射后A549肺癌细胞Ku80 mRNA及其蛋白表达的变化

Ku蛋白参与放射损伤修复,并与肿瘤的放射耐受密切相关[1-3].非小细胞肺癌尤其是肺腺癌细胞对射线不敏感.作为DNA损伤修复的主要成分之一,Ku蛋白在细胞受到照射后其含量是相对恒定,还是代偿性增加以对放射所致的DNA双链断裂进行修复,有关这个问题目前还鲜有报道.

麦冬醇提物抑制肺癌生长及自噬作用研究

目的 评价麦冬醇提物体内外抑制肺癌生长及调控肺癌细胞自噬作用.方法 采用C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型,观察麦冬醇提物对肿瘤生长的抑制作用.采用Visual Sonics Vevo 2100小动物专用高频彩色超声仪测量C57BL/6小鼠Lewis肺癌肿瘤的体积,称瘤质量,并计算抑瘤率.采用免疫组织化学法和蛋白免疫印迹法检测肺癌组织中Ki67和P53蛋白的表达.采用电镜观察麦冬醇提物诱导A549肺癌细胞自噬,结合RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测诱导自噬相关蛋白表达.结果 麦冬醇提物对Lewis肺癌小鼠的肿瘤生长具有一定的抑制作用,显著降低Ki67蛋白表达,显著增强P53蛋白表达,并且能诱导A549肺癌细胞产生自噬.结论 麦冬醇提物对肺癌具有明显的抑制作用,并能诱导A549肺癌细胞产生自噬,麦冬醇提物的抗肺癌作用可能与其诱导肺癌细胞自噬有关.

猕猴桃素-D的抗肺癌作用和免疫调节功能

建立了裸鼠A549肺癌模型和小鼠Lewis肺癌模型,以环磷酰胺为阳性药,考察猕猴桃素-D对肿瘤生长的抑制作用.并以云芝肝泰胶囊为阳性药,测定了猕猴桃素-D对荷Lewis肺癌雌性小鼠的淋巴细胞增殖和NK细胞活性的影响,评价药物对细胞免疫功能的影响.结果表明,与生理盐水组相比,猕猴桃素-D在150～600 mg/kg范围内对裸鼠A549肺癌细胞和小鼠Lewis肺癌细胞的生长有明显抑制作用,且呈剂量相关性;但与环磷酰胺相比,各剂量组的抑瘤率仍较低.中、高剂量的猕猴桃素-D还可显著促进荷Lewis肺癌雌性小鼠脾淋巴细胞增殖作用,升高NK细胞活性,且在提高雌性小鼠机体免疫力方面优于云芝肝泰胶囊.结果提示猕猴桃素-D可能具有继续向抗肿瘤新药开发的潜力.

狼毒水提液对人A549肺癌细胞凋亡的影响

中药狼毒大戟为大戟科植物狼毒大戟的根,早在几千年以前就有记载,具有散结、逐水、止痛、杀虫的疗效.长期临床研究发现狼毒具有较好的抗肿瘤作用,且能够抑制多种肿瘤细胞的增殖.本实验旨在探讨狼毒大戟诱导体外培养的人A549细胞凋亡的作用,以期为临床治疗非小细胞肺癌提供科学依据.

戊型肝炎病毒ORF3及其截短突变体真核表达载体的构建及其在A549细胞中的表达

目的 构建戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)的开放阅读框3(open reading frame, ORF3)基因及其突变体真核表达载体,并在人肺癌细胞系A549中表达.方法 以PUC-HEV为模板,PCR扩增HEV ORF3及其突变体目的片段,插入到真核表达载体pcDNA3.1-Flag中,构建重组质粒pcDNA3.1-ORF3/Flag、pcDNA3.1-△D1-ORF3/Flag、pcDNA3.1-△D2-ORF3/Flag和pcDNA3.1-△P2-ORF3/Flag,并转染A549细胞,利用Western印迹法检测ORF3及其突变体编码蛋白的表达情况.结果 经双酶切和测序鉴定真核表达质粒pcDNA3.1-ORF3/Flag、pcDNA3.1-△D1-ORF3/Flag、pcDNA3.1-△D2-ORF3/Flag和pcDNA3.1-△P2-ORF3/Flag构建正确,在转染A549细胞24 h后,在蛋白水平可以检测到ORF3及其突变体编码蛋白.结论成功地构建了HEV ORF3及其突变体真核表达载体,并在A549细胞中成功表达,为后期研究HEV各ORFs组分功能及其致病机制奠定基础.

Id反义寡核苷酸对A549肺癌细胞的抑制及意义

人骨髓间充质干细胞表达外源性IL-24基因对肺癌细胞A549增殖的影响

目的 探讨以人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)为基因治疗载体表达外源性IL-24对肺癌细胞A549增殖和凋亡的影响.方法 分离培养hBMSCs,并通过流式细胞术鉴定.慢病毒介导IL-24基因转染hBMSCs,构建表达外源性基因IL-24的hBMSCs(hBMSCs-IL-24),qPCR及ELISA法检测hBMSCs-IL-24中IL-24基因mRNA及蛋白表达.CCK-8法检测hBMSCs-IL-24分泌的外源性IL-24对肺癌细胞A549增殖活性的影响.AnnexinV-Pl检测hBMSCs-IL-24对A549细胞凋亡的影响.结果 慢病毒介导的外源基因IL-24成功转染hBMSCs(hBMSCs-IL-24),其IL-24基因在mRNA及蛋白水平均有明显表达.hBMSCs-IL-24分泌的外源性IL-24蛋白显著抑制肺癌细胞A549的增殖并促进其凋亡.结论 hBMSCs-IL-24能够在mRNA及蛋白水平表达外源性IL-24基因,IL-24蛋白能显著抑制肺癌细胞A549的增殖,促进凋亡.

hGPR177/PCDNA3.1(+)重组质粒的构建及其在A549肺癌细胞中的表达

目的 构建hGPR 177/PCDNA3.1(+)重组质粒,并在A549肺癌细胞中表达hGPR177蛋白.方法 利用生物分析软件DNAMAN 6.0选取合适的穿梭载体PCDNA3.1(+)和酶切位点.用质粒提取试剂盒对穿梭载体PCDNA3.1(+)及含有hGPR177基因pReceive-B04质粒进行抽提,并对其进行双酶切.使用DNA连接酶把hGPR177基因与PCDNA3.1(+)酶切片段连接,重新构建hGPR177/PCDNA3.1(+)重组质粒.将重组质粒通过电转的方式转导进A549肺癌细胞.运用细胞培养技术,培养已电转hGPR177/PCDNA3.1(+)重组质粒的A549肺癌细胞.结果 利用0.8％琼脂糖凝胶电泳检测hGPR177/PCDNA3.1(+)重组质粒的质量为6 999 bp.经过机械破碎后获取细胞提取物,电泳鉴定出现GPR177蛋白带.结论 成功构建了hGPR177/PCDNA3.1(+)重组质粒,并在A549肺癌细胞表达系统中表达出人GPR177蛋白.

多胺类似物四丁基丙二胺对人A549肺癌细胞的影响

目的:研究新多胺类似物四丁基丙二胺(tetrabutyl propanediamine,TBP)对人A549肺癌细胞增殖、细胞迁移能力和多胺代谢的影响及其机制.方法:MTT法用于分析细胞增殖；流式细胞术用于分析细胞周期；QT-RT-PCR技术用于分析多胺代谢酶的表达水平；高效液相色谱用于检测细胞内多胺含量.结果:TBP处理A549细胞后导致:(1)显著抑制人A549细胞增殖,其抑制效应呈浓度和时间的依赖性；(2)G1期和G2期细胞显著减少,但S期细胞显著性增加；(3)显著诱导多胺降解代谢限速酶SSAT的表达,但对其他酶影响较小；(4)细胞内多胺含量显著性下降.结论:上述研究结果提示TBP具有抑制人A549肺癌细胞增殖的药理活性,有作为肺癌治疗药物的潜在临床应用前景.其机制可能与干扰DNA复制、抑制细胞周期和降低细胞内多胺水平相关.

用Ku80 siRNA抑制Ku80基因表达以提高肺癌细胞放射敏感性的实验研究

目的 探讨用小RNA干扰抑制Ku80基因表达以提高A549肺癌细胞的放射敏感性.方法 设计并化学合成Ku80 siRNA,转染体外培养的A549肺癌细胞.利用RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白质水平对转染后的细胞Ku80基因表达情况进行测定,同时上述转染的细胞分别照射2、4、6、8及10 Gy,利用克隆形成实验测定放射敏感性的变化.结果 RT-PCR检测显示在A549肺癌细胞转染Ku80 siRNA后24、48和72 h三个时间点Ku80 mRNA含量减少,Western blot分析显示在转染48和72 h两个时间点Ku80蛋白含量减少,与对照组比较有统计学差异(P<0.05).克隆形成实验提示A549肺癌细胞转染Ku80 siRNA后放射敏感性增强.结论 Ku80 siRNA转染A549肺癌细胞后能够有效抑制Ku80基因表达,提高其放射敏感性.

干扰UCA1及抑制miR-185-5p对非小细胞肺癌β-Catenin通路的活化、自噬和存活影响

目的 探究在非小细胞肺癌中,长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)尿路上皮癌抗原1(urothelial carcinoma associated 1,UCA1)敲降miR-185-5p对β-Catenin通路的影响.方法 选取非小细胞肺癌A549细胞为研究材料,设置A549空白对照组、sh-scramble阴性对照组、sh-UCA1干扰组、miR-185 inhibitor组和sh-UCA1+inhibitor组.Western blot验证体系中增殖、凋亡和自噬相关分子表达;qRT-PCR鉴定体系中lncRNAUCA1和miR-185-5p的表达;生物信息学软件和荧光素酶实验检测lncRNA UCA1和miR-185-5p之间结合性.BrdU染色鉴定细胞增殖,免疫荧光染色检测细胞中LC3+细胞含量.结果 在A549细胞中,lncRNA UCA1干扰后,UCA1表达量显著下降并促进miR-185-5p表达,有效抑制肺癌细胞增殖和自噬,促进凋亡发生(P＜0.01);经生物信息学和双荧光素酶报告系统验证lncRNA UCA1和miR-185-5p有较强结合性;并进一步验证lncRNAUCA1可以有效抑制β-Catenin/TCF-4及Beclin 1和LC3Ⅱ表达,降低miR-185-5p对肺癌细胞增殖和自噬效果,减少细胞内LC3含量(P＜0.01).结论 lncRNA UCA1干扰后,可以有效降低UCA1对miR-185-5p的抑制效果,进而解除β-Catenin/TCF-4、Beclin 1和LC3Ⅱ受到的抑制作用,从而减少肺癌细胞自噬发生和减缓增殖.

虾青素通过阻断JAK1/STAT3通路抑制肺癌A549细胞增殖并促进其凋亡

目的 探讨虾青素对A549肺癌细胞增殖、凋亡的影响及可能的作用机制.方法 实验分为对照组、DMSO溶剂对照组、(20、40、60、80、100)μmol/L虾青素组;CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2、Bax、信号转导子和转录激活子3(STAT3)和Janus激酶1(JAK1)蛋白水平.结果 虾青素能够抑制A549细胞增殖,使A549细胞阻滞于G0/G1期,细胞凋亡增加;虾青素上调Bax蛋白水平,下调Bcl-2、STAT3、JAK1蛋白水平.结论 虾青素通过抑制JAK1-STAT3信号通路抑制肺癌A549细胞增殖并促进其凋亡.

丙泊酚抑制IL-6诱导的A549肺癌细胞上皮间质转化及其机制探讨

目的:探究丙泊酚对白细胞介素-6(IL-6)诱导的A549肺癌细胞上皮间质转化(EMT)的作用及机制.方法:将A549细胞随机分成四组:对照组、IL-6组(50 ng/ml重组IL-6蛋白)、IL-6+丙泊酚低剂量组(50 ng/ml重组IL-6蛋白和5 μmol/L丙泊酚)、IL-6+丙泊酚高剂量组(50 ng/ml重组IL-6蛋白和10 μmol/L丙泊酚).MTT法检测细胞活力,Transwell检测细胞迁移情况,Real-time PCR方法检测EMT相关基因(E-cadherin、Vimentin和Snail1)mRNA的表达水平,Western blot检测EMT相关蛋白及JAK2和STAT3的磷酸化表达水平.使用0.5 μmol/L STAT3激活剂colivelin处理细胞,检测其对丙泊酚调节的IL-6诱导的A549细胞活力、迁移和 EMT的影响.结果:与对照组相比,IL -6组中细胞的活力、迁移、EMT和 JAK2/STAT3的活化均增加(P均＜0.05);与IL-6组相比,IL-6 +丙泊酚组中细胞活力、迁移、EMT和 JAK2/STAT3的活化均降低(P均＜0.05),这些变化均具有剂量依赖性.STAT3激活剂能够减弱丙泊酚对IL-6诱导的A549细胞活力、迁移和EMT的影响(P均＜0.05).结论:丙泊酚能够抑制IL-6诱导的A549肺癌细胞EMT进程,这种作用是通过抑制JAK2/STAT3的活化发挥作用的.

索拉非尼对人肺癌细胞株A549增殖的影响及其机制的研究

目的 以人肺癌细胞株A549为研究对象,观察不同浓度/时间下索拉尼非对人肺癌细胞A549的增殖及其对VEGFR-2、VEGFR-3、P-VEGFR-2及P-VEGFR-3表达的影响.方法 不同浓度的索拉非尼(1.5μmol/L、3μmol/L、6μmol/L、12μmol/L)分别与A549细胞体外培养24 h、48 h、72 h后采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定细胞生长抑制率.采用RT-PCR法测定不同药物浓度/时间下肺癌细胞株A549中VEGFR-2mRNA、VEGFR-3mRNA的表达变化,用Western Blot法测定P-VEGFR-2及P-VEGFR-3的表达.结果 在外源性药物索拉非尼的刺激下,肺癌细胞A549的生长受到抑制,索拉非尼的浓度越高,作用时间越长,抑制率越大,提示呈现时间和浓度依赖性(P<0.05).以终浓度为1.5μmol/L、3μmol/L、6μmol/L、12μmol/L的索拉非尼加入实验组,在不同的作用时间(24 h、48 h、72 h)下,实验组与对照组比较VEGFR-2mRNA及VEGFR-3mRNA的表达无明显变化(P>0.05).P-VEGFR-2及P-VEGFR-3的表达与对照组比较呈现下降趋势(P<0.05),呈浓度依赖性.结论 索拉非尼能抑制A549肺癌细胞的生长,呈现时间和浓度依赖性.索拉非尼能抑制A549肺癌细胞的生长,其机制之一可能与其抑制P-VEGFR-2及P-VEGFR-3的表达有关.