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蛋白酶活化受体PAR-1在子宫内膜癌组织中的表达及意义
目的 初步探讨蛋白酶活化受体PAR-1在正常子宫内膜、子宫内膜增生(包括单纯性增生和复杂性增生)、子宫内膜不典型增生和子宫内膜癌中的表达及意义.方法 收集子宫内膜癌组织55例(其中子宫内膜样腺癌50例,浆液性癌5例)、子宫内膜增生组织58例、不典型增生组织22例及正常子宫内膜组织40例,采用免疫组化SP法检测PAR-1表达情况.结果 PAR-1在正常子宫内膜、子宫内膜增生组织中为(-),在不典型增生、高分化和中分化子宫内膜样腺癌组织中的阳性率分别为4.5％ (1/22)、4.7％(1/21)和11.1％(2/18),在低分化子宫内膜样腺癌和浆液性癌的阳性率为72.7％(8/11)和100％(5/5),显著高于其余各组(P＜0.05).17例伴盆腔淋巴结转移子宫内膜癌中,PAR-1阳性率为70.6％ (12/17);38例无盆腔淋巴结转移子宫内膜癌组中PAR-1阳性率为13.2％(5/38),两组阳性率比较差异显著(P＜0.05).结论 PAR-1在低分化子宫内膜样腺癌和浆液性癌中呈高表达,提示PAR-1与子宫内膜样腺癌的分化程度和肿瘤恶性程度有关,检测PAR-1蛋白表达水平对评价子宫内膜癌的恶性程度及临床预后有一定的指导意义.
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强化阿托伐他汀治疗抑制兔颈动脉球囊损伤后蛋白酶活化受体1表达及血管内膜增殖
目的 探讨强化阿托伐他汀治疗对高脂喂食的新西兰大耳白兔颈动脉球囊损伤后血小板活化产物蛋白酶活化受体I(PAR-1)、血小板聚集及血管内膜增殖的影响.方法 雄性新西兰大耳白兔30只,随机分为如下处理:对照、高脂喂食+假手术(单纯高脂组),高脂喂食+球囊损伤(高脂+损伤组)、球囊损伤+阿托伐他汀5 mg/(kg·d)治疗(低剂量他汀组)、球囊损伤+阿托伐他汀10 mg/(kg·d)治疗(高剂量他汀组),每组6只.比浊法测定血小板聚集率,酶联免疫吸附试验测定血清P-选择素、血栓素B2表达水平,Western blot检测颈动脉PAR-1蛋白表达,HE染色观察颈总动脉形态学变化,应用计算机图像分析系统测定损伤动脉壁腔比值.结果 ①颈动脉球囊损伤后,P-选择素、血栓素B2表达及血小板聚集率均较单纯高脂组增加(P＜o.05);而阿托伐他汀治疗显著降低球囊损伤后血清P-选择素、血栓素B2表达,同时抑制了血小板的聚集率(均P＜0.05).②血管球囊损伤后,兔颈动脉PAR-1蛋白的表达较对照组及单纯高脂组增加(高脂+损伤组1.143±0.099比对照组0.172±0.028、单纯高脂组0.184士0.035,P＜0.05);阿托伐他汀治疗明显降低了PAR-1蛋白的表达,高剂量他汀组更为明显(低剂量他汀组0.920±0.083、高剂量他汀组0.091±0.013比高脂+损伤组1.143±0.099,均P＜0.05).③高脂喂食后兔颈动脉内膜轻度增生,血管壁腔比值增加;而高脂喂食+球囊损伤后颈动脉新生内膜增殖更明显;5及10 mg/(kg·d)的阿托伐他汀治疗抑制了球囊损伤后内膜的增殖,壁腔比值较球囊损伤未治疗组分别下降27％ 、49％(均P＜0.01).结论 强化阿托伐他汀治疗抑制了高脂喂食及血管球囊损伤兔颈动脉PAR-1蛋白的表达,抑制血清P选择素、血栓素B2表达及血小板聚集,减轻了血管损伤后新生内膜的增殖.
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蛋白酶活化受体1调控Mcl-1和Bax表达介导热打击致人脐静脉内皮细胞早期凋亡的研究
目的:观察热打击人脐静脉内皮细胞(HUVECs)后蛋白酶活化受体1(PAR1)对凋亡相关蛋白Mcl-1、Bax水平表达调控及细胞早期凋亡的影响,明确PAR1在热打击致HUVECs凋亡中的作用.方法:采用PAR1抑制剂SCH79797 (SCH)、PAR1激动剂TFLLR-NH2(TF)、PAR1 siRNA、PAR1腺病毒过表达预处理HUVECs,给予42℃热打击2h,后于8h提取各处理组总蛋白,western blot检测Mcl-1、Bax、Caspase 3及Cleaved-Caspase 3蛋白表达,流式细胞计数仪检测各处理组细胞早期凋亡.结果:与正常对照组比较,热打击组Mcl-1、Bax、Caspase 3表达增加及Cleaved-Caspase 3活化程度增加(P＜0.05);与热打击组比较,PAR1抑制剂或PARl siRNA联合热打击组Mcl-1表达增加(P＜0.05),Bax减少(P＜0.05),Cleaved-Caspase 3活化程度降低,细胞早期凋亡数目减少(P＜0.05,P＜0.01),PAR1激动剂或PAR1腺病毒联合热打击组Bax表达增加(P＜0.05),Mc1-1表达减少(P＜0.05),Cleaved-Caspase 3活化程度增加,且细胞早期凋亡数目增加(P＜0.05或P＜0.01).结论:热打击HUVECs可发生细胞凋亡,Mcl-1、Bax蛋白表达增加;PAR1通过调控Mcl-1及Bax的表达终起到促凋亡作用.
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凝血酶对食管癌细胞株Eca109恶性生物学行为的影响
目的 研究凝血酶对食管癌细胞株Eca109增殖、侵袭等恶性生物学行为的影响,并初步探讨其可能机制.方法 分别应用四甲基偶氮唑盐(MTT)和Transwell方法检测凝血酶对Eca109细胞增殖和侵袭能力的影响,明胶酶谱法检测凝血酶对Eca109细胞培养上清液中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9活性的影响,反转录聚合酶链反应(PCR)及细胞免疫荧光法分别检测Eca109细胞中凝血酶重要受体蛋白酶活化受体1(PAR-1)mRNA的表达及PAR-1蛋白的亚细胞定位.结果 凝血酶能够促进Eca109细胞的增殖,并呈剂量依赖性,0.5 U/ml和1.0 U/ml凝血酶组Eca109细胞增殖率分别为34.38%和57.19%(P<0.05).1.0 U/ml凝血酶组Eca109细胞穿过Transwell小室基底膜的细胞数多于对照组[(303.33±6.66)个比(116.33±11.51)个,P=0.000].经不同浓度凝血酶作用24 h,Eca109细胞上清液中MMP-2、MMP-9活性有不同程度的增强,以MMP-9为著.Eca109细胞中有PAR-1 mRNA的表达,且PAR-1蛋白主要分布在细胞膜上.结论凝血酶能够提高食管癌Eca109细胞增殖及侵袭能力,增强Eca109细胞培养上清液中MMP-2、MMP-9活性,这些作用可能是通过活化细胞膜表面PAR-1实现的.
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脂多糖诱导大鼠主动脉内皮细胞蛋白C受体和蛋白酶活化受体1的表达及血必净注射液的干预作用
目的 观察脂多糖(LPS)诱导的大鼠主动脉内皮细胞蛋白C受体(EPCR)和蛋白酶活化受体1(PAR1)的表达,并探讨血必净注射液对其的干预作用.方法 采用组织贴块法培养Wistar大鼠主动脉内皮细胞,培养1周后用流式细胞仪鉴定内皮细胞纯度.按1∶3传代至3～4代时,随机将细胞分为空白对照组、LPS刺激组(1 mg/L)、血必净干预组(LPS 1 mg/L,血必净注射液10 g/L),活化蛋白C(APC)干预组(LPS 1 mg/L,APC 0.1 mg/L).分别在12、24、48、72 h采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定内皮细胞EPCR和PAR1的mRNA表达;用流式细胞仪检测EPCR和PAR1的蛋白表达.结果 12 h时各组间EPCR和PAR1蛋白表达水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05);LPS刺激组EPCR和PAR1 mRNA表达则均降低,APC和血必净干预后两值均升高(P<0.05或P<0.01).24～72 h LPS刺激组EPCR的mRNA和蛋白表达水平均明显低于空白对照组(P<0.05或P<0.01),EPCR的表达随LPS作用时间延长而减少,呈明显的负相关;而血必净干预组EPCR表达明显高于LPS刺激组(P均<0.01).LPS刺激组PAR1的mRNA和蛋白表达水平较空白对照组有所降低(P<0.05或P<0.01),用血必净干预后,PAR1的mRNA和蛋白表达水平有所增加(P均<0.01).与APC干预组比较,血必净干预组EPCR和PAR1的蛋白表达增加更为明显.结论 血必净注射液能从基因和蛋白水平增加由LPS诱导大鼠主动脉EPCR和PAR1的表达作用,可能与其保护内皮细胞的功能抑制其凋亡有关.
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脓毒症中凝血酶-蛋白酶活化受体1-1-磷酸鞘氨醇信号通路的研究进展
脓毒症是重症监护病房患者常见的致死原因,其特征表现为促炎、抗炎和凝血反应的失控.尽管应用了新的更有效的抗生素和血管活性药物进行治疗,脓毒症的病死率仍然保持在一个很高的水平上[1].
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小窝蛋白与蛋白酶活化受体1相互作用在氧糖剥夺后脑微血管内皮细胞屏障损伤中的作用
目的：通过建立体外氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation, OGD)模型模拟缺血缺氧环境，观察小窝蛋白(Caveolin-1, Cav-1)及其与蛋白酶活化受体1(protease-activated receptor 1, PAR-1)相互作用对内皮细胞紧密连接蛋白的影响。方法：体外培养小鼠脑微血管内皮细胞(mouse brain microvascular endothelial cells, bEND3)，OGD 2 h后，Western Blot法检测Cav-1和紧密连接蛋白occludin的表达变化；免疫共沉淀检测Cav-1和PAR-1相互作用；免疫荧光双标检测Cav-1和内皮蛋白C受体(endothelial protein C receptor, EPCR)共表达情况。结果：内皮细胞OGD 2 h后occludin表达减少而Cav-1表达无变化，Cav-1和PAR-1相互作用减弱，Cav-1与EPCR共定位增多。结论：OGD后内皮细胞Cav-1与EPCR共表达增强，与PAR-1解离，加剧内皮细胞屏障损伤。
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PAR1 mRNA及蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义
[目的]探讨PAR1 mRNA及蛋白在食管鳞状细胞癌及其匹配癌旁组织中的表达和临床意义.[方法]应用RT-PCR方法检测35例食管鳞状细胞癌患者食管原位癌组织及其匹配癌旁组织PAR1 mRNA的表达水平,并分析其与患者性别、年龄、肿瘤大小、临床分期及是否淋巴结转移等临床指标的关系；应用免疫组织化学法检测55对食管鳞癌组织及其匹配癌旁组织的PAR1蛋白表达情况.[结果]食管鳞癌组织PAR1 mRNA的表达水平显著高于其匹配的癌旁组织(146.220±24.790 vs 134.054±23.593,t=-4.17,P＜0.01),而且与淋巴结是否转移有关(t=-2.199,P＜0.05);食管鳞癌组织PAR1蛋白表达阳性率显著高于其匹配的癌旁组织(49％ys 3.64％,x2=23.04,P＜0.001).[结论]PAR1 mRNA及蛋白在食管鳞癌中的表达均显著上调,可能参与食管癌的发生发展、侵袭与转移.
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EPCR对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移的影响及机制
目的 探讨内皮细胞蛋白C受体(EPCR)对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移的影响及机制.方法 将MDA-MB-231细胞分为EPCR转染组、无关序列转染组和对照组,分别加入EPCR-siRNA、siRNA-NC、空脂质体转染,采用Cell-ELISA法检测EPCR对蛋白酶活化受体1(PAR-1)活性的影响、CCK-8法检测细胞增殖能力、Transwell法检测细胞迁移能力.添加抗体阻断PAR-1作用后,采用CCK-8和Transwell法分别检测细胞增殖及迁移能力.Western blotting法检测Erk1/2和AKT通路蛋白表达.结果 与对照组及无关序列转染组相比,EPCR转染组未裂解活化的PAR-1抗体结合率升高(P＜0.05),且EPCR转染组细胞增殖及迁移能力均降低(P均＜0.05).与对照组相比,PAR-1抗体处理后细胞增殖迁移能力均降低(P均＜0.05).EPCR转染组和抗体处理组细胞p-AKT(S473)和p-AKT(T308)蛋白表达均低于对照组(P均＜0.05),而Erk1/2蛋白磷酸化与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 EPCR可依赖于PAR-1的裂解活化,然后通过活化AKT通路而影响人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和迁移.
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蛋白酶活化受体1促进脑卒中后血管新生作用的研究进展
脑卒中是以脑循环障碍所致的局限性或全面性脑功能缺损为主要症状的急性脑血管病。血管新生能促进脑卒中后神经元存活，对改善患者神经功能缺损及卒中后生存质量意义重大。蛋白酶活化受体1（PAR1）是一种存在于多个系统的特殊的G蛋白偶联受体，通过调节细胞内信号通路参与血管再生、炎症、肿瘤生长及转移等病理过程。 PAR1激活后可通过增加促血管生成因子水平，如缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶等，诱导脑卒中后血管新生，促进脑卒中后神经功能恢复。本研究对蛋白酶活化受体1促进脑卒中后血管新生作用的研究进展进行综述。
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蛋白酶活化受体1诱导大鼠肝星状细胞分泌MCP-1
目的 探讨蛋白酶活化受体1(proteinase-activated receptors 1,PAR1)激动剂和活性肽对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)分泌单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein 1,MCP-1)的调控作用.方法 应用改良的Friedman方法和Nycodenz一步密度梯度离心法分离SD大鼠HSC,选用生长7天的HSC,接种于12孔培养板各孔内,分别用不同浓度的PAR1激动剂-凝血酶、凝血酶抑制剂水蛭素、PAR1活性肽SFLLR和反活性肽RLLFS进行刺激,刺激时间为2、8、16 h,用ELISA方法检测培养细胞上清液中的MCP-1水平.结果 经过16 h的培养,PAR1激动剂-凝血酶和活性肽SFLLR可引起HSC MCP-1的释放增加,凝血酶抑制剂水蛭素及PAR1反活性肽RLLFS不能引起MCP-1的释放增加.结论 PAR1活性肽和凝血酶可促进SD大鼠HSC分泌MCP-1及肝纤维化大鼠肝脏炎症反应,PAR1反活性肽和凝血酶抑制剂在肝纤维化炎症反应中可能具有抗炎作用.
关键词： 蛋白酶活化受体1 肝星状细胞 单核细胞趋化蛋白-1 -
蛋白酶活化受体1介导人胚肺成纤维细胞释放单核细胞趋化蛋白-1
目的:研究蛋白酶活化受体1(PAR1)对凝血酶诱导人胚肺成纤维细胞(HFL-1)释放单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的调节作用.方法:HFL-1用PAR1激动剂凝血酶、PAR1活性肽SFLLR和反活性肽RLLFS进行诱导,并用PAR1阻断剂SCH79797进行阻断后用凝血酶和SFLLR刺激;用ELISA检测MCP-1浓度.结果:凝血酶及SFLLR可引起HFL-1释放MCP-1,而RLLFS不能引起MCP-1的释放增加;SCH79797可阻断凝血酶及SFLLR诱导HFL-1释放MCP-1.结论:PAR1介导凝血酶诱导的HFL-1细胞释放MCP-1.
关键词： 凝血酶 蛋白酶活化受体1 单核细胞趋化蛋白-1 人胚肺成纤维细胞系
