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UNC5H3和DCC在胃癌组织中的表达与增殖的关系及其预后
目的 探讨UNC5H3和DCC在胃癌组织的表达,与临床病理特征和增殖的关系以及与患者生存和预后的关系.方法 应用组织芯片和免疫组织化学技术,分析60例胃癌组织中UNC5H3、DCC和Ki-67的表达,并对其表达进行相关分析.利用图像分析软件Image-Pro Plus 6.0测量切片积分吸光度,对结果进行验证.采用Kaplan-Meier限乘法计算生存率.建立Cox回归模型,评价UNC5H3和DCC作为胃癌患者预后的独立影响因素的可行性.结果 在60例胃癌组织中,UNC5H3、DCC和Ki-67的阳性表达率分别为43.3％、53.3％和60.0％.UNC5H3和DCC与淋巴转移和远处转移之间,差异有显著性(P＜0.05).UNC5H3和DCC表达与Ki-67表达相互之间无相关性(P＞0.05).用Kaplan-Meier生存曲线经Log-rank检验发现,UNC5H3的阳性表达与胃癌患者生存之间存在相关性(P＜0.05).DCC的阳性表达与胃癌患者生存之间无相关性(P＞0.05).经Cox回归分析,UNC5H3和DCC的表达与胃癌患者预后无明显相关性.结论 依赖性受体UNC5H3和DCC共同参与了胃癌的发生进展,检测UNC5H3和DCC可作为反映胃癌临床病理学特点的指标,检测UNC5H3可作为胃癌患者生存期的指标,但UNC5H3和DCC的表达不是判断胃癌患者预后的独立影响因素.
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DCC基因对卵巢上皮性癌细胞生长及其化疗敏感性的影响
目的 研究DCC基因对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞生长及其化疗敏感性的影响.方法 采用脂质体转染法将含有DCC基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-DCC质粒导入卵巢癌细胞系HO8910细胞中(HO8910-DCC组),以转染空载体pcDNA3.1(+)质粒(HO8910-Neo组)和脂质体(空白对照组)为对照.转染24 h后,经氨基糖甙类抗生素G418筛选,RT-PCR技术以及免疫组化法检测3组细胞DCC mRNA及蛋白表达情况;四甲基偶氮唑蓝(MTY)比色法测定3组细胞转染后1～7 d的细胞生长情况及经梯度浓度[0.1、0.2、1.0、5.0、10.0血浆峰浓度(PPC)]化疗药物顺铂和紫杉醇处理后48 h的细胞存活率,并绘制细胞生长曲线.结果 转染DCC基因后,DCC基因可在HO8910细胞中稳定表达.转染后1～7 d,HO8910-DCC组细胞生长速度较其他两组细胞明显减慢,除转染后第1天外,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);空白对照组和HO8910-Neo组细胞生长速度比较,差异则无统计学意义(P＞0.05).HO8910-DCC组细胞经0.1～5.0 PPC的顺铂和紫杉醇处理后,细胞存活率显著低于空白对照组和HO8910-Neo组(P＜0.01);经10.0 PPC的顺铂处理后细胞存活率也明显低于空白对照组和HO8910-Neo组(P＜0.05);但经10.0 PPC的紫杉醇处理后细胞存活率与空白对照组和HO8910-Neo组相比,差异则无统计学意义(P＞0.05).空白对照组和HO8910-Neo组细胞经各梯度浓度药物处理后的细胞存活率间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 DCC基因可明显抑制卵巢癌细胞的生长,并增强卵巢癌细胞对化疗药物的敏感性.
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脂质体介导的DCC基因对卵巢上皮性癌细胞生长的抑制作用
目的探讨脂质体介导的DCC基因对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞系SKOV3细胞生长的抑制作用.方法通过目的基因克隆、载体构建技术,将DCC基因重组于pcDNA3.1(+)质粒中,构建pcDNA3.1(+)-DCC质粒,并通过脂质体介导,将此质粒转染入SKOV3细胞中(即SKOV3/DCC细胞).实验分为3组,DCC基因转染组(SKOV3/DCC组)、空载体转染组(SKOV3/Neo组)和空白对照组(SKOV3组).RT-PCR技术和免疫组化染色方法检测3组细胞中DCC mRNA和蛋白的表达,并观察细胞集落形成率、生长速度、细胞周期等生物学行为变化.结果 RT-PCR技术和免疫组化染色方法检测显示,外源性DCC基因通过基因重组及脂质体介导,已整合于SKOV3细胞并获稳定表达.SKOV3/DCC组细胞的生长速度较SKOV3和SKOV3/Neo组减慢,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01).SKOV3/DCC组细胞克隆数为(38±8)个,分别与SKOV3和SKOV3/Neo组[分别为(192±8)、(186±10)个]比较,差异均有统计学意义(P<0.01).细胞周期分析显示,SKOV3/DCC组,G1期细胞占78.0%,S期细胞占5.3%,与SKOV3/Neo组(分别为20.0%、3.2%)比较,差异有统计学意义(P<0.01).电镜观察显示,SKOV3/DCC组细胞超微结构出现生长受到抑制的特征.结论 DCC基因可明显抑制卵巢癌细胞生长,可能在卵巢癌发生、发展的过程中起重要作用.
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DCC基因在卵巢恶性肿瘤组织中的表达
目的探讨DCC基因表达缺失与卵巢恶性肿瘤发生、发展及临床病理特征的关系.方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术、目的基因片段克隆测序的方法,证实正常卵巢组织中DCC基因的正常表达;并以β-肌动蛋白作为内对照,在10例正常卵巢组织、10例卵巢良性肿瘤组织、34例原发性卵巢恶性肿瘤组织中检测DCC基因表达缺失情况.结果正常卵巢组织中DCC基因表达缺失率为0%;卵巢良性肿瘤组织为20%;卵巢恶性肿瘤为56%(19/34),其中浆液性囊腺癌14例(14/18)、黏液性囊腺癌4例(4/11),两者比较,差异有显著意义(P<0.05).卵巢恶性肿瘤临床分期Ⅲ～Ⅳ期的25例中,17例DCC基因表达缺失(68%);组织学分级低分化10例中,9例DCC基因表达缺失(90%);盆腹腔转移的28例中,17例DCC基因表达缺失.结论卵巢恶性肿瘤组织中,DCC基因呈表达缺失或低表达;临床分期Ⅲ～Ⅳ期、组织学分化程度低、有盆腹腔肿瘤转移的恶性肿瘤组织中,DCC基因表达缺失率增高.DCC基因表达缺失与卵巢恶性肿瘤的发生、发展及转移、浸润有关.
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侯氏黑散对脑缺血大鼠神经导向因子及Rho GTP酶的影响
目的 探讨侯氏黑散对脑缺血大鼠神经导向因子Netrin-1/DCC和分子开关Rac1/Cdc42/RhoA表达的影响.方法 采取线栓法制备永久性大脑中动脉栓塞(permanent middle cerebral artery occlusion,pMACO)模型.大鼠采用数字表法随机分为假手术组、模型组、侯氏黑散小剂量组、侯氏黑散中剂量组、金纳多组.运用Western blotting法和RT-PCR法检测术后7d大鼠缺血侧皮质Netrin-1、DCC、Rac1、Cdc42、RhoA蛋白和基因的表达.结果 与模型组相比,侯氏黑散中剂量组、金纳多组大鼠Netrin-1蛋白的表达明显升高(P＜0.01),侯氏黑散中剂量组大鼠Netrin-1基因的表达升高(P＜0.05);侯氏黑散小剂量组、侯氏黑散中剂量组、金纳多组大鼠DCC、Rac1、Cdc42蛋白和基因的表达明显升高(P＜0.05);侯氏黑散小剂量组、侯氏黑散中剂量组、金纳多组大鼠RhoA蛋白和基因的表达则明显下降(P＜0.01).结论 侯氏黑散通过对脑缺血大鼠神经导向因子Netrin-1/DCC和分子开关Rac1/Cdc42/RhoA的调节促进脑缺血后神经功能的修复.
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K-ras基因与DCC基因在大肠癌中的表达及相关性研究
目的：通过研究k-ras基因DCC基因在大肠癌中的表达情况，初步探讨二者在大肠癌发生、发展过程中的作用及可能的分子机制。方法：采用S-P免疫组织化学方法检测80例结直肠癌组织及15例正常大肠黏膜中k-ras基因与DCC基因的表达情况。结果：k-ras基因在正常组织中未见表达，在大肠癌组织中呈阳性表达。DCC阴性表达与大肠癌的临床分期、淋巴结转移密切相关；k-ras基因与DCC基因之间存在明显的相关性。结论：k-ras基因在大肠癌中的表达与细胞分化程度、Dukes分期有密切关系； DCC在大肠癌中的表达与细胞分化程度、Dukes分期及有无淋巴结转移有密切关系。
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DCC PTEN在大肠癌中的表达及临床意义
目的:检测DCC、PTEN在大肠癌组织中的表达,并研究其临床意义.方法:应用免疫组织化学技术检测30例大肠癌组织中DCC和PTEN蛋白表达.结果:30例大肠癌中DCC和PTEN蛋白阳性表达率46.67%和36.67%.DCC和PTEN蛋白低表达与大肠癌Dukes分期、浸润深度和淋巴结转移均呈正相关.结论:DCC和PTEN表达与大肠癌浸润转移密切相关.检测DCC和PTEN蛋白表达可作为判断大肠癌预后的客观指标.
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K-RAS和DCC在直结肠癌中的表达及意义
目的:检测癌基因K-RAS和抑癌基因DCC在68例直结肠癌组织及55例直结肠良性病变组织中的表达情况,为早期直结肠癌的无创或微创性诊断提供一定的理论依据.方法:应用免疫组织化学SP法.结果:K-RAS在直结肠癌组织表达阳性42例,阳性率为61.8％,在良性病变组织中表达14例,阳性率为31.1％ ;DCC在直结肠癌组织表达阳性5例,阳性率为7.4％;在良性病变组织表达阳性41例,阳性率为91.1％.结果:K-RAS基因在直结肠癌组织与良性病变组织中表达差异极显著(P＜0.01),直结肠癌组织高表达;DCC基因在直结肠癌组织与良性病变组织中表达差异极显著(P＜0.01),良性病变组织中高表达.结论:K-RAS突变和DCC基因表达缺失与直结肠癌的发生关系密切,能够在分子水平判断直结肠癌生物学行为.
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原发性胃癌中DCC抑癌基因杂合性丢失的研究
目的:探讨原发性胃癌组织中结直肠癌缺失基因(deleted in colorectal carcinoma,DCC)杂合性丢失(loss of het-erozygosity,LOH)的情况及其与胃癌临床病理学间的关系.方法:用多聚酶链反应-单链构相多态性(PCR-SSCP)银染法分析49例原发性胃癌组织中DCC的杂合性丢失.结果:D18S484位点发生LOH的频率为26.6%(12/45),D18S487为23.9%(11/46),DCC发生LOH的频率为36.7%(18/49).36.8%(7/19)的肠型胃癌发生DCC LOH,24.0%(6/25)的弥漫型胃癌发生DCC LOH,而100%(5/5)的混合型胃癌为DCC LOH(P＜0.05).在淋巴结有转移的胃癌中,52%(13/25)的原发性胃癌发生DCC LOH,无转移者中为20.8%(5/24)(P＜0.05);发生远处转移者,原发性胃癌DCC LOH为100%(3/3),而无转移者为32.6%(15/46)(P＜0.05);在TNMⅢ、Ⅳ期中DCC LOH为50.0%(12/24),有高于TNM Ⅰ、Ⅱ期(24%,6/25)的趋势(P=0.059).DCC LOH与病人的性别、年龄、肿瘤发生部位、大小、组织学分级均无统计学意义(P＞0.05).结论:DCC的杂合性丢失可能在胃癌的发展和转移中起重要作用,是胃癌发展后期的重要分子事件.
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应用组织芯片技术研究DCC蛋白在胰腺癌中的表达及意义
目的:研究结直肠癌缺失(deleted in colorectal cancer,DCC)基因在胰腺癌中表达的意义及其与临床病理学因素的关系.方法:构建胰腺癌组织芯片,使用免疫组化法检测DCC蛋白表达情况,并分析其与肿瘤大小、分化程度、有无淋巴结转移以及TNM分期等临床病理学因素之间的关系.结果:胰腺癌组织芯片免疫组化结果显示,DCC在胰腺癌中表达的阳性率为17%(7/41),明显低于正常胰腺组织中的表达阳性率87%(34/39)(P＜0.001).胰腺癌发生淋巴结转移时DCC蛋白的表达水平0.29±0.768明显低于无淋巴结转移的胰腺癌1.27±2.27(P=0.037).DCC在Ⅲ和Ⅳ期胰腺癌中的表达水平0.25±0.71显著低于Ⅰ期1.39±2.63和Ⅱ期1.25±2.12胰腺癌的表达水平(P=0.032).结论:DCC蛋白在胰腺癌中表达降低或缺失是胰腺癌发生发展过程中的一个频繁发生的事件,免疫组化法检测DCC蛋白的表达对胰腺癌的预后评估具有重要意义.
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神经突起诱向因子Netrin-4受体的初步研究
目的研究神经突起诱向因子Netrin-4的受体,并分析Netrin-1已知受体DCC和UNC5H1作为Netrin-4共受体的可能性.方法以碱性磷酸酶(AP)标记的Netrin-4为配体,分别以原代培养神经元及转染DCC和UNC5H1的COS7细胞为对象,采用亲和细胞化学技术检测Netrin-4的受体,并分析Netrin-4的受体结合动力学及受体竞争结合动力学特征.结果通过载体转染表达已知Netrin-1受体DCC和UNC5H1的COS7细胞既能被Netrin-1结合,也能被Netrin-4结合;受体结合饱和实验显示Netrin-4与其受体快速结合(15min达高峰)后缓慢解离;受体结合竞争实验显示Netrin-1能竞争Netrin-4与其受体的结合.结论DCC和UNC5H1可能是Netrin-1与Netrin-4的共受体.由于Netrin-4受体结合动力学及受体竞争结合实验显示Netrin-1与受体的亲和力高于Netrin-4,提示Netrin-4可能还存在自身独特的受体.
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Netrin-1对活体大鼠心肌缺血再灌注损伤影响的实验研究
目的：研究Netrin-1对活体大鼠心肌缺血再灌注损伤（Ischemia reperfusion injury，I/R）的影响及机制。为临床上提供体外循环（Cardiopulmonary bypass，CPB）下心肌保护新的策略。方法雄性Spraghe-Dawley(SD)大鼠20只，体重450-500g，随机分成2组，体外循环预充液中添加Netrin-1（10只）[I/R+Netrin-1组]，体外循环预充液中不添加Netrin-1（10只）[I/R组]。建立无血预充大鼠深低温停循环（Deep hypothermic circulatory arrest，DHCA）的心肌缺血再灌注的模型。实验结束2h后处死大鼠留取心脏标本。在CPB前、CPB75min （复温后15min），CPB后2h留取大鼠动脉血测定心肌损伤指标[心肌肌钙蛋白I (cTn I)和心型脂肪酸结合蛋白(HFABP)]。实验结束取大鼠心脏标本用TUNEL法检测心肌细胞凋亡；用Western-blot法测定局部心肌组织直肠癌结肠癌缺失基因（Delete in colorectal carcinoma gene，DCC）蛋白指标。大体光镜下观察心脏组织病理形态学改变；大鼠CPB 前、CPB 15min、CPB 45min （停循环15min）以及 CPB 90min （复温30min）监测血气分析。结果 I/R+Netrin-1组较I/R组：血清中心肌肌钙蛋白I(cTn I)和心型脂肪酸结合蛋白(HFABP)含量明显减少；心肌缺血再灌注后心肌凋亡明显减少27.5%(P<0.05)；DCC表达增加(P<0.05)。HE染色镜下观察发现I/R+Netrin-1组心肌细胞损伤程度明显减轻。结论Netrin-1对心肌缺血再灌注损伤有保护作用，其机制可能与DCC有关。
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DCC基因对乳腺癌细胞株MCF-7的作用
目的 克隆人类DCC基因并构建其真核表达载体plRES2-AcGFP1/DCC,将人DCC基因转染人乳腺癌细胞MCF-7中稳定表达,检测转染后细胞生物学特性的变化.方法 构建DCC基因表达载体plRES2-AcGFP1/DCC,用脂质体法将DCC基因的真核质粒表达载体pIRES2-AcGFP1/DCC导人人乳腺癌细胞MCF7中,细胞计数、生长曲线、细胞黏附分析、软琼脂实验检测转染后细胞的生物学特性变化.结果 将逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)扩增后的产物克隆到真核表达载体pIRES2-AcGFP1/DCC上,经PCR扩增筛选鉴定和测序鉴定证实为所需序列,转染乳腺癌MCF-7细胞后,DCC基因的表达明显增强.细胞计数和细胞生长曲线结果表明,转染后的MCF-7/DCC细胞生长速度明显地低于亲代的MCF-7和MCF-7/vect细胞(P＜0.05).细胞黏附分析显示,MCF-7/DCC细胞的黏附率较其他两组明显降低(P＜0.05).MCF-7/DCC与MCF7细胞的克隆形成率分别为34％、68％,MCF-7/DCC细胞的克隆形成率低于亲本细胞(P＜0.05).结论 DCC基因可有效抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、黏附能力.
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DCC基因在大肠癌中的表达及与Bcl-2,Bax关系
目的:探讨DCC(deleted in colometal carcinoma)基因在大肠癌组织中的表达情况及与Bel-2,Bax蛋白之间的关系.方法:采用免疫组织化学法结合图像分析技术观察74例大肠癌组织中DCC,Bel-2,Bax蛋白的表达情况.结果:大肠癌组织中,DCC蛋白失表达率为54.1%(40/74),其表达在不同的肿瘤分化程度(P＝0.002)及Dukes分期中有差异(P＝0.042);Bcl-2蛋白表达阳性率为60.8%(45/74),其表达与不同的大肠癌临床Dukes分期(P＝0.032)及是否有淋巴结转移(P＜0.001)中有差异;Bax蛋白表达阳性率为48.6%(36/74),在不同的大肠癌组织学类型、分化程度、Dukes分期及淋巴结是否转移中均无差异(P＞0.05).大肠癌中DCC蛋白表达与Bel-2表达水平呈负相关(r＝-0.201,P＝0.043),与Bax表达水平呈正相关(r＝0.296,P＝0.005).结论:大肠癌中DCC表达缺失频率较高,且可能通过上调Bel-2蛋白表达和下调Bax蛋白表达阻止细胞凋亡,从而促进大肠癌发生.
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Netrin-1及其受体DCC基因在6种结直肠癌细胞中的表达差异及意义
目的:研究Netrin-1、DCC基因在6株不同类型和来源的体外培养结直肠癌细胞mRNA及蛋白水平的表达差异.方法:CCK8检测6株不同来源结直肠肿瘤细胞的生长曲线,以正常肠上皮细胞NCM460为对照;Real-Time PCR和Western blot分别检测Netrin-1、DCC基因在6株结直肠癌细胞内的mRNA和蛋白水平的表达.结果:与对照组相比,结直肠肿瘤细胞株可见DCC、Netrin-1基因及蛋白的异常表达;DCC表达在6株结直肠肿瘤细胞株中均表达下调,其中SW620、LOVO、LS174T细胞株内DCC表达下调差异显著,有统计学意义(P＜0.05);Netrin-1在6株结直肠肿瘤细胞株中均表达上调,其中SW620、LOVO、LS174T细胞株内Netrin-1表达上调差异显著,有统计学意义(P＜0.05);6株结直肠肿瘤细胞株之间DCC、Netrin-1也存在差异表达.结论:DCC、Netrin-1在结直肠肿瘤内异常表达,与肿瘤的发展和转移相关,DCC和Netrin-1在同一细胞株内表达呈负相关,DCC蛋白的下调和失活可能与Netrin-1有关.
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Netrin1及其受体与颞叶癫痫海马硬化的关系
神经轴突导向因子Netrin1及其受体在调节神经突触重建及抗细胞凋亡过程中起重要作用，海马硬化是颞叶癫痫中常见的一种病理变化，神经突触重建及神经元凋亡为其特征性病理变化。本文就Netrin1及其受体与颞叶癫痫海马硬化的相关性予以综述。
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动脉粥样硬化遗传易感性与DCC基因多态性的相关性
目的探讨DCC基因STR位点多态性与动脉粥样硬化遗传易感性之间的关系. 方法利用PCR-STR方法对陕西正常老年人群(52例)动脉粥样硬化(57例)的DCC基因STR位点多态性进行群体遗传学研究,并就该位点与动脉粥样硬化关系进行关联分析. 结果对照组陕西正常老年人群DCC基因STR位点,扩增片断基因频率分布0.0096～0.3270,片断重复次数为37～92;DCC基因STR位点,在正常老年人群中多态信息量(PIC)为0.754,杂合度(H)为0.812.结果对比显示,病例组与对照组等位基因频率分布有显著差异(χ2=38.792, df=13, P<0.01),其中动脉粥样硬化组250～270 bp范围内基因频率高于对照组(P<0.01),对照组180～190 bp范围内基因频率高于动脉粥样硬化组(P<0.01);病例组与对照组杂合度与多态性分析,未见显著性差异. 结论 DCC基因STR位点多态性改变可能与动脉粥样硬化遗传易感性相关联,等位基因片断长度在250～270 bp范围内的可能是动脉粥样硬化的遗传标记.
