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大鼠上涎核的传出神经纤维与翼腭神经节中的VIP-、DβH-、NPY-神经元的关系光镜研究
目的探讨翼腭神经节节前神经纤维在翼腭神经节中的形态、分布,以及与含不同神经活性物质的神经节细胞的关系. 方法用顺行标记结合免疫组织化学方法进行研究. 结果在翼腭神经节内,有大量的顺行追踪标记阳性神经纤维,呈篮状缠绕在神经节细胞周围,非常密集.免疫双标记法显示这些被顺行追踪阳性神经纤维包绕的神经元多呈VIP、DβH和NPY免疫反应性.在顺行追踪免疫反应性篮状神经纤维之间,还有SP、CGRP、VIP、DβH、NPY免疫反应性神经纤维. 结论翼腭神经节中VIP(ChAT)和DβH、VIP免疫反应性神经元受到上涎核发出的节前神经纤维的调控.
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DiI顺行追踪大鼠皮质脊髓束
目的 用DiI追踪大鼠皮质脊髓束,探讨DiI在皮质脊髓束顺行追踪中的应用效果.方法 Wistar大鼠24只,随机分为DiI组和溃变组,于DiI组感觉运动区皮质表面涂布5%DiI;对溃变组则损毁相应的感觉运动区皮层.结果 DiI组术后存活5d的鼠,仅在端脑和间脑区见红色荧光标记的纤维,在术后存活10d、15d、20d的鼠脑及脊髓各节段内均可见红色荧光标记的皮质脊髓束纤维;溃变组在脊髓节段可观察到明显的溃变纤维,以术后存活5d为显著,在脊髓以上节段未见明显溃变纤维.结论 采用DiI活体顺行追踪大鼠皮质脊髓束的方法简便易行,对于皮质脊髓束的示踪研究,尤其中脑以下节段的显示具有比较好的应用价值.
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三维建模的猫听皮质定位与主要分区的研究
目的 研究猫听皮质的定位与主要分区的三维可视化.方法 利用生物索葡聚糖胺(BDA)进行顺行追踪,建立猫听皮质区域的原始数据库,通过3D软件Amira进行重构.结果 建立了猫大脑半球及其听皮质区域的数据库,将听皮质分为AI、AAF、P、VP、A Ⅱ五区,重建了大脑半球及其主要听皮质分区的数字化解剖模型.结论 将组织学技术与计算机图像处理技术相结合,可以从三维的角度来研究和重建听皮质的分区结构.
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生物素化葡聚糖胺顺行追踪标记大鼠皮质脊髓束
目的:探讨生物素化葡聚糖胺(BDA)对皮质脊髓束(CST)示踪的应用价值.方法:采用成年SD大鼠40只,随机分为单侧锥体束损伤组(n=24)、假损伤组(n=8)和正常组(n=8).在锥体交叉上方选择性切断左侧锥体建立单侧锥体柬横断损伤模型.运用Rivlin斜板试验进行运动功能检测.在双侧感觉运动皮层多点分层立体定位注射BDA,BDA注射14天后取脑和脊髓切片进行ABC免疫组织化学染色显示BDA标记信号.观察皮质脊髓束的走行.结果:Rivlin斜板试验显示单侧锥体束横断损伤组倾斜平面临界角度变化明显小于正常对照组和假损伤组(P<0.05).正常组和假损伤组大鼠BDA示踪显示BDA标记阳性细胞定位于双侧感觉运动皮层的锥体细胞,锥体细胞发出的BDA阳性纤维束对称分布于双侧皮层、内囊、大脑脚、脑桥基底部、延髓锥体中的皮质脊髓柬内,继而经锥体交叉到脊髓后索,在双侧后索深层、灰质后连合背侧下行至脊髓骶段.锥体束横断损伤大鼠在损伤部位以上可见双侧对称的BDA阳性纤维束,损伤平面以下在右侧延髓锥体和左侧脊髓后索中见有BDA阳性纤维束.损伤侧锥体和右侧脊髓后索中未见有BDA阳性纤维束.结论:BDA顺行示踪技术可以清楚地显示皮质脊髓束.对皮质脊髓束损伤与修复的形态学研究具有较好的应用价值.
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大鼠延髓网状背侧亚核传出投射的PHA-L顺行追踪法研究
目的:显示大鼠延髓网状背侧亚核向内源性镇痛系统的直接传出纤维投射.方法:将顺行追踪剂PHA-L注入大鼠单侧延髓网状背侧亚核,术后存活20天后取脑,连续冠状切片,继而对切片进行PHA-L免疫组织化学染色.结果:发现中缝大核、蓝斑核、巨细胞网状核、中缝背核、中脑导水管周围灰质以及丘脑室旁核等均有阳性终末.结论:延髓网状背侧亚核与内源性镇痛系统之间有广泛的纤维联系,提示该核与痛觉调节活动有关.
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大鼠皮质脊髓束选择性横断损伤模型的建立
目的 建立一种稳定可靠且简便实用的皮质脊髓束选择性横断损伤动物模型.方法 选择在延髓锥体切断左侧锥体束,制作大鼠皮质脊髓柬选择性横断损伤模型.采用Rivlin斜板实验评价模型的运动功能,运用Luxolfast blue(LFB)染色法、生物素化葡聚糖胺(BDA)神经示踪法和蛋白激酶Cγ(PKCγ)免疫组织化学染色法观察皮质脊髓束的形态学变化.结果 皮质脊髓束损伤组大鼠术后右侧前后肢瘫痪,运动功能受限,Rivlin试验显示倾斜平面临界角度明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);损伤区未见LFB阳性神经纤维束通过;在延髓锥体交叉平面,仅见一束BDA或PKCγ阳性纤维束经右侧锥体交叉至脊髓后索,在左侧脊髓后索深层,紧邻脊髓灰质后连合背侧下行至骶段,而在损伤平面以下,未见有BDA或PKC γ阳性纤维束经左侧锥体交叉至右侧,在整个脊髓后索的右侧半未见有BDA或PKC γ阳性纤维束.结论 选择在延髓切断一侧锥体束,建立皮质脊髓束选择性横断损伤模型,方法 简便实用,结果 稳定可靠,是研究皮质脊髓束的可塑性和神经轴突再生的理想动物模型.
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树鼩内侧隔核/斜角带核垂直部--海马投射:菜豆白细胞凝集素顺行法研究
本研究用PHA-L顺行追踪法观察了树鼩内侧隔核/斜角带核垂直部到海马的投射.结果表明:(1)海马内PHA-L标记纤维根据形态特点可分为两种类型:Ⅰ型纤维较粗,分支多,有形态较大、数量较少的终末终扣;Ⅰ型纤维纤细,分支少,有较多、较小的通过型终扣(boutons en passant).(2)内侧隔核/斜角带核垂直部到海马的投射存在着以下体部定位关系:一侧向双侧海马均有投射,以同侧投射明显占优势;内侧隔核吻侧部主要投射到背侧海马和腹侧海马后部,内侧隔核尾侧部主要投射到腹侧海马前部;背侧海马齿状回内的投射纤维几乎都来自内侧隔核.(3)根据注射部位的不同,Ⅰ、Ⅱ型纤维在背侧海马的分布有差异,其中内侧隔核吻侧部到背侧海马的纤维几乎均为Ⅰ型纤维,而斜角带核垂直部到背侧海马的纤维既有Ⅰ型纤维又有Ⅰ型纤维.(4)背侧海马和腹侧海马内Ⅰ型纤维的终扣结构极有可能与锥体细胞和颗粒细胞构成突触.本研究结果为进一步认识内侧隔核/斜角带核垂直部-海马通路提供了新的形态学依据.
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发育中和成年哺乳动物中枢神经系统束路追踪的新技术
一、前 言 远在Golgi和Cajal时代，追踪神经元之间的联系即已是神经解剖学研究中的重大目标，它对研究神经的功能、神经系统的发育和成熟都具有重要的价值。这种方法学的建立始于19世纪末的逆行和顺行溃变的研究。逆行溃变主要是指毁损轴突后神经元胞体(即去除其靶区之后的神经元胞体)的溃变[17,170]；而顺行溃变技术是以Marchi法显示的Waller变性(胞体或轴突损伤后的轴突终末的溃变)[120]。在神经解剖学形成的早期，在Golgi及其支持者倡导的“网状说”和Cajal提倡的：“神经元说”论战的推动下，Cajal利用Galgi镀银法，详细研究了神经元和轴突[21]，创建了Cajal法，奠定了用溃变镀银法追踪神经通路的方法学基础。 20世纪从40年代开始，Glees[65]、Nauta[11,130,131]、Fink和Heimer[53]等的改进的溃变镀银法使从一个核团到另一处中枢投射的顺行追踪研究可以更有效地进行，特别是对那些用Golgi法无法看到的长距离联系尤为适用。 追踪法的更进一步的技术革命发生在20世纪70年代，出现了利用辣根过氧化物酶(HRP)标记技术，它是可在生活状态下通过标记物被轴浆运输的的方法[102,109]，运用简单可靠的组织化学反应即可追踪出神经元的联系。它较以前所有溃变法都简便、确切和更为敏感。HRP示踪法直到现在仍在应用，它的问世标志着神经解剖学向前迈了一大步，因为它既可以对神经元进行逆行、顺行追踪也可以跨越神经元胞体追踪出神经元的全程。也有人试用WGA－HRP [60]以及一些毒素为载体进行跨越突触的追踪。与HRP技术问世的同时，Cowan等[37]创建了放射自显影技术，通过放射性标记的氨基酸顺行传送来研究轴突的联系。
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大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核-臂旁核-丘脑间接联系的研究
目的 观察臂旁核(PBN)内向丘脑腹后内侧核(VPM)投射神经元和三 叉神经脊束核尾侧亚核(V c)向臂旁核投射纤维和终末的分布，以及两者之间的突触联系. 方法 HRP 逆行追踪与生物 素葡聚糖胺(BDA)顺行追踪相结合的双标技术，标记结果分别在光镜或电镜下观察. 结果 将HRP注入VPM后，在光镜下可见HRP逆标神经元主要位于同侧的臂旁外侧核、Kolliker-Fus e (KF)核和臂旁内侧核. 将BDA注入Vc后，BDA顺标纤维和终末也主要见于同侧旁外侧核、KF核 和臂旁内侧核，对侧丘脑VPM、丘脑后核和丘脑胶状质核也有BDA顺标纤维和终末，但臂旁核 内 的BDA顺标纤维和终末明显多于丘脑诸核团. 在臂旁核内，HRP逆标神经元的主要分布区与BD A顺标纤维和终末的主要分布区重叠. 电镜下在臂旁核内可见，Vc向臂旁核投射的BDA 顺 纤维和终末与臂旁核向丘脑VPM投射的HRP逆标神经元形成以非对称性为主的轴-树和轴-体 突 触. 结论 大鼠中枢内存在Vc-PBN-VPM间接联系通路，该通路在面口部 躯体感觉信息(包括伤害性信息)的传递和调控过程中可能发挥重要作用.
