首页 > 文献资料
-
脂毒性与胰岛微血管内皮细胞损伤的研究进展
胰岛微血管内皮细胞作为胰岛微循环系统主要的组成成分,直接参与糖尿病胰岛功能衰竭的发生发展过程.脂毒性损伤可通过促进内皮氧化应激、影响血管舒缩功能、诱导细胞凋亡等多种途径直接破坏胰岛微循环内皮细胞,影响胰岛细胞功能.
-
晚期蛋白氧化产物对大鼠胰岛微血管内皮细胞体外增殖、迁移及再血管化功能的影响及机制研究
目的 探讨晚期蛋白氧化产物(AOPPs)对大鼠胰岛微血管内皮细胞(IMECs)体外增殖、迁移及再血管化功能的影响及可能机制.方法 分为空白对照(NC)组、鼠血清白蛋白(RSA)组、不同浓度AOPP组(100、200、300μg/ml)及AOPPs 200μg/ml+NADPH氧化酶抑制剂(Apocynin)组.CCK8试剂盒检测IMECs增殖活性;Transwell小室、Matrigal胶及显微镜下细胞计数法检测AOPPs对IMECs体外迁移及再血管化的影响;化学发光法检测还原型辅酶-Ⅱ(NADPH)氧化酶活性;免疫印迹检测磷酸化丝-苏氨酸激酶(p-Akt)、磷酸化内皮型一氧化氮合酶(p-eNOS)蛋白的表达及ELISA检测一氧化氮(NO)水平.结果 AOPPs可呈剂量、时间依赖性降低IMECs体外增殖能力、迁移能力及再血管化能力,增强细胞内NADPH氧化酶的活性,降低细胞内p-Akt、p-eNOS的表达水平以及细胞内NO的水平(P<0.05).结论 AOPPs可导致胰岛微血管内皮细胞增殖、迁移及再血管化功能受损,可能与下调p-Akt及p-eNOS的表达水平以及加强NADPH氧化酶介导的eNOS脱偶联有关.
-
利拉鲁肽对糖尿病前期小鼠胰岛功能及胰岛微血管内皮细胞作用的研究
目的 探讨利拉鲁肽对糖尿病前期小鼠胰岛功能及胰岛微血管内皮细胞的作用.方法将30只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常饮食(Con)组、高脂饮食(HF)组、高脂饮食+利拉鲁肽干预组(LH),每组各10只,比较各组FBG、FIns、胰岛内胰岛素、CD31、血管内皮生长因子A(VEGF-A)蛋白表达及一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素1β(IL-1β)mRNA表达量.结果各组FBG比较,差异无统计学意义(P>0.05).LH组胰岛内胰岛素水平高于HF组(P<0.05),CD31蛋白表达[(0.196±0.002)vs(0.245±0.004)]及VEGF-A[(0.265±0.003)vs(0.413±0.005)]、IL-1β[(1.13±0.03)vs(1.54±0.02)]及iNOS[(1.28±0.02)vs(1.65±0.03)]mRNA表达均低于HF组(P<0.05).结论利拉鲁肽可改善糖尿病前期小鼠胰岛功能,对胰岛微血管内皮细胞起保护作用.
-
高级氧化蛋白产物对大鼠胰岛微血管内皮细胞凋亡的影响及机制研究
目的：探讨高级氧化蛋白产物（AOPPs）对大鼠胰岛微血管内皮细胞（IMECs）凋亡的影响及可能机制。方法以体外分离培养的大鼠 IMECs为研究对象，用不同浓度 AOPPs（100、200、300μg／ml）干预不同时间（12、24、48及72 h）。荧光染色及流式细胞术观察AOPPs对IMECs细胞凋亡的影响；DHE荧光探针检测细胞内活性氧簇（ROS）水平；Western blot检测凋亡相关蛋白的表达及ELISA检测凋亡蛋白酶（Caspase‐3）及Caspase‐9的活性。结果 AOPPs在体外可呈剂量、时间依赖性的诱导IMECs凋亡[其中，AOPPs 200μg／ml干预48 h凋亡率为（23.48±4.69）％]，增加细胞内 ROS 产生[AOPPs 200μg／ml组ROS荧光强度为（58.43±2.71）]，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；减少抗凋亡蛋白Bcl‐2、增加促凋亡蛋白Bax的表达，提高下游Caspase‐3及Caspase‐9的活性（分别为对照组的2.5倍和3.0倍）（P＜0.05）。结论 AOPPs可诱导胰岛微血管内皮细胞凋亡，其机制与还原型辅酶‐Ⅱ（NADPH）氧化酶介导的氧化应激（OS）有关。
关键词： 高级氧化蛋白产物 胰岛微血管内皮细胞 还原型辅酶-Ⅱ氧化酶 氧化应激 凋亡 -
非诺贝特对游离脂肪酸诱导的胰岛微血管内皮细胞株损害的干预作用
目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)配体非诺贝特对于游离脂肪酸(FFA)介导的胰岛微血管内皮细胞(IMEC)损害的干预作用.方法 采用MTT法和流式法分析非诺贝特对FFA诱导IMEC细胞株MS-1细胞损害的影响,应用紫外分光光度法检测细胞培养液中一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平.结果 对照组、FFA组以及非诺贝特干预组MS-1细胞增殖率分别为(100.0±0.7)%、(16.2±0.8)%、(26.8±0.8)%,差异具有统计学意义(P＜0.001);三组MS-1细胞凋亡率分别为(4.80±2.07)%、(26.31±1.78)%、(19.20±1.90)%,差异有统计学意义(P＜0.001);细胞培养液NO含量分别为(6.61±0.65)、(2.48±0.62)、(4.11±0.33)μmol/L,差异有统计学意义(P＜0.001);SOD含量分别为(20.29±1.10)、(15.10±0.40)、(16.46±0.73)U/ml,差异有统计学意义(P＜0.001);MDA水平分别为(4.44±0.98)、(8.26±0.85)、(5.56±0.91)μmoL/L,差异有统计学意义(P＜0.001).结论 FFA可以诱导胰岛微血管内皮细胞发生明显脂性凋亡和氧化应激损伤,PPAR-α配体具有保护该细胞免于FFA氧化应激损伤的作用.
关键词： 游离脂肪酸 胰岛微血管内皮细胞 非诺贝特 受体 过氧化物酶体增殖物激动剂 -
沉默钙非依赖型磷脂酶A2β基因对间歇性高糖诱导胰岛微血管内皮细胞凋亡的影响
目的 通过小分子干扰(siRNA)技术沉默大鼠胰岛微血管内皮细胞(IMECs)的钙非依赖型磷脂酶A2(iPLA2)基因,研究不同葡萄糖浓度对IMECs iPLA2表达的影响及其与细胞凋亡之间的关系.方法 通过分离纯化大鼠胰岛,获取IMECs细胞,采用随机数余数分组法将其分为正常糖组(5 mmol/L)、恒定高糖组(28 mmol/L)及间歇高糖组(每24小时轮换培养于5mmol/L或28 mmol/L葡萄糖);通过实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测葡萄糖浓度分别为恒定的5 mmol/L、28 mmol/L以及每24小时轮换的5 mmol/L或28 mmol/L培养条件下的IMECs iPLA2的基因表达;合成iPLA2的RNA干扰序列并转染至IMECs中,通过RT-PCR验证其是否转染成功;采用细胞DNA片段化检测和膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V/PI)流式细胞仪检测不同葡萄糖浓度条件下IMECs的凋亡.组间两两比较采用LSD检验,凋亡率采用随机区组设计的两因素ANOVA分析.结果 RT-PCR检测显示各组细胞iPLA2基因表达逐渐减弱,依次为1.90±0.23、0.90±0.05及0.23±0.03,且各组间差异有统计学意义(P＜0.05).成功合成并转染iPLA2 siRNA后,IMECs间歇性葡萄糖培养组较正常糖组及恒定高糖组DNA片段化更为明显,间歇高糖组流式细胞凋亡率较正常糖组升高,差异有统计学意义(44.9±2.7比3.1±1.0,P＜0.05).结论 间歇性高糖环境可抑制IMECsiPIA2基因表达,且通过小分子干扰技术抑制iPLA2基因表达能够促进细胞的凋亡,提示iPLA2表达减弱可能参与了间歇性高糖诱导的IMECs凋亡过程.
关键词： 胰岛微血管内皮细胞 间歇性高糖 钙非依赖型磷脂酶A2 凋亡 -
间歇性高糖对胰岛微血管内皮细胞凋亡和氧化应激损伤的影响
目的 探讨间歇性高糖对胰岛微血管内皮细胞凋亡和氧化应激损伤的影响.方法 以体外不同葡萄糖浓度DMEM培养基培养的大鼠胰岛微血管内皮细胞为研究对象,分为正常葡萄糖组、恒定性高糖组和间歇性高糖组,连续培养7 d.采用DNA片段化检测及流式细胞仪测定胰岛微血管内皮细胞的凋亡,连续光谱荧光仪检测细胞凋亡蛋白酶Caspase-3活性.通过测定细胞活性氧族水平、线粒体膜电位及黄嘌呤氧化酶评估不同培养条件下对胰岛微血管内皮细胞氧化应激的影响.结果 间歇性高糖组较正常葡萄糖组和恒定性高糖组的细胞凋亡明显增多,差异具有统计学意义(P<0.001);间歇性高糖组细胞内活性氧簇、黄嘌呤氧化酶水平显著高于恒定性高糖组和正常葡萄糖组差异具有统计学意义(P<0.001).间歇性高糖组线粒体膜电位水平显著低于恒定性高糖组和正常葡萄糖组差异具有统计学意义(P<0.001).结论 间歇性高糖较恒定性高糖能够促进胰岛微血管内皮细胞氧化应激损伤及增加细胞凋亡.
-
SIRT1对高糖高脂培养胰岛微血管内皮细胞炎性反应激活的影响
目的 分析高糖、高脂环境下胰岛微血管内皮细胞(IMVC)分泌E-选择素、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β的变化,研究沉默信息调节蛋白1(SIRT1)/核因子-κB信号途径异常在内皮细胞炎性反应激活中的作用.方法 合成含绿色荧光蛋白报告基因的小鼠SIRT1基因重组质粒,以Lipofectamine 2000转染IMVC.之后将IMVC分为4组:正常对照组、高糖高脂组、高糖高脂+ SIRT1基因转染组、高糖高脂+基因转染对照组.高糖高脂组以33.3 mmol/L葡萄糖+0.5mmol/L棕榈酸处理48 h.高糖高脂+SIRT1基因转染组在高糖高脂处理前以SIRT1基因重组质粒预处理48 h；高糖高脂+基因转染对照组在高糖高脂处理前以空质粒进行预处理48 h.应用实时荧光定量PCR法检测SIRT1基因转染效果及各组核因子-κB的mRNA水平,应用酶联免疫吸附法测定细胞培养上清中TNF-α、IL-1β、E-选择素的水平.结果 与正常对照组相比,高糖高脂组SIRT1 mRNA表达明显下降(0.58 ±0.12,P＜0.01)；而高糖高脂+SIRT1基因转染组的SIRT1基因表达明显升高,与高糖高脂组相比差异显著[(1.55±0.43)比(0.65±0.37),P＜0.01].与正常对照组相比,高糖高脂组核因子-κB mRNA(1.59 ±0.32,P＜0.01)、E-选择素[(48.46±1.04)比(67.12±0.57) ng/L,P＜0.01]、TNF-α[(467.46±8.98)比(621.14±11.26) ng/L,P＜0.01]、IL-1β[(63.32±1.48)比(118.43±1.40) ng/L,P＜0.01]的水平明显升高(P＜0.01).与高糖高脂组相比,高糖高脂+SIRT1基因转染组核因子-κB mRNA (0.95±0.31,P＜0.01)及TNF-α[(451.38±15.91)比(618.89±7.23) ng/L,P＜0.01]明显下降(P＜0.01),E-选择素、IL-1β无明显变化(P＞0.05).结论 高糖高脂环境下,IMVC存在炎性反应激活,可释放大量炎性反应细胞因子.SIRT1-核因子-κB-TNF-α通路异常与IMVC的炎性反应激活密切相关,早期干预该信号通路可能在预防及治疗2型糖尿病的胰岛炎性反应中具有重要意义.
-
胰岛微血管系统与糖尿病的关系研究进展
糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢性疾病,发病原因主要是由于β细胞损伤或其功能障碍造成的胰岛素分泌不足.新研究表明,胰岛微血管系统参与β细胞的分化与发育,维持β细胞正常形态及生理功能.在糖尿病的发生及发展过程中,胰岛微血管系统受到不同程度的损伤.该文就胰岛微血管系统在维持胰岛微循环稳态中的作用和其在糖尿病发病过程中扮演的角色及可能的治疗靶点进行了综述.
-
津力达颗粒预处理对高糖诱导小鼠胰岛微血管内皮细胞和人脐静脉内皮细胞增殖及凋亡的影响
目的:观察中药津力达颗粒预处理对高糖诱导的小鼠胰岛微血管内皮细胞(MS-1)及人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及凋亡的影响.方法:体外培养MS-1及HUVEC株,均随机分为正常浓度葡萄糖(5.5mmol/L)培养组(正常对照组)、高浓度葡萄糖(33mmol/L)培养组(高糖组)、不同浓度津力达颗粒(12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml)预处理24h后再高糖培养组(津力达组),各组平行培养48h后收集细胞,MTT法检测细胞增殖水平,流式细胞术检测细胞凋亡,包括总凋亡指数(TAI)和早期凋亡指数(EAI).结果:与正常对照组比较,高糖组MS-1及HUVEC增殖水平(OD值)下降(P＜0.01),TAI和EAI升高(P＜0.01).与高糖组比较,津力达组MS-1及HUVEC增殖水平随药物浓度增加而升高(P＜0.01),至津力达浓度800μg/ml时与正常对照组差异无统计学意义(P＞0.05).津力达组MS-1和HUVEC的TAI及EAI则随药物浓度增加而降低(P＜0.01),但尚不能回复至正常对照组水平.结论:中药津力达颗粒升高MS-1及HUVEC增殖水平,降低MS-1及HUVEC的TAI和EAI,从而可能对胰岛功能及血管内皮功能具有一定保护作用.
-
Toll样受体4对高糖诱导胰岛微血管内皮细胞株凋亡蛋白表达的影响
目的:观察小鼠胰岛微血管内皮细胞(MS1)Toll样受体4(TLR4)的表达及其对高糖诱导凋亡蛋白表达的影响.方法:离体小鼠MS1分为低浓度葡萄糖(5.6mM)对照组(C组)、高浓度葡萄糖(25.0mM和35.0mM)诱导组(HG组)、TLR4抑制剂干预组(35.0mM葡萄糖+1μM CLI-095,HG+CLI组)及TLR4抑制剂对照组(5.6mM葡萄糖+1μM CLI-095,CLI组).平行培养24h或48h后,先用CCK-8法检测C组和HG组MS1细胞活力,选定高糖干预浓度(35.0mM)及时间(48h);再分别应用免疫组化和Western Blotting检测各组MS1细胞TLR4表达水平;应用Western Blotting检测各组MS1细胞凋亡蛋白Caspase-9、Caspase-3表达水平;应用明胶酶谱分析法检测基质金属蛋白酶2(MMP2)活性变化.结果:与C组比较,HG组MS1的TLR4蛋白表达显著增加(P<0.01);凋亡蛋白Caspase-9和Caspase-3表达均显著升高(P<0.01,P<0.05);MMP2活性明显增强(P<0.05);与HG组比较,HG+CLI组Caspase-9水平均明显降低(P<0.01),Caspase-3水平仅有降低趋势,差异无统计学意义(P>0.05);TLR4的表达和MMP2活性虽有下降,但差异亦无统计学意义(P>0.05).结论:MS1高表达TLR4可能参与高糖诱导的MS1细胞凋亡.
-
1型糖尿病小鼠胰岛微血管内皮细胞超微结构受损
目的：探讨1型糖尿病小鼠胰岛微血管内皮细胞的超微结构改变。方法：BALB／c小鼠随机分为糖尿病组和对照组，每组6只。应用免疫组化染色检测胰岛素及胰岛微血管血小板内皮细胞黏附分子－1（ CD31）表达水平；应用透射电镜观察糖尿病小鼠胰岛β细胞及胰岛微血管超微结构变化。结果：糖尿病组小鼠胰岛β细胞数量、β细胞／α细胞数量比、β细胞分泌颗粒数量及胰岛素阳性染色面积百分比显著降低（ P＜0．01）。糖尿病组小鼠胰岛微血管数量，CD31表达水平显著降低（P＜0．01）；微血管内皮细胞及胰岛周细胞线粒体肿胀变性；微血管基膜厚度显著升高（ P＜0．01）。结论：1型糖尿病小鼠胰岛微血管内皮细胞超微结构受损。
-
普伐他汀对P38MAPK信号通路介导的胰岛微血管内皮细胞炎症损伤的保护作用
目的 研究脂多糖(LPS)诱导胰岛微血管内皮细胞(IMECs)炎症损伤的相关信号通路及采用普伐他汀干预后的作用机制.方法 以IMECs为实验材料,分为空白对照组、LPS组、SB203580组、普伐他汀组、SB203580+普伐他汀组.以Hoechst凋亡染色及Annexin V/PI双染色法对不同条件下IMECs的凋亡进行定性定量检测,Western blot法检测总P38MAPK(total-p38)、磷酸化P38MAPK(p-p38)蛋白及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白的表达水平.结果 LPS组IMECs较对照组凋亡率升高,total-p38、p-p38、iNOS蛋白的表达水平上调.与LPS组比较,SB203580组、普伐他汀组与SB203580+普伐他汀组均有凋亡率降低,total-p38、p-p38、iNOS蛋白表达水平下调.结论 LPS诱导的IMECs炎症损伤与P38MAPK及iNOS/NO炎症通路的激活有关,普伐他汀可阻断以上通路,起到抑制IMECs凋亡、坏死,改善炎症损伤的保护作用.
-
游离脂肪酸对猴胰岛微血管内皮细胞脂毒性的影响
目的 观察游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)对恒河猴胰岛微血管内皮细胞(islet microvascular endothelial cells,IMECs)增殖和凋亡的影响及FFA介导的恒河猴IMECs氧化应激损伤.方法 分离纯化恒河猴IMECs,分别用含有FFA(FFA组)和不含有FFA(对照组)的DMEM培养,MTT实验测定细胞增殖率(成活率),流式细胞仪检测细胞凋亡率,活性氧簇(ROS)酶联免疫分析(ELISA)测定IMECs中ROS的浓度.结果 经24 h培养后,FFA组IMECs增殖率较对照组显著降低(P＜0.01);Annexin V-FITC/PI双染色后FFA组于荧光显微镜下可见明显的凋亡细胞;与对照组凋亡率比较,1.0 mmol/L FFA作用适当时间可显著升高IMECs凋亡率(P＜0.01);FFA组IMECs中ROS水平较对照组显著升高(P＜0.01).结论 高水平FFA可显著降低恒河猴IMECs增殖率,促进细胞发生凋亡,其凋亡可能与FFA介导的氧化应激损伤有关.
-
软脂酸诱导胰岛微血管内皮细胞凋亡的研究
目的 观察软脂酸对胰岛微血管内皮细胞株MS-1的增殖率、凋亡率的影响.方法 体外培养MS-1细胞,用含有不同浓度软脂酸培养液培养,采用MTT法检测细胞增殖率,Annecin V-FITC/PI双染色法荧光显微镜观察和流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 12 h培养后,与对照组细胞相比,软脂酸浓度升高,MS-1细胞增殖率随之显著降低(P<0.01);染色后软脂酸组于荧光显微镜下可见明显的凋亡细胞;与对照组凋亡率比较,0.5,1.0 mmol/L软脂酸作用适当时间均可显著升高MS-1细胞凋亡率(P<0.01),差异有统计学意义.结论 高水平软脂酸可显著降低胰岛内皮细胞增殖率,促进细胞发生凋亡,其凋亡率随着软脂酸浓度和作用时间而升高.
-
放线菌素D/TNF-α诱导小鼠胰岛微血管内皮细胞凋亡的研究
目的 研究肿瘤坏死因子1型受体(TNFR1)在小鼠胰岛微血管内皮细胞(IMEC)上的表达以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)对小鼠IMEC的损伤机制.方法 用小鼠胰岛微血管内皮细胞系MS-1细胞进行实验,用免疫荧光法研究TNFR1在MS-1细胞上的表达;用四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞毒作用;用流式细胞仪C膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)、碘化吡啶(PI)染色检测TNF-α对MS-1细胞凋亡的影响以及Ac-DEVD-CHO(caspase-3的竞争抑制剂)的保护效应.结果 (1)MS-1细胞表达TNFR1.(2)发现TNF-α单独对MS-1细胞无明显作用(P>0.05).TNF-α对放线菌素D(aetinomycin D,ActD)致敏的MS-1细胞有明显的细胞毒作用,并且随着TNF-α浓度的增加,MS-1细胞活力逐渐降低.(3)Ac-DEVD-CHO可以明显拮抗ActD/TNF-α诱导的MS-1细胞凋亡,并且呈剂量效应关系.结论 小鼠IMEC上有TNFR1的表达;TNF-α能诱导ActD致敏的胰岛内皮细胞发生凋亡,而Ac-DEVD-CHO则对这种细胞凋亡有明显的拮抗作用.
-
SIRT1对高糖高脂培养胰岛微血管内皮细胞eNOS表达及活性的影响
目的 分析高表达组蛋白去乙酰化酶(sirtuin 1,SIRT1)对高糖高脂培养胰岛微血管内皮细胞(islet endothelial cells,IEC)内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达及活性的影响.方法 合成含绿色荧光蛋白报告基因的小鼠SIRT1基因重组质粒,以Lipofectamine 2000转染IEC后以高脂或高糖高脂处理48 h.高脂组以0.5 mmol/L棕榈酸处理;高脂高糖组以33.3 mmol/L葡萄糖+0.5 mmol/L棕榈酸处理.应用Western印迹法检测SIRT1基因转染效果;应用实时荧光定量PCR及Western印迹法检测eNOS的基因及蛋白水平;应用硝酸还原酶法检测培养细胞上清中NO的水平.结果 相对于正常对照组,高脂培养IEC eNOS基因及蛋白水平无明显变化;但高脂高糖环境下,eNOS的基因及蛋白水平明显下降.高表达SIRT1不仅可升高高脂培养内皮细胞eNOS蛋白表达,且可升高高脂高糖培养内皮细胞eNOS mRNA及蛋白表达.相对于正常对照组,高脂培养使内皮细胞分泌NO水平明显下降,高糖高脂培养使内皮细胞NO水平进一步下降,高表达SIRT1不仅可升高基础状态下内皮细胞的NO水平,且可升高高脂、高脂高糖培养内皮细胞的NO水平,差异具有统计学意义.结论 SIRT1可改善高糖高脂培养胰岛微血管内皮细胞的eNOS表达及活性,使内皮源性NO分泌增加,因而可能有助于改善胰岛B细胞功能,在糖尿病的药物开发、基因治疗及胰岛移植治疗中具有广阔的前景.
