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H2O2对分化的PC12细胞par-4基因表达的影响
为观察H2O2对分化的PC12细胞par-4基因表达的影响,采用终浓度分别为0、100、200和400 nmol/L的H2O2处理PC12细胞8 h,用RT-PCR检测par-4基因mRNA表达变化,Western blot检测蛋白表达的变化.结果表明,随着H2O2剂量的增加,PC12细胞存活率降低,凋亡明显增加,且par-4 mRNA表达及蛋白表达亦增加,提示在H2O2诱导PC12细胞凋亡过程中Par-4可能起重要作用.
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胶质细胞源性神经营养因子对新生大鼠窒息后纹状体中Par-4基因表达的影响及其相关信号转导机制
目的研究胶质细胞源性神经营养因子对新生大鼠窒息后纹状体中促凋亡基因Par-4表达的影响及其相关信号转导机制.方法制备新生大鼠缺氧缺血性脑病的动物模型,侧脑室给予胶质细胞源性神经营养因子(0.1、1.0、5.0 μg/μl).Western blot测定Par-4蛋白表达水平.结果新生大鼠窒息后纹状体中Par-4蛋白表达上调、(P＜0.01).胶质细胞源性神经营养因子呈剂量依赖性地抑制缺氧缺血诱导的Par-4蛋白表达上调(P＜0.01).给予200 μmol/L的P42/P44 MAPK活性阻断剂PD98059预处理,胶质细胞源性神经营养因子对Par-4表达的抑制作用由43%下调至22%(P＜0.01).结论胶质细胞源性神经营养因子抑制新生大鼠窒息后纹状体中促凋亡基因Par-4的表达,其机制可能与P42/P44 MAPK的活化有关.
关键词： 胶质细胞源性神经营养因子 窒息 纹状体 par-4 -
Par-4反义寡核苷酸拮抗谷氨酸对PC12细胞中ERK1/2的下调作用及其抗凋亡作用
目的研究par-4反义寡核苷酸拮抗谷氨酸对PC12细胞中ERK1/2活性的下调作用及其抗凋亡作用.方法利用脂质体将par-4反义寡核苷酸转染入PC12细胞.谷氨酸诱导PC12细胞凋亡.利用吖啶橙/溴化乙锭荧光染色观察PC12细胞形态,流式细胞分析评价凋亡百分率.Western印迹测定par-4的蛋白质表达量和磷酸化的ERK1/2的蛋白表达量. 结果 (1)谷氨酸诱导PC12细胞中par-4蛋白表达上调,Par-4反义寡核苷酸呈剂量依赖性地拮抗其上调(组间比较,P<0.01).(2)谷氨酸诱导PC12细胞中磷酸化(Thr202/Tyr204)的ERK1/2蛋白水平下调,par-4反义寡核苷酸拮抗其上调(组间比较,P<0.01).(3)Par-4反义寡核苷酸拮抗谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,如予ERK1/2阻断PD98059预处理,则其拮抗作用被下调(组间比较,P<0.05).结论 Par-4反义寡核苷酸拮抗谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与ERK1/2的活化有关.
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Par-4基因沉默对人骨髓间充质干细胞中Smac基因表达和半胱氨酸蛋白水解酶3酶活性的影响及其抗凋亡作用
目的 研究Par-4基因沉默对人骨髓间充质干细胞(hBMSC)中Smac基因表达和半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase)3酶活性的影响及其抗凋亡作用.方法 原代培养hBMSC.谷氨酸诱导hBMSC凋亡.设计和合成两对针对Par-4基因mRNA的小RNA干扰(siRNA)序列(Par-4-SiRNA-1、2),构建真核细胞表达载体,用脂质体介导转染hBMSC,利用G418筛选稳定表达细胞株.实时荧光定量PCR法检测Par-4 mRNA表达水平.流式细胞术测定细胞凋亡百分率.Western印迹测定Smac蛋白表达量.比色法测定Caspase-3酶的活性.结果 设计的Par-4-SiRNA-1、2可显著诱导hBMSC中Par-4基因沉默,Par-4 mRNA水平分别被降低88%、67%,谷氨酸诱导hBMSC凋亡,凋亡百分率为(58.9±8.9)%.Par-4-SiRNA-1可显著拮抗谷氨酸的诱导凋亡作用,凋亡百分率降为(37.2±6.3)%(F=58.26,P＜0.01).Par-4-SiRNA-1对谷氨酸诱导的hBMSC中Smac蛋白表达上调(P＜0.01)和Caspase-3酶活性上调(P＜0.01)有显著的抑制作用(P＜0.01).结论 Par-4基因沉默能拮抗谷氰酸对hBMSC凋亡的诱导作用.其机制可能与Smac基因表达和Caspase-3酶活性被抑制有关.
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远志总皂苷干预β-淀粉样蛋白致伤神经干细胞Caspase-3及Par-4的表达
背景:远志总皂苷具有良好的神经保护作用.目的:分析远志总皂苷对β-淀粉样蛋白致伤海马神经干细胞的保护作用及机制.方法:自昆明小鼠海马分离培养神经干细胞,取第3代神经干细胞,用含不同质量浓度远志总皂苷与β-淀粉样蛋白致伤体外培养的神经干细胞共孵育.结果:应用免疫组织化学法检测Caspase-3阳性神经干细胞,与对照组相比,远志总皂苷组Caspase-3阳性细胞率及Par-4的表达明显降低,差异具有显著性意义(P<0.05).提示远志总皂苷能够降低β-淀粉样蛋白致伤神经干细胞中Caspase-3及Par-4的表达.
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阿魏酸钠对SNP诱导的凋亡海马神经元NF-кB、par-4基因表达的影响
目的 探讨阿魏酸钠(sodium ferulate,SF)对一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)引起的大鼠海马神经元凋亡及NF-кB P65、par-4基因表达的影响.方法 采用SD大鼠海马神经元原代培养,经终浓度分别为10、20、40、80、120、160 ìmol/L的SF预处理后,用50 ìmol/L的SNP处理24 h,采用MTT法检测细胞存活率,Hochest 33258荧光染色检测凋亡,Western blot及RT-PCR检测NF-кB P65、par-4基因表达.结果 不同剂量SF (10～160 ìmol/L)预处理6 h可显著提高神经元的存活率,减少SNP引起的核固缩、凝聚和碎裂现象;降低NF-кB P65、par-4 mRNA及蛋白的表达.结论 SF 抑制NO供体SNP诱导的海马神经元凋亡,其机制可能与降低促凋亡基因NF-кB P65、par-4表达有关.
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Par-4反义寡核苷酸对谷氨酸诱导PC12细胞STAT3活性下调的抑制作用
目的:研究Par-4反义寡核苷酸拮抗谷氨酸对PC12细胞中信号转导子和激活子3(STAT3)活性的下调作用及其抗凋亡意义.方法:脂质体将Par-4反义寡核苷酸转染PC12细胞.谷氨酸诱导PC12细胞凋亡.吖啶橙/溴化乙锭荧光染色观察PC12细胞形态.流式细胞分析评价凋亡百分率.Western blot测定Par-4的蛋白表达量,凝胶迁移改变实验测定STAT3的DNA结合力.结果:谷氨酸诱导PC12细胞中蛋白表达上调,Par-4反义寡核苷酸呈剂量依赖性地拮抗其上调(P＜0.01).谷氨酸诱导PCl2细胞中STAT3的DNA结合力下调,Par-4反义寡核苷酸拈抗其下调(P＜0.01).Par-4反义寡核苷酸拮抗谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡.如予Jak/STAT3信号通路阻断剂AG-490预处理,则其拮抗作用被下调.结论:Par-4反义寡核苷酸拈抗谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与STAT3活化有关.
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新生大鼠缺氧缺血后不同部位脑组织中Par-4基因的表达
目的:观察Par-4基因在新生大鼠脑缺氧缺血后,不同脑组织中的表达.方法:制备新生大鼠缺氧缺血性脑病的动物模型.利用RT-PCR检测脑缺氧缺血后不同时间点海马组织、大脑额叶皮质及小脑中Par-4的mRNA表达的改变,利用Westemblot检测在缺氧缺血24 h后,海马组织大脑额叶皮质和小脑中Par-4蛋白表达量的改变.结果:①海马组织和大脑额叶皮质中的Par-4 mRNA在脑缺氧缺血后2 h已明显升高,至6 h已达高峰.而小脑未见表达;②在新生大鼠脑缺氧缺血24 h后,海马组织及大脑额叶皮质中Par-4蛋白表达量显著升高,并且海马组织中Par-4蛋白表达量高于大脑额叶皮质中Par-4蛋白表达量.而小脑未见其蛋白表达.结论:缺氧缺血对新生大鼠不同脑组织中Par-4基因表达影响不同,Par-4可能参予了缺氧缺血对新生大鼠海马组织和大脑额叶皮质的致病过程.
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阿魏酸钠对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用的探讨
目的探讨阿魏酸钠(sodium ferulate,SF)对H 2O2引起的PC12细胞凋亡保护作用的可能机制.方法在H2O2诱导PC12细胞凋亡模型的基础上,采用MTT比色分析测细胞存活率,RT-PCR检测par-4和caspase-3基因mRNA表达,Western blot检测Par-4蛋白表达和Caspase-3P20活性片段,用比色法检测Caspase-3相对活性.结果 不同剂量SF预处理1 h可提高PC12细胞的存活率,降低par-4和caspase-3的mRNA表达以及Par-4的蛋白表达,Caspase-3 P20活性片段和Caspase-3相对活性减少,但变化不明显.结论 SF可剂量依赖性地对抗H2O2的神经毒性作用,其机制可能与凋亡基因par-4表达有关,与Caspase-3的关系尚需进一步探讨.
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前列腺凋亡反应蛋白-4在神经退行性疾病和精神疾病中的作用
前列腺凋亡反应蛋白-4(Par-4),由Sells等从前列腺癌细胞中分离出来[1].人类par-4基因位于染色体12q21上,蛋白质分子量约为38KDa.含442个氨基酸残基.有三个重要的功能区:羧基末端的亮氨酸拉链区(LZ),及氨基末端的核定位序列(NLS)NLS1和NLS2.
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谷氨酸对人骨髓间充质干细胞中Par-4蛋白表达的影响
目的 探讨谷氨酸对人骨髓间充质干细胞(BMSCs)中Par-4蛋白表达的影响及意义.方法 用BMSCs分离液和密度梯度离心分离和培养人BMSCs,取第3-5代培养的细胞,分别加入小鼠抗人CD29-FITC、CD44-FITC、CD105-FITC、CD45-FITC、CD14-FITC、CD34-FTTC单克隆抗体,流式细胞术鉴定其免疫表型.采用0.1 nmol/L、1.0 nmol/L、10.0 nmol/L等不同剂量谷氨酸处理人BMSCs24h,并设正常对照组.Western blot测定各组Par-4与突触素1(Synapsin-1)的蛋白表达量,并进行2种蛋白表达的相关性分析.结果 在显微镜下,BMSCs呈星形或梭形.流式细胞术鉴定发现培养的细胞中CD29、CD44、CD105表达阳性.而CD45、CD14 CD34表达阴性,符合BMSCs特点.正常对照组Par-4蛋白相对表达量为17.43±5.9,0.1nmol/L、1.0nmol/L、10.0nmol/L谷氨酸诱导人BMSCs中Par-4蛋白表达依次升高,分别为39.33±8.2、49.45±11.5、86.41±14.9(Pa＜0.01).谷氨酸处理导致BMSCs中Synapsin-1表达下凋,并呈剂量依赖性(F=49.1 P＜0.01).10.0nmol/L谷氨酸处理24h后,Par-4蛋白的表达与Synapsin-1的表达量呈显著负相关(r=-0.643 P＜0.01).结论 谷氨酸诱导人BMSCs中Par-4表达升高,并可能使植入剑缺血微环境中的BMSCs发挥神经细胞替代的作用受到负面影响.
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Par-4与阿尔茨海默病神经元凋亡
前列腺凋亡反应蛋白-4(prostate apoptosis response-4,Par-4)是一种小分子蛋白质.其生理功能尚不清楚,但能够促进多种细胞包括神经元的凋亡已得到证实.Par-4参与阿尔茨海默病(Alzheimer's disease.AD)神经元凋亡过程复杂.且有望成为筛选治疗AD药物的作用靶点.
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Par-4对胰岛β细胞凋亡的影响
目的:通过抑制前列腺凋亡反应因子-4(prostate apoptosis response-4,Par-4)的表达,观察并探讨Par-4对高糖高脂干预的胰岛细胞凋亡的影响及其机制.方法:将小鼠胰岛β细胞株NIT-1随机分成正常对照组、Par-4阻断组、高糖高脂干预组、高糖高脂+Par-4阻断组,TUNEL法检测各组细胞凋亡,Western印迹检测各组细胞Par-4和葡萄糖调节蛋白(glucose regulated protein 78,GRP78)的表达水平.结果:与正常对照组[凋亡率为(3.14±1.08)％]比较,高糖高月脂干预组胰岛β细胞凋亡率[(33.82±3.15)％]明显增加,Par-4和GRP78表达明显增加,差异均有统计学意义(均P＜0.05);与高糖高脂干预组比较,高糖高脂+Par-4抑制组细胞凋亡率[(18.34±2.11)％]明显下降,Par-4和GRP78表达明显下降,差异均有统计学意义(均p＜0.05).结论:抑制Par-4表达可改善高糖高脂诱导的大鼠胰岛β细胞凋亡,其机制可能与降低了β细胞内质网应激水平有关.
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多巴胺对分化的PC12细胞par-4基因表达的影响
目的:观察多巴胺(dopamine,DA)对分化的PC12细胞par-4基因表达的影响.方法: PC12细胞采用终浓度分别为0,100,200,400 μ mol/L的DA处理24 h后,用RT-PCR检测mRNA表达的变化和Western blot检测蛋白表达的变化.结果:随着DA剂量的增加,PC12细胞存活率降低凋亡明显增加,且par-4 mRNA表达及蛋白表达亦增加.结论:在DA诱导PC12细胞凋亡过程中par-4可能起重要作用.
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Par-4 诱导细胞凋亡发生机制的研究进展
Par-4 基因(prostate apoptosis response-4 gene,前列腺凋亡反应基因-4)是从凋亡的前列腺癌细胞中分离出来的一种促凋亡基因.Par-4 是该基因编码的产物,是一个广泛表达的蛋白,可以通过多种途径诱导癌细胞凋亡及促进肿瘤消退,其SAC区可以选择性的针对肿瘤细胞诱导其凋亡而正常细胞不受影响.随着Par-4研究的深入将对进一步了解肿瘤的发病机制及肿瘤治疗具有重要意义.
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三氧化二砷诱导K562细胞凋亡过程中Par-4及WT1基因表达的变化
目的 探讨三氧化二砷(As2O3)诱导K562细胞凋亡过程中前列腺凋亡反应因子-4(Par-4)和WT1基因表达的变化.方法 用不同浓度As2O3(2～10 μmol/L)处理K562细胞24～72 h,MTT法测定细胞增生活力,流式细胞术检测细胞凋亡.采用荧光定量RT-PCR检测Par-4和WT1基因mRNA表达变化,Western blotting检测Par-4和WT1蛋白表达的变化.结果 不同浓度As2O3作用于K562细胞,随浓度增加能明显抑制细胞的生长,诱导细胞发生凋亡.同时Par-4基因mRNA和蛋白表达逐渐增加;而WT1基因mRNA及蛋白表达逐渐下降.结论 As2O3可抑制K562细胞生长,诱导细胞凋亡,Par-4与WT1基因可能参与As2O3诱导K562细胞凋亡的调控.
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蛋白酶激活受体4(PAR-4)与肺癌关联的探究
蛋白酶激活受体(Protease-activated receptors,,PARs)是一种G蛋白偶联受体,具有介导跨膜信号转导和调节细胞功能的作用.其中PAR-4亚型为凝血酶的受体可能与肺癌的发生有关.本文从PAR-4的结构与分布、功能和致病机制、临床应用和肺癌防护等方面进行阐述,以期为肺癌的诊断治疗提供依据.
