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低氧对SH-SY5Y细胞miR-124及BACE1蛋白表达的影响
目的 研究低氧对培养细胞miR-124及β-淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)蛋白表达的影响.方法 培养人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),分为对照组、氧-糖剥夺组、Aβ1-42处理组、过表达或抑制miR-124组,用实时定量PCR方法检测miR-124表达,Western blot法检测BACE1蛋白表达.结果 氧-糖剥夺处理48 h,细胞内miR-124表达水平明显下降,仅为对照组的46.9％ (P ＜0.05),BAE1蛋白表达水平与较对照组增高36％(P＜0.01);转染miR-124过表达组组细胞内miR-124表达水平较对照组增高245倍(P＜0.01),为miR-124过表达对照组的219倍(P＜0.01),BACE1蛋白表达水平较对照组下降了29％ (P ＜0.05),较miR-124过表达对照组下降25％(P＜0.05).转染miR-124抑制剂组miR-124表达水平下降至对照组的45.4％ (P ＜0.05),至miR-124抑制对照组的48％ (P ＜0.05),BACE1表达水平较对照组升高21％ (P ＜0.05),较miR-124抑制对照组升高40.3％ (P ＜0.01);细胞经Aβ1-42处理24h,miR-124表达水平较对照组下降52％ (P ＜0.05),BACE1蛋白表达水平较对照组增高51％(P＜0.05).结论 低氧通过降低SH-SY5Y细胞miR-124表达进而升高BAEC1蛋白表达,且可能在阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)早期发病中发挥作用.
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叶酸对AD模型小鼠脑内Aβ沉积及BACE1表达影响
目的 探讨叶酸对阿尔茨海默病(AD)小鼠脑内β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积影响及机制.方法 将6月龄雄性APP/PS1模型小鼠随机分为4组:叶酸缺乏组、叶酸对照组、叶酸低、高剂量组(120、600 μg/kg);同月龄野生型小鼠作为阴性对照组.叶酸缺乏组小鼠饲以叶酸缺乏饲料,其他各组饲以普通饲料,干预60 d.采用实时荧光定量PCR法(RT-PCR)检测β位淀粉样前体裂解酶-1(BACE1)mRNA水平;免疫印迹法(WB)检测脑组织BACE1蛋白表达;免疫组化法检测脑组织Aβ表达;酶联免疫吸附法检测脑组织中Aβ1-40和Aβ1-42含量.结果 与叶酸对照组比较,叶酸高剂量组小鼠脑组织中Aβ蛋白表达降低,叶酸缺乏组Aβ蛋白表达升高(P＜0.05);与叶酸对照组(0.295±0.034)比较,叶酸高剂量组小鼠脑组织Aβ1-42含量(0.209±0.041)降低,叶酸缺乏组Aβ1-42含量(0.396±0.043)升高(P＜0.05);与叶酸对照组(15.99±1.434)比较,叶酸缺乏组小鼠脑组织BACE1 mRNA水平(21.97±4.396)升高,叶酸低、高剂量组小鼠脑组织中BACE1 mRNA表达水平[分别为(9.932±1.903)、(10.53±2.750)]均降低(均P＜ 0.05);与叶酸对照组(1.371±0.213)比较,叶酸缺乏组小鼠脑组织中BACE1蛋白表达水平(1.655±0.241)升高,叶酸低、高剂量组小鼠脑组织中BACE1蛋白表达水平[分别为(1.003±0.271)、(0.906±0.188)]均降低,差异均有统计学意义(均P＜ 0.05).结论 补充叶酸可减少AD小鼠脑组织中Aβ沉积及Aβ1-42含量,其机制可能与叶酸抑制小鼠脑组织中淀粉样蛋白生成途径的分泌酶BACE1表达有关.
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γ-分泌酶在铝致大鼠脑内Aβ蓄积中作用
目的 探讨γ-分泌酶在铝引起脑内β-淀粉样蛋白(Aβ)蓄积中的作用.方法 32只SD大鼠随机分为对照组,麦芽酚铝低、中、高剂量组(0.4、0.8、1.2 mg/kg);腹腔注射麦芽酚铝8周后,酶联免疫吸附试验和western-blot检测大鼠皮质和海马Aβ的量和γ-分泌酶组成亚单位早老素1(presenilin 1)和nicastrin蛋白.结果 在皮质内,高剂量染铝组Aβ总量为(120.58 ±23.65) pg/mL,在海马内中、高剂量染铝组Aβ总量为(115.57±7.00)、(127.09±11.04) pg/mL,均高于对照组(P＜0.05);在皮质和海马内,与对照组比较,各染毒组Aβ40无明显变化;在皮质内,高剂量染铝组Aβ42为(51.02 ±20.90) pg/mL,在海马内,低、中、高剂量染铝组Aβ42分别为(24.84±5.05)、(42.52±12.13)、(54.42±7.98) pg/mL,均高于对照组(P＜0.05);与对照组比较,中、高剂量染铝组大鼠脑皮质和海马内presenilin 1、nicastrin均升高(P＜0.05).结论 γ-分泌酶水平的升高是铝引起大鼠脑内Aβ蓄积的重要原因之-.
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β-淀粉样蛋白25-35和31-35片段对大鼠在体海马长持续长时程增强抑制作用的研究
目的 在体条件下观察β-淀粉样蛋白25-35和31-35片段对大鼠海马CA1区长持续长时程增强(L-LTP)的影响.方法 在体海马CA1区L-LTP记录技术;侧脑室给药技术.结果 25 nmol浓度的 Aβ31-35或Aβ25-35不影响基础突触传递(n＝5,P＞0.05);Aβ25-35对L-LTP的抑制具有一定的剂量依赖性效应:6.25 nmol,12.5 nmol和25 nmol Aβ25-35组和对照组相比,显著抑制了L-LTP的维持(在高频刺激后3 h:均P＜0.05);12.5 nmol Aβ31-35同Aβ25-35,抑制L-LTP的维持(高频刺激后3 h,P＜0.05).结论 Aβ25-35 和 Aβ31-35可显著抑制在体海马L-LTP的维持,从而损害突触可塑性.
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生姜提取物对阿尔茨海默病大鼠行为学功能的影响
目的：研究生姜提取物对β淀粉样蛋白（Aβ）所致阿尔茨海默病（AD）大鼠行为学及大脑神经细胞形态学的影响。方法 SD 健康大鼠60只，雌雄各半，随机分成生假手术组和手术组，分别为10只和50只，假手术组侧脑室注射生理盐水，手术组侧脑室注射 Aβ25～35。造模成功后，建立假手术组（SOP）8只，再将手术组47只随机分成生姜提取物低、中、高剂量组、石杉碱甲组及空白对照组。各组大鼠予灌胃相应药物（空白对照组予等量生理盐水）4 w 后，通过 Morris 水迷宫法评价大鼠学习记忆能力，并以病理组织切片评价大脑病理形态学改变。结果生姜提取物高剂量组、石杉碱甲组潜伏期明显缩短，神经元细胞数量、层数及胞内尼氏小体增多，在低、中剂量组干预效果不显著。结论高剂量生姜提取物对 AD 大鼠具有提高学习记忆能力的作用。
关键词： 阿尔茨海默病 β-淀粉样蛋白(Aβ) 行为学 形态学 -
FZS中药合剂对Aβ42寡聚体致PC12细胞损伤的保护作用研究
目的 探讨FZS中药合剂对Aβ42寡聚体致PC12细胞损伤的保护作用,及不同浓度Aβ42寡聚体的PC12细胞毒性作用比较研究.方法 分别用不同浓度Aβ42寡聚体作用于PC12细胞,加FZS中药合剂进行干预并与正常细胞进行对照研究.应用噻唑蓝(MTT)、LDH检测细胞活性,同时采用光镜、原位末端标记(TUNEL)方法检测细胞凋亡.原子力显微镜(AFM)鉴定并观察Aβ42寡聚体、Aβ42及细胞表面的形态变化.结果 MTT在Aβ42寡聚体组表达明显降低(P＜0.05);LDH在Aβ42寡聚体组表达明显增高(P＜0.05);光镜观察及TUNEL染色Aβ42寡聚体组均发现典型的凋亡PC12细胞,凋亡率较Aβ42组差异有显著意义(P＜0.05).FZS中药合剂组细胞凋亡率均明显降低,差异有显著意义(P＜0.05).结论 Aβ42寡聚体在神经细胞凋亡过程中发挥了重要的作用,其聚集变化可通过AFM进行观察.FZS中药合剂有确切的神经细胞保护作用,其作用与药物浓度相关.
关键词： β-淀粉样蛋白(Aβ) 寡聚体 凋亡 中药 原子力显微镜 -
Aβ42寡聚体对PC12细胞损伤作用的研究
目的 研究Aβ42寡聚体对PC12细胞的损伤作用,观察Aβ42寡聚体的聚集状态的变化.方法 用不同浓度Aβ42寡聚体作用于PC12细胞,并与Aβ42作用的PC12细胞、正常PC12细胞进行对照研究.应用MTT、LDH检测细胞活性,原位末端标记(TUNEL)方法检测细胞凋亡.应用原子力显微镜(AFM)观察Aβ42寡聚体的聚集状态、PC12细胞表面形貌变化.结果 MTT、LDH在Aβ42寡聚体组的改变较对照组、Aβ42组差异有显著意义(P＜0.05);TUNEL法测定Aβ42寡聚体组凋亡率高,较对照组、Aβ42组差异有显著意义(P＜0.05).Aβ42寡聚体对PC12细胞的损伤作用随浓度增高而增加.原子力显微镜可观察到Aβ42寡聚体、Aβ42的不同聚集状态.结论 Aβ42寡聚体的细胞损伤作用与浓度相关,且强于Aβ42.利用原子力显微镜可观察Aβ的聚集变化.
关键词： β-淀粉样蛋白(Aβ) 寡聚体 PC12细胞 凋亡 原子力显微镜(AFM) -
脑健冲剂对AD大鼠5-HT和 MAO影响的实验研究
目的:采用脑健冲剂治疗AD,观察脑健冲剂对AD大鼠海马区5-羟色胺和MAO的影响.方法:本实验采用D-半乳糖拟衰老,Aβ1-40损害联合所致AD模型,用脑健冲剂治疗.结果:脑健冲剂可提高海马5-羟色胺含量和降低MAO的水平.结论:脑健冲剂可治疗AD.
关键词： 阿尔茨海默病 脑健冲剂 5-羟色胺 单胺氧化酶 β-淀粉样蛋白(Aβ) -
天然抗氧化剂TA9901抑制β-淀粉样肽1～40聚集和纤维形成
为寻找治疗老年性痴呆(AD)的有效药物,运用透射电镜和硫磺素T荧光分析,通过体外孵育方式研究天然抗氧化剂TA9901对β-淀粉样蛋白(Aβ)1～40的聚集及纤维化的影响.电镜观察显示,Aβ1～40在PBS(pH 7.4)中室温孵育7d,其纤维呈晶状聚集,直径约8～10 nm.TA9901的存在使Aβ聚集减少,无明显Aβ纤维形成,主要表现为无定形结构.Aβ1～40与维生素E(VE)共同孵育,Aβ纤维聚集密度明显下降.TA9901和VE联用使Aβ纤维的形态主要表现为网状分布的Aβ原纤维,直径约3～5 rim.荧光分析揭示,TA9901,VE和二者联用对Aβ纤维形成的抑制率分别为95.0%,38.6%和67.6%.结果表明,TA9901,VE和二者联用均可以不同程度地抑制Aβ聚集及纤维形成,以TA9901的抑制作用强.提示TA9901有望发展成为以Aβ为靶治疗AD的候选药物.
关键词： β-淀粉样蛋白(Aβ) 抗氧化剂 老年性痴呆 透射电镜 硫磺素T荧光 -
锌离子与锌转运体6在APP/PS1转基因小鼠小脑内的分布
目的 研究游离锌离子和锌转运体6(zinc transporter 6,ZnT6)在APP/PS1转基因小鼠小脑内的分布.方法 应用浸入式金属自显影技术(AMG)和免疫组织化学染色标记游离锌离子、ZnT6和淀粉样前体蛋白(arnyloid precursor protein,APP).通过免疫荧光染色和共聚焦激光扫描显微镜观察ZnT6和β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)在老年斑内的定位.并分析锌离子、ZnT6与APP和Aβ分布的相关性.结果 游离锌离子、ZnT6和APP免疫阳性反应产物均定位于老年斑内,老年斑主要分布于小脑分子层,浦肯野细胞层和颗粒层分布较少;ZnT6和Aβ荧光双标的结果进一步证实两者共存于老年斑内.结论 APP/PS1转基因小鼠小脑Aβ老年斑内有大量的ZnT6蛋白表达.并聚集着大量的锌离子,提示锌离子可能参与小脑Aβ老年斑的形成,而ZnT6在老年斑内锌离子的聚集过程中起着重要的调节作用.
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脑益康对高胆固醇血症致Aβ增高大鼠的作用研究
目的 观察脑益康对高胆固醇血症致Aβ增高大鼠的作用并分析其作用机制.方法 高胆固醇饲料喂饲大鼠建立高胆固醇血症模型,脑益康灌胃,Y电迷宫测试,测定血脂、血流变及脑海马区Aβ表达.结果 与模型对照组相比,脑益康高剂量组大鼠电刺激尝试次数显著减少(P<0.01),血清总胆固醇显著降低(P<0.01),大鼠脑海马区Aβ表达积分光密度显著降低(P<0.01).结论 脑益康可改善大鼠学习、记忆,其机制与降低血脂水平、改善血液流变学、减少脑Aβ生成有关.
关键词： 脑益康 高胆固醇血症 血液流变学 β-淀粉样蛋白(Aβ) 阿尔茨海默病(AD) -
灯盏花素对老龄小鼠学习记忆及脑组织β-淀粉样蛋白水平的影响
目的:观察灯盏花素对老龄小鼠学习记忆及脑组织β-淀粉样蛋白水平的影响.方法:选用雄性自然衰老KM小鼠,随机分成5组:空白对照组、灯盏花素0.06g·kg-1组、灯盏花素0.12 g·kg-1组、灯盏花素0.24 g·kg-1组和阳性对照组,每组10只,灌胃给予等容积药物或纯化水,每日灌胃1次,连续30 d.用Morris水迷宫测试学习记忆能力；用生化法测定SOD、MDA和AchE;双抗体夹心法测定脑组织Aβ水平.结果:灯盏花素能明显缩短老龄小鼠游泳时间及游泳路程；显著提高脑组织SOD活性,降低MDA和Aβ含量,降低脑组织AchE活性.结论:灯盏花素能改善老龄小鼠的学习记忆功能,其机制可能与提高SOD活性、降低脑组织脂质过氧化物和Aβ的含量、抑制AchE活性有关.
关键词： 灯盏花素 学习记忆 抗氧化 AChE β-淀粉样蛋白(Aβ) -
补脑Ⅰ号对复合Alzheimer病模型大鼠学习记忆障碍的改善及其作用机制实验研究
目的:研究复方中药补脑Ⅰ号对复合Alzheimer病(AD)模型大鼠学习记忆能力的影响并探讨β-淀粉样蛋白(Aβ)毒性机制.方法:将Wistar雄性大鼠60只随机分为假手术组、模型组、脑复康组以及补脑Ⅰ号大、中、小剂量组各10只,采用D-半乳糖腹腔注射和海马立体定位注射Aβ1-42制备复合AD动物模型.药物干预4周后,采用Morris水迷宫测试大鼠逃避潜伏期和跨越原平台位置次数,以及用放免法测海马组织内Aβ的含量.结果:与假手术组比较,模型组逃避潜伏期均延长,跨越原平台位置次数均减少(P＜0.05)；与模型组比较,补脑Ⅰ号大、中、小剂量组逃避潜伏期均缩短(P＜ 0.05,P＜ 0.01),补脑Ⅰ号大、中剂量组跨越原平台位置次数均增加(P＜ 0.05,P＜ 0.01).与模型组比较,补脑Ⅰ号大、中、小剂量组海马组织内Aβ含量均降低,差异均有显著性意义(P＜0.05)；脑复康组Aβ含量亦降低(P＜0.05).与脑复康组比较,补脑Ⅰ号大、中剂量组海马组织内Aβ含量均降低(P＜0.05).结论:补脑Ⅰ号具有较好的改善机体Aβ蛋白代谢的功效,降低对机体的神经毒性作用,从而改善AD大鼠学习记忆能力.
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调心方对Aβ杏仁核注射类AD大鼠tau蛋白异常磷酸化的影响
目的:研究调心方对Aβ杏仁核注射类AD大鼠tau蛋白异常磷酸化的影响.方法:通过单侧杏仁核注射Aβ造成类AD大鼠模型;免疫组织化学法观察异常磷酸化tau蛋白AT8表达;原位杂交法观察tau蛋白异常磷酸化蛋白激酶GSK-3β、P38MAPKmRNA的表达.结果:调心方可显著降低异常磷酸化tau蛋白AT8及tau蛋白异常磷酸化蛋白激酶GSK-3β、P38MAPKmRNA的表达.结论:调心方具有改善Aβ诱导的类AD大鼠tau蛋白异常磷酸化的作用.
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原子力显微镜对不同聚集状态的β-淀粉样蛋白(1-42)的形态结构研究
目的:利用原子力显微镜(AFM)观察β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)在不同聚集状态下的形态结构.方法:制备寡聚体:用六氟异丙醇溶解Aβ1-42单体,通风干燥后重悬于二甲基亚砜,以PBS稀释后4℃孵育24 h;按常规方法制备Aβ单体和纤维体;用AFM的轻敲模式及相位成像技术观察不同聚集状态Aβ的形态结构,并与单体和纤维体进行比较.结果:在制备寡聚体样本中,可观察到不同形状的Aβ1-42聚集体,包括球状寡聚体、环状结构、初级原纤维、成熟原纤维体等.初级原纤维呈串珠样链状结构,成熟原纤维呈致密的绳状结构.寡聚体高度为2～6nm,均值为4.39 nm;原纤维的长度约1μm,高度为1.5 nm～4 nm.单体分布均匀,呈颗粒状,平均高度为0.65±0.16 nm.纤维长度为2μm以上,高度为2～4 nm.结论:①用AFM可观察到Aβ单体、纤维和不同聚集状态的中间体,AFM技术是研究蛋白质聚集过程中动态变化的较好工具;②Aβ经PBS处理,可孵育出多种Aβ1-42中间体:球状体、环状结构和原纤维;③本实验将为研究阿尔茨海默病(AD)的发病机制和开发治疗AD新疗法提供实验依据.
