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六味地黄丸对APP/PS1小鼠学习记忆能力及胆碱能系统的影响
目的:探讨六味地黄丸对APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力以及胆碱能系统的影响.方法:将40只APP/PS1双转基因小鼠随机分为APP/PS1模型组,六味地黄丸低、中、高剂量(0.59,1.18,2.36 g·kg-1·d-1)组,西药布洛芬(0.04g·kg-1·d-1)组,每组8只.相匹配的3月龄野生型(WT)小鼠8只,作为正常组.ig给药3个月,通过Morris水迷宫检测学习记忆能力.采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组小鼠大脑皮层乙酰胆碱(ACh)含量,乙酰胆碱转移酶(ChAT)和乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性.结果:与正常组相比,APP/PS1模型组小鼠在各时期找到平台所需的时间(潜伏期)均延长(P＜0.05),在平台所在象限停留时间,百分比,穿越平台次数均降低(P＜0.05),ACh含量及ChAT活性均降低(P＜0.05).六味地黄丸低、中、高剂量组和布洛芬组与APP/PS1模型组相比潜伏期缩短(P＜0.05),在平台所在象限停留时间,百分比,穿越平台次数均增高(P＜0.05),ACh含量及ChAT活性均增高(P＜0.05),AChE活性无统计学差异.结论:不同剂量的六味地黄丸可通过提高脑内ChAT活性,增加ACh含量影响中枢神经胆碱能系统,从而改善APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力.
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有氧运动对APP/PS1小鼠大脑皮质和海马组织Keap1/Nrf2信号通路的影响
目的:探讨有氧运动对APP/PS1小鼠大脑皮质和海马组织Keap1/Nrf2信号通路的影响,为揭示有氧运动防治阿尔兹海默症提供理论基础.方法:雄性APP/PS1小鼠随机分为安静对照组(CG)和运动组(EG).EG组小鼠进行为期8周的跑台训练,速度从12 m/min增至15 m/min,训练时间从30 min增至60 min.后一次训练结束后48小时,分离所有小鼠大脑皮质和海马组织.通过荧光定量PCR和West-em blot检测各组小鼠大脑皮质和海马组织中结构蛋白Keap1、Nrf2和Maf及下游抗氧化蛋白HO-1、NQO1和GCLC的mRNA及蛋白含量;通过Western blot检测APP、Aβ42和BACE1的蛋白含量;通过试剂盒检测MDA和GSH含量及GSH-Px和T-SOD活力.结果:8周跑台训练后,EG组小鼠大脑皮质和海马组织Keap1 mRNA和蛋白含量与CG组相比无显著性差异,而Nrf2和Maf mRNA和蛋白含量均显著高于CG组;EG组HO-1、NQO1和GCLC mRNA和蛋白含量均显著高于CG组;EG组MDA含量显著低于CG组,而GSH含量、GSH-Px和T-SOD活力显著高于CG组;APP蛋白含量与CG组相比未发生显著改变,但Aβ42和BACE1的蛋白含量显著低于CG组.结论:有氧运动增强APP/PS1小鼠大脑皮质和海马组织中Keap1/Nrf2信号通路活性;提高该通路下游抗氧化蛋白HO-1、NQO1和GCLC的含量;降低大脑皮质和海马组织氧化应激水平;从而有效抑制Aβ蛋白的形成.
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APP／PS1双转基因小鼠认知功能和实时步态行为的相关性
目的：初步探讨APP/PS1双转基因小鼠认知功能和实时步态行为学的改变的相关性。方法3月龄APP/PS1转基因小鼠16只随机分成模型组和石杉碱甲片组，正常对照组选用同龄C57/BL6J小鼠14只。连续治疗150 d，Morris水迷宫（MWM）检测学习记忆能力，大小鼠步态分析仪（GAS-2）检测实时步态行为，并比较两种行为学的相关性。结果与正常对照相比，模型组小鼠有学习记忆能力的显著降低，逃避潜伏期均显著延长（P ＜0.05），在目标象限停留时间、游泳路程显著降低（P ＜0.05），第一次穿越平台的时间显著延长（P ＜0.05），穿台次数显著减少（P ＜0.05）；在步态行为实验中，模型组小鼠平均步行速度显著降低（P ＜0.05），平均步行周期、绝对值平均体转角和侧向移动均显著升高（P ＜0.05），在一个步行周期中左后足（left foot，LF）、右后足（right foot， RF）支撑时相显著延长（P ＜0.05），摆动时相显著缩短（P ＜0.05），左前足（left hand，LH）、右前足（right hand， RH）、右后足推进指数均显著增加（ P ＜0.05），制动指数显著降低（ P ＜0.05）。石杉碱甲片能显著改善认知功能，并能在一定程度上纠正步态行为的变化。比较两种行为学的相关性，得出学习记忆能力与双前足的制动指数相关性较高（相关系数分别为-0.433、-0.379，P值分别为0.039、0.079），其他方面的相关性不大。结论 APP/PS1转基因小鼠在8月龄时有显著的学习记忆能力障碍和步态行为的改变，并且两种行为学存在一定的相关性。
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二苯乙烯苷通过影响APP代谢途径减少斑块沉积进而影响学习记忆功能
目的:评价二苯乙烯苷(2,3,4',5-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,TSG)在长期给药过程中对APP/PS1小鼠学习记忆功能的影响及其对阿尔茨海默病病理改变的影响,同时比较其与多奈哌齐药效学及药理作用的不同.方法:给APP/PS1小鼠灌胃给药(TSG,50 mg·kg-1,100 mg·kg-1;donepezil,1 mg·kg-1)在给药后用Morris水迷宫实验,新物体识别实验,自主活动,评价小鼠的学习记忆功能及小鼠的活动性.硫磺素染色和Aβ40/42免疫荧光共定位观察全脑斑块沉积,免疫组化染色观察皮层和海马部位斑块沉积情况,ELISA方法检测脑内可溶及不可溶Aβ42的含量,用Western Blot方法检测皮层及海马部位Aβ生成及代谢途径的关键酶的含量,以此来判断TSG药物在改善老年痴呆的作用及其作用的关键点.结果:Morris水迷宫实验结果显示APP/PS1模型组与Wild Type对照组相比逃避潜伏期明显延长,给药后逃避潜伏期明显缩短,TSG与DON相比,逃避潜伏期更短.新物体识别实验显示APP/PS1模型组与Wild Type对照组相比分辨指数明显缩短,给药后分辨指数提高,TSG与DON相比,分辨指数明显提高.硫磺素染色与Aβ40/42免疫荧光共定位,斑块能够完全重合,说明斑块的主要成分是Aβ40/42,实验结果统计分析APP/PS1模型组与Wild Type对照组相比脑内斑块显著,给药后全脑斑块减少,以小剂量为显著,Don也能减少斑块沉积,减少程度较TSG稍差.免疫组化染色皮层斑块沉积,APP/PS1模型组与Wild Type对照组相比皮层斑块显著,给药后皮层斑块减少;免疫组化染色海马斑块沉积,APP/PS1模型组与Wild Type对照组相比海马斑块显著,给药后海马斑块减少.另外Western Blot检测了Aβ代谢通路,前体蛋白和关键代谢酶,给药后APP,BACE-1,PS1表达量减低.用ELISA方法检测脑内可溶及不可溶性Aβ42的含量,结果显示APP/PS1模型组与Wild Type对照组相比可溶性Aβ42含量明显增高,给药后有一定程度减低;不可溶性Aβ42,APP/PS1模型组与Wild Type对照组相比明显增加.给药后不可溶性Aβ42明显减低,DON对不可溶性Aβ42的脑内含量减低,效果与TSG相比不明显.结论:TSG在长期给药后能够改善小鼠的空间学习记忆功能,对斑块所导致的记忆功能减退,有显著的提高作用,而与TSG相比DON的改善学习记忆能力更为显著.TSG对小鼠的活动能力无不良影响.TSG能够减少斑块沉积,其中不可溶性Aβ42减低为明显.进一步研究Western Blot结果显示TSG能够减少APP的表达,在板块生成途径能够影响关键代谢酶BACE-1和PS1.TSG长期药效优于DON.
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叶酸对AD模型小鼠脑内Aβ沉积及BACE1表达影响
目的 探讨叶酸对阿尔茨海默病(AD)小鼠脑内β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积影响及机制.方法 将6月龄雄性APP/PS1模型小鼠随机分为4组:叶酸缺乏组、叶酸对照组、叶酸低、高剂量组(120、600 μg/kg);同月龄野生型小鼠作为阴性对照组.叶酸缺乏组小鼠饲以叶酸缺乏饲料,其他各组饲以普通饲料,干预60 d.采用实时荧光定量PCR法(RT-PCR)检测β位淀粉样前体裂解酶-1(BACE1)mRNA水平;免疫印迹法(WB)检测脑组织BACE1蛋白表达;免疫组化法检测脑组织Aβ表达;酶联免疫吸附法检测脑组织中Aβ1-40和Aβ1-42含量.结果 与叶酸对照组比较,叶酸高剂量组小鼠脑组织中Aβ蛋白表达降低,叶酸缺乏组Aβ蛋白表达升高(P＜0.05);与叶酸对照组(0.295±0.034)比较,叶酸高剂量组小鼠脑组织Aβ1-42含量(0.209±0.041)降低,叶酸缺乏组Aβ1-42含量(0.396±0.043)升高(P＜0.05);与叶酸对照组(15.99±1.434)比较,叶酸缺乏组小鼠脑组织BACE1 mRNA水平(21.97±4.396)升高,叶酸低、高剂量组小鼠脑组织中BACE1 mRNA表达水平[分别为(9.932±1.903)、(10.53±2.750)]均降低(均P＜ 0.05);与叶酸对照组(1.371±0.213)比较,叶酸缺乏组小鼠脑组织中BACE1蛋白表达水平(1.655±0.241)升高,叶酸低、高剂量组小鼠脑组织中BACE1蛋白表达水平[分别为(1.003±0.271)、(0.906±0.188)]均降低,差异均有统计学意义(均P＜ 0.05).结论 补充叶酸可减少AD小鼠脑组织中Aβ沉积及Aβ1-42含量,其机制可能与叶酸抑制小鼠脑组织中淀粉样蛋白生成途径的分泌酶BACE1表达有关.
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DHA改善抑郁状态下APP/PS1转基因小鼠Aβ负荷和认知功能障碍
目的 探究DHA对抑郁状态下APP/PS1转基因小鼠Aβ负荷和认知功能的影响.方法 对3月龄APP/PS1小鼠进行慢性非可预测轻度应激(CUMS)条件性饲养并同时进行DHA治疗.30天后,通过条件恐惧试验和新位置识别试验检测其认知功能,通过Western blotting和ELISA检测其脑内淀粉样肽(Aβ)负荷.结果 经CUMS条件性饲养,APP/PS1小鼠脑内Aβ负荷和沉积倾向显著增加,认知功能出现明显缺损.DHA治疗可抑制CUM条件性饲养后APP/PS1小鼠脑内Aβ含量和沉积趋势的上调,并使认知功能恢复至生理水平.结论 DHA可改善APP/PS1转基因小鼠抑郁状态下加重的Aβ负荷和认知功能障碍.
关键词： 二十二碳六烯酸(DHA) 抑郁状态 阿尔茨海默病 Aβ APP/PS1小鼠 -
跑步对早期APP/PS1转基因阿尔茨海默病小鼠海马CA1区和齿状回神经元数量的影响
目的:应用体视学方法定量研究跑步对早期APP/PS1转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠海马CA1和齿状回区域内神经元的影响.方法:将6月龄雄性APP/PS1转基因AD小鼠,随机分为跑步组和未跑步对照组.用Morris水迷宫检测2组小鼠的空间学习记忆能力,然后用体视学方法定量研究海马CA1和齿状回区域的体积和神经元的数量.结果:与对照组相比,跑步组AD小鼠Morris水迷宫的逃避潜伏期明显缩短,平台所在象限时间百分比和穿越平台次数均显著增加.体视学研究显示,跑步组AD小鼠海马CA1和齿状回的体积分别比对照组显著增大42.8％和27.3％,并且跑步组AD小鼠海马CA1和齿状回区域内的神经元数量分别比对照组显著增加61.8％和62.2％.结论:跑步能延缓早期AD小鼠空间学习记忆能力的下降;并且可降低AD小鼠海马CA1和齿状回区域内神经元的死亡.
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芍药苷对APP/PS1小鼠的神经细胞保护作用及机制研究
目的:探讨芍药苷(paeoniflorin,PF)通过抑制细胞凋亡通路而产生神经细胞保护作用的机制.方法:分别选用15只5月龄雄性APP/PS1非显性小鼠作为正常对照组,15只5月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠为模型组和15只5月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠为给药组(5 mg/kg的PF腹腔注射).采用水迷宫实验检测各组小鼠的学习和记忆能力.采用TUNEL荧光染色法检测脑内神经细胞凋亡情况.采用Western Blot检测脑内皮层及海马区PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt、caspase-3、caspase-9、Bcl-2和Bax的蛋白表达水平,并用免疫组化分析caspase-3和caspase-9的蛋白表达水平及分布情况.结果:(1)与正常对照组相比,APP/PS1模型组小鼠的学习和记忆能力明显下降;与APP/PS1模型组相比,PF明显改善小鼠的学习和记忆能力. (2)与正常对照组相比,APP/PS1模型组小鼠脑内神经细胞凋亡明显增多,分布区域较广,而PF给药组小鼠凋亡细胞明显减少. (3)与APP/PS1模型组相比,PF给药组能显著下调促凋亡因子caspase-3、caspase-9和Bax的表达水平(P<0. 05),同时上调抑凋亡因子p-PI3K、p-Akt和Bcl-2的表达水平(P<0.05).结论:PF可能通过激活PI3K/Akt通路而上调Bcl-2,下调caspase-9、caspase-3和Bax的蛋白表达水平,从而抑制神经细胞凋亡和保护神经细胞,以治疗神经退行性疾病.
关键词： 芍药苷 APP/PS1小鼠 细胞凋亡 神经细胞 PI3K/Akt信号通路 -
橄榄油改善淀粉样前体蛋白/早老素双转基因B6C3-Tg鼠认知功能的作用及机制
目的:探讨橄榄油改善淀粉样前体蛋白/早老素双转基因B6C3-Tg鼠(APP/PS1鼠)认知功能的作用及机制.方法:将16只5月龄B6C3-Tg小鼠和4只同月龄野生型小鼠分为5组:正常对照组,阳性对照组,橄榄油组,脱脂橄榄油组和β谷固醇(BS)组.正常对照组和阳性对照组小鼠用生理盐水灌胃;橄榄油组、脱脂橄榄油组和BS组小鼠则分别用橄榄油、脱脂橄榄油和BS溶液灌胃.3周后用水迷宫检测小鼠认知功能;高效液相色谱法(HPLC)检测脑组织细胞膜内BS含量;ELISA法检测脑内淀粉样前体蛋白(APP)代谢产物(sAPPα和Aβ)水平;免疫组化法检测脑内Aβ沉淀情况.结果:定位航行实验显示:与正常对照小鼠相比,阳性对照组和脱脂橄榄油组小鼠的逃避潜伏期显著延长(P＜0.01);而橄榄油组和BS组小鼠的逃避潜伏期与正常对照小鼠无明显差异.空间探索实验显示:阳性对照组和脱脂橄榄油组小鼠在目标象限的游泳距离占总的游泳距离的比例低于正常对照小鼠(P＜0.01);而橄榄油组和BS组小鼠在目标象限的游泳距离占总的游泳距离的比例与正常对照小鼠无明显差异.HPLC分析显示,仅在橄榄油组和BS组小鼠的脑组织细胞膜内可检测到BS.ELISA和免疫组化结果显示:与正常对照小鼠相比,阳性对照和脱脂橄榄油组小鼠脑内Aβ生成增加(P＜0.01),而sAPPα含量则无明显改变.橄榄油组和BS组小鼠脑内sAPPα含量与正常对照组小鼠相比有所增加(P＜0.01),但Aβ的表达较阳性对照小鼠明显减少了(P＜0.01).结论:橄榄油可改善APP/PS1鼠的认知功能,其机制可能与BS在脑内的聚集以及BS对脑组织APP代谢的调节作用有关.
