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黑水缬草石油醚部位改善小鼠睡眠作用及相关机制研究
目的:研究黑水缬草石油醚部位对小鼠睡眠的改善作用,考察其对小鼠脑内神经递质γ-氨基丁酸(GABA)及5-羟色胺(5-HT)含量的影响,初步探讨其改善睡眠的作用机制.方法:采用戊巴比妥钠协同作用实验,考察黑水缬草石油醚部位不同剂量对小鼠睡眠潜伏期和睡眠时间的影响以及联合氟马西尼注射液、5-羟色胺酸(5-HTP)和对氯苯丙氨酸(PCPA)对小鼠睡眠潜伏期和睡眠时间的影响;采用ELISA法测定小鼠脑组织GABA,5-HT含量,以确定黑水缬草石油醚部位改善睡眠的作用机制.结果:黑水缬草石油醚部位3个剂量(30,15,7.5 g·kg-1)均具有改善小鼠睡眠的作用,主要表现为缩短睡眠潜伏期和延长睡眠时间.联合氟马西尼注射液,5-HTP和PCPA后,对小鼠的睡眠时间均产生了明显的影响:与空白组比较,联合氟马西尼注射液可阻断黑水缬草石油醚部位和地西泮与戊巴比妥钠的协同作用.联合5-HTP可增强黑水缬草石油醚部位与戊巴比妥钠的协同作用:联合PCPA可阻断黑水缬草石油醚部位与戊巴比妥钠的协同作用.黑水缬草石油醚部位不同剂量均能使小鼠脑组织的神经递质GABA,5-HT含量显著升高.结论:黑水缬草石油醚部位高、中、低3个剂量均能明显延长小鼠睡眠时间.黑水缬草石油醚部位改善睡眠作用的机制与脑内神经递质GABA,5-HT的含量有关.
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黑水缬草抗老年痴呆活性成分研究
该实验基于前期黑水缬草抗老年痴呆(AD)的作用,对其有效部位进行化学成分研究,采用75％乙醇加热回流的方法对黑水缬草药材进行提取,提取物经萃取和大孔吸附树脂柱色谱分离得到其抗AD的有效部位,采用硅胶、ODS柱色谱以及制备型HPLC等色谱法分离该有效部位并得到9个化合物(1～9),结合质谱及核磁等波谱技术,分别鉴定为6-hydroxy-7-(hydroxymethyl)-4-methy-lenehexahydrocyclopenta[c]pyran-1 (3H)-one(1),suspensolide F(2),马钱子苷(3),α-莫诺苷(4),β-莫诺苷(5),patrinovalerosidate(6),野花椒苷A(7),(-)-angelicoidenol-2-O-β-D-glucopyranoside (8)和citroside A(9),其中化合物6～9为首次从缬草属植物中分离得到,进一步对化合物1～9进行体外抗AD活性研究发现化合物2和6对PC12神经元细胞损伤具有显著的保护作用.
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黑水缬草提取物对阿尔茨海默病模型小鼠治疗作用的代谢组学研究
目的 运用超高效液相色谱-质谱联用技术(UPLC-MS)探讨黑水缬草提取物对阿尔茨海默病(AD)的治疗机制.方法 将雄性昆明小鼠分为3组,分别为对照组(2％吐温80)、AD模型组(2％吐温80)和治疗组(95％黑水缬草粗提物2 g/kg),灌胃给药30 d.运用Morris水迷宫实验和UPLC-MS技术对小鼠进行研究.结果 Morris水迷宫定位航行实验显示,与对照组比较,AD模型组小鼠逃避潜伏期明显延长(P＜0.05),治疗组小鼠逃避潜伏期明显缩短(P＜ 0.05).空间探索实验显示,与对照组比较,AD模型组小鼠单位时间目标象限停留时间短,穿台次数减少(P＜0.05),治疗组小鼠单位时间内目标象限停留时间长,穿台次数增加(P＜0.05).通过UPLC-MS/MS技术,确定了10种AD的血浆生物标志物,分别为组氨酸、溶血磷脂酰胆碱C16∶0、溶血磷脂酰胆碱C18∶2、溶血磷脂酰胆碱C18∶1、溶血磷脂酰胆碱C20∶4、溶血磷脂酰胆碱C22∶6、十六碳鞘磷脂、二氢神经鞘氨醇、4-羟双氢(神经)鞘氨醇C18、4-羟双氢(神经)鞘氨醇C20,与对照组比较,AD模型组小鼠血浆中10种标志物的含量均明显降低,差异有统计学意义(P＜ 0.05或P＜ 0.01).治疗组小鼠血浆中10种标志物的含量均明显上升(P＜ 0.05或P＜0.01).结论 黑水缬草提取物可提高AD小鼠的认知功能,其作用机制与氨基酸、磷脂和鞘脂代谢等相关代谢通路有关.
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RAPD法构建黑水缬草基因组DNA指纹图谱
目的 采用RAPD 技术对黑水缬草、缬草、毛节缬草及黄花败酱等4 种药用植物进行分子水平的鉴定,并获得清晰可靠的DNA 指纹图谱.方法 采用植物基因组DNA 快速提取试剂盒提取4 种供试材料基因组DNA,以随机引物进行随机扩增. 结果4 种供试材料DNA 指纹图谱具有共同的位点,但又有各自的特征性位点.结论 RAPD 法能有效的将4种药用植物区分开.
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黑水缬草神经保护活性成分研究
目的 对黑水缬草Valeriana amurensis抗阿尔茨海默症(AD)有效部位中具有神经保护活性的成分进行筛选,以阐明黑水缬草发挥神经保护作用的药效物质基础.方法 采用各种色谱方法对黑水缬草抗AD有效部位进行化学成分分离,并根据理化分析及波谱数据进行结构鉴定;利用MTT法筛选具有PC12神经保护作用的单体化合物.结果 从黑水缬草抗AD有效部位中共分离鉴定了11个化合物,包括5个双环氧木脂素类化合物:(+)-梣皮树脂醇-4,4'-二-O-β-D-双吡喃葡萄糖苷(1)、(+)-紫丁香-4,4'-二-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、青刺尖木脂醇苷(3)、(+)-8,8 '-二羟基-松脂素-4,4'-二-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、青刺尖木脂醇(5)和6个环烯醚萜类化合物:jatamaninA (6)、7-羟基-8-(羟甲基)-4-亚甲基六氢环戊烯[并]吡喃-1(3H)-酮(7)、4-羟甲基-环戊烯[并]吡喃-7-甲醛(8)、patriscabroside Ⅲ (9)、jatamanin E(10)及败酱苷(11).对其进行体外活性研究发现25、12.5和5μmol/L的双环氧木脂素类化合物均能明显减轻Aβ1-42所致PC12细胞损伤.结论 环烯醚萜类化合物6～10为该植物中首次分离得到,双环氧木脂素类化合物为黑水缬草抗AD有效部位发挥神经保护作用的部分药效物质基础.
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黑水缬草挥发油的提取方法及其化学成分研究
黑水缬草Valeriana amurensis Smir. ex Kom.为败酱科缬草属植物,产于我国东北部[1],在黑龙江省大兴安岭地区分布广泛,资源丰富.
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黑水缬草醇提物各组分镇静催眠作用的研究
1 材料动物:昆明种小鼠,雄性,体重18～22g,黑龙江中医药大学实验动物中心提供.药材与试剂:将黑水缬草95%乙醇提取物、20%乙醇洗脱物、50%乙醇洗脱物分别蒸干,加适量2%吐温-80水溶液分散,制成供试药液;戊巴比妥钠:沃凯SCRC国药集团化学试剂有限公司.仪器:ZXC-1型小动物自主活动测定仪:黑龙江牡丹江中华电器厂.
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黑水缬草治疗老年痴呆有效部位化学成分研究
目的:研究黑水缬草(Valeriana amurensis Smir.ex Kom.)治疗老年痴呆有效部位化学成分.方法:采用大孔树脂吸附柱色谱、正相硅胶柱色谱、ODS反相柱色谱、HPLC等分离方法及各种波谱学鉴定方法.结果:从大孔树脂吸附柱色谱的50％乙醇洗脱组分中分离并鉴定了13个化合物,分别为:(+)松脂素-4,4’-O-β-D-双葡萄吡喃糖苷(1),(+)8-羟基-松脂素-4’-O-β-D-葡萄吡喃糖苷(2),(+)8-羟基-松脂素-4-O-β-D-葡萄吡喃糖苷(3),(+)松脂素-8-O-β-D-葡萄吡喃糖苷(4),(+)松脂素-4-O-β-D-葡萄吡喃糖苷(5),(+)8-羟基-松脂素(6),(+)8,9 ＇-二羟基-松脂素-4’-O-β-D-葡萄吡喃糖苷(7),(+)8-羟基-松脂素-4,4’-O-β-D-双葡萄吡喃糖苷(8),橄榄树脂素-4’-O-β-D-葡萄糖苷(9),落叶松脂醇-4,4’-O-β-D-双葡萄吡喃糖苷(10),橄榄树脂素-4-O-β-D-葡萄吡喃糖苷(11),8-羟基-落叶松脂醇-4’-O-β-D-葡萄吡喃糖苷(12),落叶松脂醇-4-O-β-D-葡萄吡喃糖苷(13).结论:13个化合物全部为该植物中首次发现,其中包括8个双环氧木脂素(1～8)和5个单环氧木脂素(9～13).
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黑水缬草野生变家植及其栽培技术
本文描述了黑水缬草的植物形态及生活习性;重点介绍了黑水缬草野生转家植的研究与实践,文章中叙述的套袋收集种子的方法很有实用价值;采用变温结合赤霉素处理种子,打破黑水缬草的种子休眠技术,提高了出芽率,取得了较为理想的效果;文章中还阐述了二次移栽和病虫害防治及采收加工的关键技术.
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超声法萃取黑水缬草精油的试验研究
目的:研究超声法萃取黑水缬草精油的实验条件.方法:采用正交实验设计法.结果:影响萃取的因素依次为萃取温度、萃取浓度、萃取时间.结论:优选了超声法萃取黑水缬草精油的实验条件.
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栽培黑水缬草中挥发油成分分析
黑水缬草(Valeriana amurensis Smir.ex Kom)为败酱科(Valerianaceae)缬草属(Valeriana Linn.)多年生草本植物,现今,各国通用欧缬草作为广义种,缬草类药物在国外广泛应用,并且被收载于欧共体大多数国家药典中.黑水缬草挥发油的药理作用与欧缬草类同,是亚洲东部地区唯一可与欧缬草匹敌的缬草属植物[1].目前国内外对其研究主要集中在化学成分和药理作用方面,对于综合评价和种质资源的保护及开发利用研究尚属空白.
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黑水缬草的生药鉴定
目的:对黑水缬草Valeriana amurensis Smir.ex Kom.进行鉴定.方法:性状鉴定与显微鉴定.结果:描述了黑水缬草的性状和显微鉴别特征.结论:研究结果可作为黑水缬草的鏊别依据.
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黑水缬草组织培养与快速繁殖研究
目的 对黑水缬草愈伤组织诱导培养基和生长的培养条件进行研究,构建黑水缬草快速繁殖体系.方法 通过筛选外植体,添加不同种类及浓度的生长调节剂对黑水缬草进行愈伤组织诱导、芽增殖培养及生根培养.结果 诱导愈伤组织适宜培养基:MS+0.5 mg/LNAA+5.0 mg/L6-BA.芽增殖培养以MS+0.2 mg/LNAA+10.0 mg/L6-BA为宜.生根培养以MS+0.1mg/LNAA为佳.结论 利用组织培养技术能够实现黑水缬草快速繁殖.
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黑水缬草对老年痴呆模型大鼠脑内iNOS、 COX-2和IκB-α表达的影响
目的:探讨黑水缬草提取物对老年痴呆大鼠大脑皮质神经元和海马神经元炎性反应的影响.方法:利用多因素造成大鼠老年痴呆病理复合模型,采用免疫组化法观察老年痴呆大鼠大脑皮质神经元和海马神经元一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)及核因子NF-κB(IκB-α)表达的变化.结果:黑水缬草各剂量及阳性对照药均显示出一定的疗效,效果显著优于模型组和对照组(P<0.05),其中50%乙醇树脂洗脱高剂量组效果尤为显著(P<0.05或P<0.01),且作用呈量效关系.结论:黑水缬草50%乙醇树脂洗脱高剂量能有效抑制痴呆大鼠脑内神经元炎性反应,其作用机制可能足通过减轻iNOS过表达,抑制COX-2活性及减少对核因子NF-κB的激活来实现的.
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黑水缬草提取物对老年痴呆大鼠脑内神经元中β-APP、Aβ_(1-40)和Caspase-3表达的影响
目的:探讨黑水缬草提取物对老年痴呆模型大鼠大脑皮质神经元和海马神经元中β-APP、Aβ_(1-40)和Caspase-3表达的影响.方法:利用多因素造成大鼠老年痴呆病理复合模型,采用免疫组化法观察老年痴呆大鼠大脑皮质神经元和海马神经元中β-APP、Aβ_(1-40)和Caspase-3蛋白表达变化.结果:黑水缬草各给药组和中药对照组显示出一定的疗效(P＜0.05),其中以50%乙醇树脂洗脱高剂量效果尤为显著(P＜0.05或P＜0.01).结论:黑水缬草50%乙醇树脂洗脱物能有效抑制神经元细胞内β-APP和Aβ_(1-40)阳性细胞过表达,阻止其聚集脑内形成老年斑和神经纤维缠结,并能有效抑制Caspase-3的活化而减少神经元细胞的凋亡.
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黑水缬草挥发油对中枢神经系统药理作用的研究
目的:观察黑水缬草挥发油对中枢神经系统的作用.方法:考察黑水缬草挥发油对小鼠自主活动的影响、对阈下和催眠剂量戊巴比妥钠的睡眠协同作用、对大鼠睡眠时相的影响、对醋酸所致小鼠扭体反应的影响以及对硫代氨基脲诱发小鼠惊厥的影响.结果:黑水缬草挥发油对小鼠的自主活动具有显著的抑制作用,与戊巴比妥钠有较好的催眠协同作用,可提高小鼠的入睡率,延长小鼠睡眠时间,明显延长大鼠睡眠周期中的慢波睡眠Ⅱ期(SWS2)和快动眼睡眠期(REMS)两个时相,同时能明显减少小鼠扭体反应次数,对抗硫代氨基脲诱发的小鼠惊厥.结论:黑水缬草挥发油具有显著的镇静、镇痛和抗惊厥等中枢神经系统抑制作用,预示了良好的新药开发前景.
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黑水缬草种子萌发特性研究
目的:探讨不同处理方法对黑水缬草种子发芽率的影响.方法:采用不同化学试剂和温水浸种等方法对黑水缬草种子进行常规发芽试验和正交试验,计算不同萌发条件下的种子发芽率.结果:不同化学试剂处理的黑水缬草种子发芽率有较大差异,适当的浸泡时间能提高黑水缬草的种子发芽率,不同的处理时间、不同的处理温度、不同的萌发温度等因素对黑水缬草种子发芽率均会产生影响.结论:为提高黑水缬草种子的发芽率,播种前应对黑水缬草种子进行适当的处理；种子繁育要在适宜的时间和温度等条件下进行.
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黑水缬草抗老年痴呆活性部位的研究
目的 筛选黑水缬草抗老年痴呆的主要活性部位.方法 利用腹腔注射半乳糖促老化与反复结扎双侧颈总动脉致脑缺血及大鼠侧脑室一次性注射Aβ1-40造成复合型老年痴呆大鼠模型.将Wistar大鼠随机分成8组:空白组、假损伤组、模型组、95%乙醇粗提物低剂量组、95%乙醇粗提物高剂量组、50%乙醇洗脱物低剂量组、50%乙醇洗脱物高剂量组、中药对照健脑胶囊组,各给药组于术后3 d开始灌胃给药7 d.采用Mor-ris水迷宫系统测试各组大鼠的学习记忆能力,并测定大鼠血浆中SOD、MDA和羟自由基的含量.结果 黑水缬草95%乙醇粗提物低、高剂量组,50%乙醇洗脱物低、高剂量组,中药对照健脑胶囊组均可增强模型大鼠的学习记忆能力,SOD活力显著增加,MDA含量降低,抑制羟自由基能力增强,尤以50%乙醇洗脱物高剂量组效果佳.结论 50%乙醇洗脱物组分为黑水缬草抗老年痴呆的主要活性部位.
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RP-HPLC同时测定黑水缬草药材中缬草烯酸和缬草素含量
目的:建立同时测定黑水缬草药材中缬草烯酸和缬草素含量的HPLC检测方法.方法:采用Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇(A)-0.5%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0～5 min,60%A→70%A;5～22 min,70%A→82%A;22～30 min,82%A→82%A;30～35 min,82%A→90%A),流速1 mL·min-1,采用切换波长法(268 nm检测缬草烯酸,255 nm检测缬草素),柱温35℃.结果:缬草烯酸、缬草素质量分别在0.0747～1.1952μg(r=0.9999)和0.0373～0.5971μg(r=0.9998)范围内线性关系良好;平均加样回收率(n=6)分别为99.8%(RSD=1.3%),100.2(RSD=1.4%).结论:本法操作简便,结果准确,重复性好,为评价黑水缬草药材的质量提供了可靠的分析方法.
