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视神经切断联合高眼压增高大鼠视网膜内P75NTR和Sortilin的蛋白表达水平
目的 观察视神经切断联合高眼压状态下,视网膜内p75NTR和Sortilin蛋白表达水平的变化.方法 60只健康雄性Wistar大鼠,随机分为对照(control,n=6)、假手术(sham,n=6)、单纯视神经切断(NT,n=24)和视神经切断联合高眼压(NP,n=24)4组.NT和NP模型组,进一步分为术后第1、3、7和14天组(均n=6).用Western blot法,检测各组大鼠视网膜内P75NTR和Sortilin蛋白表达.结果 NP组大鼠视网膜内,P75NTR及Sortilin蛋白表达量在术后第3、7和14天明显高于对照组、假手术组及单纯视神经切断组(P<0.05).结论 高眼压可使大鼠视网膜内RGC本身合成的Sortilin和P75NTR蛋白量增高,60/50 ku的P75NTR及90 ku成熟Sortilin蛋白可能参与了高眼压所致大鼠视网膜神经节细胞的损伤.
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直肠癌组织中proNGF凋亡前信号的研究
目的:探讨proNGF凋亡前信号在直肠癌组织中的表达及其临床意义.方法:采用RT-PCR及Western blot技术检测直肠癌组织中proNGF凋亡前信号各因子proNGF、Sortilin、p75的表达,以1 2例瘤周正常组织为对照.结果:proNGF、Sortilin、p75 mRNA在直肠癌组织中的表达分别为031±0.03、0.35±0.07、0.41±0.08,在正常组织中高表达,分别为0.79±0.06、0.73±0.10、0.84±0.11,2组之间比较差异有统计学意义(P＜0.05)；proNGF、Sortilin、p75蛋白在直肠癌组织中的表达分别为052±0.05、0.31±0.04、0.41±0.09,在正常组织中分别为0.83±0.16、0.53±0.08、0.72±0.12,正常组织亦明显高于直肠癌组织(P＜0.05).结论:proNGF凋亡前信号所导致的细胞凋亡信号参与了直肠癌的发生、发展过程,其较低的表达可能是导致直肠癌的一种内在机制.
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P75NTR的研究进展
P75NTR作为神经营养因子的受体之一,在神经系统的发育过程中发挥着至关重要的生物学作用.随着s-p75NTR,proNGF,proBDNF和sortilin等的发现,P75NTR在凋亡信号转导通路中的重要作用成为研究的热点.
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分拣受体Sortilin促进巨噬细胞内脂质蓄积
目的 探讨分拣受体Sortilin对THP-1巨噬细胞内脂质代谢的影响.方法 用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)孵育THP-1巨噬细胞.Western blot检测荷脂后THP-1巨噬细胞中Sortilin表达变化;THP-1巨噬细胞Sortilin高表达和沉默后,液体闪烁计数仪检测胞内胆固醇流出,高效液相色谱法检测细胞内脂质含量,油红O染色观察胞内脂滴情况.结果 THP-1巨噬细胞Sortilin表达呈ox-LDL剂量和时间依赖性增加;以50 mg/L ox-LDL处理24 h后THP-1巨噬细胞Sortilin表达水平达到高峰.与对照组相比,Sortilin过表达后巨噬细胞胆固醇流出减少,胞内脂质含量增加且脂滴明显增多,而Sortilin沉默后则刚好出现相反的结果.结论 Sortilin抑制巨噬细胞内胆固醇流出,促进胞内脂质蓄积.
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核因子κB通过Sortilin促进荷脂THP-1巨噬细胞泡沫化
目的 探究核因子κB(NF-κB)是否通过分拣蛋白Sortilin影响荷脂THP-1巨噬细胞脂质代谢和泡沫化.方法 NF-κB激活剂PMA或其特异性抑制剂PDTC孵育荷脂THP-1巨噬细胞,qRT-PCR检测Sortilin mRNA水平,Western blot检测Sortilin蛋白表达;沉默荷脂THP-1巨噬细胞Sortilin同时加入PMA孵育,胞内胆固醇流出行液体闪烁计数器检测,胞内脂质含量行高效液相色谱法检测,胞内脂滴情况用油红O染色显示.结果 PMA孵育处理荷脂THP-1巨噬细胞后Sortilin mRNA水平及蛋白表达上调,PDTC孵育处理后Sortilin mRNA水平及蛋白表达下调;PMA孵育处理荷脂THP-1巨噬细胞内脂质流出减少,脂质蓄积程度增加,泡沫细胞形成加剧,而PMA与Sortilin shRNA共处理后,其胞内脂质流出增多,胞内脂质蓄积程度减轻,泡沫细胞形成受抑.结论 NF-κB通过促进Sortilin表达,导致巨噬细胞内脂质流出受抑,胞内脂质蓄积程度加重,从而加剧泡沫细胞形成.
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神经元的发育过程中p75NTR和sortilinr的表达研究
目的 神经元发育过程中需要p75NTR和sortilin的参与.方法 体外培养新生SD大鼠海马神经元,通过细胞免疫组织化学方法观察这一过程中p75NTR、sortilin的表达情况.结果 用出生0～1h新生SD大鼠培养海马神经元,培养3d的神经元经neun免疫组化染色鉴定,其阳性率可达到90％以上.观察发现体外培养的海马神经元生长有明显的阶段性.经细胞免疫组织化学染色发现,p75NTR、sortilin在神经元发育过程中均有表达.结论 体外培养的海马神经元生长有明显的阶段性,p75NTR、sortilin在神经元发育过程中均有表达.
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Sortilin促进肝癌细胞侵袭作用及机制研究
目的 探讨Sortilin在肝癌侵袭中作用及其分子机制.方法 ELISA法检测血清中Sortilin水平;小分子干扰片段沉默Sortilin研究其功能;Western blot检测蛋白金属酶MMP-2和MMP-9水平;采用Invasion assay法检测肝癌侵袭作用.结果 沉默Sortilin后抑制肝癌细胞侵袭,下调蛋白金属酶MMP-2和MMP-9水平.肝癌病人血清Sortilin水平升高(P＜0.001),且与AFP呈正相关.结论 Sortilin通过下调蛋白金属酶MMP-2和MMP-9水平促进肝癌细胞侵袭;血清中Sortilin水平对肝癌具有较好的诊断价值.
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神经营养因子受体同源物2通过上调proNGF、sortilin、p75NTR表达诱导脑出血后血肿周围脑组织细胞凋亡
目的 探讨脑出血后不同时期血肿周围脑组织中神经营养因子受体同源物2(NRH2)、神经生长因子前体(proNGF)、sortilin、神经营养因子受体p75 (p75NTR)表达及与细胞凋亡的关系.方法 收集临床脑出血后实施血肿清除术的周围组织标本,根据脑出血距离标本取出时间,分为6h以内(包括6h)、6h以上至24h(包括24h)、24h以上至72 h(包括72 h)、72 h以上4组,同时取10例手术过程中血肿远隔部位掉落的组织块作为对照组,通过末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法(TUNEL)测定脑细胞的凋亡指数(AI),采用实时荧光定量PCR、Western blot法分别检测脑组织中NRH2、proNGF、sortilin、p75NTR mRNA和蛋白表达,Western blot法检测脑组织中Bcl-2、Bax的表达.体外培养大鼠皮层星形胶质细胞,经NRH2 siRNA或scramble siRNA转染后,Western blot法检测proNGF、sortilin、p75NTR蛋白表达.结果 与对照组以及6h以内的脑出血组相比,脑出血后6h以上各组AI升高,以24h以上至72 h内组为高,但6h以内的脑出血组AI与对照组无区别.随着脑出血时间的延长,proNGF、p75NTR mRNA和蛋白表达水平逐渐升高,24h以上至72 h达到高峰,72 h后仍处于较高水平.与对照组和6h以内的脑出血组比较,脑出血后6h以上至24h内(包括24h),脑组织NRH2、sortilin的mRNA与蛋白表达水平及Bax表达水平即增加,24h以上至72 h内达高峰,72 h后仍维持在较高水平.但与对照组比较,6h以内的脑出血组上述指标无显著性差异.与对照组相比,6h以内的脑出血组Bcl-2表达水平无明显变化,脑出血后6h以上的脑出血各组脑组织Bcl-2表达水平降低,以24h以上至72 h内处于低值.NRH2 siRNA组proNGF、sortilin、p75NTR蛋白表达水平明显低于空白对照组、scramble siRNA组.结论 NRH2在脑出血后血肿周围脑组织中表达增加,通过促进proNGF、sortilin、p75NTR表达增加Bax/Bcl-2比率,从而诱导脑细胞凋亡.
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丰富环境对单眼剥夺小鼠视皮质与外侧膝状体Sortilin表达的影响
目的:探讨丰富环境(EE)对弱视小鼠初级视皮质和外侧膝状体Sortilin的表达影响.方法:选择36只21 d昆明小鼠,雌雄不限,随机分为正常组(Control)、单眼剥夺+标准环境组(MD +SE)和单眼剥夺+丰富环境组(MD+ EE),通过行为学检测各组小鼠视功能改变、免疫组织化学方法检测各组小鼠视皮质和外侧膝状体Sortilin的表达.结果:行为学结果显示:与Control组相比,MD+ SE组探爪触地成功率明显降低(P＜0.05),MD+EE组探爪触地成功率显著高于MD+ SE组(P＜0.05);免疫组织化学结果显示:与Control组相比,MD+ SE组外侧膝状体背内侧Sortilin阳性神经元数目显著升高(P＜0.001);MD+ EE组显著低于MD+ SE组,但高于Control组(P＜0.001);与Control组相比,MD+ SE组小鼠视皮质Sortilin阳性神经元数目显著降低(P＜0.001);MD+ EE组显著高于MD+SE组(P ＜0.001),但显著低于Control组(P＜0.001).结论:丰富环境改善弱视小鼠视功能可能通过调节视皮质和外侧膝状体Sortilin的表达实现.
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炎性痛致大鼠脊髓后角ProBDNF及其受体的表达变化
目的:探讨完全弗氏佐剂(complete Freund's Adjuvant,CFA)致炎性疼痛后大鼠脊髓后角内ProBDNF及受体P75NTR和Sortilin的表达变化及意义.方法:大鼠随机分为正常组和实验组,实验组大鼠左侧足底皮下注射CFA和生理盐水混合溶剂100μl,建立炎性疼痛模型,实验组包括注射CFA后6 h、1、3、7和14 d组.采用Von Frey纤维测定不同时间点大鼠机械缩足阈值(paw withdrawal threshold,PWT)的变化；采用免疫组织化学方法检测ProBDNF及P75NTR、Sortilin在脊髓后角的表达变化.结果:足底注射CFA后1 h PWT即下降,并在6 h后达到低值,3 d后逐渐上调,至14 d仍低于基础值.ProBDNF在正常脊髓后角可见阳性表达；注射CFA后1 d注射侧脊髓后角较对侧其ProBDNF的表达明显上调,上调持续到7 d左有,至14 d逐渐恢复.正常大鼠脊髓后角P75NTR有较弱表达,主要集中在后角Ⅰ、Ⅱ层纤维；注射CFA后6 h开始,注射侧脊髓后角内P75NTR的表达明显上调,Ⅲ-Ⅴ层的阳性产物也逐渐增加,这种上调持续到7 d左右达高峰,至14 d逐渐下降.Sortilin在正常脊髓后角浅层仅有较弱阳性产物表达,注射CFA后不同时间点脊髓后角Sortilin的表达无明显差异.结论:CFA能诱导大鼠产生为期2周以上的炎性痛病程；脊髓后角ProBDNF和P75NTR的表达上调可能与炎性疼痛中外周痛觉信号的传导和中枢敏化有关.
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人脑出血后proNGF、sortilin的表达及与细胞凋亡的关系
目的 研究人脑出血后神经生长因子前体(proNGF)、sortilin在血肿周围组织中的表达及与细胞凋亡的关系.方法 本实验采集临床手术患者的脑组织标本,利用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸生物素原位缺口末端标记法(TUNEL)检测血肿周围组织中的凋亡细胞,运用免疫组化技术检测血肿周围组织及远隔部位组织中proNGF、sortilin的表达.结果 脑出血后血肿周围组织中细胞凋亡率明显增高(P<0.01),proNGF的表达水平并没有显著变化(P>0.05),而sortilin的表达水平则明显增加(P<0.01),并且sortilin的表达水平与细胞凋亡率正相关(R=0.648,P=0.00).结论 sortilin在人脑出血后表达增加,与细胞凋亡正相关,proNGF在脑出血后的表达量并未变化.
