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神经营养因子受体同源物2通过上调proNGF、sortilin、p75NTR表达诱导脑出血后血肿周围脑组织细胞凋亡
目的 探讨脑出血后不同时期血肿周围脑组织中神经营养因子受体同源物2(NRH2)、神经生长因子前体(proNGF)、sortilin、神经营养因子受体p75 (p75NTR)表达及与细胞凋亡的关系.方法 收集临床脑出血后实施血肿清除术的周围组织标本,根据脑出血距离标本取出时间,分为6h以内(包括6h)、6h以上至24h(包括24h)、24h以上至72 h(包括72 h)、72 h以上4组,同时取10例手术过程中血肿远隔部位掉落的组织块作为对照组,通过末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法(TUNEL)测定脑细胞的凋亡指数(AI),采用实时荧光定量PCR、Western blot法分别检测脑组织中NRH2、proNGF、sortilin、p75NTR mRNA和蛋白表达,Western blot法检测脑组织中Bcl-2、Bax的表达.体外培养大鼠皮层星形胶质细胞,经NRH2 siRNA或scramble siRNA转染后,Western blot法检测proNGF、sortilin、p75NTR蛋白表达.结果 与对照组以及6h以内的脑出血组相比,脑出血后6h以上各组AI升高,以24h以上至72 h内组为高,但6h以内的脑出血组AI与对照组无区别.随着脑出血时间的延长,proNGF、p75NTR mRNA和蛋白表达水平逐渐升高,24h以上至72 h达到高峰,72 h后仍处于较高水平.与对照组和6h以内的脑出血组比较,脑出血后6h以上至24h内(包括24h),脑组织NRH2、sortilin的mRNA与蛋白表达水平及Bax表达水平即增加,24h以上至72 h内达高峰,72 h后仍维持在较高水平.但与对照组比较,6h以内的脑出血组上述指标无显著性差异.与对照组相比,6h以内的脑出血组Bcl-2表达水平无明显变化,脑出血后6h以上的脑出血各组脑组织Bcl-2表达水平降低,以24h以上至72 h内处于低值.NRH2 siRNA组proNGF、sortilin、p75NTR蛋白表达水平明显低于空白对照组、scramble siRNA组.结论 NRH2在脑出血后血肿周围脑组织中表达增加,通过促进proNGF、sortilin、p75NTR表达增加Bax/Bcl-2比率,从而诱导脑细胞凋亡.
