首页 > 文献资料
-
病毒感染后表达下调的RNF167抑制小鼠腹腔巨噬细胞产生IFN-β
目的 探讨RNF167对病毒感染的小鼠腹腔巨噬细胞产生IFN-β的调控作用.方法 RNA病毒VSV和DNA病毒HSV-1感染小鼠腹腔巨噬细胞后,Western blot检测RNF167的表达水平.利用RNA干扰减少小鼠原代腹腔巨噬细胞中RNF167的表达后,病毒感染小鼠腹腔巨噬细胞,实时荧光定量PCR法检测IFN-β的mRNA水平,ELIAS法检测细胞上清中IFN-β的浓度.Western blot法检测IFN-β的转录因子IRF3的磷酸化(p-IRF3)水平.结果 VSV感染巨噬细胞4和8h后,RNF167表达水平显著下降(P＜0.01),而HSV-1感染后RNF167的表达没有显著变化.si-RNF167降低小鼠腹腔巨噬细胞RNF167表达水平后,与对照细胞相比,感染RNA病毒后细胞中IFN-β的mRNA水平及上清中IFN-β水平显著下降(P＜0.01),p-IRF3水平也显著下降.而感染HSV-1病毒后上述指标均无差异.结论 RNF167能够特异性地调控RNA病毒感染的巨噬细胞中IFN-β的表达.
-
CXCL-10在肝脏缺血再灌损伤中的研究进展
1 CXCL-10概述CXCI,10(又名IP10,即IFN-γ-inducible protein10)是在1985年由Luster等首先报道的,是用分子生物学技术从活化U937细胞株的基因表达产物中筛选出来的,其相关蛋白被命名为CXCL10,又名IP-10,相对分子质量约为10 kDa[1,2].
-
干扰素调节因子1、3、7在原发性舍格伦综合征中的表达
目的:检测原发性舍格伦综合征(primary Sj(o)gren's syndwme,pSS)患者血细胞中干扰素调节因子(IRF)1、3、7的表达水平,并检测IRF1在pSS患者腮腺组织中的表达.方法:采用实时定量PCR,对37例pSS患者和24例对照组患者血细胞中IRF1、3、7的水平进行检测,比较分析其在两组之间的差异.采用免疫组化和免疫荧光法检测IRF1在pSS患者腮腺组织中的表达.应用SAS6.12软件包对数据进行t检验.结果:实时定量PCR法检测结果发现,pSS组的IRF1 mRNA表达量显著高于对照组,两组之间有显著差异(P=0.000121),pSS组的IRF1是对照组的2.17倍,而IRF3和IRF7在两组之间无显著差异(P=0.3813,0.4501).免疫组化和免疫荧光发现,pSS组患者腮腺组织中的导管上皮细胞、淋巴细胞和上皮岛均为IRF1阳性:而对照组腮腺组织中仅导管上皮细胞为IRF1阳性.结论:IRF1在原发性舍格伦综合征患者中存在异常表达.
-
长链非编码RNA MALAT1在肿瘤细胞中调控IRF3的表达
目的:验证长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)与干扰素调节因子3(interferon regulation factor 3,IRF3)的靶向调控关系.方法:将人IRF3启动子荧光素酶报告基因重组质粒pGL3-56与敲降MALAT1的siRNA(siMALAT1-1、siMALAT1-2)或阴性对照物(siNC)瞬时共转染A549细胞,检测相对荧光素酶活性.同样使用siNC或siMALAT1-1、siMALAT1-2瞬时共转染A549细胞,反转录-实时荧光定量PCR检测IRF3 mRNA表达水平,Western blot检测IRF3蛋白表达水平.结果:与siNC组比较,siMALAT1-1组和siMALAT1-2组荧光素酶活性均有下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与siNC组比较,siMALAT1-1组和siMALAT1-2组MALAT1 mRNA和IRF3 mRNA相对表达量均有下降,差异有统计学意义(P<0.05);与siNC组比较,siMALAT1-1组和siMALAT1-2组的IRF3蛋白表达水平均有下降,差异有统计学意义(P<0.05).结论:IRF3是MALAT1的靶基因,MALAT1通过调控IRF3启动子区来影响IRF3的转录与表达.
-
TLR3和IRF3在华支睾吸虫感染C3H/HeN小鼠中表达的初步分析
目的 建立华支睾吸虫感染小鼠模型,初步分析TLR3、IRF3基因在小鼠肝脏中的表达情况.方法 随机选用健康雌性C3H/HeN小鼠感染华支睾吸虫建立感染模型,分别在感染第0、1、7、14、28、56、84天颈椎脱臼处死小鼠,取肝脏组织进行病理学观察,收集粪便检查华支睾吸虫虫卵.同时,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝脏中Toll样受体(TLRs)中的TLR3和IRF3的mRNA的表达情况.结果 自感染后第20~30天检查出华支睾吸虫虫卵;肝脏病理学结果显示,与正常组小鼠相比,随着时间的增加,感染组小鼠肝脏汇管区由少量炎症细胞浸润、胆管上皮反应性增生发展到在该区域出现大量纤维组织增生伴有炎症细胞浸润,表明华支睾吸虫感染C3H/HeN小鼠模型成功建立.与正常组相比,感染组自感染后第1天起TLR3和IRF3的mRNA表达均升高(P<0.01),均在第84天开始下降.结论 华支睾吸虫感染C3H/HeN小鼠后可激活TLR3-TRIF途径,提示TLR3-TRIF途径可能在华支睾吸虫致病过程中起了一定的作用.
-
柯萨奇病毒A组16型的3C蛋白抑制RIG-I介导的IFN-β的诱导
探讨柯萨奇病毒A组16型对RIG-I介导的信号通路的影响.方法将带有IFN-β启动子的萤火虫荧光素酶报告质粒pIFN-β-luc及内对照报告载体pRL-CMV转染细胞,之后用CA16感染细胞,24h后检测报告基因活性.将CA16感染细胞,在感染6h、12 h、24h以及48 h后用Real-time PCR方法测定细胞中IFN-β的mRNA的表达水平.将pIFN-β-luc和pRL-CMV以及表达RIG-I的质粒和表达CA16的3C蛋白质粒共转染细胞,24h后检测报告基因活性.将带有绿色荧光蛋白GFP的IRF3质粒和表达RIG-I基因N端质粒以及表达CA16的3C蛋白共转染细胞,24h后用荧光显微镜观察.将表达RIG-I的质粒和表达CA16的3C蛋白质粒共转染细胞,24h后用免疫共沉淀方法验证蛋白质间相互作用.结果CA16感染细胞不能引起IFN-β表达的上调,CA16的3C蛋白抑制了RIG-I诱导的IFN-β的启动子活性以及IRF3的核迁移,CAI6的3C蛋白与RIG-I存在相互作用.结论 CA16的3C蛋白通过与PIG-I相互作用从而抑制RIG-I介导的IFN-β的诱导.
关键词： 柯萨奇病毒A组16型 3C蛋白 RIG-I IFN-β IRF3
