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分子影像学国内外研究现状与发展动向
分子影像学是一门新兴学科,是国内外医学研究的前沿和热点,无疑将成为21世纪医学影像学发展的趋势和主导,成为连接分子生物学等基础学科与临床医学的桥梁,对现代和未来医学模式将会产生革命性影响.作为临床医学工作者,尤其是临床医生更应当了解和关注该学科的发展.
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用PCR制备检测丁型肝炎病毒基因芯片的探针
目的:制备诊断丁型肝炎病毒(HDV)cDNA基因芯片探针. 方法:针对HDV病毒基因保守区域设计聚合酶链反应(PCR)引物,纯化PCR扩增产物克隆,并测序鉴定. 结果:序列分析表明,所扩增的片段均属于HDV特异基因. 结论:利用PCR扩增产物制备基因芯片探针是一种快速、简便、实用的方法.
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人脑胶质瘤恶性进展相关基因表达谱中葡萄糖代谢相关基因的分析
目的研究胶质瘤糖代谢增强时哪些基因从中发生显著变化.方法根据已经建立的胶质瘤恶性进展相关基因表达谱,用生物信息学分析方法和GeneBank检索的资料分析其中葡萄糖代谢相关基因的变化.结果在胶质瘤恶性进展中,与葡萄糖代谢相关的差异表达基因有HK1、PFK、PyK、Tra、citratc synthase、isocitrate dehydrogenase、LDH-A、LDH-B、Glut5、L-xylulose reductase共10条.结论上述的10条基因涉及到多个代谢途径,可为进一步研究胶质瘤细胞葡萄糖代谢的分子机制提供线索,其中在磷酸戊糖途径中起关键作用的Tra基因可以作为治疗靶点作深入研究.
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胶质瘤细胞诱导分化相关基因在胶质瘤组织中的表达
目的利用已经建立的胶质瘤细胞诱导分化相关基因表达谱,筛选胶质瘤恶性进展相关基因.方法按分子生物学实验要求,收集经病理确诊的不同恶性程度胶质瘤手术标本,应用反向多点杂交技术制作分子探针,与96个相关基因组成的小芯片杂交检测在不同恶性级别胶质瘤手术标本中的表达情况.结果共有8个基因在各个恶性级别胶质瘤中均呈高表达;有14个基因随胶质瘤恶性程度升高而表达频率呈上升趋势;有6个基因随胶质瘤恶性程度升高表达频率呈下降趋势;筛选到可能与胶质瘤恶性进展有关的新基因有DIP1、RPS7、CLK2、WWOX/FOR、GRIM-19等基因.结论本研究制作的胶质瘤细胞分化相关基因小芯片,在不同级别胶质瘤组织标本中检测到的表达情况,可进一步用于胶质瘤恶性进展的分子机制研究.
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肿瘤分子影像学研究进展
恶性肿瘤严重威胁人类健康.肿瘤的早期诊断与治疗是提高其治愈率及改善患者生存质量的关键.X线、超声、CT、MRI及PET是目前诊断恶性肿瘤的主要影像学手段,效果明显.小肿瘤形成病灶前难以被发现,定位及定性诊断相当困难.分子生物学、人类基因技术及影像学等相关学科的飞速发展,形成一个崭新的边缘学科--分子影像学(molecular imaging).
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脂质体介导对反义分子探针肿瘤靶向作用影响的实验研究
[目的]评价脂质体介导对反义分子探针在体外靶细胞摄取以及在荷瘤裸鼠体内特异显像的不同影响情况.[方法]以双功能螯合剂法,制备99mTc标记的针对人端粒酶催化亚单位(hTERT)mRNA的正、反义探针.分别测定在有/无脂质体介导下,不同处理组的细胞对分子探针的摄取率.建立荷MCF-7乳腺癌裸鼠模型,分别经尾静脉注射有/无脂质体介导的正、反义探针.注射后6h对所有裸鼠进行SPECT显像,分别勾画肿瘤部位与对侧相应部位的感兴趣区,定量分析不同处理组的肿瘤放射性摄取情况.[结果]分子探针的标记率达到76%±5%,放射性化学纯度达到96%以上,比活度达到1850kBq/μg.不论脂质体介导与否,反义探针在不同时相的细胞摄取率均高于正义探针(P＜0.05);脂质体明显提高细胞对分子探针的摄取,高可达2.5倍.通过脂质体介导,细胞对反义探针的摄取高峰值提前至2h,并保持稳定水平至3h.荷瘤裸鼠体内显像结果显示:不论脂质体介导与否,反义组的荷瘤裸鼠肿瘤部位可见有明显的放射性浓聚.而正义组的荷瘤裸鼠肿瘤部位未见有明显的放射性浓聚:脂质体介导没有明显增加肿瘤/非肿瘤(T/NT)比值(P＞0.05).[结论]脂质体在体外能有效地提高分子探针的细胞靶向摄取效率,但是对分子探针在体内的显像效果无明显影响作用.
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关注医学影像学发展热点促进医学影像学科发展
功能与分子影像学是当前的研究热点.文中介绍分子影像学的定义和常用功能成像技术,分析成像中的关键问题,探讨功能与分子影像学未来的发展和影像学科建设的关键内容.
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线性探针快速诊断耐药结核的应用价值评价
目的 评价线性探针法快速诊断耐药结核的应用价值.方法 对99株结核分枝杆菌分离株采用GenoType MTBDRplus和MTBDRsl试剂盒进行利福平、异烟肼、氧氟沙星、卡那霉素、乙胺丁醇五种药物的耐药快速检测,与传统药物敏感性试验结果比较,评价其诊断试验的真实性.结果 GenoType MTBDRplus检测利福平、异烟肼耐药的灵敏度和特异度分别为100％和50％、86.11％和47.06％.GenoType MTBDRsl检测氧氟沙星、卡那霉素、乙胺丁醇耐药的灵敏度分别为94.74％、62.50％、58.82％,特异度分别为92.59％、98.81％、91.67％.结论 线性探针法GenoType MTBDRplus用于检测利福平耐药具有较高的灵敏度,GenoType MTBDRsl用于检测氧氟沙星耐药的灵敏度和特异度均较满意,可用于对疑似耐药患者进行早期快速检测.对异烟肼耐药的检测结果与其他报导差异较大,需要进一步验证后决定是否适合推广.卡那霉素和乙胺丁醇耐药机制不完全明确,线性探针的灵敏度较低,尚不适宜广泛应用于临床.
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基质金属蛋白酶-2在脑胶质瘤细胞中的表达及其分子探针体外磁共振成像的检测
目的 观察基质金属蛋白酶-2(MMP2)在脑胶质瘤细胞中的表达,并检测其分子探针体外磁共振成像能力.方法 利用免疫印迹法检测 MMP2在多种脑胶质瘤细胞系的表达水平;利用碳二亚胺法合成USPIO-PEG-MMP2Ab分子探针,进行噻唑蓝比色法检测其细胞毒性,普鲁士蓝染色及体外磁共振成像检测USPIO-PEG及USPIO-PEG-MMP2Ab与MMP2高表达的脑胶质瘤细胞的特异性结合能力.结果 所有胶质瘤细胞均高表达MMP2,与星形胶质细胞相比,差异有统计学意义;合成的分子探针USPIO-PEG-MMP2Ab应用浓度范围内无明显细胞毒性,具有同C6脑胶质瘤细胞特异性结合的能力,普鲁士蓝染色结果显示在相同浓度及时间的条件下,USPIO-PEG-MMP2Ab 组较 USPIO-PEG 组蓝染颗粒更多、更明显;磁共振成像结果显示USPIO-PEG-MMP2Ab组细胞在相同浓度条件下SI值下降水平明显较高,与USPIO-PEG组细胞相比,差异有统计学意义.结论 MMP2在胶质瘤细胞中高表达,且USPIO-PEG-MMP2Ab分子探针活性高,安全性好,对脑胶质瘤细胞系具有靶向性.
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二聚体蝎型探针荧光定量PCR快速检测志贺菌方法的建立及初步应用
目的 利用二聚体蝎型荧光探针法,建立一种可广泛应用且敏感、特异的检测志贺菌的荧光定量PCR技术.方法 根据编码志贺菌ipaH基因的核苷酸序列设计引物和荧光探针,采用基因重组技术构建用于志贺菌检测的定量标准品,通过对荧光定量PCR反应体系和反应条件的摸索,建立了检测志贺菌的二聚体蝎型探针定量PCR方法.结果 成功构建了志贺菌重组质粒标准品和志贺菌实时荧光定量PCR方法;通过特异性、敏感性、稳定性和重复性验证,结果表明具有较好的特异性、敏感性、稳定性和重复性;对比分离培养标本,二者符合率为100%;对比TaqMan方法,本方法具有更敏感、省时、成本低的特点.结论 建立了一种以二聚体蝎型荧光探针技术为基础的志贺菌荧光定量PCR检测法,为研制新型的检测试剂盒奠定了基础,可应用于食品卫生监管以及传染病诊断等.
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冬凌草抗肿瘤对映贝壳杉烯迈克尔反应受体分子快速发现
目的：快速发现冬凌草中抗肿瘤对映贝壳杉烯迈克尔反应受体分子。方法以乙醇钠为催化剂，将冬凌草提取液与紫外分子探针对硝基苯甲酰乙酸乙酯进行柱前衍生迈克尔加成反应。反应完毕后，加入乙酸中和催化剂终止反应得反应液。将反应液与冬凌草原提取液在相同的条件下进行HPLC对比分析。发生加成反应的对映贝壳杉烯色谱峰面积将相应减小，并产生迈克尔加成产物新色谱峰。综合保留时间、色谱峰形和DAD紫外光谱图确定原提取液和反应液HPLC图谱中的对映贝壳杉烯迈克尔反应受体分子。结果从冬凌草提取液 HPLC 图谱上鉴定出对映贝壳杉烯迈克尔反应受体分子12个。结论首次采用对硝基苯甲酰乙酸乙酯分子探针HPLC-DAD法快速发现冬凌草中对映贝壳杉烯迈克尔反应受体分子。
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蛋白质功能研究的有利工具--化学遗传学
化学遗传学是利用细胞渗透性的生物活性小分子作为分子探针进行生物学研究的方法.对化学遗传学的基本思路和策略,以及与传统遗传学方法的比较,作了简要介绍,并强调了其优越性及其用途.
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基于适配子的分子探针在肿瘤分子影像学中的应用
理想的分子影像探针应具有一定的特异性、敏感性、安全性。适配子是可与靶分子高特异性和高亲和力结合的单链 DNA 或 RNA 分子，具有靶分子广泛、分子小、易生产和修饰、免疫原性低、渗透性强等特点，是一种新型的分子影像探针。目前基于适配子的肿瘤分子影像学研究越来越多，为肿瘤的诊断和治疗提供了新的技术和工具。
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靶向 EphB4受体分子探针的研究进展
促红细胞生成素产生肝细胞受体（Eph）B 型受体4与肿瘤生长和肿瘤血管形成密切相关，并且在许多肿瘤中过量表达。EphB4靶向探针可提高肿瘤诊断的准确性和特异性。大量针对该靶点的分子探针已经被设计出来，有望为肿瘤的早期诊断和治疗提供新的方法。
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谷氨酰胺与肿瘤代谢及其在核医学中的应用
许多肿瘤依赖谷氨酰胺(Gln)供能,Gln代谢被认为是除Warburg效应之外又一重要的肿瘤细胞能量代谢特征之一.以正电子发射计算机断层扫描(PET)为代表的核医学分子示踪技术为肿瘤的早期诊断和预后提供了很好的手段,利用PET显像技术可以无创地探测肿瘤Gln代谢区域,为优化肿瘤诊断和治疗方案提供了新策略.
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非RGD肽—超微超顺磁氧化铁分子探针的制备及鉴定
目的 制备及鉴定非RGD肽(命名为P1c)-超微超顺磁氧化铁(USPIO)分子探针.方法 采用化学交联法将P1c偶联于二巯基丁二酸(DMSA)修饰的USPIO,形成具有免疫活性的P1c-USPIO分子探针.采用CCK-8试剂盒检测P1c-USPIO分子探针对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响,观察P1c-USPIO的细胞毒性.用固相结合实验、普鲁士蓝染色和体外MRI法观察P1c-USPIO的体外免疫学特性.结果 成功构建USPIO标记的P1c肽分子探针P1c-USPIO.其对HUVEC增殖无影响.固相结合试验及普鲁士蓝染色证实该探针能特异性与整合素αvβ3结合.体外MRI显示在同一USPIO浓度时,用P1c-USPIO孵育的HUVEC与用USPIO孵育者相比T2加权相信号强度明显降低(P均＜0.01).结论 化学交联法可成功制备P1c肽超微超顺磁氧化铁分子探针,该分子探针具有良好免疫学活性,可特异性结合整合素αvβ3分子.
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神经纤毛蛋白-1靶向性分子探针的构建及体外显像脑胶质瘤细胞的研究
目的：合成以超小超顺磁性氧化铁颗粒（ ultrasmall superparamagnetic iron oxide， US?PIO）为核心、tLyP?1（ CGNKRTR）为配体的新型磁共振分子探针USPIO?PEG?tLyP?1并检测其对神经纤毛蛋白?1（ Neuropilin?1，NRP?1）高表达的脑胶质瘤细胞的成像能力。方法利用碳二亚胺法将US?PIO?PEG同多肽tLyP?1偶联得到USPIO?PEG?tLyP?1，通过免疫印迹法检测不同脑胶质瘤细胞系中NRP?1的表达水平，利用噻唑蓝比色法检测分子探针的细胞毒性，利用普鲁士蓝染色、透射电镜及体外磁共振成像检测USPIO?PEG及USPIO?PEG?tLyP?1同NRP?1高表达的脑胶质瘤细胞的结合能力。结果合成了水合粒径为43．84 nm的分子探针USPIO?PEG?tLyP?1，噻唑蓝比色法证实这种分子探针在有效浓度下（50μg Fe／ml）对细胞存活无显著影响（P＞0．05）。选择NRP?1表达水平高的U87脑胶质瘤细胞作为实验对象（P＜0．01）。普鲁士蓝染色结果显示在相同浓度及时间的条件下，USPIO?PEG?tLyP?1组的蓝染颗粒较USPIO?PEG组更多、更明显。透射电镜结果显示USPIO?PEG?tLyP?1同U87细胞结合后主要分布于溶酶体、内质网及线粒体中。磁共振成像结果显示在相同浓度下，USPIO?PEG?tLyP?1组细胞的SI值下降水平均明显高于USPIO?PEG组细胞（P＜0．01）。结论 tLyP?1的修饰大大提高了USPIO?PEG同脑胶质瘤细胞的结合能力，并且显著增加了磁共振下的阴性对比效果，为新型磁共振分子探针USPIO?PEG?tLyP?1的体外实验及今后的临床应用奠定了基础。
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荧光-磁共振双功能纳米探针标记乳腺癌细胞
目的 探讨载Herceptin靶向聚乳酸-羟基乙酸[poly(1actic-co-glycolic acid),PLGA]-超顺磁性氧化铁(superparamagnetic iron oxide,SPIO)分子探针的构建方法及对乳腺癌体外靶向结合的可行性.方法 以 PEG 化端羧基 PLGA 作为成膜材料,采用双乳化法及碳二亚胺化学连接法,制备装载超顺磁性氧化铁的 Herceptin-SPIO-PLGA探针,并对其粒径、表面形态等进行检测,体外培养高表达 HER2 的乳腺癌细胞株SK-BR-3,评价其体外寻靶能力及MTT法检测所制备探针对细胞活性的影响.结果 光镜及扫描电镜观察所制备探针形态规则,呈球形,表面光滑,分散性好,大小较均匀,粒径为(281.5±81.2)nm.透射电镜结果显示探针为壳核结构,USPIO分布于壳膜中,且其分布具有随机性.Herceptin-SPIO-PLGA即使在Fe 浓度达到400 μg/mL,细胞存活率仍保持在90%以上,具有较低细胞毒性.在激光扫描共聚焦显微镜下,被SK-BR-3细胞吞噬的发出红色荧光.结论 双靶点磁性、荧光双模态分子探针多肽Herceptin-SPIO-PLGA具有优良的理化性质及稳定性,生物安全性好,肿瘤靶向结合能力强.
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人类基因组DNA单核苷酸多态性的检测方法
单核苷酸多态性(SNP)作为新的遗传标记对基因定位及相关疾病的研究意义重大.本文对近年来9种SNP检测方法的原理、应用及优缺点,包括基于FRET原理的Taqman法和分子灯塔法;基于分子杂交技术的寡核苷酸连接分析、等位基因特异性寡核苷酸探针杂交法、动态等位基因特异性杂交法及DNA芯片法;及质谱法、变性-高压液相色谱法和单个碱基延伸标记法进行综述.
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脂肪组织来源干细胞促进随意型皮瓣存活的血管发生机制
本实验旨在证实脂肪组织来源干细胞( ASCs)体内外分化为内皮细胞(EC)的能力,从而判断血管发生是否真正参与ASCs改善随意型皮瓣移植后的再血管化机制.一、材料和方法1.ASCs的原代培养及DiI标记:取5周龄BAL-C小鼠,从腹股沟部脂肪垫提取ASCs进行培养.取第3代(P3) ASCs按照产品说明书标记1,1’-dioctadecyl-3,3,3’,3’-tetramethylindocarbocyanine (DiI)(分子探针,Eugene,Ore.)荧光.
