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高脂高糖饮食暴露诱导大鼠多囊卵巢综合征研究
目的 通过高脂高糖饮食诱导雌性大鼠多囊卵巢综合征(PCOS),探讨其生殖和代谢特征. 方法 将23天断奶雌性大鼠随机分成两组:对照组接受正常饮食(对照组,n=18),实验组接受高脂高糖饮食(HFHS组,n=18),连续喂养14周.观察两组体重、动情周期和卵巢组织学变化,检测两组空腹血糖、空腹胰岛素、计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、血脂水平、性激素水平. 结果 HFHS组大鼠体重至第3周起显著高于对照组(P＜0.001),但两组卵巢重量无显著差异[(0.041±0.006)g vs.(0.045±0.005)g,P＞0.05].HFHS组动情周期失去规律变化,发情期持续时间占整个发情周期时间的比例显著长大对照组[(0.46±0.06) vs.(0.27±0.03),P＜0.001].HFHS组卵巢组织学检查发现多个囊状扩张卵泡、黄体数量下降.HFHS组空腹胰岛素、HOMA-IR、总胆固醇水平显著高于对照组(P＜0.001);发情间期HFHS组LH和E2水平显著低于对照组(P＜0.05),睾酮(T)水平显著高于对照组(P＜0.001);发情前期HFHS组LH和P水平显著低于对照组(P＜0.05),T和E2水平显著高于对照组(P＜0.001). 结论 高脂高糖饮食诱导雌性大鼠PCOS,并产生代谢紊乱和卵巢改变,与PCOS患者临床观察到的相似.
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ATP合成酶β亚单位在PCOS伴2型糖尿病大鼠胰岛中的表达
目的 研究ATP合成酶β亚单位在多囊卵巢综合征(PCOS)伴2型糖尿病的大鼠胰岛中的表达情况,初步探讨ATP合成酶β亚单位在PCOS发展为2型糖尿病中的作用. 方法 30只雌性SD大鼠平均分为3组:PCOS组、PCOS伴2-DM组和对照组.采用硫酸普拉睾酮钠诱导PCOS模型(PCOS组,10只),硫酸普拉睾酮钠联合高脂高糖十链脲左菌素(STZ)诱导2型糖尿病大鼠模型(PCOS伴2-DM组,10只).HE染色光镜下观察PCOS大鼠卵巢的病理结构改变,用酶联免疫吸附法测定血清睾酮(T)、雌二醇(E2)及空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)含量.采用免疫组织化学法检测PCOS组、PCOS伴2型糖尿病组及空白对照组胰腺胰岛中ATP合酶p亚单位的表达. 结果 与对照组相比,PCOS伴2-DM组及PCOS组卵巢均呈多囊样改变;与对照组相比,PCOS伴2-DM组和PCOS组大鼠FINS虽显著降低(P＜0.05),但HOMA-IR指数均显著增高(P＜0.05),PCOS伴2-DM组大鼠空腹血糖均≥16.7 mmol/L;PCOS组及PCOS伴2-DM组大鼠血清T与E2水平显著高于对照组(P＜0.05),而PCOS组及PCOS伴2-DM组之间无显著差异(P＞0.05);PCOS伴2-DM组的胰岛面积显著小于对照组及PCOS组(P＜0.05);PCOS伴2-DM组ATP合酶β亚单位的表达强度显著低于对照组及PCOS组(P＜0.05),PCOS组与对照组相比胰岛中ATP合酶β亚单位的表达亦显著降低(P＜0.05). 结论 硫酸普拉睾酮钠联合高脂高糖饮食十小剂量STZ能有效诱导PCOS伴2型糖尿病大鼠模型;PCOS及PCOS伴2型糖尿病患者胰岛中ATP合成酶β亚单位表达异常,可能是导致2型糖尿病发生的原因之一.
关键词： 多囊卵巢综合征 2型糖尿病 ATP合成酶β亚单位 动物模型 -
实验性多囊卵巢综合征大鼠脂肪组织中抵抗素基因的表达及其意义
目的研究脱氢表雄酮(DHEA)诱导SD幼年雌性大鼠多囊卵巢综合征(PCOS)动物模型的脂肪组织中抵抗素(resistin)mRNA的表达与其性激素变化及胰岛素抵抗(IR)的关系.方法以DHEA皮下注射21 d龄SD雌性大鼠,观察卵巢重量及光镜(HE染色)、透视电镜下形态学改变,测定糖耐量、血清胰岛素、雌二醇(E2)、睾酮(T)、孕酮(P)、泌乳素(PRL)水平,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测脂肪组织resistin mRNA的表达.结果实验组卵巢重量显著高于对照组(P＜0.05),实验组卵巢呈多囊样改变而黄体形成比例减少;实验组血清T、E2和空腹血糖、胰岛素水平明显高于对照组(分别为P＜0.001、＜0.05、＜0.001、＜0.05),空腹血胰岛素与空腹血糖乘积的倒数(1/FINS×FGC)显著高于对照组(P＜0.05);PCOS大鼠白色脂肪组织resistin mRNA表达显著高于对照组(P＜0.05). 结论DHEA诱导的PCOS大鼠动物模型与PCOS患者相似,伴有IR现象;由白色脂肪组织分泌的resistin在PCOS发生机制中起部分调节的作用,并使PCOS的IR进一步加重.
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MMP-2,-9及其抑制物TIMP-1在多囊卵巢综合征患者黄素化颗粒细胞上的表达
目的 分析多囊卵巢综合征(PCOS)患者黄素化颗粒细胞上基质金属蛋白酶-2,-9(MMP-2,-9)及其组织抑制物TIMP-1的蛋白及mRNA在不同培养时间的表达水平,了解与细胞外基质合成、降解相关的MMPs/TIMPs系统参与PCOS的病理生理机制. 方法 收集2011年9月到2012年1月行体外受精(IVF)或卵胞浆内单精子注射(ICSI)治疗的PCOS患者30例,对照组为同期行IVF或ICSI治疗的不孕症患者30例.密度梯度法获得卵巢黄素化颗粒细胞,细胞贴壁培养,分别在培养24、48和72 h收集颗粒细胞.采用Western blotting方法检测颗粒细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1的蛋白表达;RT PCR检测颗粒细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA的表达. 结果 (1)PCOS组黄素化颗粒细胞MMP-2,-9蛋白表达在各培养时间点(24、48、72 h)均显著高于对照组(P均＜0.05);且MMP-2蛋白表达水平在48、72 h相对于24 h的比值,以及MMP-9蛋白表达水平在72 h相对于24 h的比值,PCOS组均显著高于对照组(P均＜0.01).(2) PCOS组MMP-2mRNA在24、48、72 h的表达,MMP 9 mRNA在48、72h的表达均高于对照组,差异有统计学意义(P均＜0.05);MMP-2,-9mRNA表达水平在48、72 h相对于24 h的比值,PCOS组高于对照组,差异均有统计学意义(P均＜0.05).(3)PCOS组TIMP-1蛋白及mRNA表达在24、48、72 h与对照组比较无统计学差异(P＞0.05). 结论 PCOS患者黄素化颗粒细胞中MMP-2和MMP-9的表达升高,其MMPs/TIMPs的平衡状态向蛋白酶的活性增强方向移动,可能与PCOS患者黄体功能不足有关.
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一种新的胰岛素抵抗的多囊卵巢综合征大鼠模型的建立
目的 皮下注射脱氢表雄酮(DHEA)联合高脂高卡饮食喂养,建立一种新的胰岛素抵抗(IR)的多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型.方法 建立60只IR的PCOS雌鼠为造模组,13只同龄雌鼠为对照组.HE染色观察卵巢形态学变化,葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖(FBG),ELISA检测胰岛素样生长因子(IGF)-1、胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBPs),放射免疫法测定血清空腹胰岛素(Fins)、睾酮(T)、雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH),计算胰岛素敏感指数(ISI)和LH/FSH.结果 与对照组比较,造模组大鼠卵巢呈多囊样改变,平均排卵数及排卵率、IGF-1、IGFBP-3、ISI、FSH明显降低(P＜0.05或P＜0.01),FBG、Fins和IGFBP-1、T、E2、LH浓度以及LH/FSH显著升高(P＜0.05或P＜0.01).结论 皮下注射DHEA联合高脂高卡饮食,可成功诱导IR的PCOS大鼠模型.
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多囊卵巢综合征大鼠卵巢smad3的表达及其组织病变的观察
目的 定量分析卵巢血管密度,探讨多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢smad3的表达与体积增大、微血管密度增加等病理改变的相关性. 方法 皮下注射脱氢表雄酮法建立PCOS大鼠病理模型,动情间期取卵巢组织后称重；免疫组织化学法检测smad3在卵巢组织中表达,anti-CD34标记卵巢微血管,并进行定量分析；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢smad3的表达；逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)法检测smad3 mRNA在卵巢组织中的表达. 结果 免疫组织化学检测显示:与对照组比较,实验组卵泡smad3表达减弱,卵巢间质表达增强(P＜0.05),在各级卵泡及间质均有表达.实验组卵巢体积增大,卵巢间质微血管的密度增加(P＜0.05)；Western blot检测结果提示在实验组smad3表达上调；RT-PCR结果显示实验组卵巢组织中smad3 mRNA表达与对照组无显著性差异(P＞0.05). 结论 PCOS卵巢间质平均血管密度增加,smad3的表达变化可能与PCOS特殊卵巢病理改变有关.
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高雄激素PCOS动物模型中抗苗勒管激素Ⅱ型受体蛋白及其基因甲基化分析
目的 通过建立高雄激素诱导的多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型,探讨抗苗勒管激素Ⅱ型受体(AMHRⅡ)在卵巢、子宫内膜中的表达及其基因启动子区域甲基化与PCOS发病及局部病理变化的关系. 方法 45只雌性SD大鼠随机分两组:PC、OS组皮下注射脱氢表雄酮(DHEA)建立PCOS模型,对照组同期皮下注射等量生理盐水;测定血清激素水平,结合卵巢组织HE染色切片结构改变评估PCOS模型;免疫组化法检测卵巢、子宫内膜组织AMHRⅡ蛋白的表达与定位;通过甲基化特异性PCR(MSP)定性分析两组大鼠血液、卵巢组织AMHRⅡ基因启动子区域的甲基化状态. 结果 血清性激素水平及卵巢切片结果均提示成功建立PCOS动物模型;免疫组化检测显示AMHRⅡ蛋白定位表达于细胞膜,在卵巢间质及卵泡颗粒细胞中均存在阳性表达,且在模型组中的表达强于对照组(P＜0.05);AMHRⅡ在子宫内膜中也存在表达,两组之间表达无统计学差异(P＞0.05);MSP结果显示两组中血液及卵巢组织所有DNA样本均检出部分甲基化条带,两组之间无统计学差异(P＞0.05). 结论 AMHRⅡ可能参与了PCOS中AMH调控卵泡发育的过程,但与子宫内膜病变无明显相关性;AMHRⅡ基因在启动子区域存在着部分甲基化,但这种甲基化状态与PCOS发病及局部组织病理变化无明显相关.
关键词： 抗苗勒管激素Ⅱ型受体 多囊卵巢综合征 DNA甲基化 动物模型 -
高胰岛素血症与多囊卵巢综合征大鼠排卵障碍的相关性研究
目的 探讨高胰岛素血症参与多囊卵巢综合征(PCOS)排卵障碍的可能机制. 方法 (1)按改良Poretsky法建立PCOS动物模型,采用测定空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、睾酮(T)、雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH),并计算胰岛素抵抗指数(HOMA1-IR);HE染色观察卵巢病理变化验证模型.(2)采用免疫组织化学方法检测卵巢组织生长分化因子9(GDF-9)蛋白质的表达. 结果 (1)与正常对照组比较.高胰岛素血症组FBG、FINS、T、HOMA1-IR显著升高(P＜0.01).(2)高胰岛素血症组各发育阶段卵泡数明显减少,但囊性扩张的卵泡和闭锁卵泡增多,卵泡膜细胞增生,卵泡间的间质明显增厚.(3)高胰岛素血症组卵巢组织GDF-9蛋白质表达著低于正常对照组(P＜0.05). 结论 高胰岛素血症可能通过抑制GDF-9在卵巢组织的表达,使卵泡发育停滞、闭锁而导致排卵障碍.
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类固醇激素合成急性调节蛋白在大鼠多囊卵巢中的表达
目的 用脱氢表雄酮(DHEA)制造大鼠的多囊卵巢综合征(PCOS)模型,探讨类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)在多囊卵泡中的表达,及其和卵巢激素分泌及大鼠动情周期的变化关系.方法 用DHEA建立PCOS大鼠模型,放射免疫法检测血清孕酮(P)和雌二醇(E2)水平的变化,免疫组化和蛋白免疫印迹法检测类固醇合成因子-1 (SF-1)和StAR的表达.结果 PCOS组大鼠卵巢呈多囊样改变,血清E2显著高于对照(NC)组 (P<0.01),血清P无显著变化(P>0.05).SF-1和StAR蛋白表达均高于NC组(P<0.05).结论 在DHEA建立的PCOS大鼠模型中,StAR的表达升高受到SF-1的调控,但其表达在E2的生成中不起主要作用.
关键词： 多囊卵巢综合征 脱氢表雄酮 类固醇激素合成急性调节蛋白 -
罗格列酮对多囊卵巢综合征患者黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物-1和-2表达的影响
目的 探讨胰岛素增敏剂罗格列酮对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物(IRS)-1、-2表达的影响.方法 收集行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的9例PCOS患者(PCOS组)和12例排卵正常的输卵管性不育患者(对照组)促排卵后卵巢黄素化颗粒细胞行体外培养,并用罗格列酮处理48 h,采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法分别测定颗粒细胞IRS-1、-2 mRNA和蛋白的表达.结果 与对照组比较,PCOS组患者颗粒细胞IRS-1的表达升高,IRS-2表达降低(P<0.05);罗格列酮可显著降低PCOS患者黄素化颗粒细胞IRS-1 的表达(P<0.05),增加其IRS-2 的表达(P<0 05).结论 罗格列酮可以通过调整IRS-1/2的表达失衡,改善PCOS卵巢局部胰岛素抵抗.
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细胞色素P450芳香化酶在大鼠多囊卵巢中的表达及意义
目的 检测细胞色素P450芳香化酶(P450 arom)在大鼠多囊卵巢颗粒细胞中的表达水平,探讨P450 arom与多囊卵巢综合征(PCOS)的关系. 方法 应用半定逆转录-聚合酶链反应(RT-PcR)检测PCOS实验组及正常对照组大鼠卵巢组织中P450 arom基因(CYP19)的表达;采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法对大鼠卵巢组织中P450 arom进行检测. 结果 实验组和对照组卵巢组织中CYPl9基因,相对表达强度分别为(0.138±0.072)和(0.759±0.236),差别有显著性意义(P<0.01);实验组中原始卵泡、初级卵泡和成熟卵泡比较,P450 arom蛋白表达下降(P<0.05).对照组间初级卵泡、次级卵泡和成熟卵泡比较,arom蛋白表达有显著性差异(P<0.05). 结论 P450 arom mRNA在PCOS大鼠卵巢组织中呈低表达P450 atom蛋白在PCOS大鼠卵巢初级卵泡和成熟卵泡中表达下降;PCOS的发生可能与P450 arom在mRNA和蛋白水平的表达下调有关.
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颗粒蛋白前体在高脂饮食诱导的肥胖PCOS大鼠卵巢中的表达
目的 研究颗粒蛋白前体(PGRN)在肥胖PCOS大鼠卵巢中的表达情况,初步探讨PGRN在PCOS发病中的作用. 方法 选择SPF级23日龄SD雌性大鼠38只,使用随机数字表随机分为3组:正常对照组(n=8)、PCOS组(DHEA组,n=15)及肥胖PCOS组(DHEA+HFD组,n=15).采用脱氢表雄酮联合高脂饲料(DHEA+ HFD)诱导肥胖PCOS大鼠.HE染色光镜下观察PCOS大鼠卵巢的病理结构改变.酶联免疫吸附法测定血清睾酮(T)、雌二醇(E2)及空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)含量等,比较各组间的水平差异.采用免疫组织化学法检测各组卵巢PGRN的表达水平及分布情况. 结果 造模结束时,DHEA+ HFD组体重显著高于对照组(P＜0.01)及DHEA组(P＜0.05).DHEA组及DHEA+ HFD组的FINS、稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA IR)均显著高于对照组(P＜0.05).DHEA组及DHEA+ HFD组的睾酮(T)、FSH水平均显著升高(P＜0.01).DHEA组及DHEA+ HFD组卵巢组织光镜下均表现出典型的多囊样改变.免疫组化结果显示各组大鼠卵巢中均可见PGRN蛋白表达,主要分布于卵泡的颗粒细胞层及黄体;DHEA组PGRN表达水平显著高于对照组(P＜0.01),DHEA+ HFD组PGRN表达水平显著高于DHEA组及对照组(P＜0.01). 结论 PGRN在卵巢颗粒细胞层有表达.其在PCOS大鼠和肥胖PCOS大鼠卵巢组织中的差异性表达,提示PGRN可能通过作用于局部卵泡微环境,参与PCOS肥胖及慢性代谢性炎症的发生.
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多囊卵巢综合征患者血雄激素与胰岛素、黄体生成素水平关系的探讨
血高雄激素是多囊卵巢综合征(PCOS)的主要生化特征.以往认为高黄体生成素(LH)是PCOS高雄激素的主要因素,现在证明高胰岛素(INS)与高雄激素关系密切.为了进一步探讨高INS、高LH与高雄激素的关系,我们对PCOS患者的血激素水平进行了比较分析.
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79例多囊卵巢综合征患者血凊C肽水平测定分析
多囊卵巢综合征(PCOS)是一种以内分泌紊乱为主伴多种代谢异常的临床综合征,基本的病理生理改变为无排卵性月经异常及高雄激素血症.近年来的研究表明胰岛素抵抗 (IR) 与 PCOS 的发病过程相关, IR 可能是 PCOS 发生发展的重要因素之一, IR 所产生的代偿性高胰岛素血症,可引起糖代谢、脂代谢紊乱,增加心血管病的危险.我们对79例PCOS患者血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、泌乳素(PRL)、睾酮(T)、皮质醇(Cort)及C肽(C-peptide)、胰岛素(Ins)测定值进行了统计分析,以了解高Ins、C肽水平与高雄激素血症的关系.
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达英-35联合罗格列酮对多囊卵巢综合征胰岛素抵抗患者的临床疗效
多囊卵巢综合征(PCOS)是以高雄激素血症(HA)、胰岛素抵抗(IR)、高胰岛素血症和长期无排卵为特征的内分泌代谢性疾病.罗格列酮(RGZ)属噻唑烷二酮类药,可增加胰岛素敏感性,降低胰岛素水平.
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克罗米芬抵抗多囊卵巢综合征不孕患者的改良促排卵方案
多囊卵巢综合征(PCOS)是妇科内分泌临床常见疾病,是不排卵性不孕症患者的常见病因,成功地诱导排卵可使大部分女性获得妊娠.目前克罗米芬(CC)仍为一线促排卵药物,但其中有20％～25％的患者对CC无反应[1],对这部分患者临床常用尿促性素(HMG)递增方案或CC诱发排卵基础上继用HMG促排卵,并可得到理想结局,但部分患者仍表现为反应不佳而无优势卵泡发育,或有发生卵巢过度刺激(OHSS)倾向而放弃周期.有研究报道腹腔镜下卵巢打孔术后排卵率和妊娠率均较高,但目前资料表明,腹腔镜术后粘连仍然是一个不可忽视的问题[2].
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溴隐亭治疗难治性多囊卵巢综合征不育的临床观察
多囊卵巢综合征(PCOS)在育龄妇女中患病率为5%～10%,是引起无排卵性不育的主要原因[1].药物促排卵是治疗PCOS不育的首选方法,但是仍有60%～70%[2]的患者用药后无法妊娠,称之为难治性PCOS(intractable polycystic ovary syndrome).
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胰岛素抵抗多囊卵巢综合征不育患者不同促排卵疗效观察
多囊卵巢综合征(PCOS)以高雄激素和持续性无排卵为特征,在育龄妇女的发病率高达5%～10%[1,2],常与胰岛素抵抗(IR)、肥胖、高血压及血脂代谢异常有关.解决IR是治疗PCOS的关键,为此观察了二甲双胍类药物对PCOS患者的疗效.
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中药补肾联合促性腺激素治疗顽固性多囊卵巢综合征不育疗效观察
对我院应用中药补肾联合促性腺激素治疗多囊卵巢综合征(PCOS)合并不育的疗效,进行观察分析.一、资料与方法1.病例选择与分组:选择2001年5月至2005年5月就诊于我院不孕不育科经克罗米酚(CC)50 mg/d×5 d治疗＞3个周期,至少有一次CC 150 mg/d均未排卵的PCOS患者306例.
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二甲双胍治疗多囊卵巢综合征合并高胰岛素血症患者的临床研究
本研究通过二甲双胍提高胰岛素敏感性,观察在多囊卵巢综合征(PCOS)治疗过程中瘦素(leptin)、胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-1)及胰岛素样生长因子结合蛋白-1 (IGFBP-1)水平的变化及月经恢复、排卵和妊娠情况.
