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反相高效液相色谱法测定湿生扁蕾中木犀草素和1,7-二羟基-3,8-二甲氧(口山)酮的含量
目的 建立湿生扁蕾药材中木犀草素和1,7-二羟基-3,8-二甲氧基(口山)酮的含量测定方法.方法 采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),色谱柱为ZORBAX SB-C18(4.6mm× 250mm,5μm);流动相为甲醇(A)-0.4%磷酸水溶液(B)梯度洗脱,0～15 min,A∶B=50∶50,15～60 min,A∶B=55∶45;检测波长260 nm;流速1 mL/min;柱温30℃.结果 1,7-二羟基-3,8-二甲氧(口山)酮和木犀草素分别在0.084～0.84 μg和0.184～1.84 μg范围内线性关系良好,相关系数分别为0.999 4和0.999 7;平均回收率分别为96.82%和97.19%,RSD均小于3%.结论 该方法简便准确,重现行好,可作为湿生扁蕾药材的质量控制方法.
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藏药湿生扁蕾的化学成分研究Ⅰ
目的:对湿生扁蕾全草进行化学成分研究.方法:用常压硅胶柱和薄层色谱法分离,根据理化性质和波谱数据鉴定其结构.结果:分离得到了6个化合物,鉴定为1,7-二羟基-3,8-二甲氧基(口山)酮(Ⅰ),1-羟基-3,7,8-三甲氧基(口山)酮(Ⅱ),1,8-二羟基-3,7-二甲氧基(口山)酮(Ⅲ),1-羟基-3,7-二甲氧基(口山)酮(Ⅳ),β-谷甾醇(Ⅴ),胡萝卜苷(Ⅵ).结论:化合物Ⅲ～Ⅵ为首次从该植物中分离得到.
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藏药湿生扁蕾的化学成分研究
目的对湿生扁蕾全草进行化学成分研究.方法用柱色谱法分离化学成分,波谱法鉴定其结构.结果分离得到8个化合物,分别为三十烷醇(Ⅰ),齐墩果酸(Ⅱ),熊果酸(Ⅲ),1-羟基齐墩果酸(Ⅳ),kaneric acid(Ⅴ),木犀草素(Ⅵ),木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅶ),7,8-二羟基-3-甲氧基(口山)酮-1-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅷ).结论化合物Ⅰ,Ⅱ,Ⅳ,Ⅴ,Ⅶ,Ⅷ为首次从该植物中分离得到,其中化合物Ⅷ为首次从扁蕾属植物中分离得到,Ⅴ为首次从龙胆科植物中分离得到,Ⅳ为首次从天然产物中分离得到.
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基于药效学指标筛选藏药湿生扁蕾抗溃疡性结肠炎的活性成分
目的 研究藏药湿生扁蕾抗溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis,UC)肠纤维化的药效物质基础.方法 将藏药湿生扁蕾用乙酸乙酯萃取的活性提取物以硅胶色谱分离、薄层定性得到的活性部位,分别灌胃用2,4,6-三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulphonic acid,TNBS)诱导的大鼠UC肠纤维化模型,采用荧光定量RT-PCR检测大鼠结肠组织胶原Ⅰ mRNA、胶原ⅢmRNA、α-SMAmRNA、E-cadmRNA的表达,筛选其活性成分.结果 湿生扁蕾乙酸乙酯萃取物分离得到的活性部位经纯化得到4个单体化合物,用光谱分析等鉴定为1,8-二羟基-3,7-二甲氧基口山酮、1-羟基-3,7,8-三甲氧基口山酮、1,7-二羟基-3,8-二甲氧基口山酮和1-羟基-3,7-二甲氧基口山酮,4种单体化合物对UC肠纤维化大鼠模型均有明显的活性.结论 湿生扁蕾抗UC肠纤维化的物质基础集中在乙酸乙酯部位,活性成分主要体现为4种口山酮类化合物.
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蒙药扁蕾、湿生扁蕾、花锚生药学比较研究
目的:对扁蕾、湿生扁蕾、花锚进行生药学鉴别、确定有效活性成分和专属性薄层色谱方法.方法:采用常规药材软化、永久切片制作方法、生药学鉴别方法、薄层色谱法.结果:确定了显微鉴别特征指标;确定了专属性薄层色谱.结论:所建立的方法简便、准确、重复性好.
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不同产地藏药材湿生扁蕾中多糖的含量测定
目的:通过测定不同产地、不同采收期湿生扁蕾中多糖的含量,考察湿生扁蕾的佳佳产地与采收期.方法:用硫酸-苯酚法测定分析甘肃15个不同产地湿生扁蕾药材中多糖的含量.结果:15个不同产地湿生扁蕾药材中多糖的含量差别较大,高为2.98％(g·g-1),低为1.01％(g·g-1).结论:同一产地7月份以后采收的湿生扁蕾多糖的含量高；甘肃15个产地中以甘肃卓尼县口子下村产湿生扁蕾中多糖的含量高.
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藏药湿生扁蕾提取物对实验性大鼠溃疡性结肠炎肠纤维化的影响
探讨藏药湿生扁蕾提取物对实验性大鼠溃疡性结肠炎(UC)肠纤维化的影响.方法:用免疫结合化学刺激法复制大鼠UC肠纤维化模型,以复方鳖甲软肝片作为阳性对照药,观察各组大鼠体质量改变、疾病活动指数(DAI)与结肠组织学变化.结果:藏药湿生扁蕾提取物能够显著改善UC肠纤维化模型大鼠体质量的减轻,能使疾病活动指数(DAI)明显下降(P＜0.05)；并且能够显著改善UC肠纤维化模型大鼠结肠长度缩短与结肠重量的增加(P＜0.01)；明显改善结肠组织学损伤(P＜0.05).结论:藏药湿生扁蕾提取物对实验性大鼠溃疡性结肠炎肠纤维化有抑制作用,为寻找肠纤维化新的治疗方法提供理论依据.
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藏药湿生扁蕾提取物的止泻作用及其急性毒性研究
目的 研究湿生扁蕾提取物(GTP)的止泻作用及其急性毒性,为湿生扁蕾的开发利用提供理论依据.方法 采用番泻叶诱导的小鼠腹泻模型,以腹泻潜伏期和湿便总数为指标评价GTP的止泻作用；用Bliss法测定小鼠灌胃GTP的半数致死量(LD50).结果 GTP各剂量均有止泻作用；GTP的半数致死量为127.4g/kg.结论 GTP对番泻叶所致的小鼠腹泻有明显的对抗作用,表现在腹泻潜伏期延长和在相同时间内累积腹泻次数减少,且具有剂量依赖性；小鼠灌胃GTP的LD50 95％可信限为(116.6～139.4)g/kg,其急性毒性较低.
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HPLC测定湿生扁蕾中熊果酸和齐墩果酸的含量
湿生扁蕾(Gcntianopsis paludosa(munro)Ma.)为龙胆科扁蕾属植物,也叫沼生扁蕾.产于青海、西藏、四川等地,一年生草本,生于海拔1 180～4 600米的海滩,沼泽地,山坡草地.湿生扁蕾全草入药,具有镇咳,止痛,清热解毒,利湿消黄,健脾止泻等功效[1].
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复方湿生扁蕾提取液镇痛、抗炎及急性毒性研究
目的 研究复方湿生扁蕾提取液的镇痛、抗炎作用,并考查其单次给药的急性毒性反应,为临床用药提供一定的理论依据.方法 通过热板致小鼠疼痛、二甲苯致小鼠耳肿胀模型,观察复方湿生扁蕾提取液对小鼠的镇痛、抗炎作用;通过单次以大灌胃体积不同浓度给药观察该复方提取液对小鼠的急性毒性.结果 本复方提取液具有一定的镇痛、抗炎作用,复方组给药前后的痛阈差值与空白对照组相比具有显著性差异(P<0.01),复方组对二甲苯致小鼠耳肿胀抑制率达31.7%.100、120 g·kg-1剂量组给药后4 h之内部分小鼠出现昏睡、萎靡少动、进食减少、稀便、反应迟钝等临床症状,这些症状在2d内逐渐消失.观察期间这两复方组体重增长缓慢,观察结束后剖检主要脏器未见肉眼可见病变.结论 在100、120 g·kg-1剂量下发现对小鼠体重具有不良影响,未发现致小鼠死亡及器官性病变的毒性作用,其LD50大于120 g·kg-1,安全性较好,可一定程度上为临床用药提供实验依据.
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藏药湿生扁蕾提取物通过 NF －κB 通路诱导结肠癌细胞凋亡的机制研究
目的：探讨藏药湿生扁蕾提取物通过 NF －κB 信号通路诱导结肠癌 SW480细胞凋亡的作用及其机制。方法本研究用不同浓度的藏药湿生扁蕾提取物处理结肠癌 SW480细胞，通过 JC －1染色检测 SW480细胞线粒体膜电位的变化，通过 Hoechst 染色以判断藏药湿生扁蕾提取物是否具有诱导结肠癌细胞 SW480细胞凋亡效应。同时检测 NF －κB 蛋白的表达，用以明确 NF －κB 信号通路在结肠癌发生中的作用机制。结果经一定浓度的湿生扁蕾提取物处理后的 SW480细胞内，NF －κB 的表达明显下调，染色现象揭示湿生扁蕾提取物具有促进肿瘤细胞凋亡的作用。结论湿生扁蕾提取物可以在体外诱导肿瘤细胞凋亡，其抗肿瘤机制是通过 NF －κB 信号通路介导的。
关键词： 湿生扁蕾 结肠癌 细胞凋亡 NF -κB 信号通路 -
基于qRT-RNA技术筛选藏药湿生扁蕾抗溃疡性结肠炎肠纤维化活性成分的研究
目的：研究藏药湿生扁蕾抗溃疡性结肠炎肠纤维化的药效物质基础。方法采用2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的大鼠溃疡性结肠炎肠纤维化模型，灌胃给予藏药湿生扁蕾用乙酸乙酯萃取的活性提取物，以硅胶色谱分离、薄层定性得到的活性部位，采用荧光定量 RT-PCR 法检测大鼠结肠组织胶原ⅠmRNA、胶原Ⅲ mRNA、α-SMA mRNA、E-cad mRNA 的表达，筛选其活性成分。结果湿生扁蕾乙酸乙酯萃取物分离得到的活性部位经纯化得到4个单体化合物，用光谱分析等鉴定为1-hydroxy-3，7，8-Trimethoxyxanthones、1，8-Dihydroxy-3，7-Dimethoxyx-anthones、1-hydroxy-3，7-Dimethoxyxanthones 和1，7-Dihydroxy-3，8-Dimethoxyxanthones，4种单体化合物对溃疡性结肠炎肠纤维化大鼠模型均有明显的活性。结论湿生扁蕾抗溃疡性结肠炎肠纤维化的物质基础集中在乙酸乙酯部位，活性成分主要体现为4种酮类化合物。
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藏药湿生扁蕾对三硝基苯磺酸诱导的大鼠溃疡性结肠炎模型的影响
目的 观察藏药湿生扁蕾提取物(GTP)时实验性结肠炎大鼠过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平的影响.方法 采用三硝基苯磺酸(TNBS)乙醇溶液灌肠制备大鼠实验性结肠炎(UC)模型,以正常大鼠、UC模型大鼠作对照,从大鼠结肠组织形态学改变及结肠组织髓 MPO、SOD)活性和MDA水平等方面,考察GTP对大鼠UC的影响.结果 UC模型组的SOD活性显著低于正常组(P<0.05),MPO活性、MDA水平显著高于正常组(P<0.05);GTP各剂量组大鼠结肠组织大体形态和组织学损伤明显改善(P<0.05),SOD活性显著高于UC模型组(P<0.05),MPO活性、MDA水平显著低于UC模型组(P<0.05),与治疗药柳氮磺胺吡啶(SASP)比较无显著性差异(P>0.05).结论 藏药湿生扁蕾提取物对TNBS诱导的大鼠溃疡性结肠炎有一定的治疗作用,抗氧化应激可能是其作用机制之一.
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藏药湿生扁蕾的抑菌作用研究
目的 探讨湿生扁的体外抑菌作用.方法 用K-B纸片扩散法和生长速率分别研究了湿生扁蕾对细菌和真菌的抑制作用.结果 湿生扁蕾的提取物和各部位对供试菌都有一定的抑制作用,其中对辣椒疫霉的抑制作用强;氯仿部位的抑菌作用则好.结论 湿生扁蕾在体外有明显的抑菌作用.
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基于药效学与毒理学结合的湿生扁蕾与苦豆子配伍比例的优选
目的:探讨湿生扁蕾与苦豆子的优配伍比例,为临床安全合理用药提供理论依据.方法:采用热板致小鼠疼痛、琼脂致小鼠肉芽肿、三硝基苯磺酸致大鼠腹泻的动物模型,观察湿生扁蕾与苦豆子不同配伍提取物的镇痛、抗炎、止泻作用;并观察湿生扁蕾与苦豆子不同配伍提取物对小鼠的急性毒性.结果:随着湿生扁蕾配伍比例的增加,其配伍提取物的镇痛、抗炎、止泻效果明显增强;随着苦豆子配伍比例的增加,其配伍提取物的镇痛、抗炎效果也明显增强,但止泻作用增强不明显;灌胃给药未测得半数致死量(LD50),灌胃给药的大耐受量(MTD)为32.0 g/kg,是成人临床拟日用剂量的106倍.结论:该实验采用药效学与毒理学结合的方法,综合评价优选的湿生扁蕾与苦豆子配伍比例为20∶1,与临床拟日用剂量完全吻合.
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藏药湿生扁蕾抗大鼠实验性溃疡性结肠炎有效部位筛选研究
目的:通过比较湿生扁蕾乙醇提取物各极性组分抗大鼠实验性溃疡性结肠炎的效果,筛选出湿生扁蕾抗溃疡性结肠炎的有效部位.方法:乙醇回流提取湿生扁蕾,提取液浓缩并经石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,得到极性不同的5部分产物.用三硝基苯磺酸(TNBS)乙醇溶液复制大鼠UC模型,以柳氮磺胺吡啶(SASP)作为阳性对照药,观察各组大鼠腹泻与粪便隐血的动物数、结肠组织形态学与组织内髓过氧化物酶(MPO)活性的变化.结果:乙醇提取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物能显著减少UC模型大鼠发生腹泻与粪便隐血的动物数(P＜0.05)；并且能显著改善UC模型大鼠结肠局部组织形态学损伤；能显著降低UC模型大鼠结肠组织中MPO的水平(P＜0.05)；与阳性对照药柳氮磺胺吡啶比较无显著性差异.结论:湿生扁蕾抗溃疡性结肠炎的活性成分在氯仿及乙酸乙酯萃取物中含量较高,可对这2个组分作进一步的分离筛选研究.
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药理效应法评价藏药湿生扁蕾的提取工艺
目的:研究藏药湿生扁蕾的提取工艺.方法:采用小鼠耳廓二甲苯致炎、角叉菜胶致大鼠足跖肿胀、大鼠干酵母致热、小鼠热板致痛及电刺激致痛试验,观察湿生扁蕾不同工艺提取物对抗炎、镇痛、解热作用的影响.结果:湿生扁蕾不同工艺提取物均有抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀、角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的作用;水提取物、乙醇提取物和微波提取物均可提高小鼠热板致痛的痛阈,但超临界CO2提取物镇痛效果不明显;乙醇提取物和微波提取物对小鼠电刺激致痛显示明显的镇痛作用,水提取物和超临界CO2提取物镇痛效果不明显;湿生扁蕾不同工艺提取物对于酵母所致大鼠发热均有明显的解热作用.结论:湿生扁蕾乙醇提取物的抗炎、镇痛、解热作用显著,其药理效应明显优于水提、超临界CO2提取及微波提取.
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湿生扁蕾和苦豆子配伍的提取工艺优选
目的:采用正交设计优选湿生扁蕾和苦豆子配伍的佳提取工艺.方法:前期本课题组已研明湿生扁蕾和苦豆子佳配伍比例为20∶0.9,适用80％乙醇提取.本研究选取乙醇用量、提取时间、提取次数3个因素,采用L9(34)设计正交试验,以湿生扁蕾中木犀草素和当药醇苷的含量结合干膏率作为综合评价指标,进行提取工艺优选.结果:佳提取工艺为采用8倍量的80％乙醇,提取2次,每次90 min,该结果在验证试验中得到验证.结论:正交设计优选的提取方法稳定可靠,评价指标可控,是湿生扁蕾和苦豆子配伍的理想的提取方法.
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藏药湿生扁蕾与獐牙菜的相关本草考证
目的：为辨别使用和正确开发藏药湿生扁蕾与獐牙菜提供参考。方法：通过查阅古籍和译本，以“Swertia”“Effect”“Com-ponent”“湿生扁蕾”“獐牙菜”“化学成分”等为关键词，组合检索1986年1月－2016年1月在PubMed、Web of Science、中国知网、万方、维普等数据库中有关湿生扁蕾和獐牙菜化学成分、药理作用的相关文献，重点对二者在功效方面的基源归属、生境差异、化学成分进行整理。结果与结论：共查阅到相关文献95篇，其中有效文献29篇。在藏医药本草和译著里关于治疗“赤巴”“胆热”的湿生草类的功效基源归属更多趋向于獐牙菜（印度獐牙菜、川西獐牙菜、藏獐牙菜），而非湿生扁蕾，提示今后尚需进一步开展对二者细分差异化的研究。二者在生境、化学成分上的相似，为其药效一致性提供了依据。由于湿生扁蕾分布较局限，獐牙菜类种属较多、分布广泛，可从化学成分、药理作用进一步研究，以确定獐牙菜是否可以部分或完全替代藏药湿生扁蕾。
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湿生扁蕾对结肠癌微环境中HMSCs恶性增殖以及CD34、CD90的影响
目的:探究湿生扁蕾乙酸乙酯部位对结肠癌微环境中人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,HMSCs)恶性增殖及表面标志分子CD34、CD90表达的影响.方法:通过MTT法筛选湿生扁蕾乙酸乙酯部位作用于SW480细胞和HMSCs的佳给药剂量.建立SW480和HMSCs细胞Transwell非接触共培养模型,将试验分为正常对照组、肿瘤细胞对照组、共培养组和湿生扁蕾给药组,分别采用细胞计数试验、流式细胞术FCM观察各组细胞的增殖、周期及HMSCs表面标志分子CD34和CD90的表达情况.结果:湿生扁蕾乙酸乙酯部位佳给药剂量为200μg/ml,100μl.与正常对照组相比,共培养组HMSCs增殖能力增强,G1期细胞比例明显降低,S期和G2/M期细胞比例明显升高,且HMSCs表面标志分子CD34阳性表达率升高,CD90阳性表达率降低.与共培养组相比,湿生扁蕾给药组HMSCs增殖能力降低,G1期细胞比例明显升高,S期和G2/M期细胞比例明显降低,且HMSCs表面标志分子CD34阳性表达率降低,CD90阳性表达率升高.结论:结肠癌微环境中HMSCs增殖能力增强,且HMSCs表面标志分子阳性表达率发生显著改变,提示HMSCs发生恶性增殖,且湿生扁蕾乙酸乙酯部位可抑制结肠癌微环境中HMSCs的恶性转变.
