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电针对SAMP8小鼠行为学和ADAM10、ADAM17在大脑皮层表达的影响
目的:通过对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠SAMP8行为学观察和ADAM10和ADMA17在小鼠大脑皮层的表达,探讨电针干预AD的疗效及作用机制,并比较电针与药物治疗AD的差异.方法:8月龄SAMP8小鼠30只,随机分为模型组、电针组、药物组,每组10只,以SAMR1小鼠10只作为空白组;采用Morris水迷宫进行空间记忆行为学测试,以免疫组化法观察ADAM10、Western blot检测ADAM17的表达情况.结果:Morris水迷宫检测显示:模型组与空白组比较,逃避潜伏时增加、目标象限游泳路程明显减少(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,电针组、药物组逃避潜伏时明显减少(P＜0.05),目标象限游泳路程明显增加(P＜0.05,P＜0.01);药物和电针干预AD模型小鼠,均能增加ADAM10和ADMA17在SAMP8小鼠大脑皮层的表达(P＜0.01).结论:电针可以改善AD模型的学习记忆能力,可能通过上调ADAM10和ADMA17在SAMP8小鼠大脑皮层的表达,从而发挥治疗痴呆的作用.
关键词： 阿尔茨海默病 皮层 α分泌酶 电针 解聚素金属蛋白酶10 解聚素金属蛋白酶17 -
浅谈PIMT在阿尔兹海默病中作用机制
阿尔兹海默病(AD)严重影响现代老年人生活质量,其治疗成为研究热点问题.蛋白L型异天冬氨酰基/D型天冬氨酰基邻甲基转移酶(PIMT)对AD中淀粉样β蛋白沉积起到抑制作用,其过程包括对异天冬氨酸的修复功能和对α分泌酶表达的调节,为AD治疗提供一个新的方向.
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去整合素和金属蛋白酶10与阿尔兹海默病的研究进展
去整合素和金属蛋白酶（ a disintegrin and metalloprotease ， ADAM）家族为一个包含了三十多个成员的家族，它们在细胞黏附、细胞迁移、白细胞募集、炎症、蛋白水解等方面发挥各自的作用［1］。 ADAM10为ADAM家族中一员，早从牛的脑髓鞘膜中分离纯化所得，当时被称为哺乳动物整合素金属蛋白［2］，其后实验发现其为细胞质髓鞘碱性蛋白酶［3］；随后的研究显示 AD-AM10在人的大脑［4］及外周结构［5］均有表达；而在过表达AD-AM10 cDNA的HEK293细胞中首次证实ADAM10具有切割APP的α分泌酶活性［6］。其后，Postina等［7］将阿尔兹海默病（Alzhei-mer disease，AD）小鼠与ADAM10转基因小鼠杂交，发现小鼠脑内淀粉样斑块明显减少，而α分泌酶切割淀粉样前体蛋白（ amy-loid precursor protein ，APP）所产生的可溶性片段APPsα增多，杂交小鼠的学习及记忆能力均有所增强；与此相反，ADAM10突变小鼠的APPsα减少，淀粉样斑块增多，学习能力降低［8］。上述结果表明，ADAM10是一种功能性的分泌酶，其对APP的加工可抑制淀粉样斑块的形成。
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阿尔茨海默病中α分泌酶的研究进展
阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种常见的神经系统退行性疾病.现有研究证实淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)代谢紊乱是导致AD发病的核心环节[1],其中α、β分泌酶功能是决定APP代谢途径的关键.近年来随着对α分泌酶研究的深入,研究者逐渐认识到其可能成为AD治疗的一个重要的靶点而具有深远的临床应用价值.我们主要针对α分泌酶构成、活化途径及激活剂的研究作一概述.
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β片层阻断肽H102对双转基因AD小鼠海马脑区APP代谢酶的影响
目的:探讨β片层阻断肽H102对APP/PS1双转基因小鼠(AD小鼠)海马脑区β淀粉样蛋白前体蛋白(APP)代谢分泌酶以及学习记忆能力的影响.方法:将6月龄大小的30只AD模型小鼠随机分为AD组和H102组,相同月龄、数量和背景的C57BL/6J小鼠作为对照组(n=15).H102组每日经鼻腔给予H102溶液(5.8 mg/kg)5 μl,对照组及AD组每日给予辅料溶液5 μl.给药30 d后,使用Morris水迷宫的方法检测各组小鼠的空间记忆能力变化,采用免疫组织化学方法及Western blot技术测定海马脑区α分泌酶(ADAM10和ADAM17)、β分泌酶(BACE1)及γ分泌酶(PS1,APH1a,PEN2)在小鼠海马中的表达.结果:与对照组比较,AD组小鼠海马脑区BACE1、PS1、PEN-2、APH1-a蛋白表达显著升高,ADAM10、ADAM17蛋白表达显著降低(P＜0.05);与模型组相比,H102能够明显提高AD小鼠的空间学习记忆能力,明显降低海马脑区BACE1、PS1、PEN-2、APH1-a蛋白的表达,明显提高ADAM10、ADAM17蛋白的表达(P＜0.05).结论:β片层阻断肽H102能够减少海马脑区Aβ的生成,提高海马脑区α分泌酶的活性,降低β和γ分泌酶的活性,改善AD小鼠的学习记忆能力.
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雌二醇对大鼠皮质原代神经元α分泌酶活性的影响
目的:探讨雌二醇对α分泌酶活性的影响及其可能机制.方法:雌二醇作用于大鼠皮质神经元8 h,采用MTT法检测其对细胞活力的影响,应用荧光法检测其对α分泌酶活性的影响,应用Western Blot检测其对可溶性淀粉样前体蛋白(sAPPα)分泌的影响;并检测丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)抑制剂PD98059对雌二醇引起的α分泌酶活性的影响和各种条件下雌二醇对磷酸化和非磷酸化的MAPK活性的影响.结果:1～500μmol/L雌二醇对大鼠皮质神经元细胞活力无明显影响(F=2.101,P＞0.05),但其可呈剂量依赖性地增加α分泌酶的活性(F=10.368,P＜0.05),其中100 μmol/L的雌二醇可使α分泌酶活性增加至对照组的(150.4±15.1)%(P＜0.05).1～100μmol/L的雌二醇均促进sAPPα的分泌(F=86.360,P＜0.05),100 μmol/L的雌二醇使sAPPα分泌增加至对照组的(270.5±25.6)%(P＜0.05).与雌二醇相比,加入PD98059后α分泌酶活性降至(124.1±13.5)%(F=43.699,P＜0.05).100 μmol/L的雌二醇使磷酸化MAPK的活性增加至对照组的(160.6±18.3)%(P＜0.05),此种作用能被PD98059部分拮抗(120.8±15.5)%(F=22.700,P＜0.05);在各种条件下,对非磷酸化MAPK的活性无明显影响(F=2.063,P＞0.05).结论:雌二醇可以增加α分泌酶活性,而激活MAPK可能是其增加α分泌酶活性的机制之一.
关键词： 雌二醇 α分泌酶 丝裂原活化的蛋白激酶 阿尔茨海默病 大鼠 -
齐墩果酸对阿尔茨海默病模型大鼠海马区ADAM10、sAPPα及凋亡相关蛋白bax和bcl-2表达的影响
目的 观察齐墩果酸对阿尔茨海默病模型大鼠海马区α分泌酶(ADAM10)、可溶性淀粉样前体蛋白(sAPPα),以及凋亡相关蛋白bax、bal-2表达的影响,初步探讨齐墩果酸治疗AD可能性作用机制.方法 将30只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组和齐墩果酸组.除假手术组外其他两组采用右侧侧脑室注射聚集态β-淀粉样蛋白片段25-35(Aβ25-35)片段,造模成功后齐墩果酸组按照20mg·kg-1予以齐墩果酸灌胃,假手术组和模型组予同体积蒸馏水灌胃,灌胃1次/d,连续4周.采用Western bolt检测大鼠海马区ADAM10、sAPPα、bax、bcl-2蛋白的表达.结果 与假手术组相比,模型组海马区ADAM10、sAPPα、bcl-2蛋白表达显著下降,差异具有统计学意义(P ＜0.05);bax表达量显著升高,差异具有统计学意义(P＜0.05);与模型组相比,齐墩果酸组大鼠海马区ADAM10、sAPPα、bcl-2蛋白表达显著增加,差异具有统计学意义(P ＜0.05);bax表达显著下降,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 补肾中药女贞子有效成分齐墩果酸可通过促进AD模型大鼠海马区ADAM10、sAPPα、bcl-2蛋白的表达,抑制bax蛋白的表达进而达到神经保护的作用.
关键词： 阿尔茨海默病 齐墩果酸 α分泌酶 可溶性淀粉样前体蛋白 凋亡相关蛋白 -
α-分泌酶与阿尔茨海默病的治疗
淀粉样前体蛋白(APP)在脑内经β和γ分泌酶的作用生成β淀粉样蛋白(Aβ),也可在α和γ分泌酶的作用下从Aβ序列内部进行降解,生成sAPPα而避免Aβ的生成,sAPPα可对神经细胞产生神经营养和神经保护作用.Aβ在脑内沉积从而对细胞造成毒性作用即Aβ毒性学说被认为是阿尔茨海默病(AD)发病机制之一.目前AD的治疗策略主要集中于抑制β分泌酶和γ分泌酶的研究.新近的研究显示,一类属于解聚素和金属蛋白酶(主要指ADAM10、ADAM 17和ADAM 9)分子具有α分泌酶的功能,提高α分泌酶的表达可以降低Aβ,有可能在AD的治疗中具有潜在作用.
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三七总皂苷对快速老化SAMP8小鼠大脑α分泌酶含量及活性的影响
目的:研究三七总皂苷(PNS)对快速老化SAMP8小鼠大脑α分泌酶含量和活性的影响.方法:采用快速老化痴呆模型小鼠SAMP8,将其随机分为模型组、PNS高剂量组(200 mg/kg)、PNS低剂量组(100 mg/kg)和石杉碱甲组(0.3 mg/kg),8只/组,对照组给予给药组相同容积的双蒸水灌胃.每天灌胃1次,连续给药2个月.分别采用western blot和直接免疫荧光法检测三七总皂苷对快速老化SAMP8小鼠大脑α分泌酶(ADAM 9、AD-AM10、ADAM17)的影响.结果:western blot结果显示PNS高、低剂量组ADAM10和ADAM17蛋白表达均低于模型组(P＜0.05),而ADAM9蛋白表达量均高于模型组(P＜0.05)；石杉碱甲组ADAM17、ADAM9蛋白表达量均高于模型组(P＜0.05),而ADAM10蛋白表达则低于模型组(P＜0.05).直接免疫荧光法结果显示PNS高、低剂量组和石杉碱甲的RFU值均高于模型组(P＜0.01).结论:三七总皂苷可以通过提高α分泌酶中的ADAM9的含量,石杉碱甲则可能通过提高ADAM9和ADAM 17的含量,从而提高SAMP8小鼠大脑α-Secretase的活性.
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Ac-HF对Aβ1-42致大鼠皮质原代神经元损伤的保护作用及对α分泌酶活性的影响
目的 探讨贯叶金丝桃素乙酸酯(hyperforin acetate,Ac-HF)对β淀粉样肽(Aβ)1-42毒性损伤大鼠原代培养大脑皮层神经元的作用及对α分泌酶活性的影响及可能机制.方法 采用大鼠原代培养皮层细胞,用MTT法观察Ac-HF对Aβ1-42毒性损伤后的神经细胞活力的影响.用ELASA检测其对α分泌酶活性及可溶性淀粉样前体蛋白(sAPPα)分泌的影响,应用Western blot检其对淀粉样前体蛋白(APP)及解聚金属蛋白酶(a disintegrin and metalloproteinas,ADAM)10表达的影响;并观察Calphostin C(Cal.C)对Ac-HF这些作用的影响.结果 0.1～10.0 μmol/L Ac-HF无细胞毒性(P＞0.05),1.0～50.0 μmol/L Ac-HF可增加Aβ1-42毒性损伤的大鼠皮层神经细胞的活力(P＜0.05),0.1～10.0 μmol/L Ac-HF可使α分泌酶活性增加,sAPPα分泌增多,对APP蛋白表达无影响,使ADAM10表达增多,PKC抑制剂Calphostin C(Cal.C)可抑制Ac-HF对α分泌酶的活性,sAPPα分泌及ADAM10表达的影响.结论 1.0～10.0 μmol/L Ac-HF对Aβ1-42毒性损伤的大鼠皮层神经细胞有保护作用,Ac-HF可通过增加α分泌酶活性及sAPPα分泌产生保护作用,这一作用可能是通过激活PKC通路增加ADAM10表达.
