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健骨颗粒乙酸乙酯萃取部位对卵巢切除大鼠骨质量的影响
目的:研究健骨颗粒乙酸乙酯萃取部位对卵巢切除大鼠骨质量的影响.方法:采用切除雌性SD大鼠双侧卵巢建立绝经后骨质疏松症模型.运用双能X线4500W骨密度仪测定骨密度,万能材料试验机检测骨组织的大载荷.骨组织石蜡包埋切片后行Masson染色,观察骨组织形态,并做骨小梁面积百分比计量.通过酶联免疫吸附法检测血清中的骨碱性磷酸酶(BALP)、雌二醇(E2)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的含量.结果:与空白组比较,乙酸乙酯组术后4、12周BMD显著升高(P＜0.01),术后12周胫骨三点抗弯大载荷显著升高(P＜0.01),术后8、12周腰椎、胫骨近干骺端骨小梁面积百分比及血清E2水平显著升高(P＜0.01),术后12周血清BALP水平显著升高(P＜0.01),术后8周血清TRAP水平显著下降(P＜0.05).结论:健骨颗粒乙酸乙酯萃取部位能有效的改善卵巢切除术后大鼠机体的骨代谢水平,改善骨质量.
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健骨颗粒对体外破骨细胞整合素αV及β3mRNA表达的影响
目的:探讨补肾健脾中药健骨颗粒对体外破骨细胞整合素(Itg) αv、β3mRNA表达的影响.方法:采用破骨前体细胞系诱导培养法,通过M-CSF和RANKL诱导剂诱导RAW264.7细胞,分化为成熟破骨细胞.分别用健骨颗粒含药血清和生理盐水血清干预,运用实时荧光定量PCR法检测Itgαv、β3mRNA表达,并取骨片行甲苯胺蓝染色,骨陷窝和骨吸收面积计算分析.结果:经M-CSF和RANKL诱导后,RAW264.7细胞的形态特征、TRAP染色均符合成熟破骨细胞特异性表现;含药血清组破骨细胞Itgαv、β 3mRNA表达水平明显低于生理盐水血清组(P＜0.05),同时骨磨片的骨吸收陷窝数和面积亦呈同样变化趋势.结论:RAW264.7细胞经诱导分化后可以获取成熟破骨细胞;健骨颗粒能有效抑制破骨细胞Itgαv、β3mRNA表达,影响破骨细胞功能活性.
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健骨颗粒对成骨细胞分化的影响
目的:观察健骨颗粒对成骨细胞分化过程的影响.方法:取第3代SD大鼠颅骨成骨细胞,生理盐水血清组加入生理盐水血清;含药血清组加入佳浓度的健骨颗粒颗粒含药血清;MTT法检测佳含药血清浓度;运用采用ELISA法检测成骨细胞OCN的表达,采用比色法测羟脯氨酸(HYP)、碱性磷酸酶(AKP),实时荧光定量PCR-SYBR GREEN法检测核心结合因子(Cbfα1)、Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、成骨转录因子(OSX)mRNA的表达.取第4代细胞采用茜素红染色法染色矿化结节.结果:MTT法检测显示含药血清佳浓度为20％;钙化结节观察显示含药20％组先出现矿化结节,结节数量增多;含药血清组细胞液内OCN、AKP和HYP含量高于生理盐水血清组(P＜0.05);Real-time PCR检测结果显示含药血清组Cbfα1、Col Ⅰ、OSX基因mRNA的相对表达水平明显高于生理盐水血清组(P＜0.05).结论:健骨颗粒含药血清能提高体外培养成骨细胞中矿化结节的数量、AKP、HYP、OCN的含量、Col Ⅰ、Cbfα1、OSX mRNA的表达,促进成骨细胞增殖,加快细胞分化.
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健骨颗粒对大鼠骨组织端粒酶逆转录酶增龄性变化的干预作用
目的:探讨健骨颗粒对雌激素介导的骨组织端粒酶逆转录酶增龄性变化的干预作用.方法:6、7、10、15月龄SD大鼠雌雄各半,6月龄组直接处死取材,其余各组均随机分为健骨颗粒组和生理盐水组,雌雄各半,灌胃3个月后处死取材.左侧股骨行X线摄片.第5腰椎行HE染色及图像分析.ELISA法检测血清中的BGP、TRACP5b、E2、T和TNF-α含量.SYBR GREEN法检测第1腰椎中TERT、ER和NF-κB mRNA表达.Western blot法检测第2腰椎TERT、ERα蛋白的表达.结果:血清中BGP、TRACP5b、E2、T随月龄增大降低,且生理盐水组低于健骨颗粒组(P＜0.01,P＜0.05).TNF-α随着月龄增大逐渐升高,生理盐水组高于健骨颗粒组(P＜0.01,P＜0.05).骨组织中ERα、TERT mRNA与蛋白表达均随月龄的增长而降低,生理盐水组明显低于健骨颗粒组(P＜0.0,P＜0.05).NF-κB的mRNA表达随月龄增长逐渐升高,且生理盐水组明显高于健骨颗粒组(P＜0.01).腰椎椎体及股骨头骨小梁随月龄增加逐渐出现骨质疏松的病理形态改变,且生理盐水组较健骨颗粒组明显(P＜0.01).结论:健骨颗粒能在一定程度上提高大鼠体内E2、T水平,从而有效激活骨组织TERT使成骨细胞端粒酶活性增加,减缓成骨细胞凋亡进程.
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健骨颗粒对维甲酸致骨质疏松模型大鼠的影响
目的:探讨健骨颗粒对维甲酸致骨质疏松模型大鼠的影响.方法:建立维甲酸致骨质疏松大鼠模型,并进行药物干预.28d后分别运用双能X线骨密度仪、放射免疫分析法、酶联免疫吸附法和骨组织形态学等手段,观察各组模型大鼠的骨密度(BMD)、骨形态结构及血清甲状旁腺素(PTH)、绒毛膜促甲状腺激素(CT)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等指标变化情况.结果:健骨颗粒组股骨颈骨密度和血清CT水平显著升高(P＜0.05,P＜0.01),而PTH、TNF-α浓度低于模型组,骨小梁结构明显优于模型组.结论:健骨颗粒能有效控制维甲酸致骨质疏松模型大鼠的骨量丢失,抑制骨吸收,促进骨形成,改善骨代谢负平衡状态,有效防治维甲酸导致的骨质疏松症.
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健骨颗粒对去卵巢骨质疏松模型大鼠骨质量的影响
目的探讨健骨颗粒对骨质疏松模型大鼠骨质量的影响.方法运用切除大鼠卵巢方法建立去卵巢骨质疏松症模型,应用双能X线骨密度仪测定骨密度;运用不脱钙骨切片、甲苯胺蓝染色观察胫骨上端组织结构并作形态计量;运用光测弹性仪加力架测定第1腰椎压缩强度极限和弹性模量,以及股骨弯曲破坏荷载.结果健骨颗粒能有效提高模型大鼠骨密度、骨小梁面积和骨皮质厚度/髓腔直径比值,提高椎体骨压缩强度极限和股骨弯曲破坏荷载.结论健骨颗粒在增加骨质疏松模型大鼠骨密度的同时,能有效改善骨组织的结构状况,提高骨骼生物力学性能,提高骨质量.
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健骨颗粒对去卵巢骨质疏松模型鼠尿脱氧吡啶酚及骨组织整合素β1 mRNA表达的影响
目的从分子水平及骨代谢角度探讨健骨颗粒对成骨细胞功能的调控作用以及对骨吸收的影响.方法通过切除大鼠卵巢建立骨质疏松模型,药物干预,分别运用酶联免疫吸附法和原位杂交等手段,检测模型鼠尿脱氧吡啶酚(D-Pyr)水平和骨组织整合素β1(Itgβ1)mRNA表达.结果切除卵巢后模型鼠尿D-Pyr水平明显升高(P＜0.01),骨组织成骨细胞Itgβ1 mRNA表达降低.健骨颗粒治疗12周,骨质疏松模型鼠尿D-Pyr水平明显下降(P＜0.05),而骨组织成骨细胞数量以及Itgβ1 mRNA表达均显著增加.结论健骨颗粒通过降低骨质疏松模型鼠骨基质中Ⅰ型胶原纤维的分解代谢,提高成骨细胞的成骨活性,从而改善或扭转因E2下降出现的成骨不足病理态势,发挥"健骨"之功.
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健骨颗粒对去卵巢大鼠骨质疏松症预防作用的研究
目的:探讨健骨颗粒对实验性Ⅰ型原发性骨质疏松症的预防作用.方法:运用切除大鼠卵巢方法建立去卵巢骨质疏松症模型,采用双能X线骨密度测定法和放射免疫分析法等,检测实验鼠骨骼密度、血清骨钙素、雌二醇、降钙素水平以及子宫指数.结果:健骨颗粒可明显升高骨密度和子宫指数,提高血清雌二醇、降钙素水平,降低骨钙素含量.结论:健骨颗粒可通过调节机体相关内分泌功能,有效协调钙调节激素,降低骨的转换率,增加骨密度,对Ⅰ型原发性骨质疏松有预防或延缓发生的作用.
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健骨颗粒含药血清对体外破骨细胞CAⅡ、CK、MMP-9mRNA表达的影响
目的 通过观察补肾健脾中药健骨颗粒含药血清对体外破骨细胞CA Ⅱ、CK、MMP-9mRNA表达的影响,进一步揭示健骨颗粒有效防治绝经后骨质疏松症的作用机制.方法 用M-CSF和RANKL诱导破骨前体细胞RAW264.7分化为成熟破骨细胞,alamarBLue法检测破骨细胞血清干预的佳浓度,于破骨细胞培养第7天开始干预,分别用25％浓度的健骨颗粒含药血清和25％浓度的生理盐水血清干预,培养48小时后抽提总RNA,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、实时荧光定量SYBRGREEN法检测CA Ⅱ、CK、MMP-9mRNA表达,并取骨片行甲苯胺蓝染色,计算分析骨陷窝数和骨吸收面积,同时运用氧化显色法检测破骨细胞培养液中TRAP含量,ELISA法检测骨磨片培养液中CTx含量.结果 健骨颗粒含药血清组破骨细胞CA Ⅱ、CK、MMP-9mRNA表达水平明显低于生理盐水血清组(P＜0.05),含药血清组骨磨片的骨陷窝数和骨吸收面积以及TRAP和CTx含量均低于生理盐水血清组(P＜0.05).结论 健骨颗粒能有效抑制破骨细胞CA Ⅱ、CK、MMP-9mRNA表达,降低破骨细胞功能活性,抑制破骨细胞对骨基质的分解,从而抑制骨吸收.
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应用microCT技术对中药干预去卵巢小鼠骨组织微结构的分析
目的 应用microCT技术观察健骨颗粒对C57小鼠去卵巢骨质疏松模型骨组织骨量、骨微结构及生物力学的影响.方法 将4周龄清洁级C57小鼠30只随机分为三组(假手术组10只、卵巢切除小鼠两组各10只),两组卵巢切除小鼠术后1周开始,分别用健骨颗粒和生理盐水进行灌胃,假手术组用生理盐水灌胃.2个月后,小鼠左胫骨行microCT检测及图像分析、右胫骨行生物力学三点抗压大载荷检测.结果 与假手术组比较,去卵巢组BMC、BMD、Mean、BV、BS显著下降(Pp＜ 0.01),TMC下降(0.01＜P＜0.05);与去卵巢组比较,去卵巢中药组BMC、BMD、Mean指标显著提高(P＜0.01);图像分析结果显示去卵巢组较假手术组骨皮质薄,骨小梁数量少,形态细小、不连续呈扭曲或断裂状等明显骨质疏松病理特征,去卵巢中药组介于两者之间.生物力学结果显示三组胫骨三点抗压大载荷均具有明显差异(P＜0.01).结论 去卵巢2月成功建立小鼠绝经后骨质疏松症模型;健骨颗粒抗骨质疏松作用明显,主要通过增加骨量和改善骨小梁微结构来终提高骨强度;microCT对骨质疏松参数分析简洁、高效,图像多维、全面,与传统的检测方法相比,具有一定的优势.
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健骨颗粒通过G1/S期调控蛋白对成骨细胞增殖的影响
目的 观察健骨颗粒对成骨细胞G1/S期调控的影响,探讨健骨颗粒促进成骨细胞增殖的作用机制.方法 制备健骨颗粒血清组、模型血清组和雌二醇血清组.采用酶消化法培养SD大鼠成骨细胞,健骨颗粒含药血清干预,以模型血清和雌二醇血清为对照.运用流式细胞术检测成骨细胞增殖周期,荧光定量PCR法检测成骨细胞G1/S期调控蛋白Cyclin E、CDK2、p21和转录因子E2F-1 mRNA的表达.结果 15％的雌二醇血清与健骨颗粒血清干预48 h,成骨细胞增殖速度均明显快于模型血清组(P＜ 0.01);G0/G1期成骨细胞比例明显降低(P＜0.01),S期、G2/M期细胞比例及增殖指数则明显高于模型血清组(P＜0.01);与模型血清组比较,雌二醇血清组与健骨颗粒血清组能提高成骨细胞Cyclin E、CDK2及转录因子E2F-1 mRNA的表达(P＜0.01),而降低p21的表达(P＜0.01).结论 健骨颗粒通过调节成骨细胞G1/S期调控机制,推进成骨细胞顺利通过G1/S检测点,促进成骨细胞增殖.
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补肾健脾方影响高脂肪饮食骨质疏松模型大鼠脂代谢及瘦素的变化
背景:绝经也可导致体内瘦组织与脂肪成分的改变,现阶段发现骨质疏松在肥胖的老年人中的发生率要大于非肥胖者,由此推断瘦素可能是骨质疏松症发病机制中的一个重要调节因素.目的:探讨补肾健脾方对高脂肪饮食骨质疏松大鼠脂代谢及瘦素的影响.方法:将6月龄SPF级雌性SD大鼠220只随机分成模型组170只和假手术组50只.模型组行双侧卵巢结扎切除术,假手术组除未行卵巢结扎切除外,其余步骤同模型组.手术后12周,模型鉴定成功后,手术组随机分成正常饮食模型组、高脂饮食模型组、高脂饮食健骨颗粒组和高脂饮食辛伐他丁组各40只.各组于术后第13周开始给药,健骨颗粒组给予健骨颗粒2 g/(kg?d),生理盐水2 mL溶解后灌胃,辛伐他丁组给予辛伐他丁100μg/(kg?d)灌胃,假手术组和正常饮食模型组以2 mL生理盐水灌胃,1次/d.于用药2,6,12,24周后测体质量,取血清、腰椎和股骨近端备用.双能X射线测定右侧胫骨骨密度,ELISA法测定血清骨钙素、血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACT-5b)、总胆固醇、三酰甘油、瘦素、瘦素受体的水平,qPCR法测定大鼠骨组织瘦素、瘦素受体mRNA表达.结果与结论:①高脂饮食健骨颗粒组大鼠的体质量高于同期正常饮食模型组和高脂饮食模型组,但低于假手术组和高脂饮食辛伐他汀组,同时表达的瘦素、瘦素受体、骨钙素水平均高于正常饮食模型组和高脂饮食模型组,TRACT-5b、胆固醇、三酰甘油的浓度均低于正常饮食模型组和高脂饮食模型组,各组比较差异均有显著性意义(P<0.05);②结果表明,补肾健脾方可以调整大鼠脂代谢紊乱、降低血液黏滞度、改善血管壁结构的同时还能通过上调大鼠血清和骨组织中瘦素、瘦素受体的表达,改善大鼠骨代谢水平,防治原发性骨质疏松症.
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健骨颗粒治疗无菌性股骨头坏死120例临床观察
应用健骨颗粒治疗无菌性股骨头坏死120例,另设35例为对照组,以健骨生胶囊治疗.结果治疗组痊愈5例,显效79例,好转19例,无效17例;对照组痊愈1例,显效15例,好转8例,无效11例.经Ridit分析,治疗组疗效优于对照组(P＜0.01).提示:补肾生骨,益气养血,活血通脉法治疗股骨头坏死有效.
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健骨颗粒对去卵巢骨质疏松模鼠骨组织结构的影响
目的:观察健骨颗粒对去卵巢骨质疏松模鼠股骨颈超微结构的影响以及同期骨密度(BMD)的改变,探讨该药药效及作用机制.材料和方法:SD雌性大鼠去卵巢造模,随机分成健骨颗粒预防组和治疗组,并设生理盐水和骨松宝对照组.术后24周处死,分别行骨密度检测及股骨颈骨粒透射电镜观察.结果:去势12周,骨细胞以吸收相和退变相为主,BMD明显降低.生理盐水组骨细胞多表现为退变相,骨细胞性溶骨更加明显,且出现破骨细胞性溶骨现象.健骨颗粒治疗组和骨松宝组多见成骨相骨细胞,成骨细胞活性加强,BMD明显升高.健骨颗粒预防组活跃的成骨细胞数量明显增加,可见成骨细胞成骨过程,BMD接近假手术组.结论:健骨颗粒能有效防治骨质疏松的发生和发展.本文还就其作用机制进行了讨论.
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健骨颗粒对钛颗粒诱导的骨溶解模型大鼠OPG/RANKL/RANK mRNA的调控作用
目的 研究健骨颗粒对钛颗粒诱导的骨溶解模型大鼠OPG/RANKL/RANK系统相关因子的影响,探讨其防治人工关节假体无菌性松动发病机制. 方法 40只SD大鼠随机取10只将其颅骨骨片作为供体,其余30只制备植骨气囊模型后随机分为对照组、模型组和健骨颗粒组各10只,其中模型组和健骨颗粒组建立肽颗粒诱导的骨溶解病理模型.造模后健骨颗粒组予健骨颗粒混悬液灌胃,对照组和模型组予等量生理盐水灌胃,连续灌胃2周.灌胃结束后取出完整气囊,HE染色观察植骨气囊壁形态变化,ELISA法检测IL-1β、TNF-α含量,Real-time PCR法检测OPG、RANKL mRNA表达. 结果 HE染色中对照组气囊壁炎症反应较轻、无明显骨溶解,模型组气囊壁厚度增加、炎细胞浸润以及骨溶解,健骨颗粒组炎细胞浸润、骨溶解程度较模型组低.与对照组比较,模型组IL-1β、TNF-α含量及RANKL mRNA表达明显升高(P＜0.05),OPG mRNA表达及OPG/RANKL明显降低(P＜0.05);与模型组比较,健骨颗粒组IL-1β、TNF-α含量及RANKL mRNA表达明显降低(P＜0.05),OPG mRNA表达及OPG/RANKL明显升高(P＜0.05). 结论 健骨颗粒可能通过降低炎性反应、上调OPG/RANKL mRNA比值来抑制钛颗粒诱导骨溶解,这可能是其防治人工关节无菌性松动的作用机制之一.
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健骨颗粒抗炎镇痛作用的实验研究
目的 探讨健骨颗粒的抗炎镇痛作用. 方法 采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀,蛋清致大鼠足趾肿胀,观察中药对小鼠耳廓肿胀和大鼠足趾肿胀的作用;采用扭体法观察中药对醋酸刺激小鼠所致疼痛的影响. 结果 健骨颗粒对小鼠耳廓肿胀、大鼠足趾肿胀有明显的抑制作用,对小鼠扭体反应也有抑制作用. 结论 补肾健脾中药健骨颗粒具有一定的抗炎、镇痛作用.
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健骨颗粒含药血清对成骨样细胞OPG、RANKL mRNA表达的影响
目的 观察健骨颗粒含药血清对OPG、RANKL mRNA表达的影响.方法 制备健骨颗粒含药血清和生理盐水血清,分别干预体外培养的成骨样细胞ROS17/2.8,干预48 h后,用MTT法检测细胞增殖,荧光定量PCR检测OPG、RANKL mRNA表达.结果 中药血清组对OPG mRNA表达较生理盐水血清组上升,对RANKL mRNA表达较生理盐水血清组降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 健骨颗粒含药血清能促进成骨样细胞的OPG mRNA表达并抑制其RANKL mRNA表达.
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健骨颗粒对大鼠成骨细胞OCN、Cbfal的影响
骨质疏松症主要是由于骨形成、骨吸收偶联的破坏,使骨形成减少,骨量降低所导致.成骨细胞是骨形成的关键细胞,而成骨细胞的分化成熟、功能活性与骨形成密切相关.前期在体、体外实验表明.补肾健脾中药健骨颗粒能明显增强成骨细胞的功能活动.
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健骨颗粒对大鼠成骨细胞雌激素受体表达的影响
目的 探讨健骨颗粒对骨组织成骨细胞雌激素受体表达的影响. 方法 通过切除6月龄SD雌性大鼠卵巢,建立绝经后骨质疏松症动物模型,分假手术组、模型组、治疗组,运用RT-PCR实时荧光定量SYBR GREEN法检测雌激素受体ERα、ERβmRNA的表达. 结果 治疗组与模型组比较,ERα、ERβmRNA的相对表达量增加,差异有显著性(P<0.01). 结论 健骨颗粒能提高去卵巢骨质疏松模型大鼠的成骨细胞ERα、ERβ的表达,促进成骨细胞增殖.
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健骨颗粒对去卵巢骨质疏松模型鼠整合素信号转导通路的影响
目的 从分子水平探讨健骨颗粒对去卵巢骨质疏松模型鼠整合素传导通路的影响.方法切除大鼠卵巢建立骨质疏松模型,药物干预,运用荧光定量PCR检测模型鼠骨组织中Ⅰ型胶原、整合素β1(Itgβ1)和粘着斑激酶(FAK)mRNA表达. 结果 切除卵巢后12周,大鼠骨密度明显降低,模型成立.Ⅰ型胶原、整合素β1和FAK mRNA表达均明显下降.经过健骨颗粒治疗后12周,骨密度虽然未能达到正常,但与生理盐水组对比明显回升;Ⅰ型胶原、Itgβ1和FAK的mRNA表达则显著增加. 结论 健骨颗粒可通过整合素信号转导通路作用于成骨细胞,提高成骨细胞的功能活性,从而改善骨质量,控制骨密度的继续下降.
