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成熟度对江西单叶蔓荆子质量的影响
目的:比较不同成熟度单叶蔓荆子中挥发性成分、总黄酮及蔓荆子黄素含量的差异.方法:采用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)分离鉴定蔓荆子中挥发性成分,利用峰面积归一化法计算各成分的相对质量分数,结合紫外分光光度法和HPLC分别测定蔓荆子中总黄酮和蔓荆子黄素的含量.结果:厚田黄果和黑果分别鉴定了35,36种化合物,二者相同成分有30种;都昌黄果和黑果分别鉴定了31,27种化合物,两者相同成分有23种.不同成熟度蔓荆子挥发油成分种类相似,但各成分的含量却存在很大差异.厚田黄果、厚田黑果、都昌黄果及都昌黑果中蔓荆子黄素质量分数分别为0.268％,0.209％,0.226％,0.242％,总黄酮质量分数依次为7.902％,3.540％,3.982％,2.617％.结论:不同样品中总黄酮含量存在很大差异,黄果与黑果中蔓荆子黄素的含量不存在显著性差异.成熟度对蔓荆子的品质影响很大.
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高效液相色谱法测定蔓荆子生品与炮制品中蔓荆子黄素的含量
目的:建立蔓荆子的含量测定方法及测定生品与不同炮制样品蔓荆子黄素含量变化.方法:高效液相色谱法,色谱柱用Hypersil BDS(250mm×4.6mm,5μm)流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液(60:40),检测波长为258 nm,流速为1.0 mL·min-1,柱温35℃.对不同地区生品与不同炮制方法制备的蔓荆子中蔓荆子黄素的含量进行测定.结果:蔓荆子黄素线性范围为0.1525～0.762 5μg,r=0.999 9,平均回收率为98.39%,RSD=1.48%.蔓荆子经清炒炮制后,样品中蔓荆子黄素含量略有上升;经炒焦、炒炭炮制后,样品中蔓荆子黄素的含量下降,以炒炭法含量低.结论:不同炮制方法使蔓荆子炮制前后蔓荆子黄素的含量发生明显改变.
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炮制对蔓荆子中主要黄酮成分水溶出率的影响
目的 研究炮制对蔓荆子中黄酮类成分含量的影响,探索炮制对蔓荆子中黄酮类成分水溶出率的影响.方法 建立高效液相色谱法,采用Agilent TC-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇(A)[1％冰醋酸水(B)梯度洗脱(0～ 10 min:25％～35％ A;10～18 min:35％ A;18 ～ 45 min:35％ ～ 75％A),流速l mL· min-1,检测波长254 nm,柱温30℃.同时测定蔓荆子生品和炮制品中异荭草素、蔓荆子黄素的含量及水溶出率,分析炮制前后变化.结果 上述2个成分的含量,炮制前分别为0.035％、0.066％,炮制后分别为0.033％、0.056％;异荭草素、蔓荆子黄素炮制前的水溶出率分别为:40.00％、12.12％,炮制后分别为60.61％、14.29％.结论 炮制会增加蔓荆子中异荭草素、蔓荆子黄素的水溶出率.
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蔓荆子黄素对p53突变型人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 了解蔓荆子黄素(vitexicarpin)对p53突变型人乳腺癌细胞Hs578T增殖和凋亡的影响,并观察vitexicarpin对Hs578T和p53野生型人乳腺癌细胞MCF-7中c-Myc、p2l、Bcl-2蛋白表达的影响及c-Myc蛋白高表达对vitexicarpin作用的影响.方法 在不同时间点(24、48和72 h)用MTT方法来检测不同浓度vitexicarpin(0、0.1、0.2、0.5、1.0 μmol/L)对细胞增殖的影响.用TUNEL方法在24 h时间点检测不同浓度vitexicarpin对细胞凋亡的影响.在vitexicarpin不同浓度作用下,检测Hs578T细胞中c-Myc、Bcl-2和p21三种蛋白的表达情况.在Hs578T和MCF-7细胞中瞬时转染c-Myc基因,用MTT方法检测c-Myc蛋白高表达对vitexicarpin抑制细胞增殖作用的影响.结果 在vitexicarpin浓度>0.2μmol/L情况下,Hs578T及MCF-7细胞的增殖能力均受到明显抑制(IC50为0.25μmoVL和0.53μmol/L,72 h).TUNEL 实验显示vitexicarpin在0.1、0.2、0.5μmol/L作用浓度下TUNEL阳性细胞率分别为10.15%,27.33%和35.34%,而对照组为4.65%.Hs578T细胞中c-Myc和Bcl-2的表达与vitexicarpin的浓度呈反比,p21的表达与vitexicarpin的浓度呈正比.转染c-Myc基因及c-Myc蛋白高表达后,在Hs578T细胞中vitexicarpin对Bcl-2和p21的影响减弱.在vitexicarpin 0.5 μmol/L组72 h时比0 h时的吸光度(A)值增加了1.53倍,抑制细胞增殖的能力下降;相反地,但在MCF-7/c-Myc细胞中,同样条件下A值减少了48%.结论 vitexicarpin抑制p53突变型Hs578T细胞增殖的机制可能是通过c-Myc蛋白,而对于MCF-7细胞则是通过其他机制.vitexicarpin对恶性肿瘤细胞的作用机制在不同细胞中是不同的.
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HPLC法同时测定拨云退翳丸中10种指标成分
目的 采用HPLC-DAD法同时测定拨云退翳丸中甘草苷、甘草酸铵、蔓荆子黄素、胡薄荷酮、阿魏酸、绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、盐酸小檗碱、山柰素、蒙花苷10种成分.方法 应用Shim-pack VP-ODS C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈(50∶50,A)和0.05％磷酸水溶液(B),梯度洗脱,梯度洗脱程序为0～5 min,50％A;5～30 min,50％～80％ A;30～32 min,80％～50％ A;32～40 min,50％ A;进样体积10 μL,体积流量1.0 mL/min,柱温40℃.结果 甘草苷、甘草酸铵、蔓荆子黄素、胡薄荷酮、阿魏酸、绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、盐酸小檗碱、山柰素、蒙花苷10种成分能够达到很好分离;其线性范围分别为2～20 (r=0.999 2)、20～200 (r=0.999 5)、3～30 (r=0.999 4)、2～20 (r=0.999 7)、1.2～12.0 (r=0.999 5)、3.5～35.0 (r=0.999 2)、8～80 (r=0.999 3)、9～90 (r=0.999 3)、2～20 (r=0.999 6)、3～30μg/mL (r=0.999 5);平均加样回收率分别为99.1％、101.1％、100.2％、99.4％、101.9％、98.5％、100.5％、101.7％、100.8％、99.7％,RSD分别为0.62％、0.79％、0.77％、0.83％、0.47％、0.38％、0.97％、1.05％、0.86％、1.11％(n=6).6批次供试品中甘草苷、甘草酸铵、蔓荆子黄素、胡薄荷酮、阿魏酸、绿原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、盐酸小檗碱、山柰素、蒙花苷质量分数分别为0.505～0.685、1.793～2.012、0.227～0.268、0.183～0.206、1.258～1.324、0.348～0.381、0.648～0.720、1.544～1.722、1.543～1.627、3.434～3.883 mg/丸.结论 该方法快速、灵敏度高、准确度高、专属性好,为拨云退翳丸的质量控制提供依据.
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HPLC法测定蔓荆子黄素的含量
以蔓荆子黄素为指标,用反相HPLC法测定了蔓荆子中的含量,实验采用C18柱,以甲醇-0.4%磷酸溶液(60:40)为流动相,检测波长258 nm,用外标法测定,回收率为98.18%,RSD1.46%,线性范围0.15～0.75 μg.本法快速简便,重现性好,为蔓荆子质量控制提供了可靠的依据.
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蔓荆子炮制标准化研究
蔓荆子为马鞭草科植物单叶蔓荆Vitex trifolia L.var.simplicifolia Cham.或蔓荆Vitex trifolia L.的干燥成熟果实,为辛凉解表药,具有疏散风热,清利头目之功效~([1]),是用于风热感冒头痛的常用药.其清炒炮制品目前多用于临床,并收于历版药典蔓荆子项下.清炒品含量标准还不完善,因此我们以炮制前后蔓荆子中挥发油、总黄酮、蔓荆子黄素为指标进行对比,在研究炮制工艺及质量标准的同时~([2-6]),试图从炮制前后的变化中,探索饮片本身的化学变化规律,从而为蔓荆子的合理炮制与质控指标的建立及蔓荆子的深入研究提供客观依据.
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傣药七味榼藤子丸质量标准研究
目的:建立傣药七味植藤子丸(榼藤子仁、黑种草子、胡椒等)质量标准.方法:采用薄层色谱法对方中黑种草子进行鉴别.用高效液相色谱法测定蔓荆子黄素含量.结果:在薄层色谱中能检出黑种草子;蔓荆子黄素在0.106 5～2.130 0μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 6,n=5);平均回收率101.4%,RSD为1.11%.结论:所建立的方法简便可行,重现性好,可用于七味榼藤子丸的质量控制.
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HPLC测定七味榼藤子丸中蔓荆子黄素的含量
目的:建立七味榼藤子丸中蔓荆子黄素的定量分析方法.方法:色谱柱为Agilent ZORBAX-Extend C18(4.6 mm×150 mm,5 μm);流动相为甲醇-水(50:50);流速:1.0 mL·min-1;检测波长258 nm.蔓荆子黄素保留时间为20.4 min.结果:线性关系良好,平均加样回收率为101.47%,RSD为1.11%.结论:此方法简便、准确,可作为七味榼藤子丸中蔓荆子黄素的含量测定方法.
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蔓荆子质量标准的研究
蔓荆子为较常用中药,虽然中国药典各版均有收载,但都没有含量测定指标及必要的检查项目.目前蔓荆子有野生和人工栽培2种,有效成分的含量有较大差异,为了确保其药理作用和临床疗效,本课题从蔓荆子中得到一有效成分[1]蔓荆子黄素,经波谱检定,可供含量测定用(纯度98.90%).以蔓荆子黄素为对照品,进行了薄层鉴别[2]及采用HPLC法对14个省(市)的市售蔓荆子药材进行了含量测定[3].在此基础上又以蔓荆子黄素为对照品对10个省(市)10批样品进行了含量测定,并对10批样品的杂质、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物进行了研究,从而为建立蔓荆子的含量测定方法及完善蔓荆子的质量标准提供了依据.
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HPLC测定山东不同产地单叶蔓荆子中蔓荆子黄素的含量
目的:采用HPLC对山东地产药材单叶蔓荆子进行了含量测定,考察了产地、生境、采收期、贮藏期对蔓荆子质量的影响.方法:HPLC,色谱柱用phenomenex(250mm×4.6mm,5μm)C18柱,流动相为甲醇-0.4%磷酸水溶液(60:40),检测波长为258nm,流速为1.0ml/min,柱温30℃.结果:蔓荆子黄素线性范围为0.76～3.8μg,回收率为97.2%.结论:产地、贮藏期对山东单叶蔓荆子有效成分蔓荆子黄素含量影响较大;10月份为蔓荆子佳果收期.
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单叶蔓荆果实及叶片中蔓荆子黄素的积累动态研究
目的 研究单叶蔓荆果实及叶片中蔓荆子黄素的积累规律,以及不同栽培管理措施对其含量的影响,为进一步确定单叶蔓荆药材的合理采收时间及科学栽培管理提供理论依据.方法 采用高效液相色谱法测定单叶蔓荆干燥果实及叶片中蔓荆子黄素的含量.结果 夏末秋初,单叶蔓荆果实和叶片中蔓荆子黄素的累积均呈现出一定的波动性,且维持在较高的水平,果实中蔓荆子黄素的含量约为同时期叶片含量的3倍.起垄与直立整形相结合的栽培管理措施下,果实中蔓荆子黄素的含量较对照提高约16.3％,而叶片中的含量仅较对照提高2.7％.结论 综合考虑各影响因素,山东及周边省份于8月底至10月上中旬采收单叶蔓荆果实入药较为适宜.起垄与直立整形相结合的复合管理措施能够显著促进单叶蔓荆果实中蔓荆子黄素的积累,而对叶片的影响较小.
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异地驯化对蔓荆子中蔓荆子黄素含量的影响
目的 研究异地驯化对蔓荆子中蔓荆子黄素含量的影响.方法 采用高效液相色谱法测定各产地蔓荆集中驯化一年后干燥成熟果实中蔓荆子黄素的含量.结果 各野生蔓荆从海边或者湖边沙地移至水肥条件较好的壤土中驯化一年后,果实中蔓荆子黄素的平均含量反而下降了56.1％.结论 生长环境对蔓荆子黄素的含量有显著影响.
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单叶蔓荆不同器官中蔓荆子黄素含量测定
目的 研究单叶蔓荆不同器官中蔓荆子黄素的含量,为选择单叶蔓荆的药用部位及栽培利用提供科学依据.方法 采用高效液相色谱法测定单叶蔓荆不同器官中蔓荆子黄素的含量.结果 自然晾干后,果实中蔓荆子黄素的含量高(0.030 8%),叶片次之(0.012 0%),未能检测出枝条和根系中蔓荆子黄素含量.结论 单叶蔓荆以果实入药合理,叶片可进一步开发.
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HPLC法同时测定失眠花草药枕中4种有效成分的含量
目的:建立同时测定失眠花草药枕中4种有效成分女贞苷、甘松新酮、蔓荆子黄素和苍术素含量的HPLC测定方法.方法:采用HPLC法,色谱柱为SunFireTM C18(250 mm×4.6 mm,5μm);柱温:30℃;流速:1.0 ml·min-1;检测波长为254nm;以甲醇-0.1％磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱.结果:在45 min内花草药枕药粉中的女贞苷、甘松新酮、蔓荆子黄素、苍术素4种有效成分色谱分离度良好;4个被测成分在各自测定的线性范围内线性关系良好(r女贞苷=0.999 8;r甘松新酮=0.998 9;r蔓荆子素 =0.999 7;r苍术素=0.999 8);平均加样回收率为97.4％～103.7％,RSD均小于2.4％(n=9).结论:本方法简便易行、稳定可靠、专属性强,可用于失眠花草药枕的质量控制.
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蔓荆子黄素对小鼠单核巨噬细胞 增殖和凋亡的影响
目的 通过蔓荆子黄素对小鼠腹腔巨噬细胞活性及RAW264.7细胞增殖和凋亡作用的研究,探讨蔓荆子黄素对单核巨噬细胞的影响.方法 分别用含有不同浓度蔓荆子黄素作用于小鼠腹腔巨噬细胞与小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,于24、48及72 h后采用CCK-8检测细胞活性.使用AO/EB染色观察RAW264.7细胞凋亡变化;应用流式细胞仪检测RAW264.7细胞凋亡率.通过荧光探针DCFH-DA检测RAW264.7细胞活性氧水平,使用JC-1染色标记线粒体膜电位的变化.结果 CCK-8法检测结果显示,蔓荆子黄素对小鼠腹腔巨噬细胞的细胞活性及RAW264.7细胞的增殖都有抑制作用,呈剂量与时间依赖关系,尤其对具有增殖能力的RAW264.7细胞活性抑制作用更强.AO/EB染色结果显示,RAW264.7细胞经浓度为5及10μmol/L的蔓荆子黄素处理后,细胞表现为凋亡形态;流式细胞仪检测结果显示,蔓荆子黄素诱导RAW264.7细胞Sub-G1期代表凋亡细胞的百分比增加(P<0.05).蔓荆子黄素作用于RAW264.7细胞后,细胞内活性氧水平提高;JC-1染色结果显示,蔓荆子黄素能使RAW264.7细胞的线粒体膜电位下降.结论 蔓荆子黄素能够抑制小鼠腹腔巨噬细胞与小鼠单核巨噬细胞RAW264.7活性,尤其对具有增殖能力的RAW264.7细胞活性抑制作用更强,可以促进其凋亡,其作用机制与增加细胞内活性氧水平和降低线粒体膜电位有关.
关键词： 蔓荆子黄素 小鼠腹腔巨噬细胞 RAW264.7细胞 细胞凋亡 细胞增殖 -
不同地区炒蔓荆子中蔓荆子黄素的含量
目的:建立炒蔓荆子的含量测定方法及考察生品与清炒样品中蔓荆子黄素的含量变化.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为迪马kromasil(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液(60∶ 40),检测波长为258 nm,流速为1.0 mL/min,柱温为35℃.结果:对收集到的5个省的样品进行统一炮制,对比炮制前后蔓荆子黄素的含量变化,并对16个省(市)市售蔓荆子药材按照上述色谱条件进行了含量测定,不同地区的市售样品蔓荆子黄素的含量差异很大,含量高的可达0.093%,低为0.020%.结论:本方法简便、准确、重复性好,为制定蔓荆子的质量标准提供了依据.
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HPLC法测定江西不同产地蔓荆子中蔓荆子黄素的含量
目的:建立测定江西不同产地蔓荆子中蔓荆子黄素含量的方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为Alltima HPC18(250mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-50 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(磷酸调pH值为3.0)=50:50,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为254nm,柱温为室温,进样量为10 μL.结果:蔓荆子黄素的进样量在0.2～1.2 μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.999 4);平均加样回收率为99.96％,RSD=1.42％(n=9).江西不同产地蔓荆子中蔓荆子黄素含量差异较大.结论:本方法简便、快速、线性关系良好,可用于蔓荆子中蔓荆子黄素的含量测定.
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蔓荆子黄素抑制p53突变型人肺癌细胞生长及其机制研究
目的：了解蔓荆子黄素对p53突变型人肺癌 H322细胞增殖的影响，并对其机制进行初步研究。方法在不同时间点（24，48和72h）采用MTT法检测不同浓度（0，0．1，0．2，0．5，1．0μmol·L －1）蔓荆子黄素对细胞增殖的影响。在不同浓度蔓荆子黄素的作用下，采用Western blot法检测c‐myc基因表达情况。结果蔓荆子黄素能抑制H322细胞增殖，且呈剂量和时间依赖性，24，48和72 h的IC50分别为0．577，0．501和0．473μmol · L －1。不同浓度的蔓荆子黄素在同一时间点、相同浓度的蔓荆子黄素在不同时间点对 H322细胞增殖的抑制作用均存在明显差异（P＜0．05）。c‐myc基因表达与蔓荆子黄素的浓度呈反比。结论蔓荆子黄素能抑制人肺癌H322细胞的增殖，其机制可能是通过抑制c‐myc的表达。
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高效液相色谱法测定不同地区蔓荆子中蔓荆子黄素的含量
目的:建立蔓荆子的含量测定方法及比较不同样品的含量.方法:高效液相色谱法,色谱柱用Shim-pack ODS(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液(60∶ 40,pH=2.7),检测波长为258 nm,流速为1.0 mL*min-1,柱温32 ℃.结果:标准曲线线性范围为0.16～0.80 μg(r=0.999 9),回收率为98.15%,对收集到的14个省(市),16个城市的市售蔓荆子药材,进行了含量测定,不同地区的市售样品蔓荆子黄素的含量差异很大,含量高的可达0.112 0%,低的0.027 2%.结论:本方法简便、准确、重复性好,为制定蔓荆子的含量限度提供了依据.
