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炙甘草汤及有效成分配伍对猫缺血再灌心脏触发活动及心肌损伤影响
本研究在麻醉猫左冠状动脉前降支(LDH)结扎再灌的实验中使用心肌单相动作电位技术观察了炙甘草汤、甘草酸单铵盐、人参总皂甙配伍甘草酸单铵盐能显著降低心律失常,缩短触发活动时程和幅度,减少血清中磷酸肌酸激酶(CPK)和乳酸脱氧酶(LDH),明显增加缺血再灌注区心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性,降低心肌组织中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量.实验结果表明,炙甘草汤、甘草酸单铵盐、人参总皂甙配伍甘草酸单铵盐具有抗实验性心肌缺血再灌注触发活动和对心肌损伤有保护作用.
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天麻钩藤方对自由活动大鼠脑缺血海马细胞外液递质氨基酸的影响
目的:观察天麻钩藤方(天钩方)对不完全脑缺血清醒自由活动大鼠海马细胞外液递质氨基酸的影响.方法:用CMA微透析采样系统收集双侧颈总动脉结扎和放松引起的清醒自由活动大鼠不完全缺血前、缺血期间及再灌后大鼠海马细胞外透析液;用高效液相色谱-电化学法测定透析液中谷氨酸(Glu)、牛磺酸(Tau)、精氨酸(Arg)、γ-氨基丁酸(GABA)和半胱氨酸(Cys)的浓度.结果:天钩方中剂量组可升高正常大鼠脑海马细胞外液GABA和Tau的浓度.与模型组比较,大鼠不完全缺血120 min时,天钩方中和大剂量组的Glu水平分别降低了38.64%和31.35%,Tau升高了13.99%和12.86% ,GABA升高了25.89%和33.99%,Cys降低了40.93%和42.08%,Arg升高了16.95%和8.96%;再灌120 min时,天钩方中和大剂量组的Glu的水平分别降低了14.55%和11.48%,Tau升高了16.13%和14.03%,GABA升高了24.41%和26.22%.结论:天钩方能增加正常大鼠海马细胞外液中抑制性氨基酸的浓度,抑制缺血再灌引起的兴奋性氨基酸的过度释放,增加Arg和抑制性氨基酸的浓度,从而发挥神经保护作用.
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金森脑泰注射剂中葛根素在正常和缺血再灌模型大鼠体内的药动学研究
目的探讨脑血管新药金森脑泰注射剂(商品名)中葛根素在正常和缺血再灌大鼠体内的动力学过程.方法对正常大鼠及缺血再灌大鼠静脉注射金森脑泰注射液后不同时间采血,用HPLC-PAD(二极管阵列紫外检测器)测定葛根素血药浓度.3P87软件拟合药动学参数.结果静注金森脑泰后葛根素在正常大鼠体内呈一室模型,t1/2a为18 min,在脑缺血再灌大鼠体内呈二室模型分布,t1/2a和t1/23分别是7.7和38.4min.平均驻留时间(MRT)和清除率(CLtot)分别为24.0,43.9 min和0.014,0.003 L@min-1@kg-1.后者特征HPLC图谱经PAD分析,3个未知成分的色谱峰中有两个与葛根素的紫外光谱(200～800nm)相似,它们的峰面积的经时消长过程与葛根素色谱峰的峰面积的经时消长变化相似,相关系数分别为0.995 7,0.9990.结论利用未知成分的峰面积消长变化,求得相对药动学参数,有助于更全面地反映中药复方(有效部位)的药物代谢规律.同时也提示我们,作为葛根黄酮的主要有效成分的葛根素的药动学参数可以基本反映葛根黄酮的药动学参数.
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丹红注射液预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞损伤的影响
目的 研究丹红注射液预处理对大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的作用.方法 体外培养大鼠心肌细胞,将丹红注射液以2%、4%、8%、16%四种浓度分别加入培养基中,预处理24 h 后,置于缺血再灌注(I/R)环境中培养,采用流式细胞仪技术检测各组细胞的凋亡率,免疫组织化学法检测凋亡基因Bax 及Bcl-2 蛋白表达变化.结果 与正常对照组比较,缺血再灌组细胞凋亡率及Bas 表达明显升高,Bcl-2 表达则显著降低;而用丹红注射液预处理后呈浓度依赖性地下调凋亡率及Bas 表达,上调Bcl-2 表达.结论 丹红注射液对缺血再灌心肌细胞有保护作用,且与浓度有一定的依赖关系,其作用可能是通过上调Bcl-2 蛋白表达,抑制Bax 蛋白表达实现的.
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缺血-再灌注对甲床损伤机制的实验研究
目的 探讨使用止血带后缺血-再灌注对甲床组织的损伤及其相应的作用机制.方法大耳白兔于右后肢根部上止血带,于缺血30、60、90、120 min再灌注1 h后剥离甲床组织.分光分析法检测标本中超氧化物歧化酶(SOD)活性.荧光定量PCR检测标本中TNF-α基因的mRNA表达水平.TUNEL法检测细胞凋亡.结果 甲床组织缺血30 min后再灌注SOD活力、TNF-α mRNA表达和细胞凋亡率无显著改变(P>0.05).与缺血30 min比较,缺血60 min后再灌注甲床组织SOD活力显著降低(P<0.01),TNF-α mRNA的表达显著增加(P<0.01),细胞凋亡率逐渐升高(P<0.01),但缺血90 min与120 min细胞的凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论缺血60 min后再灌注可以诱发甲床细胞凋亡的发生,可能是术后指甲畸形的主要致病机制,SOD的减少和TNF-α表达的升高是导致细胞凋亡的主要原因.
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缺血再灌后血管内皮空泡的形成与内皮的损伤
目的：在活体上探讨缺血再灌后血管内皮细胞损伤及白细胞、血小板 与内皮之间粘附的变化。方法：用失血及再回输血液造成缺血再灌流模型， 在高倍显微镜下观察肠系膜微血管内皮损伤及血细胞粘附的变化。结果：缺 血再灌后1～3 h细静脉、集合毛细血管内出现白细胞、血小板的粘附，血管内皮水肿、管 壁增厚。有的血管内皮细胞的胞浆形成圆丘形的空泡。空泡从血管内皮突入管胺、空泡直径 10～30 μm多出现在细动脉内，在同一根血管内可同时出现几个空泡，大的空泡几乎占据血 管腔的2／3。结论：缺血再灌后血管内皮水肿及空泡形成，显示内皮细胞的 严重损伤。
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几种不同刺激对血管内白细胞粘附的影响
目的：研究几种刺激引起白细胞与内皮细胞粘附的变化。方法：本实验采用脉冲电刺激、缺血再灌、内毒素和白介素-8等物理或药物的作用，观察大鼠肠系膜细静脉内白细胞粘附及白细胞和血管内皮粘附之间的差别。结果：缺血再灌、内毒素、脉冲电刺激和白介素-8(IL-8)作用后肠系膜细静脉白细胞粘附数量比正常组明显增多。IL-8用药后30 min细静脉内白细胞粘附数量多、缺血再灌、内毒素、脉冲电刺激后白细胞粘附数量大致相同。结论：缺血再灌、内毒素、脉冲电刺激能诱导白细胞的粘附作用，造成内皮损伤，IL-8诱导白细胞的粘附作用强。
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牛磺酸预处理对大鼠离体心脏缺血再灌损伤血流动力学的影响
目的:观察牛磺酸对大鼠离体心脏缺血再灌损伤血流动力学的影响.方法:40只大鼠随机分为4组:缺血再灌组(I/R),预适应组(IPC),牛磺酸Ⅰ组,牛磺酸Ⅱ组.采用Langendorff离体心脏灌流方法,经主动脉用K-H液平衡灌注.记录左室舒张末压(LVEDP)、左室收缩压(LVSP)、左室压力上升和下降大变化速率(±dp/dt max)、冠脉流量(OF).结果:与I/R组比较,牛磺酸预处理能提高大鼠离体心脏停灌再灌期的CF,升高LVSP、±dp/dt max而降低LVEDP,其差异有显著性(P<0.05).结论:牛磺酸预处理对大鼠离体心脏停灌再灌注损伤具有保护作用.
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与人染色体结构维持基因6高度同源应力可诱导基因克隆及其表达
背景:已往研究显示,心肌对短暂缺血再灌的应答与多种基因表达改变有关,但它们的特性尚未明确.目的:克隆和分析应力可诱导基因特性以探讨心肌短暂缺血再灌损伤的分子机制.设计:对比观察的动物实验.单位:中南大学湘雅医院血液科.材料:选用16只健康德国Landrace家猪,体质量21～39 kg,由德国巴特瑙海姆马普所生理与临床研究所实验心脏病学研究室提供.对家猪的处置遵循美国生理学会的规章.按随机数字表法将16只家猪分为缺血再灌注手术组(n =14)和假手术组(n =2).缺血再灌注组动物在第二次缺血再灌注后0,30,90 min 3个时间点进行观察.每组又分为缺血组织和对照组织两部分.方法:实验于1998-07/2007-05分别在德国巴特瑙海姆马普生理与临床研究所实验心脏病学研究室和中南大学湘雅医院血液科完成.将动物麻醉后,开胸,稳定30 min后,缺血再灌注组动物阻塞左冠状动脉前降支10 min,灌注30 min,再次阻塞10 min,时间点为(10'-30' -10'),再灌注30 min(时间点为10'-30'-10'-30');再灌注90 min(时间点为10'-30'-10'-90')后取心肌组织.假手术组不进行缺血再灌注.按预定观察时间点将动物分别麻醉后处死,取左冠状动脉前降支区域的组织作为缺血组织,左冠状动脉弦支区域的组织作为对照组织.首先,以cDNA片段RKD7.1作为探针筛选猪心脏cDNA文库并通过DNA序列测定分析所克隆基因的DNA序列.同时,通过短暂阻断和再灌注猪左冠状动脉前降支形成缺血再灌心肌.然后,从该缺血再灌猪心肌组织提取总RNA后用于Northern杂交分析,以基因杂交后灰度值与其18S rRNA灰度值的比值作为基因表达的相对水平.主要观察指标:克隆基因DNA和氨基酸序列分析及克隆基因表达分析.结果:16只健康德国Landrace家猪均进入结果分析.通过筛选文库,克隆到一个含有3461个碱基对的cDNA.DNA序列测定和检索分析显示该cDNA与可能编码DNA修复蛋白的人类染色体结构维持基因6具有86%的相同性,并与鼠染色体结构维持基因6具有84%的相同性.进一步分析发现,由此cDNA推导出的长多肽链含有1 007个氨基酸残基,它与人类染色体结构维持基因6蛋白具有92%相同性, 与鼠染色体结构维持基因6蛋白具有89%相同性.为此,该cDNA取名为人类染色体结构维持基因6猪同源基因.Northern杂交结果显示,猪染色体结构维持基因6 mRNA在缺血再灌心肌的表达为增加并且其mRNA在所检测的各种器官中均存在达.结论:从猪心肌克隆到一个应力可诱导猪染色体结构维持基因6,它与人类染色体结构维持基因6具有高度的同源性,猪染色体结构维持基因6或者与其他分子可能共同参与缺血再灌所致猪心肌DNA损伤的早期修复.
关键词： 染色体结构维持基因6 基因表达 缺血再灌 分子克隆 心肌 -
鼠肝缺血再灌注Fas-mRNA、Caspase-3变化及缺血预处理作用机制
目的探讨Fas介导细胞凋亡上游Fas-mRNA表达和下游Caspase-3活性在鼠肝缺血再灌注(Ischemic Reperfusion,IR)损伤中的变化及缺血预处理(Ischemia Preconditioning,IP)的保护作用机制.方法 45只大鼠随机分为IR组、IP组及假手术组(S)组.检测再灌注术后3h血清AST,ALT水平、肝组织Fas-mRNA表达、Caspase-3活性、肝细胞凋亡指数(Apoptosis Index,AI)和电镜下超微结构改变.结果 (1)血清AST,ALT改变:IP组和IR组较S组显著升高(P<0 01),其中IR组升高明显,与IP组比较差异有显著性(P<0.01).(2)肝组织Fas-mRNA表达、Caspase-3活性,IR组和IP组较S组明显升高(P<0.01),IR组明显,与IP组比较差异显著(P<0.01),而3组IR前各指标比较均差异无显著性(P>0.05).(3)肝细胞AI与Fas-mRNA表达、Caspase-3活性均呈正相关,S组未见明显凋亡细胞,IR组和IP组AI差异有显著性(P<0.01).(4)电镜IR组超微结构破坏明显,IP组相对较轻,S组基本正常.结论 IR损伤可增强Fas-mRNA表达、激活Caspase-3活性,共同促进肝细胞凋亡,从而加重肝脏损害,IP可明显减轻肝脏IR损伤,机制之一是下调Fas介导细胞凋亡上游Fas-mRNA表达和下游Caspase-3活性来抑制肝细胞凋亡.
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脑梗死的药物治疗
脑卒中以急性脑梗死多见.对急性脑梗死及时而有效的治疗是多年来医学工作者全力攻克的难题之一.脑缺血的临床治疗目标是尽早恢复血流改善半暗区的血液供应,抑制缺血再灌所致的损害,故抗血栓治疗及神经细胞保护剂的应用成为治疗脑梗死的两大原则.
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芪桂益脉灵对缺血再灌注型大鼠心肌细胞蛋白激酶C的影响
1 材料与方法1.1 材料选用健康Wistar大鼠56只[合格证号SCXK(辽)2003-0012],雄雌各半,体重200～250g,由沈阳市双义实验动物研究所提供.芪桂益脉灵水煎汤剂由我校制剂窒提供.消心痛:购自山东博山制药有限公司(H37022980).
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血管性痴呆模型大鼠海马CA3区微管相关蛋白-2的表达及其意义
目的:探讨海马CA3区神经元微管相关蛋白-2(MAP-2)表达变化与学习记忆功能的关系.方法:采用大白鼠大脑中动脉线栓法(MCAO)缺血再灌模型,分为缺血2h再灌(I/R)1d、7d、14d、30d、90d组和假手术组,免疫组织化学方法观察海马CA3区MAP-2表达,并用图像分析系统作定量分析;同时用Morris水迷宫检测再灌7d、14d、30d、90d组大鼠行为学变化.结果:缺血再灌1d海马CA3区MAP-2呈高表达突起断裂不均匀,再灌7d和14d表达高,突起出现螺旋样变,再灌30d后MAP-2的表达开始恢复,突起依然断裂,再灌90d后突起形态基本恢复正常.行为学检测发现,大白鼠缺血再灌7d和14d组定位航行试验潜伏期明显延长,空间探索试验中跨平台次数减少,再灌30d开始恢复,再灌90d与假手术组无差别.结论:缺血再灌后,海马CA3区神经元处于高度可塑性状态,可能是神经元新的突触连接形成的结构基础之一,可部分代偿缺血敏感区CA1神经元丧失引起的学习记忆功能的下降.
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肝癌术中阻断与不阻断肝门的组织钙离子及丙二醛含量变化
多数肝癌患者伴有肝硬变,术中阻断肝门的缺血再灌注损伤必将产生严重的影响.本文对我院1995年9月～1997年8月收治的23例肝癌切除术患者随机分成术中阻断及不阻断肝门两组,在术中不同时间取样,检测组织钙和丙二醛(MDA)含量的变化,以了解肝细胞的损害情况.
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大鼠高眼压后视网膜内三种钙结合蛋白免疫活性的改变
目的:通过高眼压诱导的视网膜缺血模型和免疫组化方法,探讨parvalbumin(PV),calbindin(CB)和calretinin(CR)三种钙结合蛋白在缺血后视网膜中的表达.方法:24只大鼠(分4组,每组6只)的右眼眼内压升高至14.6 kPa(110 mmHg),维持90 min;左眼作对照.分别存活0,2,7,14 d后处死.其视网膜冷冻切片后,分别作CB、PV和CR的免疫组化反应;邻片用焦油紫染色.结果:在正常视网膜,PV和CB主要表达于内核层;CR表达于内核层、节细胞层和内网层.缺血0 d组中,PV在内核层的表达剧减,而CB和CR仅轻微减少.2 d后,CB和CR明显减少;而PV的表达开始逐渐恢复.至第14天,尽管内核层神经元已减少了1/2,但PV的表达已恢复至正常水平,其阳性神经元与尼氏染色神经元数之比是正常的2倍.同样,相对第7天而言,CB和CR的表达也有一定程度的恢复.结论:PV,CB和CR的阳性神经元对缺血敏感程度不同,且在一定的实验条件下其表达是可逆的.
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卵巢切除后脑缺血再灌海马CA1区ET-3和GFAP的表达
目的:探讨脑缺血再灌损伤中雌激素与ET-3,GFAP的相互关系.方法:采用雌性昆明小鼠卵巢切除结合脑缺血再灌的动物模型及免疫组织化学方法.动物分为3组:①缺血再灌组(IR),双侧颈总动脉结扎7 min,再灌1,3,5,14 d;②卵巢切除/缺血再灌组(OVX/IR),在缺血再灌前1周作卵巢切除术;③假手术对照组.结果:对照组海马CA1区可见少量ET-3和GFAP免疫阳性细胞散在分布,IR组和OVX/IR组各时间点阳性细胞数明显增多(P＜0.01).缺血再灌1 d时,OVX/IR组ET-3和GFAP阳性细胞数明显高于IR组(P＜0.01);5 d时,OVX/IR组和IR组ET-3和GFAP阳性细胞数达高峰,在时空变化上存在一致性.结论:雌激素可能在缺血再灌的早期参与对ET-3和GFAP的调控而起保护作用.
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银杏叶提取物改善L-甲状腺素诱导的大鼠心肌缺血/再灌注损伤
目的 研究银杏叶提取物对L-甲状腺素诱导的心肌肥厚合并缺血/灌注引起的心律失常的保护作用.方法 SD大鼠分为5个组,分别为正常组,模型组,倍他乐克(10mg/kg·d-1)组,银杏叶提取物高、低(100、50 mg/kg·d-1)剂量组,按0.4 mg/g·d-1皮下注射L-甲状腺素10d造模,同时灌胃给药治疗.在第11d,结扎左冠状动脉10 min,再灌流10 min,统计心律失常发生率,测定心肌酶谱CK,CKMB,LDH,HBDH及AST的含量.结果 模型组动物心室重量指数显著升高,药物干预后升高的心室重量指数明显下降,缺血再灌注诱发的心律失常分数与模型组相比也均有显著下降.模型组心肌酶谱显著升高,药物干预后均得到显著改善结论 银杏叶提取物可改善心肌肥厚合并缺血/灌注诱导的心律失常.
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复脉汤改善大鼠心肌肥厚合并缺血/再灌注诱导的心律失常
目的 研究复脉汤对L-甲状腺素诱导的心肌肥厚合并缺血再灌引起的心律失常的治疗作用.方法 将SD大鼠分为6个组,正常,模型,美托洛尔(5 mg/kg·d-1),复脉汤高、中、低(26.7、17.8、8.9g/kg·d-1),按0.4 mg/kg·d-1皮下注射L-甲状腺素10 d造模,同时灌胃给药治疗.在第11 d,结扎左冠状动脉10 min,再灌流10 min,统计心律失常发生率,测定心肌酶谱AST, LDH,HBDH,CK及CKMB的含量.结果 模型组动物体重增加百分率显著下降,心室重量指数显著升高,药物干预后体重下降得以缓解,升高的心室重量指数明显下降,缺血再灌注诱发的心律失常分数与模型组相比也均有显著下降.模型组心肌酶谱显著升高,药物干预后均得到显著改善.结论 复脉汤可改善心肌肥厚合并缺血再灌诱导的心律失常.
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肢体缺血再灌注后关节软骨的组织学观察
目的:通过动物实验观察肢体缺血再灌注后关节软骨的病理变化,证实缺血再灌注导致关节软骨的损伤,并探讨关节缺血再灌注损伤与骨性关节炎形成的关系.方法:健康中国本地兔42只,随机分为正常对照组,缺血4h组和缺血10h组,分别于肢体缺血再灌注后0、1d和1、5、10周,取4只兔8条腿做标本,行光镜观察,及图像分析仪处理.结果:早期(24h以内)关节软骨的组织学改变在光镜下表现不明显.再灌注5周时损伤为明显,此后短期内(10周内)软骨损伤不再加重.软骨组织形态学的定量观察,股骨外髁关节软骨全层厚度明显增加(P＜0.01),非钙化层增加不明显,而钙化层厚度则明显增加(P＜0.01).结论:(1)证实了缺血再灌注导致关节软骨的损伤;(2)关节缺血再灌注损伤也是导致骨性关节炎形成的重要原因.
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辅酶Q10对缺血再灌心肌的保护作用
目的:研究CoQ10对在体家兔缺血再灌心肌的保护作用.方法:19只日本大耳白毛兔(存活18只)随机分为3组:对照组、缺血再灌组、CoQ10治疗组.结扎冠状动脉左前降支(LAD)20 min 后再灌360 min,建立缺血再灌注动物模型,监测心率(HR)、左室收缩峰压(LVSP)、左室压上升大速度(+dP/dTmax)、左室压下降大速度(-dP/dTmax)及缺血区中央心肌组织三磷酸腺苷(ATP)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,以及电镜下心肌超微结构的变化.结果:①三组家兔LVSP、±dP/dTmax、心率的基础值均无差异;②对照组及CoQ10治疗组心肌ATP、SOD含量明显高于缺血再灌组,MDA明显低于缺血再灌组,左室功能指标(LVSP、±dP/dTmax)及电镜下超微结构变化均优于缺血再灌组;③CoQ10治疗组各时点的HR优于对照组,其余指标无显著性差异.结论:CoQ10对缺血再灌心肌有保护作用,能促进心功能恢复.
