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β-七叶皂甙钠对脊髓损伤大鼠脊髓组织水通道蛋白4与水通道蛋白9表达的影响
目的：探讨β?七叶皂甙钠对脊髓损伤大鼠水通道蛋白（AQP）4与AQP9表达的影响。方法成年雌性SD大鼠150只，随机分为假手术组、脊髓损伤组和β?七叶皂甙钠组，每组50只。用改良的Allen’s法建立急性脊髓损伤模型后，术后行BBB运动功能评分及斜板实验评价大鼠后肢功能，免疫组化和Western blotting方法检测各组大鼠脊髓组织AQP4与AQP9的表达变化。结果相比于假手术组，各时间点脊髓损伤组和β?七叶皂甙钠组运动功能评分及斜板实验评分均显著降低（P<0.05）；但是第7天开始，各时间点β?七叶皂甙钠组大鼠后肢功能恢复情况明显优于脊髓损伤组（P<0.05）。相比于假手术组，各时间点脊髓损伤组和β?七叶皂甙钠组大鼠脊髓组织AQP4与AQP9的含量显著升高（P<0.05）；但是与同时间点脊髓损伤组相比，β?七叶皂甙钠组大鼠脊髓组织AQP4与AQP9的含量显著降低（P<0.05）。结论β?七叶皂甙钠能够通过降低AQP4与AQP9蛋白表达对脊髓损伤大鼠的神经功能发挥保护作用。
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脊髓缺血再灌注损伤对大鼠水通道蛋白4表达的影响
目的:在整体水平研究脊髓缺血再灌注损伤对大鼠水通道蛋白4表达水平的影响.方法:SD大鼠72只随机分为空白组、假手术组和SCⅡ组,每组24只.建立大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型,并于1、3、5、7天四个时间点分别处死6只.BBB评分评价神经功能,Western blot和免疫荧光方法检测AQP4的表达情况.结果:空白对照组和假手术组在不同时间点的BBB评分均为21分,SCⅡ组的BBB评分在1天时低,随时间推移逐渐增加,3天明显优于1天(P＜0.05),5天明显优于3天(P＜0.05),5天明显优于7天(P＜0.05).Western blot在34 kD及43 kD分子量处可见特异性条带,SCⅡ组早期AQP4的表达水平显著下降,即在1、3、5、7天四个时间点AQP4的表达显著低于空白对照组和假手术组,但呈逐渐增加趋势；在7天仍显著低于正常空白组和假手术组(P＜0.05).免疫荧光检测AQP4的表达变化趋势与Western blot的检测结果相似.结论:SCⅡ存在AQP4低表达,这可能是造成SCⅡ神经功能障碍的重要原因.
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电针对缺血再灌注大鼠脑水肿及水通道蛋白-4的影响
目的 探讨针刺治疗缺血再灌注脑水肿可能作用机制.方法 70只SD大鼠随机分为假手术组(10只)、模型组(30只)、针刺组(30只).模型组、针刺组采用线栓法制备大鼠大脑中动脉(MCA)缺血再灌模型.针刺组选取穴人中、内关、三阴交进行电针刺激.电流0.3 mA,频率15 Hz,疏密波,留针30 min.干湿重法检测大鼠脑组织含水量,免疫组织化学方法 检测大鼠水通道蛋白-4(AQP4)的表达.结果 脑组织含水量模型组较假手术组明显增多(P<0.01),针刺组较模型组有所降低(P<0.01或P<0.05).但仍高于假手术组(p<0.01或P<0.05).脑组织AQP4模型组均较假手术组增强(P<0.01);针刺组大鼠AQP4较模型组有所降低(P<0.01或P<0.05),但仍高于假手术组(P<0.01).结论 针刺治疗缺血性脑水肿的作用机制可能与其抑制脑内AQP4表达有关.
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泽泻汤加味方对高脂血症大鼠胃黏膜AQP4蛋白表达的影响
目的 通过观察泽泻汤加味方对高脂血症大鼠胃黏膜水通道蛋白(AQP)4蛋白表达的影响.方法 将60只健康SD大鼠随机分为空白组、模型组、辛伐他汀对照组和泽泻汤加味方高、中、低剂量组,每组10只,造模的同时给予相应药物治疗.第5周末检测血清中三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量,观察肝组织形态学变化,并运用免疫组化及Western印迹法检测大鼠胃黏膜中AQP4蛋白的表达变化.结果 模型组TG、TC、LDL-C含量显著升高、胃黏膜AQP4表达显著增强(P<0.01),HDL-C含量显著降低(P<0.01或P<0.05),各用药组大鼠血清中TG、TC、LDL-C含量显著降低、胃黏膜AQP4的表达显著减弱,HDL-C含量显著升高(P<0.01或P<0.05).结论 泽泻汤加味方具有良好的调节血脂作用,可能是通过下调胃黏膜AQP4蛋白的表达调节水液代谢,抑制水湿停聚,祛除痰浊.
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水通道蛋白1和4在大鼠挫伤肺组织中的表达
目的：探讨水通道蛋白（AQP）1和4在老年大鼠挫伤后肺组织中的表达。方法通过自由落体模型制作老年鼠肺挫伤模型，分别于伤后1，3和6 h处死，取右侧肺上叶组织测水含量，RT-PCR法测量AQP1和4的mRNA表达，Western印迹法检测蛋白AQP1和4的表达水平。结果伤后老年大鼠的肺组织水含量比明显增加，与假手术组相比，AQP1和4的mRNA和蛋白表达在术后逐渐升高，术后6 h有显著差异（P＜0.05）， AQP-1的蛋白表达量亦明显升高（ P＜0.05）。结论 AQP1和4在挫伤后的肺组织中表达升高，靶向调节二者的表达可能对于肺挫伤后肺水肿的治疗具有重要意义。
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大黄酚对小鼠脑缺血再灌注损伤沉默信息调节因子3和水通道蛋白4表达的影响
目的 测定脑组织中沉默信息调节因子(SIRT)3和水通道蛋白(AQP)4的表达,探讨大黄酚对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用.方法 随机将昆明小鼠分为空白对照组、假手术组、模型组、大黄酚组.采用改良的Himori法暂时性阻断双侧颈总动脉建立脑缺血再灌注模型.观察脑缺血5 min再灌注24 h后小鼠的行为学表现,计算神经功能损伤评分,应用免疫组化法测定脑组织中沉默信息调节因子(SIRT)3,水通道蛋白(AQP)4的表达,测定脑组织中的超氧化物歧化酶(SOD)活力.结果 大黄酚能明显改善脑缺血再灌注后小鼠的神经功能损伤情况;大黄酚可提高脑组织中SOD的活力;小鼠脑缺血再灌注后24 h SIRT3及AQP4表达均增强,而应用大黄酚可以降低AQP4以及上调SIRT3的表达.SIRT3的表达与SOD活力呈正相关.结论 大黄酚是通过上调SIRT3的表达,增强抗细胞凋亡及SOD的抗氧化作用;下调AQP4的表达,减轻脑缺血后脑水肿的发生,发挥其神经保护作用.
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水通道蛋白4在急性实验性脊髓损伤中的表达
目的 研究急性实验性脊髓不完全损伤水通道蛋白4(AQP4)的表达规律,探讨脊髓水肿的分子生物学机制.方法 建立兔急性脊髓不完全损伤动物模型,采用免疫组化方法、RT-PCR检测脊髓损伤术后6 h、1、3、5和7 d时AQP4蛋白及其mRNA的表达变化.结果 脊髓损伤后AQP4及其mRNA表达即开始增加并持续上升,伤后3 d达到高峰,以后逐渐减少,二者的表达变化呈显著正相关.结论 AQP4参与了脊髓损伤后水肿的形成过程,AQP4过度表达可能是损伤性脊髓水肿的分子生物学机制之一.
关键词： 水通道蛋白4 免疫组化RT-PCR 脊髓损伤 脊髓水肿 -
肢体远端缺血预处理延缓脑卒中DWI上病灶出现的机制研究
目的 研究肢体远端缺血预处理(limb remote ischemic preconditioning,LRP)延缓大鼠脑缺血模型DWI图像上病灶出现的机制.方法 54只成年SD大鼠随机分为3组,脑缺血模型组24只、LRP组24只和假手术组6只.用Western blot检测和免疫荧光法分别检测不同时间点(缺血后1h、3h、12h、24 h)AQP4的表达情况.并通过共染对AQP4进行初步定位.结果 Western blot表明AQP4在缺血后表达下降,而LRP组的AQP4表达水平上升.免疫荧光结果与Western blot一致,AQP4阳性表达量均在缺血组降低,而LRP组的AQP4表达量增多.共染结果显示AQP4与GFAP出现共染,证明AQP4在星形胶质细胞上的表达;AQP4与CD31少量共染,提示AQP4在血管内皮细胞上的少量表达.AQP4与MAP-2未显示出共染.推测LRP组增多的AQP4主要表达在邻近血管周围的星形胶质细胞膜上及血管内皮细胞上.结论 LRP对DWI上病灶的面积延缓作用很可能通过上调AQP4实现.
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p38MAPK在大鼠脑缺血再灌注脑组织AQP4表达变化及脑水肿形成中的作用
目的 探讨p38 MAPK在大鼠脑缺血再灌注后脑组织AQP4表达及脑水肿形成中的作用.方法 54只SPF级雄性SD大鼠,体质量240～260g,随机分为假手术组(sham组)、缺血再灌注组(I/R组)和p38抑制剂组(SB组).采用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血/再灌注(MCAO/R)模型.I/R组、SB组分别于造模前15min舌下静脉注射10％ DMSO和p38特异性抑制剂SB203580.sham组不作脑梗死.缺血2h再灌注24h对大鼠进行神经功能缺损评分,采用干湿比重法测定缺血半球脑含水量、Western blot检测缺血周边区脑组织磷酸化p38和AQP4表达.结果(1)与sham组相比,I/R组大鼠神经功能缺损加重(P＜0.05)；与I/R组相比,SB组大鼠神经功能缺损减轻(P＜0.05).(2)与sham组相比,I/R组大鼠缺血周边区脑组织磷酸化p38的水平上升(P＜0.05),AQP4的表达上调(P＜0.05),缺血侧半球脑含水量升高(P＜0.05)；与I/R组相比,SB组大鼠缺血周边区脑组织磷酸化p38的水平下降(P＜0.05),AQP4的表达下调(P＜0.05),缺血侧半球脑含水量降低(P＜0.05).结论 p38 MAPK参与了大鼠脑缺血再灌注后AQP4表达上调及脑水肿形成,抑制p38 MAPK的激活可降低AQP4表达的上调和减轻脑水肿.
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尼膜同对大鼠脑出血后血脑屏障通透性及水通道蛋白4mRNA表达的影响
目的 研究大鼠脑出血后血脑屏障(BBB)通透性与水通道蛋白4(AQP4)的关系及尼膜同的干预作用.方法 采用自体动脉血注入尾状核法制成大鼠脑出血模型,RT-PCR法观察AQP4mRNA的表达,伊文思兰法测量BBB通透性,干湿重法计算脑含水量表示脑水肿.结果 与对照组相比,脑出血组及尼膜同组BBB通透性均在出血后6h开始升高(0.5955±0.0956、0.5092±0.0309),1d～3d高(0.8889±0.0968、0.7826±0.0339和0.7914±0.0520、0.7442±0.0753),尼膜同组低于脑出血组(P＜0.05);两组AQP4mRNA表达也于6h即开始升高(1.06±0.12、0.90±0.15),3d时达到高峰(1.34±0.14对1.27±0.14),尼膜同组低于脑出血组(P＜0.05);BBB通透性与AQP4mRNA表达呈显著正相关(r=0.686,P＜0.01),与脑水肿变化趋势一致.结论 脑出血后可能通过上调APQ4mRNA表达,增加BBB通透性,参与脑水肿形成,尼膜同可抑制此过程.
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载脂蛋白E对EAE星形胶质细胞的影响
目的 探索载脂蛋白E(apolipoprotein E,apoE)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型小鼠病灶星形胶质细胞的影响.方法 采用MOG35-55诱导apoE基因敲除的C57BL/6小鼠(apoE-/-EAE组)及野生型C57BL/6小鼠(普通EAE组),建立EAE模型.取免疫后35 d的EAE小鼠的大脑及脊髓切片,行HE染色,免疫组织化学染色法观察各组小鼠水通道蛋白4(AQP4)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.结果 apoE-/-EAE组和普通EAE组大脑和脊髓AQP4、GFAP的表达量均高于正常对照组,差异均有统计学意义(P＜ 0.05);apoE-/-EAE组大脑和脊髓AQP4、GFAP表达量均高于普通EAE组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 EAE中存在星形胶质细胞水肿、增生,apoE缺乏可以加重这一病变.
关键词： 载脂蛋白E 实验性自身免疫性脑脊髓炎 水通道蛋白4 胶质纤维酸性蛋白 -
香港远志黄酮苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠血脑屏障的保护及作用机制
目的 探讨香港远志黄酮苷预处理,对局灶性脑缺血再灌注大鼠血脑屏障(BBB)通透性、脑含水量、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)及水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)表达的影响.方法 线栓法制备SD大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,随机分假手术组、模型组、山柰酚-3-O-葡萄糖苷(PHN-08)干预组、山柰酚-3-O-芸香糖苷(PHN-11)干预组及合方组).再灌注前干预组分别用PHN-08、PHN-11及合方注射液腹腔注射1w,4ml/kg/d,每天1次,假手术组、模型组给生理盐水.观察再灌注24h、48h脑组织伊文氏蓝(EB)含量、脑含水量、MMP-9及AQP4表达.结果 与假手术组比较,模型组及干预组再灌注24h、48h的EB含量、脑含水量、MMP-9及AQP4表达显著增高(P＜0.05)；与模型组比较,干预组再灌注24h、48h的EB含量、脑含水量、MMP-9及AQP4表达显著降低(P＜0.05).结论 香港远志黄酮苷预处理,对局灶性脑缺血再灌注大鼠BBB有保护作用,机制可能是下调MMP-9及AQP4的表达.
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去铁胺干预对大鼠脑出血后水通道蛋白4 mRNA表达及脑水含量的影响
目的观察水通道蛋白4(AQP4)及脑水含量在脑出血模型组及去铁胺(DFO)模型干预组的动态变化.以期阐明AQP4及DFO在脑出血后水肿形成中的机制及作用.方法采用自体血脑出血模型,应用RT-PCR方法观察AQP4mRNA的表达,干湿重法测量血肿周围的脑水含量.结果 AQP4 mRNA表达在ICH各组及DFO干预3d、7d组较假手术组明显增高,且以第3天高.DFO干预各组与同期ICH组相比AQP4mRNA表达显著降低,DFO干预第14天组AQP4 mRNA表达与对照组无差别.脑水含量显示在ICH第1、3、7天组及DFO干预3d组较假手术组明显增高,且以第3天高;ICH 14d组及DFO干预第7天、第14天组均与正常组无差别;DFO干预第3天及第7天组较ICH组同期脑水含量显著减少.相关分析显示AQP4mRNA表达及脑水含量之间存在正相关关系.结论 AQP4在脑出血后水肿形成及消退中可能起重要作用,去铁胺可能为干预脑出血后水肿形成的有效手段.
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乙酰唑胺对慢性癫痫大鼠海马NF-κB p65、IL-1β、IL-6及TNF-α表达的影响
目的 观察戊四氮(Pentylenetetrazole,PTZ)致慢性癫痫大鼠发作以及应用AQP4抑制剂乙酰唑胺(Acetazolamide,AZA)干预后对海马核因子-κB p65(NF-κB p65)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达影响,探讨AQP4与炎症因子表达间的关系及乙酰唑胺抑制癫痫发作的可能机制.方法 将50只健康成年SD大鼠随机分为对照组(每日腹腔注射生理盐水)、致痫组(每日腹腔注射亚惊厥剂量PTZ35 mg/(kg·d)建立慢性癫痫大鼠模型)、乙酰唑胺干预组[每日先腹腔注射AZA35 mg/(kg·d)预处理,30 min后再腹腔注射亚惊厥剂量PTZ].连续注射28 d,每天记录大鼠的发作级别.后一次给药1d后处死所有大鼠以备实验,RT-qPCR和ELISA检测大鼠海马中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达;Western blot检测海马内NF-κB p65表达.结果 对照组无明显癫痫发作,RT-qPCR和ELISA检测结果显示致痫组IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著高于对照组(P＜0.001);乙酰唑胺干预组的三者水平明显低于致痫组(P＜0.05),但仍高于对照组(P＜0.05);Western blot结果显示致痫组海马组织NF-κB p65的表达与对照组相比显著升高(P＜0.01),而乙酰唑胺干预组表达量与致痫组相比明显下降(P＜0.05),但仍高于对照组(P＜0.05).结论 乙酰唑胺抑制癫痫的发作的作用机制可能与乙酰唑胺抑制星形胶质细胞膜上AQP4的表达、改善星形胶质细胞水肿损伤状况、下调炎性因子表达有关.
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尼莫地平对大鼠脑出血周边组织AQP4表达的影响
目的 观察尼莫地平对ICH周边组织AQP4表达、细胞内Ca2+浓度变化及对BBB保护作用的影响.方法 参考Rosenberg等方法复制大鼠ICH动物模型,随机将120只Wistar大鼠分为假手术组(n=20)、脑出血组(n=50)和尼莫地平治疗组(n=50),脑出血后分别观察6h、1d、3d、5d、7d等5个时间点.用免疫组化法测定ICH周边组织AQP4的表达,用荧光标记检测胞内Ca2+及EB作为示踪剂监测BBB的损伤程度,用干湿法测定脑组织含水量.结果 (1)脑出血组3d含水量达到高峰,第7天明显下降,但仍高于正常水平;尼莫地平组3d含水量达高峰,但低于脑出血组;(2)脑出血后6h血肿周边组织EB含量增加,1d达高峰,7d已明显下降;尼莫地平干预后各时间点EB含量明显低于脑出血组,高于假手术组,7d后EB含量恢复正常;(3)脑出血后6h血肿周边组织AQP4表达及细胞内Ca2+浓度逐渐增高,3d达高峰,7d后下降明显;尼莫地平组血肿周边组织AQP4表达及细胞内Ca2+浓度逐渐增高,3d达高峰,明显低于脑出血组.结论 (1)Ca2+能促进AQP4的过度表达,使BBB通透性增加,参与出血性脑水肿的病理过程;(2)尼莫地平可阻断Ca2+向细胞内过度内流,进而降低AQP4的表达,减轻脑水肿程度,为脑出血治疗提供新的靶点.
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视神经脊髓炎的研究进展
视神经脊髓炎(NMO)是一种自身免疫性炎性脱髓鞘性疾病,自身抗体攻击正常组织,其选择性的影响视神经和脊髓,造成视神经和脊髓的相继或同时受累.临床特点是急性或亚急性起病的单眼或双眼失明,在其前后数日或数周出现横惯性或上升性脊髓炎.近年来,对视神经脊髓炎的发病机制,病理学特点以及治疗方面的研究取得了巨大成就,其中水通道蛋白4(AQP4)的发现开辟了NMO研究的新领域,抗AQP4抗体参与致病过程并对疾病的诊断和判断预后具有重要作用因而深入研究视神经脊髓炎的发病机制和治疗方法对指导临床诊治、改善预后具有积极的意义.
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水通道蛋白4与脑水肿研究进展
水通道蛋白4(AQP4)是膜水通道蛋白家族的一员,在脑组织中高表达,是控制水进出脑组织的通道.近年来发现,AQP4的功能和表达与脑水肿密切相关.同时脑水肿又是和脑疾病治疗密切相关的病理过程,对两者的研究或许可以为我们带来更多的临床治疗新思路.本文综述了AQP4的结构、表达、调控与功能以及AQP4与脑水肿关系的研究进展.
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七叶皂苷钠对模拟高原低氧大鼠脑损伤的干预作用及对水通道蛋白4表达的影响
目的 探讨七叶皂苷钠对模拟高原低氧大鼠脑损伤的干预作用及对水通道蛋白4(AQP4)表达的影响.方法 40只SD大鼠随机均分为正常对照组、高原低氧致脑损伤组、七叶皂苷钠干预组.将大鼠放置在模拟海拔6000 m高原环境中,每6 h舱外以20 m/min 运动2 h,重复三次致大鼠脑损伤.脑损伤后干预组给予尾静脉推注5 mg/kg七叶皂苷钠,高原低氧致脑损伤组尾静脉推注5 mg/kg生理盐水,分别观察各组脑组织病理切片、含水量、TNF-α含量和AQP4蛋白在脑组织中的定位及表达情况.结果 病理切片显示,大鼠高原脑损伤后立即给予七叶皂苷钠干预,脑损伤程度显著减低.免疫组化示,AQP4蛋白主要在脑组织星形胶质细胞、小胶质细胞胞浆中呈阳性表达,且干预组较脑损伤组AQP4蛋白表达量显著降低;与正常组比较,脑损伤组12 h脑含水量、TNF-α含量和AQP4蛋白表达显著升高,干预组12 h脑含水量、12 h TNF-α含量和6、12 h AQP4蛋白表达较脑损伤组显著降低.结论 七叶皂苷钠通过抑制TNF-α及下调AQP4表达,从而有效改善高原脑损伤程度.
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特布他林影响水通道蛋白4在大鼠急性肺损伤肺水代谢的作用
目的 油酸造成急性肺损伤(ALI) 初期,特布他林气管滴入治疗,根据肺损伤程度及测定血管外肺水的大小,评估病理状态下特布他林对肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ) 水通道蛋白4(AQP-4 )转运水能力的影响.方法 血气分析、肺组织病理学评分、透射电镜检测肺损伤程度;重力法测定血管外肺水(EVLW)含量;免疫组化法分析肺组织AQP-4的表达,急性分离纯化ATⅡ细胞,电子显微镜观察超微结构;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 检测肺泡Ⅱ型上皮细胞AQP-4的mRNA 表达.结果 血气分析、光镜下肺损伤评分说明油酸致大鼠急性肺损伤,显微镜下ATⅡ细胞的数量较对照组无明显减少,但电镜下细胞的超微结构如板层小体排空,线粒体损伤等改变;特布他林治疗后血气分析、病理评分、电镜下细胞等损伤明显减轻(P<0.05);EVLW三组间有显著性差异(P<0.05),治疗组肺水下降明显;肺组织免疫组化观察到损伤后肺泡上皮细胞AQP-4表达增强,呈阳性,特布他林组表达呈强阳性;ATⅡ细胞AQP-4的mRNA 表达治疗组、油酸组较对照组有显著性差异(P<0.05),两者之间无显著性差异(P＞0.05).结论 特布他林可能通过上调肺泡上皮细胞和Ⅱ型细胞上AQP-4的表达,介导水转运减轻肺损伤时肺泡腔水肿.
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视神经脊髓炎谱系病60例临床特点分析
目的：探讨视神经脊髓炎谱系病（NMOSD）患者的临床特点。方法回顾性分析60例患者的临床症状、实验室检查、影像学资料和治疗效果，进行综合分析。结果 NMOSD多为复发型，平均发作间隔6个月。首次发病仅为视神经、脊髓或两者同时受累者分别占56．7％、35．0％和5.0％。首发症状可仅为腰背部、颈部、上肢疼痛及呃逆。视神经和脊髓受累间隔中位数为24个月。24％的脊髓受累的患者出现3级或3级以下的肌力减退。血清AQP4－Ab的阳性率为63．6％。4例脊髓病变为短节段。头颅M RI异常率为50．0％。结论首次发病累及部位以单纯视神经或单纯脊髓多见。部分患者首发症状可仅为腰背部、颈部、上肢疼痛或呃逆，易误诊。NMOSD脊髓受累存在大病灶、小症状特点。NMOSD早期治疗有效率高，但显著有效率低。
