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吸烟致大鼠肺组织蛋白质电泳图谱的改变
[目的]用双向电泳法测定烟草烟雾染毒大鼠肺组织差异蛋白的表达.[方法]雄性Wistar大鼠20只,平均体重(150±10)g,随机分为4组,每组5只.其中,3组为吸烟组,分别暴露于动式气体染毒装置进行烟草烟雾染毒1个月、2个月和4个月,每天2次,每次30min;另1组为不吸烟对照组,按常规饲养于动物房.分离不同剂量组大鼠肺组织,提取总蛋白,进行双向电泳测定.用ImageMaster2D Platinum软件对获得的蛋白图谱加以分析,寻找差异表达的蛋白质.[结果]病理切片显示吸烟组大鼠肺气肿改变明显,支气管炎症反应逐渐加重.双向电泳结果显示吸烟组大鼠肺组织总蛋白数增加,与对照组相比,有28个差异表达的蛋白点数,其中16个表达上调,12个表达下调.表达上调的蛋白点中,6个仅在吸烟组表达;下调的点中5个仅在对照组表达.[结论]双向电泳是一种有效的分离肺组织总蛋白的方法,烟草烟雾染毒可致大鼠发生肺气肿和支气管炎症反应,并引起大鼠肺组织蛋白质双向电泳图谱的改变.
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双向电泳分析结晶型NiS诱发人支气管上皮细胞恶变后的蛋白表达差异
[目的]建立双向凝胶电泳分析方法,比较结晶型NiS诱发人支气管上皮细胞恶变后的蛋白表达差异.[方法]采用一步法分别提取人支气管上皮细胞系16HBE细胞和结晶型NiS诱发该细胞系的恶性转化细胞N-2细胞的可溶性总蛋白,经双向凝胶电泳分离、银染显色、用双向电泳凝胶图像分析软件ImageMaster 2D 3.10分析两者之间可溶性蛋白的差异表达.[结果]获得了分辨率和重复性较好的双向电泳银染图谱.图像分析显示在恶性转化细胞中检测到19个新的蛋白点,同时有47个蛋白点消失,有140个蛋白点在两种细胞中表达量有显著差异,其中89个蛋白点在N-2细胞中表达升高,51个蛋白点在N-2细胞中表达降低.[结论]双向电泳技术分析NiS诱发细胞恶性转化后蛋白质组发生了变化,这将为镍致癌相关的蛋白的研究和鉴定奠定基础.
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运用蛋白质组学方法研究肾阳虚异病同证的思路与方法
探讨运用蛋白质组学技术研究肾阳虚异病同证的思路与方法.分析蛋白质组学与证候的内在联系,采用双向电泳(2-DE)+质谱(MS)+数据库的蛋白质组解决方案及药理学实验方法,探求肾阳虚证的蛋白质学本质.
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双向电泳分析水蛭酒炙前后差异蛋白表达
目的 采用双向电泳分析水蛭(Hirudo)酒炙前后差异蛋白表达.方法 分别采用饱和硫酸铵沉淀法、三氯乙酸/丙酮沉淀法、直接裂解液法提取生水蛭和酒炙水蛭蛋白,十二烷基硫酸钠-丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对这3种方法进行筛选,建立双向电泳体系.分析水蛭酒炙前后蛋白表达谱,寻找相关差异蛋白.结果 直接裂解液法所得条带数量多,分布连贯清晰.水蛭酒炙前后蛋白含有量有显著性差异(P＜0.01),共发现19个差异蛋白点,其中下调蛋白8个,上调蛋白11个.结论 双向电泳所得差异蛋白可作为蛋白标志物以规范水蛭炮制工艺,并确保其稳定性.
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双向电泳在真菌致病性蛋白分离中的应用
双向电泳作为蛋白质组学的重要技术,具有高分辨率和高通量等特点,被广泛用于蛋白质的分离.本文简要介绍了双向电泳的原理和在真菌蛋白质分析领域应用时的特点,初步总结了近年来国内、外在真菌致病性蛋白分离、鉴定方面研究的情况,并展望双向电泳在病原真菌领域的进一步发展趋势.
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一种新型抗结核先导化合物S28对结核分枝杆菌蛋白质组表达的影响
目的 探讨从化合物库中高通量筛选得到的、可有效抑制结核分枝杆菌生长和繁殖的新型活性化合物S28的作用机制及其可能的作用靶点.方法 采用双向电泳技术,比较分析活性化合物作用于结核分枝杆菌H37Ra前、后的全细胞蛋白表达差异.结果 13个蛋白质斑点表达下调,对其中6个改变明显的蛋白质斑点进行基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱分析,成功测定2个蛋白质斑点.数据库检索分析确定这2个差异蛋白点分别为延长因子Tu和短链脱氢酶,是参与蛋白质翻译和氧化呼吸、能量代谢等生理过程的重要蛋白.结论 为进一步深入探索新型抗结核活性化合物的作用机制和可能的靶点提供研究基础和方向.
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一种新的胰腺癌相关性自身抗原PAA47的纯化和鉴定
以往的研究发现63.64%的胰腺癌患者具有针对相对分子质量初步鉴定为47 000的靶抗原的阳性共带,该条带仅在1.9%的正常人中查及,本研究旨在纯化并鉴定该靶抗原,以深入认识该独特的自身免疫现象在胰腺癌中的意义,探索靶抗原的生物学功能以及在临床诊断中可能应用价值.提取人喉癌上皮细胞(Hep-2)蛋白抗原,进行双向电泳,选取8份以往在单向蛋白质印迹(SDS-PAGE)中,相对分子质量约为47000处有明显抗原抗体反应的胰腺癌患者血清进行免疫印迹分析.比较双向电泳凝胶图像、丽春红染色之蛋白质转印硝酸纤维素滤膜图像以及血清反应后滤膜图像,确定靶抗原在凝胶上的斑点,判断其等电点.切取胶上蛋白质斑点经胰蛋白酶消化后通过HPLG-MS联用分析获得串级质谱数据;利用互联网搜索工具MASCOT分析处理数据并进行数据库查询,以鉴定靶抗原.结果表明,KIAA0111的基因预测产物是一种新鉴定的胰腺癌相关性自身抗体靶抗原,有希望成为新的胰腺癌标志物.
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蛋白质组研究技术及其在筛选肿瘤标志物中的应用
肿瘤标志物是细胞在特定疾病状态下的分子信号,是检测、诊断、治疗、监测肿瘤和判断肿瘤预后的重要工具.如何发现新的、具有高度特异度和灵敏度的肿瘤标志物多年来一直是肿瘤研究的热点之一[1-3].蛋白质和蛋白质组学研究的快速发展给肿瘤标志物研究注入了新的活力.蛋白质组一词由Wilkins于1994年首次提出,意指一种基因组或一种细胞所表达的全套蛋白质,近年迅速发展为一门新兴学科--蛋白质组学(proteomics),其含义主要包括3个方面:①表达蛋白质组学,研究细胞或组织中蛋白质表达的质和量的变化;②功能蛋白质组学,研究在不同生理和病理条件下细胞中各种蛋白质之间的相互作用关系及其调控网络等;③结构蛋白质组学,以阐明生物大分子的三维结构特性为目的[4,5].由于蛋白质组研究具有在整体水平上发掘和寻求潜在肿瘤标志物的能力,使其一经提出便受到肿瘤研究者的重视.
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蛋白质组学技术及其在弓形虫研究中的应用
蛋白质组学是独立于基因组学而发展起来的一门新兴前沿学科,是在特定的时间和空间研究一个完整生物体(或细胞)所表达的全体蛋白质的特征,从而在蛋白质水平上全面认识有关生物体生理、病理等过程.该文综述了蛋白质组学研究的双向电泳、生物质谱、生物信息学等技术及其在弓形虫研究中的应用.
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蛋白质组学技术及其在寄生虫学研究中的应用
该文介绍了蛋白质组学研究的核心技术,即蛋白质组分分离、鉴定,利用蛋白质组信息学进行结构和功能预测,以及蛋白质组学技术在寄生虫学研究中的应用和前景.
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细粒棘球蚴原头节3种重组抗原的双向电泳定位分析
目的 利用已有的细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus)原头节3种重组抗原rEgZW-5、rEg14-3-3和rEgP-29获得特异性抗体,以识别双向电泳图谱中相应的蛋白位点. 方法 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)初步分离细粒棘球蚴原头节蛋白,预判断蛋白分布情况.应用双向电泳技术分离原头节蛋白,PDquest软件分析原头节的蛋白质数量、相对分子质量(Mr)和等电点(IP).用原头节的3种重组蛋白rEgZW-5、rEg14-3-3和rEgP-29分别免疫新西兰家兔,制备血清,纯化抗体.蛋白质印迹(Western blotting)鉴定特异性抗体对原头节双向电泳图谱中相应蛋白的识别.结果 SDS-PAGE结果显示,细粒棘球蚴原头节蛋白主要分布于Mr 18 000～90 000区域.双向电泳分离出240个蛋白位点,为Mr 15 790～117 050,IP为4.0～9.5,其中85.8％ (206/240)蛋白等电点为5～9.Western blotting 结果显示,rEg14-3-3特异性抗体可识别细粒棘球蚴原头节双向电泳图谱中约为Mr 33000、IP为4.86的14-3-3蛋白位点,rEgZW-5特异性抗体可识别约为Mr 23 000、IP为4.98的ZW-5蛋白位点,rEgP-29特异性抗体可识别约为Mr29 000、IP为5.65的P-29蛋白位点. 结论 细粒棘球蚴原头节的3种重组抗原rEgZW-5、rEg14-3-3和rEgP-29的抗体可识别双向电泳图谱中相应的蛋白位点.
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曼氏迭宫绦虫裂头蚴可溶性蛋白质的分析
目的 分析曼氏迭宫绦虫裂头蚴可溶性蛋白组分. 方法 提取曼氏迭宫绦虫裂头蚴总蛋白后,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和双向凝胶电泳(2-DE)进行分离,转膜后用感染裂头蚴小鼠的血清和健康小鼠血清作为一抗,行蛋白质印迹(Western blotting)分析,比较杂交蛋白点的差异. 结果 曼氏迭宫绦虫裂头蚴可溶性蛋白经SDS-PAGE分离出33条蛋白带,相对分子质量(Mr)范围在13 800～145 400,其中Mr 26 500、Mr 37 600、Mr 88 200和Mr 130 200为高丰度蛋白区带.经Western blotting分析,Mr 31 600和Mr 37 600条带为曼氏迭宫绦虫裂头蚴特异性蛋白条带,能被感染小鼠血清识别.裂头蚴总蛋白双向电泳凝胶的蛋白质斑点总数为367个,大部分分布在Mr 18 840～46 800,246个蛋白质斑点的等电点为4.0～7.0,占总数的67%;Western blotting分析显示,30个抗原抗体结合点为特异性抗原斑点. 结论 曼氏迭宫绦虫裂头蚴可溶性蛋白有2条特异性蛋白带和30个特异性蛋白斑点,以偏酸性为主.
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猪囊尾蚴特异性抗原的筛选、鉴定和生物信息学分析
目的 对猪囊尾蚴的特异性抗原进行筛选、鉴定和生物信息学分析.方法 四川省雅江县呷拉乡猪带绦虫病患者,口服槟榔-南瓜子驱虫.收集、制备虫卵悬液(8万个/ml).将6头20d龄三元杂交乳猪均分实验组和窄白对照组,实验组每猪灌胃虫卵悬液1 ml.40 d后,分别制备实验组心脏血混合血清及对照组心脏血混合血清;收集、制备实验组猪囊尾蚴蛋白,进行双向电泳(2-DE)分析.将凝胶蚩白斑点转移至聚偏氟乙烯膜(PVDF膜),用实验组混合血清及对照组混合血清(均为1:10)为一抗,羊抗猪HRP-IgG(1:200)为二抗,进行蛋白质印迹(Western blot-ting)分析,比较两组杂交蛋白点的差异.确定猪囊尾蚴抗原抗体阳性杂交斑点,据此挖取双向电泳与之对应的蛋白点,用电喷雾离子阱型质谱仪(ESI-Trap MS)进行质谱鉴定.搜索美国国家生物技术信息中心(NCBI)网站信息进行生物信息学分析.结果 双向电泳凝胶共检测到207±9个蛋白质斑点,相对分子质量为Mr 14 400～94 000,等电点(pI)为3.0～10.0.筛选出7个特异性抗原,其中的4个分别为AF239799-1膜联蛋白(AF239799-1 annexin)、细胞支架肌动蛋白-2(cytoskeletal actin-2)、原肌球蛋白(tropomyosin)和肌动蛋白-1(actin-1).前1个蛋白已被鉴定为猪带绦虫特异性抗原,后3个蛋白抗原与NCBI网上登录的亚洲带绦虫成虫蛋白一致,为猪囊尾蚴特异性抗原. 结论 共获得3个猪囊尾蚴特异性抗原,即细胞支架肌动蛋白-2、原肌球蛋白和肌动蛋白-1.
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用聚丙烯酰胺凝胶电泳和双向电泳分析阴道毛滴虫滋养体抗原
目的研究阴道毛滴虫滋养体可溶性抗原. 方法用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、酶联免疫电转移印迹(EITB)和双向电泳等方法,对阴道毛滴虫滋养体全虫可溶性抗原进行分析. 结果 SDS-PAGE分离出26条蛋白带,其中主带9条,分子量8条为15～62 kDa、1条为97 kDa.EITB显示24条带,仅在75 kDa和22 kDa处缺如,其中主带8条.双向电泳分离出43个多肽斑点,多分布于PI 3.65～5.84,分子量为27～＞100kDa,其中有9个主要多肽斑点. 结论阴道毛滴虫滋养体可溶性抗原26条蛋白带中,有8条蛋白含量较高、免疫学反应较强.在43个多肽斑点中有9个多肽含量明显较高.
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抗猪囊尾蚴IgG4抗体的特异性抗原筛选
将囊液抗原蛋白采用双向凝胶电泳分离,经考马斯亮蓝染色后用双向电泳图像分析软件分析蛋白点,以脑囊尾蚴病患者血清为一抗进行蛋白质印迹分析(Western blotting),选取阳性蛋白点进行质谱分析,获取肽质量指纹图谱,采用Mascot软件在NCBI中搜寻、比对,筛选出抗猪囊尾蚴IgG4特异性抗原.囊液抗原经双向电泳检测到(201±5)个蛋白斑点,相对分子质量(Mr)为10 000～170 000,等电点(pI)为3.0～10.0.Westernblotting分析显示,与患者血清中特异IgG4抗体结合的抗原以小分子量蛋白为主,从中筛选出51个(抗原)点进行质谱分析,其中有21个点峰值大于39.对比分析显示,高峰值点与10种囊尾蚴蛋白有关,其中为密切相关的为4种蛋白,按分值高低排序分别为Ts8B2、Ts8B3、10ku抗原和Sequence 3.
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猪带绦虫囊尾蚴与亚洲带绦虫囊尾蚴蛋白双向电泳图谱分析
将2头20日龄三元杂交乳猪分别感染猪带绦虫虫卵和亚洲带绦虫虫卵,8×104个/头.感染后40 d分别收集寄生在肝脏的未成熟猪带绦虫囊尾蚴(简称猪囊尾蚴)和亚洲带绦虫囊尾蚴,制备囊尾蚴蛋白,并进行蛋白双向电泳分析,用ImageMaster 2D Plantinum 6.0软件分析差异表达蛋白.结果显示,感染后40 d肝脏寄生的未成熟猪囊尾蚴和亚洲带绦虫囊尾蚴蛋白的双向电泳凝胶上分别有(236±12)和(231±14)个蛋白斑点,差异表达2倍以上的蛋白共10个,其中猪囊尾蚴表达上调的蛋白3个,下调的蛋白7个.
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应用双向电泳及蛋白质印迹分析弓形虫特异性抗原
将感染弓形虫速殖子的SD大鼠血清和健康大鼠血清作为一抗进行蛋白质印迹(Western blotting)分析,比较杂交蛋白点的差异,分析弓形虫速殖子特异性抗原.弓形虫速殖子总蛋白双向电泳考马斯亮蓝染色图谱(7 cm×8 cm,pH 3～10)共检测到209个蛋白质斑点.Western blotting显示实验组抗原抗体反应点17个,对照组仅2个非特异性的蛋白结合点.
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日本血吸虫成虫蛋白质的性别差异性研究
目的 研究日本血吸虫成虫蛋白质表达的性别差异性。方法 利用双向电泳技术对日本血吸虫中国大陆株雌雄虫体蛋白质进行电泳分析。结果 在43 kDa，pI 5.60～5.90处，雄虫有一条长度和宽度均超过雌虫并由多个斑点连在一起组成的条带，并有3个较雌虫大的斑点；雌虫有7个特异性斑点，且有一处较雄虫深的着色区。结论 血吸虫成虫蛋白质表达有性别差异性。
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应用双向电泳分析精子冻融前后蛋白改变的初步研究
目的精子蛋白双向电泳的建立,并利用其初步研究冻融前后精子蛋白的改变,为进一步筛选差异表达的蛋白奠定基础.方法来源于同一个人的冻融前后精子样品经溶解液溶解,并以等电聚焦(IEF)作为第一向电泳,以变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)作为第二向,对上述样品进行分离,凝胶银染后进行比较.结果建立了精子蛋白的双向电泳,并用其分析了冻融前后精子蛋白的改变.结论冻融前后精子蛋白发生不止一种蛋白的改变,本研究的实验方法是一种研究精子冻融蛋白改变的有效手段,但仍有待进一步优化.
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双向电泳结合免疫印迹法分析抗精子抗体相关精子膜抗原
为筛选精子抗体相关的精子膜抗原.本文使用ELISA试验检测不育病人血清的抗精子抗体,选取抗精子抗体阳性血清,通过双向电泳和免疫印迹的方法来筛选抗精子抗体相关精子膜抗原.
